Sau khi E. M. Southern mụ tả phương phõp Southern blot văo năm 1975, người ta đờ dựng một phương phõp tương tự để xõc định cõc đoạn RNA đặc biệt gọi lă Northern blot. Phương phõp năy cũn được gọi lă Northern blotting, phương phõp lai Northern hay phương phõp lai RNA.
- RNA (RNA tổng số hoặc chỉ mRNA) được phđn tõch bằng điện di trớn gel agarose.
Hỡnh 3.1: Sơ đồ mụ tả phương phỏp Southern blot
- RNA sau khi đờ phđn tõch được chuyển lớn măng lai (cõc phđn tử RNA giữ nguyớn vị trớ như ở trớn gel).
- RNA cố định trớn măng được lai với mẫu dũ DNA sợi đơn (hoặc RNA) cú đõnh dấu phúng xạ hoặc được gắn với một enzyme (alkalin phosphatase hoặc horseradish peroxidase) tạo thănh phđn tử lai RNA-DNA (hoặc RNA-RNA) sợi kĩp.
Hỡnh 3.2: Sơ đồ mụ tả phương phõp Northern blot
- Vị trớ của mẫu dũ được phõt hiện nhờ kỹ thuật phúng xạ tự ghi nếu nú được đõnh dấu phúng xạ. Trong trường hợp mẫu dũ được gắn với enzyme thỡ đem ủ với một cơ chất khụng
mău. Enzyme liớn kết với nú sẽ biến đổi thănh một sản phẩm mău cú thể nhỡn thấy hoặc phõt ra õnh sõng mă sẽ được phõt hiện bằng phim X quang một cõch trực tiếp. Phương phõp Northern blot cho phĩp phõt hiện sự cú mặt, xõc định kớch thước, trọng lượng phđn tử, khối lượng mRNA ở trong cõc mẫu khõc nhau. éđy lă một phương phõp rất tốt để phđn tớch sự biểu hiện của gen khi chỳng ta cần định lượng để phđn biệt sự khõc nhau giữa hai mẫu vă nú rất nhạy bởi vậy chỳng ta cú thể điện di một lượng lớn RNA tổng số hoặc mRNA trớn gel.