Nghiên cứu điều chế và khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng của cao đặc tiêu dao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯU CƠNG BÌNH NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO ĐẶC TIÊU DAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯU CƠNG BÌNH NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO ĐẶC TIÊU DAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Bùi Hồng Cường HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới: Đầu tiên xin cảm ơn Ban giám hiệu, phịng Sau đại học, tồn thể thầy tận tình dạy bảo tơi suốt tháng, năm học Trường Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Bùi Hồng Cường, người thầy tận tụy, luôn bảo hướng dẫn, định hướng, tạo điều kiện tốt cho học tập, nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài, hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn tồn thể thầy cơ, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược học cổ truyền, ln giúp đỡ tạo điều kiện giúp tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn TS Nguyễn Trần Linh giúp đỡ việc sử dụng phần mềm MODDE 12.1, kiến thức tối ưu hóa phương pháp phân tích mặt đáp Tơi xin cảm ơn Trường Đại học Dược Hà Nội hỗ trợ kinh phí nghiên cứu Đề tài cấp Trường với nội dung xây dựng phương pháp định tính, định lượng cao đặc Tiêu dao Tôi xin cảm ơn DS Trần Văn Cương Công ty cổ phần dược phẩm VCP, DS Đỗ Trung Hiếu Công ty cổ phần thương mại dược phẩm quốc tế Winsacom cung cấp dược liệu, chất chuẩn hỗ trợ kinh phí nghiên cứu nội dung điều chế cao đặc Tiêu dao Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè tồn thể đồng nghiệp ủng hộ, động viên, giúp đỡ trong suốt trình thực luận văn Do kiến thức thân cịn giới hạn, nên luận văn khơng tránh khỏi hạn chế thiếu sót Tơi mong nhận góp ý, chỉnh sửa q thầy cơ, bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng 09 năm 2020 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét phương thuốc Tiêu dao 1.1.1 Công thức 1.1.2 Công chủ trị phương thuốc 1.1.3 Định tính, định lượng 1.2 Thông tin vị thuốc 1.2.1 Sài hồ .3 1.2.2 Đương quy .5 1.2.3 Bạch thược 1.2.4 Bạch truật 11 1.2.5 Bạch linh .13 1.2.6 Cam thảo .15 1.2.7 Bạc hà 17 1.2.8 Sinh khương 19 1.3 Phương pháp điều chế cao 20 1.4 Phương pháp khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết cao 21 1.4.1 Giải thích từ ngữ 21 1.4.2 Quy trình tối ưu hóa phương pháp phân tích mặt đáp 22 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tượng, phương tiện nghiên cứu: 25 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu: 25 2.1.2 Thiết bị, máy móc: 27 2.1.3 Hóa chất, chất chuẩn: 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc 27 2.2.2 Khảo sát số tiêu định tính, định lượng cao đặc 29 2.3 Xử lí số liệu 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Kết nghiên cứu điều chế cao đặc 35 3.1.1 Khảo sát thông số điều chế cao .35 3.1.2 Thiết kế thí nghiệm .35 3.1.3 Tối ưu hóa quy trình chiết xuất .37 3.2 Định tính vị thuốc cao đặc Tiêu dao SKLM .44 3.2.1 Định tính vị thuốc Sài hồ cao đặc Tiêu dao SKLM 44 3.2.2 Định tính vị thuốc Đương quy cao đặc Tiêu dao SKLM 46 3.2.3 Định tính vị thuốc Bạch thược cao đặc Tiêu dao SKLM 48 3.2.4 Định tính vị thuốc Bạch truật cao đặc Tiêu dao SKLM .50 3.2.5 Định tính vị thuốc Bạch linh cao đặc Tiêu dao SKLM 52 3.2.6 Định tính vị thuốc Cam thảo cao đặc Tiêu dao SKLM 54 3.3 Kết xây dựng thẩm định phương pháp định lượng paeoniflorin cao đặc Tiêu dao 56 3.3.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn: 56 3.3.2 Chuẩn bị dung dịch thử 56 3.3.3 Thẩm định quy trình định lượng 56 3.3.4 Định lượng paeoniflorin mẫu cao đặc 61 CHƯƠNG BÀN LUẬN .62 4.1 Về thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa q trình chiết xuất để bào chế cao đặc Tiêu dao .62 4.2 Về khảo sát định tính vị thuốc cao sắc ký lớp mỏng: 64 4.3 Về định lượng paeoniflorin cao đặc Tiêu dao 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 Kết luận 68 1.2.1 Định tính vị thuốc cao đặc Tiêu dao SKLM 68 1.2.2 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng paeoniflorin cao đặc Tiêu dao 68 Kiến nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT BL Bạch linh BL-C BT Bạch linh chuẩn Bạch thược BT-C BTr BTr-C Bạch thược chuẩn Bạch truật Bạch truật chuẩn CT Cam thảo CT-C Cam thảo chuẩn DĐTQ Dược điển Trung Quốc DĐVN Dược điển Việt Nam DL/N ĐQ ĐQ-C HPLC PAE P-BL P-BT P-BTr Dược liệu/nước Đương quy Đương quy chuẩn Sắc kí lỏng hiệu cao Paeoniflorin Placebo Bạch linh Placebo Bạch thược Placebo Bạch truật P-CT Placebo Cam thảo P-ĐQ PL P-SH RSD RSM SH SH-C SKLM TD Placebo Đương quy Phụ lục Placebo Sài hồ Độ lệch chuẩn tương đối Response surface methodology Sài hồ Sài hồ chuẩn Sắc ký lớp mỏng Tiêu dao TT Thuốc thử DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Công thức bào chế mẫu cao đặc placebo 25 Bảng 2.2 Hàm ẩm vị thuốc 28 Bảng Khoảng biến thiên biến độc lập 35 Bảng Yêu cầu biến phụ thuộc 35 Bảng 3 Thiết kế thí nghiệm điều chế cao đặc kết thực nghiệm 36 Bảng Kết phân tích phương sai (ANOVA) hàm lượng PAE (Y1) .37 Bảng Kết phân tích phương sai (ANOVA) hiệu suất chiết PAE (Y2) .38 Bảng Kết đánh giá sai số mơ hình 41 Bảng Giá trị dự đoán kết thực nghiệm kiểm chứng (n = 3) 43 Bảng Kết SKLM định tính vị thuốc Sài hồ cao đặc Tiêu dao sau phun thuốc thử 45 Bảng Kết SKLM định tính vị thuốc Đương quy cao đặc Tiêu dao soi bước sóng 366 nm 47 Bảng 10 Kết SKLM định tính vị thuốc Bạch thược cao đặc Tiêu dao sau phun thuốc thử 49 Bảng 11 Kết SKLM định tính vị thuốc Bạch truật cao đặc Tiêu dao soi bước sóng 254 nm 51 Bảng 12 Kết SKLM định tính vị thuốc Bạch linh cao đặc Tiêu dao sau phun thuốc thử 53 Bảng 13 Kết SKLM định tính vị thuốc Cam thảo cao đặc Tiêu dao soi bước sóng 366 nm 55 Bảng 14 Kết độ thích hợp hệ thống .58 Bảng 15 Kết khảo sát khoảng tuyến tính định lượng paeoniflorin .59 Bảng 16 Độ lặp lại độ xác trung gian 60 Bảng 17 Kết độ phương pháp 61 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ bước tối ưu hóa quy trình chiết xuất phương pháp phân tích mặt đáp (RSM) [35] 24 Hình 2.1 Các dược liệu phương thuốc Tiêu dao 26 Hình 3.1 Đồ thị đường đồng mức biểu diễn ảnh hưởng biến độc lập tới hàm lượng hiệu suất chiết PAE 39 Hình 3.2 Vùng tối ưu xác suất thất bại mơ hình tối ưu hóa 43 Hình 3.3 Sắc ký đồ định tính Sài hồ sau phun thuốc thử vanilin 2,5% ethanol acid sulfuric .45 Hình 3.4 Sắc ký đồ định tính Đương quy soi bước sóng 366 nm 47 Hình 3.5 Sắc ký đồ định tính Bạch thược sau phun thuốc thử vanilin 2,5% ethanol acid sulfuric .49 Hình 3.6 Sắc ký đồ định tính Bạch truật soi bước sóng 254 nm 51 Hình 3.7 Sắc ký đồ định tính Bạch linh sau phun thuốc thử vanilin 2,5% ethanol acid sulfuric .53 Hình 3.8 Sắc ký đồ định tính Cam thảo soi bước sóng 366 nm 55 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu nghiên cứu 56 Hình 3.10 Phổ mẫu thử chuẩn paeoniflorin 57 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích pic paeoniflorin .59 ĐẶT VẤN ĐỀ Phương thuốc Tiêu dao có xuất xứ từ sách Trung Quốc “Thái bình huệ dân hịa tễ cục phương”, cơng sơ can giải uất, kiện tỳ hòa dinh [4], [9], chủ trị can uất huyết hư làm cho hai bên sườn đau đớn, lúc rét lúc sốt, đau đầu mờ mắt, miệng táo họng khơ, tinh thần mệt mỏi, ăn ít, kinh nguyệt khơng đều, bầu vú căng trướng, mạch huyền, hư [4] Ngoài ra, nhiều nghiên cứu dược lí đại cho biết thuốc có nhiều loại tác dụng bảo vệ gan [17], hạ huyết áp [71], tăng cường tiêu hóa [48], cải thiện triệu chứng khó tiêu điều chỉnh hội chứng ruột kích thích [49], điều hịa chức tử cung Phương thuốc Tiêu dao sử dụng điều trị bệnh trầm cảm Trung Quốc, sử dụng kết hợp với thuốc chống trầm cảm khác để điều trị cho hiệu tốt tác dụng phụ [33], [69], [81], có tác dụng chống lại căng thẳng trầm cảm [14], [33], [41] Cổ phương dùng dạng thuốc tán (bột), Y Dược học cổ truyền dung dạng thuốc bột thuốc thang sắc uống, thuốc hoàn Dược điển Việt Nam V có 01 chuyên luận, Dược điển Trung Quốc 2015 có 06 chuyên luận quy định tiêu chất lượng phương thuốc Tiêu dao Cho đến nay, chưa có nghiên cứu tối ưu hóa quy trình chiết xuất để bào chế cao đặc từ phương thuốc Tiêu dao cơng bố Với mong muốn phát huy tính ưu việt thuốc cổ truyền, tiện dùng cho người bệnh, việc nghiên cứu điều chế dạng cao đặc bán thành phẩm từ phương thuốc để tiếp tục phát triển sang dạng thuốc đại thuốc cốm, viên nén, viên nang đồng thời khảo sát số tiêu chất lượng cao đặc nhằm góp phần tiêu chuẩn hóa dạng bán thành phẩm cần thiết Xuất phát từ lý trên, đề tài “Nghiên cứu điều chế khảo sát số tiêu chất lượng cao đặc Tiêu dao” nghiên cứu với mục tiêu cụ thể: Xây dựng quy trình chiết xuất, điều chế cao đặc Tiêu dao theo hướng tối ưu hàm lượng hiệu xuất chiết paeoniflorin Khảo sát số tiêu định tính, định lượng cao đặc Tiêu dao CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét phương thuốc Tiêu dao 1.1.1 Công thức Sài hồ (Radix Bupleuri) 143,0 g Đương quy (Radix Angelicae sinensis) 143,0 g Bạch thược (Radix Paeoniae lactiflorae) 143,0 g Bạch truật (Rhizoma Atractylodis macrocephalae) 143,0 g Phục linh (Poria) 143,0 g Chích cam thảo (Radix Glycyrrhizae) 114,4 g Bạc hà (Herba Menthae) 28,6 g Sinh khương (Rhizoma Zingiberis officinalis Recens) 143,0 g Phương thuốc xuất xứ từ “Thái bình huệ dân hịa tễ cục phương” [4] 1.1.2 Công chủ trị phương thuốc Công năng: Sơ can giải uất, kiện tỳ hòa dinh [2], [4], [9] Chủ trị: Can uất huyết hư làm cho hai bên sườn đau đớn, lúc rét lúc sốt, đau đầu mờ mắt, miệng táo họng khô, tinh thần mệt mỏi, ăn ít, kinh nguyệt khơng [2], [4], bầu vú căng trướng, mạch huyền, hư [4] Cách dùng: Các vị thuốc làm thành bột thô, lần uống từ đến gam, thêm Gừng nước Bạc hà, sắc nước uống lúc cịn ấm Cũng làm thành thang sắc uống Thuốc hoàn lần uống từ đến gam ngày lần [4] Giải thích phương thuốc: Trong bài, Sài hồ sơ can giải uất quân, Đương quy, Bạch thược dưỡng huyết nhu can thần Mà mùi hương thơm Đương quy lại hành khí, vị hỗn cấp, vị thuốc quan trọng can uất huyết hư Bạch truật, Phục linh kiện tỳ đuổi thấp, khiến cho việc vận hóa có linh hoạt, khí huyết có nguồn gốc Chích Cam thảo ích khí bổ trung, hỗn gấp gáp gan, vị tá sứ, có tác dụng trợ giúp, Sinh khương ôn ấm, Đương quy, Bạch thược bổ huyết mà trợ tỳ làm tá Bạc hà vào can, giúp tăng tính sơ can giải uất Sài hồ làm tá, sứ Các vị phối hợp với thực trọn vẹn chức năng: Sơ can giải uất, kiện tỳ hòa dinh [4], [9] Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Sài hồ Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch thược Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch thược Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch linh Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch linh Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch truật Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Bạch truật Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Cam thảo Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Cam thảo Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Đương quy Phiếu kiểm nghiệm dược liệu Đương quy Chất chuẩn paeoniflorin PHỤ LỤC HÌNH ẢNH CÁC VỊ DƯỢC LIỆU CHUẨN Bạch thược Bạch truật Bạch linh Cam thảo Đương quy Sài hồ ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯU CƠNG BÌNH NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO ĐẶC TIÊU DAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC... xuất, điều chế cao đặc Tiêu dao theo hướng tối ưu hàm lượng hiệu xuất chiết paeoniflorin Khảo sát số tiêu định tính, định lượng cao đặc Tiêu dao CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét phương thuốc Tiêu dao. .. đặc nhằm góp phần tiêu chuẩn hóa dạng bán thành phẩm cần thiết Xuất phát từ lý trên, đề tài ? ?Nghiên cứu điều chế khảo sát số tiêu chất lượng cao đặc Tiêu dao? ?? nghiên cứu với mục tiêu cụ thể: Xây