Chuyển gen qua liposome

Một phần của tài liệu Giáo trình sinh học biến đổi gen (Trang 51)

Văo thập niớn 1980, liposome nhđn tạo đờ được sử dụng để đưa DNA văo tế băo. Lipid với toăn bộ lưới tớch điện dương ở pH sinh lý lă thănh phần lipid tổng hợp phổ biến nhất của liposome được phõt triển cho chuyển gen (Hỡnh 2.3). Thường thỡ lipid cation được trộn với một lipid trung tớnh như L-dioleoyl phosphatidyl- ethanolamine (DOPE) (Hỡnh 2.4). Phần cation của phđn tử lipid kết hợp với DNA tớch điện đm vă kết quả lă chứa đầy DNA trong phức hợp liposome-DNA (Hỡnh 2.5). éối với cõc tế băo nuụi cấy, toăn bộ lưới tớch điện dương của phức hợp liposome-DNA núi chung lă gđy ra hiệu quả chuyển gen cao hơn bởi vỡ nú cho phĩp phức hợp năy kết hợp với măng tế băo tớch điện đm bền hơn. Nhờ cơ chế nhập băo, cõc phức hợp xuất hiện trong endosome vă sau đú đi văo nhđn (Hỡnh 2.6). Chưa rừ DNA được phúng thớch từ endosome vă đi qua măng nhđn như thế năo. DOPE được xem lă một lipid kớch thớch sự dung hợp vă vai trũ của nú lă phúng thớch cõc phức hợp năy từ endosome cũng như lăm cho sự dung hợp của măng tế băo phớa ngoăi với phức hợp liposome-DNA xảy ra dễ dăng. Trong phương phõp năy, cõc đại phđn tử trước hết được đưa văo trong cõc tỳi phospholipid. Cõc loại tỳi khõc nhau đờ được mụ tả, nhưng tỳi một lớp mỏng lă thớch hợp nhất cho chuyển gen vỡ chỳng cú tỉ lệ khoảng trống chứa nước ở bớn trong tương đối cao đối với mỗi đơn vị lipid vă bởi vỡ chỳng cú tỉ lệ

phđn phối cao hơn. Sự dung hợp của liposome với măng plasma lă một sự kiện hiếm. Hiệu quả biến nạp của phương phõp năy thấp hơn so với phương phõp vi tiớm văo tiền nhđn. Cõc nổ lực nghiớn cứu đang được tiến hănh để tỡm ra cõc điều kiện thớ nghiệm mă cú thể lăm tăng sự phúng thớch cõc phđn tử đờ kết nang từ con đường ẩm băo.

Hỡnh 2.3: Cấu trỳc tổng quõt của lipid cation tổng hợp

Hỡnh 2.4: Cấu trỳc của DOPE (L-diolecyl phosphatidylethanolamine)

Hỡnh 2.6: Sơ đồ hoạt động của vector liposome

Liposome đờ được sử dụng để đưa protein, lipid vă cõc phđn tử nhỏ văo nhiều loại tế băo nuụi cấy, tuy nhiớn hiệu quả thấp hơn vi tiớm đối với RNA hoặc protein. Cũng như thế, chuyển gen qua liposome vă sự biểu hiện của gen chuyển lă khụng vượt qua được cõc phương phõp chuyển gen thụng thường (như hệ thống virus), sự biểu hiện gen chuyển thường nhất thời, sự ức chế bởi cõc thănh phần của huyết thanh cú thể xảy ra. Bớn cạnh đú, kỹ thuật năy cú nhiều ưu điểm lă gen chuyển sẽ khụng hợp nhất văo genome chủ, cú hiệu quả tốt đối với cả tế băo in vitro vă in vivo, cú thể mang được cõc DNA cú kớch thước rất lớn, độ tinh khiết cao, khụng gđy miễn dịch, cú thể sử dụng với cõc tế băo mă biến nạp bằng kỹ thuật calcium phosphat khụng cú hiệu quả..

Ứng dụng trong tương lai của kỹ thuật năy chủ yếu sẽ lă khả năng phđn phối thuốc văo cõc tế băo của cơ thể sống. Hiện nay kỹ thật năy đang được phõt triển để cải tiến sự phđn phối đặc hiệu của liposome bằng cõch ghĩp cõc khõng thể đặc hiệu với bề mặt của liposome đớch.

Một phần của tài liệu Giáo trình sinh học biến đổi gen (Trang 51)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(193 trang)