... vi khuẩn gây bệnh Phương pháp PCR lồng (Nested PCR) PCR lồng kỹthuật thực hai lần PCR Trong lần PCR thứ (Nested 2) sử dụng cặp mồi thứ kết khuếch đại đoạn DNA lần PCR thứ (Nested 1) làm khuôn, ... phía khoanh AMC Vùng vơ khuẩn thường méo mó hay có hình elip 2.3.4 Sàng lọc vi khuẩn Gram âm sinh ESBL kỹthuật multiplex- PCR * Kỹthuậtmultiplex - PCR Phát gene mã hóa ESBL chủng vi khuẩn Gram ... 23 2.3.2 Kỹthuật xác định độ nhạy cảm với kháng sinh 24 2.3.3 Kỹthuật xác định vi khuẩn sinh ESBL 25 2.3.4 Sàng lọc vi khuẩn Gram âm sinh ESBL kỹthuật multiplex- PCR 26 2.4...
... bào thường sử dụng để khẳng định kết kỹthuật phân biệt giới tính khác 2.3.4 Sử dụng đoạn dò DNA chuyên biệt NST Y để phân biệt giới tính phơi Ngun tắc kỹthuật việc lai DNA tổng số lấy từ tế ... nhiều lần quan sát thông qua kỹthuật phân tách điện di DNA (Hồ Huỳnh Thuỳ Dương , 2002) Theo Schorder ctv (1990), việc sử dụng đoạn mồi chuyên biệt NST Y phản ứng PCR giúp khuếch đại đoạn trình ... tăng tối đa lượng nguyên liệu dùng cho phản ứng nhân - Trình tự lặp lại phải trình tự đặc hiệu cho đực 2.3.5.2 Một số cơng trình xác định giới tính PCR 13 Sau thập niên phát triển, kỹthuật xác...
... 2.4 KỹthuậtPCR 14 2.4.1 Khái niệm .14 2.4.2 Nguyên tắc 14 2.4.3 Các thành phần cần thiết phản ứng PCR 15 2.4.4 Phân tích kết PCR 16 2.4.5 Multiplex – PCR ... uid vi khuẩn E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy bò, heo, bê mẫu bề mặt thịt bò kỹthuậtmultiplex – PCR Quan sát ghi nhận mơi trường MAC có loại khuẩn lạc hồng, mơi trường SMAC có hai loại ... ĐÀM THỊ MINH THƠ, Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, tháng 9/2005 “ỨNG DỤNG KĨ THUẬTMULTIPLEX – PCR ĐỂ PHÁT HIỆN MỘT SỐ GEN ĐỘC LỰC CỦA NHÓM E COLI SẢN SINH ĐỘC TỐ SHIGA (STEC) PHÂN LẬP...
... lập Multiplex – PCR cải tiến kỹthuậtPCR mà nhân lên đồng thời nhiều đoạn DNA mong muốn cách sử dụng nhiều cặp primer phản ứng Multiplex – PCR mô tả Chamberlain năm 1988 kể từ multiplex – PCR ... (ELISA), DNA-probe, PCR 2.2 KỹthuậtPCR 2.2.1 Nguyên tắc PCR (polymerase chain reaction - phản ứng tổng hợp dây chuyền nhờ polymerase) Kary Mullis cộng phát minh năm 1985 PCRkỹthuật in vitro cho ... dụng kỹthuậtmultiplex – PCR để phát gen độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ phân bò, phân heo tiêu chảy thịt bò” 1.2 Mục tiêu - Phát số gen độc lực E coli kỹthuậtmultiplex – PCR...
... kết PCR Sau thực phản ứng PCR, tùy vào mục đích mà người ta sử dụng nhiều kỹthuật sinh học phân tử khác để phân tích sản phẩm phản ứng PCR đọc 16 trình tự sản phẩm PCR, tạo dòng sản phẩm PCR ... Qui trình multiplex – PCR (1) Trình tự đoạn mồi sử dụng multiplex – PCR Bảng 3.1 Trình tự đoạn mồi sử dụng phản ứng multiplex - PCR 22 Kích cỡ DNA Mồi (primer) Trình tự oligonucleotide (5’3’) ... (-) Multiplex - PCR Loại bỏ ống NA giữ gốc (+) ) Ly trích DNA riêng theo ống NA Multiplex- PCR Sơ đồ 3.1 Qui trình phân lập, định tính phát gen độc lực E coli 3.3.4 Qui trình multiplex – PCR...
... ETEC 2.2 KỹthuậtPCR 11 2.2.1 Nguyên tắc 11 2.2.2 Các giai đoạn phản ứng PCR .12 2.2.3 Các thành phần phản ứng PCR 14 2.2.4 Phân tích kết PCR .15 ... Ngun lý phản ứng PCR 13 Hình 2.2 Chu kỳ nhiệt độ phản ứng PCR .14 Hình 3.1 Kết điện di sản phẩm multiplex - PCR1 26 Hình 3.2 Kết điện di sản phẩm multiplex - PCR2 26 SƠ ĐỒ ... Những ứng dụng PCR .15 2.2.5.1 PCR sử dụng để nghiên cứu lượng DNA nhỏ .15 2.2.5.2 PCR sử dụng chẩn đoán lâm sàng .16 2.2.5.3 PCR dùng để khuếch đại RNA .16 vi 2.2.5.4 PCR sử dụng...
... tra b2 MultiplexPCRMultiplexPCR cải tiến kỹthuậtPCR mà nhân lên đồng thời nhiều đoạn DNA mong muốn cách sử dụng nhiều cặp primer phản ứng MultiplexPCR mơ tả Chamberlain năm 1988 kể từ multiplex ... IEF Lỏng RIA RAPD -PCR Lỏng cao áp Miễn dịch enzyme Species-specific PCR Dựa vào PCR Cạnh tranh Standard -PCR Không cạnh tranh MultiplexPCR Real time PCR PCR-RFLP PCR- sequencing PCR- SSCP Sơ đồ 2.1: ... ký), phương pháp phát dựa vào DNA (lai DNA, RAPD -PCR, PCR đặc trưng cho loài standard -PCR, multiplex- PCR, Realtime PCR, PCR- RFLP, PCR sequencing, PCR- SSCP.) Các phương pháp phát dựa vào protein...
... sót PCR, Chamberlain cộng người mô tả, phát triển kỹthuậtmultiplexPCR vào năm 1988 Trong kỹthuậtmultiplex PCR, nhiều gene đích khuyếch đại lúc nhiều cặp mồi phản ứng KỹthuậtmultiplexPCR ... động cho kết sau 10- 15 ngày 1.3.2 KỹthuậtMultiplexPCR phát nhanh vi khuẩn lao PCRkỹthuật phổ biến nghiên cứu sử dụng rộng rãi chẩn đốn Tuy nhiên, chẩn đốn PCR có nhược điểm giá thành cao Để ... đoán lao kỹthuậtMultiplexPCR tiến hành với nội dung nghiên cứu bao gồm: 1- Thử nghiệm hệ thống multiplexPCR phát vi khuẩn lao mẫu bệnh phẩm lâm sàng 2- Đánh giá hiệu hệ thống multiplexPCR phương...
... Công nghệ Việt Á, TP HCM 2.2.3 Xác định tần số xuất V cholerae mẫu tôm nhuyễn thể kỹthuậtmultiplexPCRKỹthuật m -PCR thực với DNA từ hai nguồn gốc khác gồm DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch ... rfb-R Nguồ n 663 V cholerae Phản ứng mPCR1 Mồi V cholerae O139 V cholerae O1 El Tor V cholerae O1 Classical Trình tự 5’ – 3’ Kích cỡ (bp) Xác định 248 mPCR2 mPCR3 Alam cs, 2006 River a cs, 2001 ... ghi nhận tiếp tục thực phản ứng m -PCR2 Phản ứng m -PCR2 sử dụng cặp mồi, cặp mồi thứ thiết kế dựa vào gen ctxA đặc trưng cho V cholerae, cặp mồi thứ thứ thiết kế để phân biệt hai serogroup O1...
... 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tài liệu tiếng Việt Huỳnh Thị Lệ Duyên, 2003 Ứng dụng kỹthuật thụ tinh in vitro dùng pcr xác định giới tính phơi heo Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp, Đại Học Khoa ... Nguyễn Thị Thu Lan, 2002 Thiết lập qui trình xác định giới tính heo (sus scrofa domestica) kỹthuậtpcr (polymerase chain reaction) Khóa luận tốt nghiệp cử nhân sinh học, Đại Học Khoa Học Tự ... Hoá chất PCRPCR buffer MgCl2 Taq polymerase dNTP 1X 1,5 mM tùy phản ứng 200 µM / loại H2O cất lần, khử ion, vô trùng, chiếu tia UV 15 phút, pH 6,8 – 7,0 - Hoá chất điện di sản phẩm PCR + Agarose...
... đạt nồng độ Tris - HCl buffer PCR 20 mM Nhưng bổ sung khơng mang lại hiệu Ngồi ra, loại Taq sản xuất hãng theo qui cách khác ảnh hưởng đến kết PCR Hình 4.2 Sản phẩm PCR từ ba loại Taq Như vậy, ... sử dụng Tris - HCl phản ứng Theo Alves ctv (2003), buffer PCR cần 20 mM Tris - HCl phản ứng xác định 36 giới tính bò Thực tế, buffer PCR Bio-rad ABgene đáp ứng điều buffer Promega có 10 mM Tris ... kiện hoạt động cho enzyme tăng lượng lông cần ly trích) 34 4.2 KẾT QUẢ PCR XÁC ĐỊNH GIỚI TÍNH 4.2.1 Kết xây dựng qui trình PCR 4.2.1.1 So sánh hai chu trình nhiệt Sau tiến hành xác định giới tính...
... tăng tối đa lượng nguyên liệu dùng cho phản ứng nhân - Trình tự lặp lại phải trình tự đặc hiệu cho đực 2.3.5.2 Một số cơng trình xác định giới tính PCR Sau thập niên phát triển, kỹthuật xác ... pháp lai chỗ Kết cho thấy phương pháp PCR cho hiệu phân tích cao so với phương pháp lại Vào 1994, Bredbacka ctv nghiên cứu qui trình xác định giới tính kỹthuậtPCR Trong cơng trình này, tác giả ... giống bò Từ trình tự lặp lại đó, thiết kế đoạn mồi RIV đoạn mồi UIV nhằm khuếch đại đoạn DNA dài 655 bp qua PCR Ngoài ra, để kiểm chứng kết xác hay khơng, dựa vào trình tự chun biệt cho gen thụ...
... bào thường sử dụng để khẳng định kết kỹthuật phân biệt giới tính khác 2.3.4 Sử dụng đoạn dò DNA chun biệt NST Y để phân biệt giới tính phơi Nguyên tắc kỹthuật việc lai DNA tổng số lấy từ tế ... (King, 1984; Daiger ctv, 1985; Picard ctv, 1985) Phương pháp gặp phải hai khó khăn Một, phải có kỹthuật cao tạo nhiều tế bào metaphase để NST dàn trãi rõ ràng Hai, đòi hỏi nhiều thời gian phân ... Bridges chứng minh ruồi giấm (Drosophila) có giới tính xác định dựa số lượng NST X dù NST Y có diện hay khơng Năm 1923, Painter chứng minh diện NST X Y người mặt tế bào học Năm 1959, Welshons Russeell...
... Phân biệt giới tính kỹthuật polymerase chain reaction (PCR) 12 2.3.5.1 Cơ sở phản ứng PCR dùng để phân biệt giới tính 12 2.3.5.2 Một số cơng trình xác định giới tính PCR 13 PHẦN III ... Nguyễn Văn Út, Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, tháng 9/2005, “XÁC ĐỊNH GIỚI TÍNH BẰNG KỸTHUẬTMULTIPLEXPCR TRÊN BA GIỐNG BÒ” Hướng dẫn khoa học : PGS TS Trần Thị Dân BSTY Quách Tuyết Anh Đề ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** XÁC ĐỊNH GIỚI TÍNH BẰNG KỸTHUẬTMULTIPLEXPCR TRÊN BA GIỐNG BÒ Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS TRẦN THỊ DÂN NGUYỄN...
... sta E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy bò, bê heo 5.2 Đề nghị (1) Có thể ứng dụng kỹthuậtmultiplex – PCR để phát gen độc lực dòng E coli gây bệnh, góp phần chẩn đoán bệnh cho gia súc người, ... Thị Mai Khanh, 2004 Phát số gen độc lực Escherichia coli phân lâp từ phân thịt bò, heo kỹthuậtmultiplex – PCR Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp Trường đại học Nông Lâm TP HCM Trần Thanh Phong, ... type by Mismatch amplification mutation assay multiplex – PCR J Clin Microbiol 33:28-250 17 Cerna J F., Nataro J P, and Garcia T E., 2003 Multiplex – PCR for detection of three plasmid borne genes...
... môi trường MAC mẫu số (1HM), multiplex – PCR phát 8/9 (88,9%) khuẩn lạc mang gen stx2 (2) khuẩn lạc riêng lẻ màu hồng môi trường SMAC mẫu số (1HS), multiplex – PCR phát 9/9 (100%) khuẩn lạc ... môi trường SMAC mẫu số 1(1TS), multiplex – PCR phát 9/10 (90%) khuẩn lạc mang gen stx2 (4) khuẩn lạc riêng lẻ màu trắng môi trường SMAC mẫu số (2TS), multiplex – PCR phát 3/8 (37,5%) khuẩn lạc ... lẻ để ly trích DNA chạy multiplex – PCR phát gen gây độc Kết trình bày bảng 4.4 Kết bảng 4.4 cho thấy (1) khuẩn lạc riêng lẻ màu hồng MAC lấy ngẫu nhiên, multiplex – PCR phát 1/4 số khuẩn lạc...
... phân lập multiplex - PCR - Việc phát gen độc lực E coli thực phản ứng multiplex – PCR với máy luân nhiệt (thermal cycler): Multiplex – PCR1 : Phát gen eae, hly, stx1, stx2 Multiplex – PCR2 : Phát ... IMViC(+/-;+;-;-) Ly trích DNA (DNA nhóm khuẩn lạc) (-) Loại bỏ ống NA giữ gốc Multiplex - PCR (+) Ly trích DNA riêng theo ống NA Multiplex- PCR Sơ đồ 3.1 Phân lập, xác định E coli phát gen độc lực 34 3.3.3 ... mẫu đối chứng dương cung cấp từ Trường đại học Thú y Toulouse (Pháp) Multiplex – PCR1 * Trình tự primer sử dụng multiplex – PCR1 Gen độc TCGCCAGTTATCTGACATTCTG Eae-F GACCCGGCACAAGCATAAGC Eae-R...
... lập Multiplex – PCR cải tiến kỹthuậtPCR mà nhân lên đồng thời nhiều đoạn DNA mong muốn cách sử dụng nhiều cặp primer phản ứng Multiplex – PCR mô tả Chamberlain năm 1988 kể từ multiplex – PCR ... (ELISA), DNA-probe, PCR 2.2 KỹthuậtPCR 2.2.1 Nguyên tắc 23 PCR (polymerase chain reaction - phản ứng tổng hợp dây chuyền nhờ polymerase) Kary Mullis cộng phát minh năm 1985 PCRkỹthuật in vitro ... điều Khía cạnh PCR chứng minh quan trọng phân tích pháp lý, cho phép kỹthuật genetic fingeprinting sử dụng với sợi tóc chí với vết máu, khiến cho tên tội phạm khó lọt lưới pháp luật PCR sử dụng...