Nghiên cứu môi trường nhân nhanh và khảo sát một số yếu tố môi trường; thời gian để héo nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu cây hùng chanh plectranthus amboinicus (lour ) spreng in vitro nghiên cứu khoa học

TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƢỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƢỜNG “NGHIÊN CỨU MÔI TRƢỜNG NHÂN NHANH VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG; THỜI GIAN ĐỂ HÉO NGUYÊN LIỆU ĐẾN HÀM LƢỢNG TINH DẦU CÂY HÚNG CHANH PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) SPRENG IN VITRO” Mã số đề tài: Thuộc nhóm ngành khoa học: Cơng nghệ Sinh học TP HCM, 3/2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƢỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƢỜNG “NGHIÊN CỨU MÔI TRƢỜNG NHÂN NHANH VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG; THỜI GIAN ĐỂ HÉO NGUYÊN LIỆU ĐẾN HÀM LƢỢNG TINH DẦU CÂY HÚNG CHANH PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) SPRENG IN VITRO” Mã số đề tài : Thuộc nhóm ngành khoa học: Cơng nghệ Sinh học Nơng nghiệp Nhóm sinh viên thực hiện: Lê Văn Vinh Nam/nữ: Nam Đồng Văn Trọng Nam/nữ: Nam Trần Đình Thiện Nam/nữ: Nam Nguyễn Thị Ngọc Hạnh Nam/nữ: Nữ Nguyễn Nhƣ Ngọc Nam/nữ: Nữ Dân tộc: Kinh Năm thứ: 4/Số năm đào tạo: Lớp: DH11NN01 Ngành học: Công nghệ Sinh học Ngƣời hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Trần Đông Phƣơng TP HCM, 3/2015 LỜI CẢM ƠN Xin trân trọng cảm ơn trƣờng Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học tạo điều kiện cho tiếp thu cách tốt nhất, giúp chúng tơi có mơi trƣờng học tập rèn luyện Xin gửi lời cảm ơn đến tất thầy cô giảng dạy suốt thời gian qua, trang bị cho kiến thức cần thiết giúp vững bƣớc chân chặn đƣờng sau Trân trọng cảm ơn cô Nguyễn Trần Đông Phƣơng ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn truyền đạt cho kiến thức quý báu để thực tốt đề tài Trân trọng cám ơn thầy Nguyễn Minh Hồng bạn phịng thí nghiệm Hóa – Mơi trƣờng tạo điều kiện giúp thực tốt đề tài nghiên cứu Xin cảm ơn tất bạn bè, anh chị em học việc phịng thí nghiệm Công nghệ Tế bào thực vật bên cạnh động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập Xin cảm ơn lịng tình cảm chân thành Chúc tất điều hạnh phúc thành cơng Tp Hồ Chí Minh, ngày 23 tháng 03 năm 2015 Nhóm sinh viên thực i MỤC LỤC MỤC LỤC ii Danh mục hình v Danh mục bảng vi Danh mục viết tắt vii ĐẶT VẤN ĐỀ Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 Sơ lƣợc họ Lamiaceae Sơ lƣợc Húng chanh Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng 2.1 Vị trí phân loại 2.2 Nguồn gốc, phân bố 2.3 Đặc tính sinh học Húng chanh .4 2.4 Đặc điểm sinh thái Húng chanh .5 2.5 Kĩ thuật nhân giống .5 2.6 Thành phần công dụng Húng chanh Hợp chất thứ cấp 10 3.1 Những yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp hợp chất thứ cấp 11 3.2 Tinh dầu 12 3.3 Một số phƣơng pháp chiết tinh dầu 13 Nghiên cứu nƣớc: 15 4.1 Nghiên cứu nƣớc 15 4.2 Nghiên cứu nƣớc .15 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 16 5.1 Khái niệm ứng dụng .16 5.2 Các yếu tố ảnh hƣởng đến nuôi cấy mô 16 5.3 Các điều kiện ảnh hƣởng đến q trình ni cấy 16 5.4 Vai trò chất điều hòa sinh trƣởng 17 5.5 Than hoạt tính 18 Phần II Phát sinh hình thái chồi bất định 19 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 ii Địa điểm thời gian thực nghiên cứu khoa học 22 1.1 Địa điểm: 22 1.2 Thời gian: 22 Đối tƣợng nghiên cứu 22 Điều kiện nuôi cấy in vitro Húng chanh 22 3.1 Môi trƣờng nuôi cấy 22 3.2 Điều kiện nuôi cấy 22 3.3 Hoá chất dùng nuôi cấy mô 22 Phƣơng pháp 23 4.1 Ảnh hƣởng nồng độ thành phần chất điều hòa tăng trƣởng thực vật lên tạo chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh 23 4.2 Khảo sát số yếu tố môi trƣờng ảnh hƣởng tới sinh trƣởng chồi in vitro Húng chanh 24 4.3 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh .27 ố tr th nghiệm 29 Phần III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 Ảnh hƣởng nồng độ thành phần chất điều hòa tăng trƣởng thực vật lên tạo chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh 31 1.1 Môi trƣờng MS có bổ sung kết hợp IAA BA .31 1.2 Mơi trƣờng MS có bổ sung kết hợp IAA kinetin 32 Khảo sát số yếu tố môi trƣờng ảnh hƣởng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 35 2.1 Ảnh hƣởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 35 2.2 Ảnh hƣởng nồng độ khoáng đa lƣợng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 37 2.3 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh .41 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh 44 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 Kết luận 47 Kiến nghị 47 iii Tài liệu tham khảo .48 Phụ lục viii iv DANH MỤC HÌNH Hình I.1 Cây Húng chanh Hình I.2 Hoa Húng chanh Hình I.3 Đoạn cành Húng chanh già, có rễ đốt .6 Hình I.4 Hai thành phần tinh dầu Húng chanh Hình I.5 Một số dƣợc phẩm đƣợc điều chế từ Húng chanh 10 Hình II.1 Quy trình ly trích tinh dầu 28 Hình II.2 Bộ chƣng cất tinh dầu phƣơng pháp lôi nƣớc .29 Hình III.1 Ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trƣờng MS sau tuần nuôi cấy 32 Hình III.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trƣờng MS sau tuần ni cấy 34 Hình III.3 Ảnh hƣởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trƣờng MS sau tuần nuôi cấy 36 Hình III.4 Ảnh hƣởng nồng độ khống đa lƣợng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh sau tuần ni cấy .38 Hình III.5 Ảnh hƣởng nồng độ khống đa lƣợng có bổ sung than hoạt t nh g/l đến sinh trƣởng chồi Húng chanh sau tuần nuôi cấy 40 Hình III.6 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng lên sinh trƣởng chồi in vitro Húng chanh sau tuần nuôi cấy 42 Hình III.7 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng bổ sung than hoạt t nh g/l đến sinh trƣởng chồi Húng chanh sau tuần ni cấy 43 Hình III.8 Tinh dầu Húng chanh thu đƣợc 45 v DANH MỤC BẢNG Bảng I.1 Thành phần phần trăm hợp chất bay Húng chanh đƣợc trồng số nơi giới Bảng II.1 Ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 23 Bảng II.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 24 Bảng II.3 Ảnh hƣởng than hoạt t nh trình sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 25 Bảng II.4 Ảnh hƣởng nồng độ khoáng đa lƣợng đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 26 Bảng II.5 Ảnh hƣởng nồng độ khoáng đa lƣợng bổ sung than hoạt t nh đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 26 Bảng II.6 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 27 Bảng II.7 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 27 Bảng II.8 Ảnh hƣởng thời gian để héo nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh 29 Bảng III.1 Ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 31 Bảng III.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 33 Bảng III.3 Ảnh hƣởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh .35 Bảng III.4 Ảnh hƣởng nồng độ khoáng đa lƣợng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 37 Bảng III.5 Ảnh hƣởng nồng độ khống đa lƣợng có bổ sung than hoạt t nh đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 39 Bảng III.6 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 41 Bảng III.7 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng bổ sung than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi chủ Húng chanh 43 Bảng III.8 Ảnh hƣởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh 45 vi DANH MỤC VIẾT TẮT AC Than hoạt tính BA 6-Benzinaminopurine Kin Kinetin MS Môi trƣờng Murashige Skoog IAA Indol-3-acetic acid 2,4-D 2,4-Diclophenoxyacetic acid vii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: “ Nghiên cứu môi trƣờng nhân nhanh khảo sát số yếu tố môi trƣờng; thời gian để héo nguyên liệu dến hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng in vitro” - Sinh viên thực hiện: Lê Văn Vinh - Lớp: DH11NN01 Khoa: Công nghệ Sinh học Năm thứ: Số năm đào tạo: - Ngƣời hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Trần Đông Phƣơng Mục tiêu đề tài: Xây dựng quy trình nhân nhanh Húng chanh điều kiện in vitro để thu đƣợc lƣợng lớn bệnh, từ khảo sát ảnh hƣởng thời gian để héo nguyên liệu đến trình chƣng cất thu nhận tinh dầu Tính sáng tạo: Khảo sát nồng độ khoáng đa lƣợng, nồng độ đƣờng ảnh hƣởng đến sinh trƣởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh Kết nghiên cứu: Chồi phát triển từ đoạn thân mang chồi ngủ tốt mơi trƣờng MS có bổ sung BA nồng độ 1,2 mg/l kết hợp IAA nồng độ 1,2 mg/l với chiều cao chồi cấy 19,47 mm/mẫu cấy môi trƣờng kinetin nồng độ 0,3 mg/l kết hợp IAA nồng độ 0,3 mg/l cho chiều cao chồi 22,13 mm/mẫu cấy Trong mơi trƣờng ni cấy có bổ sung than hoạt t nh, mơi trƣờng than hoạt tính nồng độ g/l cho chồi có chiều cao 12,11 mm/mẫu cấy tốt nghiệm thức khác Chồi hình thành phát triển tốt mơi trƣờng MS có bổ sung 20 g/l đƣờng với chiều cao chồi cấy 21 mm/mẫu cấy, mơi trƣờng ½ MS chiều cao chồi 15,67 mm/mẫu cấy Thời gian lƣu trữ nguyên liệu tối ƣu ngày cho khối lƣợng tinh dầu 157 mg Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Cung cấp nguồn lớn giống bệnh, phục vụ sản xuất dƣợc liệu viii TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học [2] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 1, Nhà xuất Khoa học kĩ thuật [3] Vƣơng Ngọc Chính(2005), Hương liệu mỹ phẩm, Nhà xuất đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [4] Võ Thị Bạch Mai (2004), Sự phát triển chồi rễ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [5] Phạm Triều Nghi (2013), Xây dựng phương pháp thủy canh rau tần dày (Plectranthus amboinicus) đốt thân số môi trường dinh dưỡng, Thƣ viện đề tài nghiên cứu Khoa học Euréka [6] Dƣơng Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật tập 1, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [7] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Cơng ty in Cơng đồn Việt Nam, Hà Nội [8] Vũ Ngọc Lộ, Đỗ Trung Võ, Nguyễn Mạnh Pha, Lê Thúy Hạnh (1996), Những tinh dầu Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật Hà Nội [9] Nguyễn Đức Lƣợng, Lê Thị Thủy Tiên (2006), Công nghệ tế bào, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [10] Hồng Thị Sản (2009), Phân loại thực vật học, Nhà xuất Giáo dục [11] Lê Ngọc Thạch (2003), Tinh dầu, Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [12] Nguyễn Thị Bích Thuyền, Nguyễn Thị Diệu Thúy, Châu Thị Thúy Hằng (2012), Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu Húng chanh ( Plectranthus amboinicus Lour.), Tạp chí Khoa học,21(a), pp 144-147 [13] Bùi Trang Việt (2000), Sinh lý thực vật đại cương, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Tài liệu nƣớc [14] Annadurai Senthilkumar, Venugopalan Venkatesalu (2010), Chemical composition and larvicidal activity of the essential oil of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng against Anopheles stephensi: a malarial vector mosquito, Parasitol Res 107, pp 1275-1278 48 [15] C.O Akalezi, S Liu, Q.S Li, J.T Yu, J.J Zhong (1998), Combined effects of initial sucrose concentration and inoculum size on cell growth and ginseng saponin production by suspension cultures of P ginseng, Process Biochem, 34, 639 [16] Candrappa S., Hugar S., Itgappa M., Nagarajappa K (2009), Antidiabetic and antioxidant potential of Coleus aromaticus leaf extracts in alloxan induced diabetic rats, Pharmacologyonline 3, 1054-1061 [17] Chang J., Cheng C (2007), Potential use of Plectranthus amboinicus in the Treatment of Rheumatoid Arthritis, eCAM 7(1), 115-120 [18] Gupta S.D., Ibaraki Y (2006), Plant tissue culture engineering, Springer [19] Koba K., Garde D., Sanda K., Raynaud C., Chaumont, JP (2007), Chemical composition and antimicrobial properties of the leaf esential oil of Coleus aromaticus Benth from Cambodia, Inter J of Essential Oil Therapeutics 1(1), pp 16-20 [20] Kee-Yoeup P and Eun-Joo H (2000), Cytokinins, auxin and activated charcoal affect organogenesis and anatomical characteristics of shoottip cultures of Lisianthus [Eustoma grandiflorum (Raf) Shinn] In Vitro Cell Dev Bio Plant, 36(2):128-132 [21] Krajňáková J., Gömöry D and Häggman H.,(2009), Effect of sucrose concentration, polyethylene glycon and activated charcoal on maturation and regeneration of Abies cephalonica somatic embryos, Plant Cell Tiss.Org.Cult., 96: 251-262 [22] Myrthy PS, Ramalakshmi K, Srinivas P (2009), Fungitoxyc activity of India borage (Plectrathus amboinicus) volatiles, Food chemistry 114, pp 1014-1018 [23] Pan M J and Staden V J (1998), The use of charcoal in in vitro culture: review, J Plant Grow Geg., 26, 155-163 [24] Rashmi Sahay Khare, Shanta Banejee, Kanika Kundu (2011), Coleus aromaticus Benth.- a nutritive medicinal plant of potential therapeutic value, ISSN 2(3), pp 488-500 [25] Sánchez M C., San-josé M C., Ballester A and Vieitez A M (1996), Requirement for in vitro rooting of Quercus robur and Q rubra shoots derived from mature trees, Tree physiol., 16, 673- 680 [26] Singh G, Singh OP, Prasad YR, de Lampasona MP, Catalan C (2002), Studies on essential oil, part 33: Chemical and insecticidal investigations on leaf oil of Coleus amboinicus Lour., Flavour and Fragrance J 17, pp 440-442 [27] Small E (1997), Culinary Herbs, NRC Research Press, 49 [28] Staples G.W., K M.S (1999), Ethnic culinary herbs, University of Hawaii Press [29] Valera D, Rivas R, Avila JL, Aubert L, Alonso-Amelot M, Usubillage A (2003), The essential oil of Coleus amboinicus Loureiro chemical composition and evaluation of insect anti-feedant effects, Ciencia 11(2), pp 113-118 [30] J.J Zhong (1998), Production of genseng saponin and polysaccharide by cell cultures of P ginseng and P notoginseng, Effects of plant growth regulators, Appl Biochem and Biotechnol., 75, 261 50 PHỤ LỤC I Thành phần môi trƣờng MS (Murashige Skoog) Bảng 1: Thành phần muối khoáng (mg/l) NH4NO3 KNO3 Skoog I KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O Na2EDTA Skoog II FeSO4.7H2O Mn2SO4.4H2O H3BO3 ZnSO4.7H2O KI Skoog III Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Bảng Thành phần Vitamin Morel (mg/l) Pirydoxyne (B6) Biotin (II) Meso-inositol Morel‟s Vitamin Nicotinic Acid (P.P) Thiamin-HCl (B1) Pantotheate-Ca 1650,00 1900,00 170,00 370,00 440,00 37,30 27,80 22,30 6,20 8,60 0,83 0,25 0,025 0,025 1,00 0,01 100,00 1,00 1,00 1,00 viii II Phân tích thống kê ANOVA Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi mơi trƣờng MS bổ sung kết hợp A IAA ANOVA Table for chieucao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 647.869 129.574 206.77 0.0000 Within groups 7.52 12 0.626667 Total (Corr.) 655.389 17 Table of Means for chieucao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 1.43333 0.457044 0.729186 2.13748 12 19.4667 0.457044 18.7625 20.1708 15 14.8667 0.457044 14.1625 15.5708 3 6.06667 0.457044 5.36252 6.77081 7.06667 0.457044 6.36252 7.77081 12.3333 0.457044 11.6292 13.0375 -Total 18 10.2056 ix Multiple Range Tests for chieucao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 1.43333 X 3 6.06667 X 7.06667 X 12.3333 X 15 14.8667 X 12 19.4667 X -Contrast Difference -0 - 12 *-18.0333 - 15 *-13.4333 - *-4.63333 - *-5.63333 - *-10.9 12 - 15 *4.6 12 - *13.4 12 - *12.4 12 - *7.13333 15 - *8.8 15 - *7.8 15 - *2.53333 - -1.0 - *-6.26667 - *-5.26667 -* denotes a statistically significant difference x Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi mơi trƣờng MS bổ sung kết hợp Ki IAA ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 762.746 152.549 104.68 0.0000 Within groups 17.487 12 1.45725 Total (Corr.) 780.233 17 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 1.63333 0.696958 0.559561 2.70711 12 5.53 0.696958 4.45623 6.60377 15 9.34333 0.696958 8.26956 10.4171 3 22.1333 0.696958 21.0596 23.2071 5.04 0.696958 3.96623 6.11377 8.81 0.696958 7.73623 9.88377 -Total 18 8.74833 xi Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 1.63333 X 5.04 X 12 5.53 X 8.81 X 15 9.34333 X 3 22.1333 X -Contrast Difference -0 - 12 *-3.89667 - 15 *-7.71 - *-20.5 - *-3.40667 - *-7.17667 12 - 15 *-3.81333 12 - *-16.6033 12 - 0.49 12 - *-3.28 15 - *-12.79 15 - *4.30333 15 - 0.533333 - *17.0933 - *13.3233 - *-3.77 -* denotes a statistically significant difference xii Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi mơi trƣờng MS bổ sung than hoạt tính Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 90.0115 18.0023 3.36 0.0397 Within groups 64.2989 12 5.35824 Total (Corr.) 154.31 17 Table of Means for Col_3 by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 5.23 1.33644 3.171 7.289 8.06667 1.33644 6.00767 10.1257 12.1133 1.33644 10.0543 14.1723 3 6.92 1.33644 4.861 8.979 9.83333 1.33644 7.77433 11.8923 6.95667 1.33644 4.89767 9.01567 -Total 18 8.18667 xiii Multiple Range Tests for Col_3 by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 5.23 X 3 6.92 XX 6.95667 XX 8.06667 XXX 9.83333 XX 12.1133 X -Contrast Difference -0 - -2.83667 - *-6.88333 - -1.69 - *-4.60333 - -1.72667 - -4.04667 - 1.14667 - -1.76667 - 1.11 - *5.19333 - 2.28 - *5.15667 - -2.91333 - -0.0366667 - 2.87667 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng thay đổi nồng độ đa lƣợng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh ANOVA Table for chieucao by NT Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 368.933 92.2333 34.59 0.0000 Within groups 26.6667 10 2.66667 Total (Corr.) 395.6 14 xiv Table of Means for chieucao by NT with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error NT Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0.25MS 13.0 0.942809 11.5146 14.4854 0.5MS 15.6667 0.942809 14.1812 17.1521 1.5MS 5.33333 0.942809 3.8479 6.81876 2MS 2.33333 0.942809 0.847904 3.81876 MS 6.66667 0.942809 5.18124 8.1521 -Total 15 8.6 Multiple Range Tests for chieucao by NT -Method: 95.0 percent LSD NT Count Mean Homogeneous Groups -2MS 2.33333 X 1.5MS 5.33333 X MS 6.66667 X 0.25MS 13.0 X 0.5MS 15.6667 X -Contrast Difference +/- Limits -0.25MS - 0.5MS -2.66667 2.97086 0.25MS - 1.5MS *7.66667 2.97086 0.25MS - 2MS *10.6667 2.97086 0.25MS - MS *6.33333 2.97086 0.5MS - 1.5MS *10.3333 2.97086 0.5MS - 2MS *13.3333 2.97086 0.5MS - MS *9.0 2.97086 1.5MS - 2MS *3.0 2.97086 1.5MS - MS -1.33333 2.97086 2MS - MS *-4.33333 2.97086 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng thay đổi nồng độ đa lƣợng bổ sung than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh ANOVA Table for chieucaochoi by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 428.278 85.6556 35.86 0.0000 Within groups 28.6667 12 2.38889 Total (Corr.) 456.944 17 xv Table of Means for chieucaochoi by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0.25MS* 12.6667 0.892354 11.2919 14.0415 0.5MS* 14.6667 0.892354 13.2919 16.0415 1.5MS* 3.33333 0.892354 1.95852 4.70815 2MS* 1.0 0.892354 -0.374812 2.37481 MS 6.66667 0.892354 5.29185 8.04148 MS* 10.0 0.892354 8.62519 11.3748 -Total 18 8.05556 Multiple Range Tests for chieucaochoi by nghiem thuc -Method: 95.0 percent LSD nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -2MS* 1.0 X 1.5MS* 3.33333 X MS 6.66667 X MS* 10.0 X 0.25MS* 12.6667 XX 0.5MS* 14.6667 X -Contrast Difference +/- Limits -0.25MS* - 0.5MS* -2.0 2.74962 0.25MS* - 1.5MS* *9.33333 2.74962 0.25MS* - 2MS* *11.6667 2.74962 0.25MS* - MS *6.0 2.74962 0.25MS* - MS* 2.66667 2.74962 0.5MS* - 1.5MS* *11.3333 2.74962 0.5MS* - 2MS* *13.6667 2.74962 0.5MS* - MS *8.0 2.74962 0.5MS* - MS* *4.66667 2.74962 1.5MS* - 2MS* 2.33333 2.74962 1.5MS* - MS *-3.33333 2.74962 1.5MS* - MS* *-6.66667 2.74962 2MS* - MS *-5.66667 2.74962 2MS* - MS* *-9.0 2.74962 MS - MS* *-3.33333 2.74962 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng thay đổi nồng độ đƣờng lên sinh trƣởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh xvi ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 368.25 122.75 34.26 0.0001 Within groups 28.6667 3.58333 Total (Corr.) 396.917 11 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -20 21.0 1.09291 19.2179 22.7821 30 7.0 1.09291 5.21791 8.78209 40 10.0 1.09291 8.21791 11.7821 50 8.33333 1.09291 6.55125 10.1154 -Total 12 11.5833 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -30 7.0 X 50 8.33333 X 40 10.0 X 20 21.0 X -Contrast Difference -20 - 30 *14.0 20 - 40 *11.0 20 - 50 *12.6667 30 - 40 -3.0 30 - 50 -1.33333 40 - 50 1.66667 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng thay đổi nồng độ đƣờng bổ sung than hoạt tính lên sinh trƣởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh xvii ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 288.4 72.1 32.77 0.0000 Within groups 22.0 10 2.2 Total (Corr.) 310.4 14 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -20* 16.3333 0.856349 14.9841 17.6825 30 7.0 0.856349 5.65079 8.34921 30* 13.3333 0.856349 11.9841 14.6825 40* 10.3333 0.856349 8.98413 11.6825 50* 4.0 0.856349 2.65079 5.34921 -Total 15 10.2 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -50* 4.0 X 30 7.0 X 40* 10.3333 X 30* 13.3333 X 20* 16.3333 X -Contrast Difference -20* - 30 *9.33333 20* - 30* *3.0 20* - 40* *6.0 20* - 50* *12.3333 30 - 30* *-6.33333 30 - 40* *-3.33333 30 - 50* *3.0 30* - 40* *3.0 30* - 50* *9.33333 40* - 50* *6.33333 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát thời gian để héo ảnh hƣởng đến hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh xviii ANOVA Table for khoi luong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14825.0 4941.67 10.78 0.0035 Within groups 3666.67 458.333 Total (Corr.) 18491.7 11 Table of Means for khoi luong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 156.667 12.3603 136.512 176.821 10 143.333 12.3603 123.179 163.488 20 166.667 12.3603 146.512 186.821 30 76.6667 12.3603 56.512 96.8214 -Total 12 135.833 Multiple Range Tests for khoi luong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent LSD nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -30 76.6667 X 10 143.333 X 156.667 X 20 166.667 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 10 13.3333 40.3094 - 20 -10.0 40.3094 - 30 *80.0 40.3094 10 - 20 -23.3333 40.3094 10 - 30 *66.6667 40.3094 20 - 30 *90.0 40.3094 -* denotes a statistically significant difference xix ... KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG; THỜI GIAN ĐỂ HÉO NGUYÊN LIỆU ĐẾN HÀM LƢỢNG TINH DẦU CÂY HÚNG CHANH PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR. ) SPRENG IN VITRO? ?? Mã số đề tài : Thuộc nhóm ngành khoa học: ... trích tinh dầu chƣa đƣợc quan tâm Do đó, chúng tơi nghiên cứu đề tài “NGHIÊN CỨU MÔI TRƢỜNG NHÂN NHANH VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG; THỜI GIAN ĐỂ HÉO NGUYÊN LIỆU ĐẾN HÀM LƢỢNG TINH DẦU CÂY... Thành phố Thủ Dầu Một, tỉnh ình Dƣơng, làm nguồn mẫu để khảo sát môi trƣờng nhân nhanh Húng chanh, ảnh hƣởng yếu tố môi trƣờng thời gian để héo nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu Húng chanh Điều