Xây dựng qui trình nuôi, nhân sinh khối cụm chồi lan kim tuyến anoectochilus roxburghii (wall ) lindl in vitro nghiên cứu khoa học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HỒ CHÍ MINH - - BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN XÂY DỰNG QUI TRÌNH NI, NHÂN SINH KHỐI CỤM CHỒI LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS ROXBURGHII (Wall.) Lindl in vitro Mã số đề tài: Bình Dương, 04/2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN XÂY DỰNG QUI TRÌNH NI, NHÂN SINH KHỐI CỤM CHỒI LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS ROXBURGHII (Wall.) Lindl in vitro Mã số đề tài: Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Thu Ngân Khoa: Công nghệ sinh học Các thành viên: Đinh Thiên Hùng Nguyễn Quốc Khánh Đoàn Thúy Vy Châu Ngọc Qúi Người hướng dẫn: Nguyễn Thanh Mai Bình Dương, 4/2018 MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1 Sơ lược lịch sử phát triển 1.2 Khái niệm ứng dụng 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô thực vật 1.3.1 Sự lựa chọn mẫu cấy 1.3.2 Khử mẫu 1.3.3 Môi trường nuôi cấy 1.4 Các điều kiện ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ 1.4.1 Ánh sáng 1.4.2 Nhiệt độ 1.4.3 Nồng độ pH 1.4.4 Sự thống khí 1.4.5 Muối khoáng 1.4.6 Nguồn cacbon 1.4.7 Dịch nghiền khoai tây 1.4.8 Vitamin 1.4.9 Agar 1.4.10 Than hoạt tính 1.5 Chất điều hòa sinh trưởng 1.5.1 Auxin 1.5.2 Cytokinin 1.6 Sự tạo cụm chồi 1.7 Sản xuất sinh khối in vitro Lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl 2.1 Phân loại 2.2 Đặc điểm hình thái 10 2.4 Phân bố 11 2.5 Tác dụng công dụng A.roxburghii (Wall.) Lindl 11 PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 Địa điểm thời gian thực nghiên cứu 14 1.1 Địa điểm 14 1.2 Thời gian 14 Đối tượng nghiên cứu 14 Điều kiện nuôi cấy in vitro lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl 14 3.1 Môi trường nuôi cấy 14 3.2 Điều kiện nuôi cấy 14 3.3 Hóa chất dùng nuôi cấy 14 Phương pháp 15 4.1 Tạo nguồn mẫu cho trính nhân chồi: chồi nách lan kim tuyến 15 4.2 Tạo cụm chồi lan kim tuyến 15 Bố trí thí nghiệm 16 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 Kết 18 1.1 Tạo nguồn mẫu ban đầu: chồi nách lan kim tuyến 18 1.2 Tạo cụm chồi lan kim tuyến 21 1.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tạo cụm chồi 22 1.2.2 Ảnh hưởng BA đến chiều cao chồi 25 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 Kết luận 29 Kiến nghị 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC 31 DANH MỤC VIẾT TẮT BA Benzylaminopurine ĐHQGHN Đại học Quốc gia Hà Nội KHLN Khoa học Lâm Nghiệp KHLNVN Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam MS Môi trường Marashige Skoog NAA Naphthalene acetic acid Nxb Nhà xuất i DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ thành phần nguyên tố đa lượng MS đến trình tạo chồi nách lan kim tuyến 30 ngày 15 Bảng 2.2: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến khả tạo cụm chồi Lan A roxburghii (Wall.) Lindl 30 ngày 16 Bảng 3.1: Kết thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ thành phần nguyên tố đa lượng MS đến trình tạo chồi nách lan kim tuyến 30 ngày 18 Bảng 3.2: Kết thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến khả tạo cụm chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày 22 Bảng 3.3: Kết nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến chiều dài chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày 25 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl Hình 3.1: Chồi lan kim tuyến sau 30 ngày nuôi cấy tạo chồi ngủ 20 Hình 3.2: Thí nghiệm tạo chồi lan kim tuyến sau 30 ngày nuôi cấy tạo chồi nách 21 Hình 3.3: Chồi nách lan kim tuyến 22 Hình 3.4: Thí nghiệm tạo cụm chồi lan kim tuyến sau 45 ngày nuôi cấy từ chồi nách 24 Hình 3.5: Chiều cao chồi lan kim tuyến sau 45 ngày nuôi cấy từ chồi nách 27 iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: XÂY DỰNG QUI TRÌNH NI, NHÂN SINH KHỐI CỤM CHỒI LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS ROXBURGHII (Wall.) Lindl in vitro - Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thu Ngân - Lớp: DH14NN01 Khoa: Công nghệ sinh học Năm thứ: Số năm đào tạo: - Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Thanh Mai Mục tiêu đề tài: “Xây dựng qui trình sản xuất sinh khối dược liệu lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl in vitro” thực Phịng TNTĐ phía Nam cơng nghệ tế bào thực vật – Viện Sinh học nhiệt đới kết hợp với phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào sở trường đại học Mở thành phố Hồ Chí Minh Nhằm mục tiêu cấp thiết tạo nguồn nguyên liệu lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl nhân tạo để đảm bảo phục vụ cho y học, đáp ứng nhu cầu thị trường, giảm giá thành sản phẩm Ngồi hạn chế việc khai thác trái phép nguồn ngồi tự nhiên Đồng thời lưu giữ giống lan quý có khả tuyệt chủng Việt Nam Tính sáng tạo: Thực đối tượng có giá trị kinh tế - xã hội Bảo tồn loài lan dược liệu quí Thực nhân sinh khối giúp đáp ứng nhu cầu nguồn dược liệu xã hội Đem lại hiệu kinh tế phát triển qui trình nhờ vào kĩ thuật cơng nghệ Kết nghiên cứu: Tỷ lệ thành phần đa lượng MS gốc cho tỷ lệ phát sinh chồi nách nhanh hiệu Phần thân lan kim tuyến có chồi ngủ rễ bất định cho hiệu suất cao so với phần gốc thân phần khơng có rễ bất định Chồi nách lan kim tuyến nuôi cấy môi trường MS có bổ sung mg/L BA cho hiệu tạo cụm chồi cao Cụm chồi môi trường MS có bổ sung 1mg/L BA cho chiều cao chồi tốt Chồi đạt từ 1,5 cm cấy truyền để thực tăng sinh khối Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Nghiên cứu hoàn thành tạo qui trình nhân sinh khối lan kim tuyến nhanh hiệu quả, đem lại hiệu lớn kinh tế Đồng thời, việc nuôi trồng lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl giúp giảm nạn khai thác bừa bãi lan kim tuyến ngời tự nhiên, gây suy giảm nghiêm trọng số lượng lồi Cơng bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): Ngày 16 tháng 04 năm 2018 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài Nguyễn Thị Thu Ngân Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi): Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Ngày 16 tháng 04 năm 2018 Người hướng dẫn (ký, họ tên) Nguyễn Thanh Mai (a) (c) (b) (d) Hình 3.1: Chồi lan kim tuyến sau 30 ngày ni cấy tạo chồi ngủ a) mẫu thân ban đầu; b) chồi NT1, c) chồi NT2, d) chồi NT3 20 (a) (c) (b) (d) Hình 3.2: Thí nghiệm tạo chồi lan kim tuyến sau 30 ngày nuôi cấy tạo chồi nách a) mẫu thân ban đầu; b) chồi NT1, c) chồi NT2, d) chồi NT3 1.2 Tạo cụm chồi lan kim tuyến Khảo sát nồng độ cytokinin BA mơi trường có chứa MS + 30g/L đường + 7,8 g/L agar, pH 5,7 – 5,8 Mẫu cấy chồi nách thí nghiệm mục 4.1 đạt độ dài khoảng – 10 mm 21 Hình 3.3: Chồi nách lan kim tuyến 1.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tạo cụm chồi Bảng 3.2: Kết thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến khả tạo cụm chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày Trung bình số chồi Nghiệm thức Nồng độ BA (mg/L) Đ/C 0,0 1,000f TC1 0,5 1,600e TC2 1,0 2,800d TC3 1,5 4,050c TC4 2,0 8,200a TC5 2,5 6.000b TC6 3,0 1,300ef cv(%) hình thành 8,977 Trong cột số liệu có mẫu tự khơng có khác biệt mức ý nghĩa 0,05 qua phép thử Ducan Chồi có kích thước khoảng – 10 mm từ mắt thân lan kim tuyến cấy môi trường MS sau 30 ngày nuôi cấy tiếp tục cấy vào mơi trường MS có bổ sung BA nồng độ thay đổi theo bảng 2.2 22 Sau 45 ngày ni cấy, số chồi hình thành từ chồi ban đầu nghiệm thức thí nghiệm cho thấy ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tạo cụm chồi Ở nghiệm thức TC4 (nồng độ BA 2,0 mg/L) cho hiệu tạo chồi cao so với nghiệm thức lại với số chồi trung bình 8,2 chồi/mẫu Ở nghiệm thức có mẫu đạt đến 11 chồi, chồi nhỏ, phát sinh từ gốc, phát triển chậm Nghiệm thức Đ/C TC6 khác biệt, chồi hình thành khơng có nghiệm thức Đ/C (nồng độ BA mg/L), trung bình chồi hình thành 1,0 chồi/mẫu, mẫu ban đầu phát triển bình thường hình thành Nghiệm thức TC6 ( nồng độ BA 3,0 mg/L) chồi hình thành ít, trung bình chồi hình thành 1,3 chồi/mẫu, có chồi nhỏ, chậm phát triển, có xuất mẫu bị chết Ở nghiệm thức TC1, TC2 khả tạo cụm chồi thấp, trung bình số chồi hình thành nghiệm thức TC1 1,6 chồi/mẫu TC2 2,8 chồi/mẫu, đa số mẫu đạt từ chồi trở lại, có mẫu có chồi, khơng có mẫu chồi hình thành Ở mẫu có đến chồi, chồi phát triển tốt, chồi mập, cao, phát triển nhanh, chủ yếu phát triển chồi chính, chồi phụ chậm phát triển Nguyên nhân nồng độ BA chưa đủ để ức chế hoàn toàn ưu lan kim tuyến dẫn đến chất dinh dưỡng tập trung phát triển chồi có chiều cao phát triển so với chồi nghiệm thức có nồng độ BA cao Nghiệm thức TC3 (nồng độ BA 1,5 mg/L) có số chồi tạo khơng cao, trung bình số chồi tạo 4,05 chồi/mẫu Đối với nghiệm thức TC5 (nồng độ BA 2,5 mg/L) có số chỗi phát sinh cao, trung bình chồi/mẫu, phát triển không tốt, phần chồi trắng Để nhân số lượng lan kim tuyến điều cần thiết để tạo nguồn vật liệu đủ lớn để thực thí nghiệm Trong nhân giống in vitro, cytokinin có vai trị đặt biệt quan trọng kích thích phát triển chồi, định hệ số nhân chồi chất lượng chồi Nhóm cytokinin ảnh hưởng đến trình phân chia tế bào, cảm ứng, phát triển chồi phụ, ức chế ưu Qua thí nghiệm cho thấy, có mặt BA tạo hiệu việc tạo cụm chồi, nghiệm thức có chứa BA hệ số nhân chồi tốt so với đối chứng Trong thực vật ln có cân nội hormone, việc bổ sung chất điều hòa sinh trưởng phá vỡ cân tạo động lực cho hình thành chồi bên Với liều lượng bổ sung thích hợp làm tăng hệ số nhân chồi thực vật Tuy nhiên với liều lượng cao có thể gây ức chế gây độc cho thực vật 23 (a) d e (d) (c) (b) f (e) (f) (g) Hình 3.4: Thí nghiệm tạo cụm chồi lan kim tuyến sau 45 ngày nuôi cấy từ chồi nách 24 a) Chồi Đ/C; b) chồi TC1; c) chồi TC2; d) chồi TC3; e) chồi TC4; f) chồi TC5; g) chồi TC6 1.2.2 Ảnh hưởng BA đến chiều cao chồi Bảng 3.3: Kết nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến chiều dài chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày Trung bình chiều Nghiệm thức Nồng độ BA (mg/L) Đ/C 0,0 3,625b TC1 0,5 3,800ab TC2 1,0 4,025a TC3 1,5 3,050c TC4 2,0 2,500d TC5 2,5 2,325d TC6 3,0 0,860e cv (%) dài (cm) 7,398 Trong cột số liệu có mẫu tự khơng có khác biệt mức ý nghĩa 0,05 qua phép thử Ducan Chồi hình thành từ nách lan kim tuyến ni cấy mơi trường MS có bổ sung BA nồng độ thay đổi theo bảng 4.3 Sau 45 ngày nuôi cấy, chiều cao chồi lan kim tuyến nghiệm thức thí nghiệm khác nhau, cho thấy ảnh hưởng BA đến phát triển lan kim tuyến Ở nghiệm thức TC2 (nồng độ BA mg/L) TC1 (nồng độ BA 0.5mg/l) cho kết chiều cao lớn so với nghiệm thức thí nghiệm Trung bình chiều cao chồi nghiệm thức TC2 4,025 cm TC1 3,8 cm Sự có mặt BA thúc đẩy phát triển thực vật Nghiệm thức TC2, trung bình chiều cao chồi có khác biệt so với đối chứng, cịn TC1 khơng có khác biệt với đối chứng Điều giải thích có diện BA đồng thời kích thích phát sinh chồi bên phát triển Ở Đ/C (nồng độ BA mg/L) mẫu khơng phát sinh thêm chồi phụ, tồn dinh dưỡng cung cấp cho phát triển Nghiệm thức TC1 (nồng độ BA 0,5 mg/L) nồng độ 25 BA thấp cung cấp cho việc phát sinh -2 chồi phụ phát triển nên BA chưa đủ để tạo khác biệt chiều cao so với nghiệm thức Đ/C Tuy nhiên, nghiệm thức TC2 (nồng độ BA mg/L) nồng độ đủ phát sinh - chồi phụ bù lại lượng BA có khả khích thích phát triển tạo khác biệt với đối chứng Ở nghiệm thức TC3, TC4, TC5, BA tác động tạo nhiều chồi lượng chồi lớn lại cạnh tranh dinh dưỡng môi trường, ảnh hưởng đến phát triển cây, trung bình chiều cao chồi thấp so với đối chứng có khác biệt có ý nghĩa Ở nghiệm thức TC3 (nồng độ BA mg/L) hàm lượng BA cao gây ức chế gây độc cho cây, làm chậm phát triển Cụm chồi từ đến chồi có chiều cao đạt yêu cầu nhiều nhất, chồi phát triển mạnh, chồi mập Tuy nhiên, cụm chồi từ 2-3 chồi đa số phát triển mạnh chồi chính, cịn chồi phụ phát triển chậm Ở nồng độ BA thấp khơng đủ ức chế hồn tồn ưu lan kim tuyến Nồng độ BA cao ưu bị kiềm hãm, chồi cụm phát triển so với nồng độ BA thấp Chồi đạt chiều cao từ cm có khoảng – đốt thân cấy truyền làm mẫu cho thí nghiệm tăng sinh khối 26 (a) (b) (c) (d) (e) (f) (g) Hình 3.5: Chiều cao chồi lan kim tuyến sau 45 ngày nuôi cấy từ chồi nách a) Chồi Đ/C; b) chồi TC1; c) chồi TC2; d) chồi TC3; e) chồi TC4; f) chồi TC5; g) chồi TC6 27 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 Kết luận Tỷ lệ thành phần đa lượng MS gốc cho tỷ lệ phát sinh chồi nách nhanh hiệu Phần thân lan kim tuyến có chồi ngủ rễ bất định cho hiệu suất cao so với phần gốc thân phần khơng có rễ bất định Chồi nách lan kim tuyến nuôi cấy môi trường MS có bổ sung mg/L BA cho hiệu tạo cụm chồi cao Cụm chồi môi trường MS có bổ sung 1mg/L BA cho chiều cao tốt Chồi đạt từ 1,5 cm cấy truyền để thực tăng sinh khối Kiến nghị Nghiên cứu mơi trường có chứa hợp chất tự nhiên để tăng sinh cụm chồi lan kim tuyến Thực tăng sinh lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl hệ thống bioreactor + Khảo sát môi trường có chứa nồng độ casein thích hợp tăng sinh khối lan kim tuyến bioreator + Khảo sát môi trường có chứa nồng độ nước dừa thích hợp tăng sinh khối lan kim tuyến bioreator 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa họcvà Công nghệ Việt Nam 2007 Sách ĐỏViệtNam Phần II Thực Vật Nxb Khoahọc tự nhiên Công nghệ, tr 404 – 405 [2] Nguyễn Thị Lệ Hà 2017 Nghiên cứu kỹ thuật vi nhân giống lan kim tuyến (Anoectochilus sp.) tạp chí KHLN Chuyên san/2017 (8 – 15) Viện KHLNVN – VAFS [3] Dương Công Kiên.2002 Nuôi cấy mô thực vật tập Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [4] Nguyễn Thị Lài 2012 Nghiên cứu nhân nhanh loài Lan kim tuyến (Anoectochilus Roxburghii (Wall.) Lindl.) Việt Nam phương pháp nuôi cấy mô tế bào Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Hà Nội [5] Phùng Văn Phê 2009 Đặc điểm hình thái, phân bố loài lan kim tuyến Anoectochilus setaceus blume Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 26 (2010) 104-109 [6] Phùng Văn Phê 2010 Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi in vitro loài lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 26 (2010) 248 – 253 [7] Bùi Trang Việt 1998 Sinh lý thực đại cương Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Tài liệu nước [8] Thorpe TA, Stasolla C, Yeung EC, de Klerk G-J, Roberts, George EF 2008 The Components of Plant Tissue Culture Media II: Organic Additions, Osmotic and Ph Effects, and Support Systems In George EF Hall MA de Kelrk G-J, eds Plant Propagation by Tissue Culture 3rd Edition Vol.1 The Background Springer- Verlag Dordrecht, pp.115-173 Tài liệu Internet [9] http://s1.downloadmienphi.net/file/downloadfile8/200/1372848.pdf [10] https://khonggiansinhhoc.com/nuoi-cay-mo-thuc-vat-va-thanh-phan-moi-truongnuoi-cay-invitro-phan-ii/ 30 PHỤ LỤC Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog) Bảng: Thành phần muối khoáng (mg/l) Skoog I Skoog II Skoog III NH4NO3 1650,00 KNO3 1900,00 KH2PO4 170,00 MgSO4.7H2O 370,00 CaCl2.2H2O 440,00 Na2EDTA 37,30 FeSO4.7H2O 27,80 Mn2SO4.4H2O 22,30 H3BO3 6,20 ZnSO4.7H2O 8,60 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Bảng: Thành phần vitamin Morel (mg/l) Morel’s Pirydoxine (B6) 1,00 Vitamin Biotin (II) 0,01 Meso-inositol 100,00 Nicotinic Acid (P.P) 1,00 Thiamin-HCl (B1) 1,00 Pantotheate-Ca 1,00 31 Phân tích thống kê ANOVA 2.1 Kết thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ thành phần nguyên tố đa lượng MS đến trình tạo chồi nách lan kim tuyến 32 2.2 Kết thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến khả tạo cụm chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày 33 2.3 Kết thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA (mg/L) đến chiều cao chồi lan A roxburghii (Wall.) Lindl 45 ngày 34 ... ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN XÂY DỰNG QUI TRÌNH NI, NHÂN SINH KHỐI CỤM CHỒI LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS ROXBURGHII (Wall. ) Lindl in vitro. .. THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: XÂY DỰNG QUI TRÌNH NI, NHÂN SINH KHỐI CỤM CHỒI LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS ROXBURGHII (Wall. ) Lindl in vitro - Sinh viên... 23 (a) d e (d) (c) (b) f (e) (f) (g) Hình 3.4: Thí nghiệm tạo cụm chồi lan kim tuyến sau 45 ngày nuôi cấy từ chồi nách 24 a) Chồi Đ/C; b) chồi TC1; c) chồi TC2; d) chồi TC3; e) chồi TC4; f) chồi