... hạn vikhuẩn 13 Hình 3.1 Phản ứng tạo đầu (blunt-end) cho đoạn DNA 35 Hình 4.1 Biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 38 Hình 4.2 Biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn ... phƣơng tiện mang gen, biếnnạp gen, tăng gen, biểu gen hay thao tác khác genCác cấu trúc DNA dùng cho mục tiêu gọi vectorVi c biếnnạp DNA tái tổ hợp vàotếbào thích hợp cho phép vector có khả ... Các thực khuẩn thể xâm nhiễm vàotếbàovikhuẩn sinh sôi nhờ máy sinh tổng hợp vikhuẩn Khi số lƣợng phage tăng lên đến hàng triệu sao, chúng phá vỡ tếbàovikhuẩn Nhƣng số trƣờng hợp, tế bào...
... 4.2.2 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp đối chứng Biếnnạp có tếbào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tếbào khả nạp) phục hồi ... khả nạp mà không cần xác định giá trị OD 42 4.2 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml a b c DC Hình 4.3 Kết cấy vikhuẩn ... trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biếnnạp đoạn DNA vàovikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vikhuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid Bluescript II SK (+/-) Sốc nhiệt Vi khuẩn...
... 4.2.2 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp đối chứng Biếnnạp có tếbào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tếbào khả nạp) phục hồi ... khả nạp mà không cần xác định giá trị OD 42 4.2 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml a b c DC Hình 4.3 Kết cấy vikhuẩn ... trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biếnnạp đoạn DNA vàovikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vikhuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid Bluescript II SK (+/-) Sốc nhiệt Vi khuẩn...
... vikhuẩn nhận phần đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩn nhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn ... tiếp hợp vikhuẩn F+ vikhuẩn F- Hình 2.5 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn Hfr vikhuẩn F- Hình 2.6 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn F’ vikhuẩn F- 10 Hình 2.7 Vách tếbàovikhuẩn Gram ... loại tải nạp Tải nạp chung: Là trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩn nhận sau thực tái tổ hợp để gắn DNA vàogenvikhuẩn nhận Tải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định...
... 4.2.2 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp đối chứng Biếnnạp có tếbào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tếbào khả nạp) phục hồi ... khả nạp mà không cần xác định giá trị OD 42 4.2 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml a b c DC Hình 4.3 Kết cấy vikhuẩn ... trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biếnnạp đoạn DNA vàovikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra + CaCl2 Vikhuẩn Ecoly DH5α Khả nạp Plasmid Bluescript II SK (+/-) Sốc nhiệt Vi khuẩn...
... 38 PHẦN KẾTQUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn B A C Hình 4.1 Biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biếnnạp với tỷ lệ tếbào khả nạp plasmid ... 3.4.1 Quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn E coli Vikhuẩn E coli ... hạn vikhuẩn 13 Hình 3.1 Phản ứng tạo đầu (blunt-end) cho đoạn DNA 35 Hình 4.1 Biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 38 Hình 4.2 Biếnnạp plasmid vàotếbàovi khuẩn...
... vikhuẩn nhận phần đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩn nhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn ... tiếp hợp vikhuẩn F+ vikhuẩn F- Hình 2.5 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn Hfr vikhuẩn F- Hình 2.6 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn F’ vikhuẩn F- 10 Hình 2.7 Vách tếbàovikhuẩn Gram ... loại tải nạp Tải nạp chung: Là trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩn nhận sau thực tái tổ hợp để gắn DNA vàogenvikhuẩn nhận Tải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định...
... trợ chuyểngen RK2 chứa các yếu tố tra+ mob+ giúp vikhuẩn cho hình thành cầu tiếp hợp chuyểngenvàovikhuẩn nhận Vikhuẩn cho sử dụng hệ thống transposon mini-Tn5 đột biến hai lần mang gen ... lam (BW – Blue Wavelength) 47 Phần KẾTQUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết 4.1.1 Kết tiếp hợp đoạn gen gfp vàovikhuẩn Pseudomonas fluorescens 4.1.1.1 Nuôi cấy vikhuẩn môi trƣờng LB Môi trƣờng LB môi ... Hình 4.1 Kết cấy vikhuẩnKhuẩn lạc môi trƣờng KB sau 24 48 4.1.1.3 Nuôi cấy vikhuẩn môi trƣờng M9 Môi trƣờng M9 môi trƣờng tối thiểu dùng để chọn lọc riêng dòng vikhuẩn Mật độ dịch vi khuẩn...
... DNA vàotếbào nhận Vi c thực cách đƣa đoạn đứt sợi site oriT vàochuyển sợi từ đầu E vàotếbào nhận cho operon tra chuyểnvào sau DNA chuyển phần lại biếnthành hai sợi Ở các plasmid vi c thể ... xác vikhuẩn đối kháng sản sinh hợp chất DAPG Các hình thức xử lý vikhuẩn đối kháng cách khử hạt giống, ngâm rễ dịch vikhuẩn tƣới dịch vikhuẩnvào đất cần đƣợc ý Kết hợp nhiều dòng vikhuẩn ... gen vòng Vi c chuyển đoạn DNA vikhuẩn nhờ plasmid tiếp hợp thànhcơng trƣờng hợp chúng khơng có mối quan hệ bền Thí dụ, F-plasmid tiếp hợp chuyểngenvikhuẩn với tần số khoảng 10-5 vàotế bào...
... vikhuẩn nhận phần đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩn nhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn ... tiếp hợp vikhuẩn F+ vikhuẩn F- Hình 2.5 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn Hfr vikhuẩn F- Hình 2.6 Quá trình tiếp hợp vikhuẩn F’ vikhuẩn F- 10 Hình 2.7 Vách tếbàovikhuẩn Gram ... loại tải nạp Tải nạp chung: Là trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩn nhận sau thực tái tổ hợp để gắn DNA vàogenvikhuẩn nhận Tải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định...
... 38 PHẦN KẾTQUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn B A C Hình 4.1 Biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biếnnạp với tỷ lệ tếbào khả nạp plasmid ... lọc thể biếnnạp theo quy trình (ở thể tích biếnnạp 3:0.5, dịch biếnnạp pha lỗng ½ trang lên đĩa) cho kết tốt chọn lọc thể biếnnạp theo quy trình (ở thể tích biếnnạp 3:0.5, dịch biếnnạp khơng ... Biếnnạp plasmid tái tổ hợp (A) Biếnnạp plasmid chèn đoạn 223bp; (B) Biếnnạp plasmid chèn đoạn 900bp; (C) Biếnnạp plasmid chưa tái tổ hợp C 47 Kếtbiếnnạp hồn tồn plasmid tái tổ hợp vào vi...
... 3.4.1 Quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn E coli Vikhuẩn E coli ... khác Kết nghiên cứu ông cho thấy sử dụng tếbào đầu phage log ảnh hƣởng lớn đến thànhcôngvi c chuẩn bị tếbào khả nạp Giá trị OD600 thích hợp dịch ni cấy chuẩn bị tếbào khả nạp với chủng vikhuẩn ... trƣởng tếbào chủ Trƣớc hết, biếnnạp plasmid vàotếbào chủ, sau nuôi cấy tếbào chủ môi trƣờng chọn lọc thích hợp thu nhận sinh khối tếbào Q trình tách chiết plasmid từ tếbào chủ công đoạn...
... 4.4 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp sốc nhiệt 60 giây .44 Hình 4.5 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp đối chứng 45 Hình 4.6 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp tỉ lệ thể tích 30 : 46 Hình 4.7 Kết cấy vikhuẩn ... 3.3.1 Quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biếnnạp đoạn DNA vàovikhuẩn E.coly DH5α kiểm tra .27 3.3.3 Xác định mật số vikhuẩn cách đo OD600nm kết hợp với phƣơng ... tính 39 4.2 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 43 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml 43 4.2.2 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng...
... PHẦN : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Chúng tơi xây dựng đƣợc quy trình chuyển đoạn DNA vàotếbào chủ DH5α Quy trình sử dụng cho thí nghiệm tạo dòng áp dụng trực tiếp phòng thí nghiêm Các bƣớc ... 20μl glycerol 98% vào trữ -700C Biếnnạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3µl dịch huyền phù tếbào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 0.5µl DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ ... theo điều kiện phòng thí nghiệm, chuyển đoạn DNA từ sản phẩm cắt vàotế bào, chuyểngen hoàn chỉnh vàotếbào chủ kiểm soát biểu của gen 59 Nếu trƣờng hợp khơng đủ hố chất để tách chiết plasmid theo...
... hợp vàovikhuẩn E.coly DH5α khả nạp, thu đƣợc kết nhƣ sau 52 a b Hình 4.16 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp plasmid tái tổ hợp với đoạn DNA 629 bp môi trƣờng LB/amp(100μg/ml)/ X-gal/IPTG (a) Biếnnạp ... gel agarose, kết đƣợc kiểm tra chèn vào plasmid (đã đƣợc cắt tạo đầu bằng) biếnnạpvàovikhuẩnKết diện di (hình 4.14) cho thấy sản phẩm sau tinh không band phụ, nhiên lúc kiểm tra kết tinh cần ... hình ( a) phóng to b a Hình 4.17 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp plasmid tái tổ hợp với đoạn DNA 580bp môi trƣờng LB/amp/ X-gal/IPTG (a )Biến nạp với tỉ lệ tếbào khả nạp plasmid tái tổ hợpvới đoạn DNA...
... 4.2.2 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 100µg/ ml Hình 4.5 Kết cấy vikhuẩnbiếnnạp đối chứng Biếnnạp có tếbào khả nạp khơng có plasmid ( thể tích 30μl tếbào khả nạp) phục hồi ... khả nạp mà không cần xác định giá trị OD 42 4.2 Các quy trình biếnnạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩnbiếnnạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml a b c DC Hình 4.3 Kết cấy vikhuẩn ... chọn lọc thể biếnnạpBiếnnạp 60 giây với tỉ lệ khả nạp : plasmid 30 : ; 10 : ; : 0.5 đối chứng đƣợc thể Hình 4.4 Kết tƣơng tự với kếtbiếnnạp 90 giây Nhƣ vậy, quy trình biếnnạp khơng có khác...
... buffer 3.3.11 Chuyển sản phẩm nối vàotếbàovikhuẩn E.coly DH5α khả nạp (theo quy trình Sambrook cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực biếnnạp theo quy trình sau Hút 10µl dịch huyền phù tếbào competen ... (a) kết cấy vikhuẩn sau nuôi cấy nồng độ pha loãng 100, 10-1, 10-2 nồng độ lập lại lần ; (b) kết cấy vikhuẩn sau nuôi cấy nồng độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 nồng độ lập lại lần a b Hình 4.2 Kết ... OD600 nm kết hợp với đếm spot cuonting, chọn nồng độ pha lỗng có số khuẩn lạc từ 25 – 300 để đếm Nếu khuẩn lạc mọc dy quỏ thỡ cú th m ẵ hoc ẳ git nhân lên tƣơng ứng a b Hình 4.1 Kết cấy vi khuẩn...