Nghiên cứu điều chế và xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng của cao đặc kỷ cúc địa hoàng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ DUYÊN NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐCHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO ĐẶCKỶ CÚC ĐỊA HOÀNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ DUYÊN NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO ĐẶC KỶ CÚC ĐỊA HOÀNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ 8720206 Người hướng dẫn khoa học:PGS.TS Bùi Hồng Cường HÀ NỘI 2019 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới: Đầu tiên tơi xin cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng sau đại học, tồn thể thầy tận tình dạy bảo tơi suốt tháng năm học trường Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn chân thành tớiPGS.TS Bùi Hồng Cường, người thầy tận tụy, luôn bảo hướng dẫn, định hướng, tạo điều kiện tốt cho học tập, nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài, hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn tồn thể thầy cơ, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược cổ truyền, giúp đỡ tạo điều kiện giúp tơi hồn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn tới sinh viênĐặng Thị Khánh Huyền, sinh viên Nim Phanakhonekhóa 69 sinh viên khóa 69, 70 – Trường Đại học Dược Hà Nội làm đề tài môn Dược học cổ truyền – trường đại học Dược Hà Nội tham gia nghiên cứu với thời gian nghiên cứu thực luận văn Tôi xin cám ơn DS Đỗ Trung Hiếu Công ty cổ phần thương mại dược phẩm Quốc tế WINSACOM; DS Trần Văn Cương Công ty cổ phần dược phẩm VCP cung cấp dược liệu, chất chuẩn hỗ trợ kinh phí giúp thực đề tài Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè tồn thể đồng nghiệp trường Cao đẳng Dược Hải Dương ủng hộ, động viên, giúp đỡ trong suốt trình thực luận văn Do kiến thức thân giới hạn, nên luận văn khơng tránh khỏi hạn chế thiều xót Tơi mong nhận góp ý, chỉnh sửa q thầy cơ, bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 31 tháng 03 năm 2019 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT Về PHƯƠNG THUốC Kỷ CÚC ĐịA HOÀNG 1.2 CÁC Vị THUốC TRONG PHƯƠNG THUốC Kỷ CÚC ĐịA HOÀNG 1.2.1 Thục địa (Radix Rehmanniae glutinosae praeparata) 1.2.2 Hoài sơn (Rhizoma Dioscoreae persimilis) 1.2.3 Sơn thù (Fructus Corni officinalis) 1.2.4 Đơn bì (Cortex Paeoniae suffruticosae) 1.2.5 Bạch phục linh (Poria) 11 1.2.6 Trạch tả (Rhizoma Alisma plantago) 12 1.2.7 Câu kỷ tử (Fructus Lycii) 13 1.2.8 Cúc hoa (Flos Chrysanthemi indici) 14 1.3 PHƯƠNG PHAP DIềU CHế VA TIEU CHUẩN CủA CAO THUốC 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐốI TƯợNG VÀ PHƯƠNG TIệN NGHIÊN CứU 17 2.1.1.Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2.Phương tiện nghiên cứu 17 2.2 PHƯƠNG PHAP NGHIEN CứU 19 2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc 19 2.2.2 Xây dựng số tiêu chất lượng cao đặc 21 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu – đánh giá kết 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 BÀO CHế CAO ĐặC 27 3.2 KHảO SÁT MộT Số CHỉ TIÊU CHấT LƯợNG CAO ĐặC Kỷ CÚC ĐịA HOÀNG 28 3.2.1 Xác định pH 28 3.2.2 Khảo sát tiêu định tính 28 3.2.3 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng cao đặc Kỷ cúc địa hoàng HPLC 37 CHƯƠNG BÀN LUẬN 46 4.1 Về ĐIềU CHế DạNG CAO ĐặC 46 4.2 ĐịNH TÍNH CÁC NHĨM CHấT TRONG CAO 48 4.2.1 Định tính phản ứng hóa học 48 4.2.2 Định tính sắc ký lớp mỏng 48 4.3 ĐịNH LƯợNG 49 4.3.1 Về khảo sát lựa chọn chất chuẩn định lượng 49 4.3.2 Về khảo sát thẩm định 49 4.3.3 Về kết định lượng loganin cao đặc Kỷ cúc địa hoàng 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 KếT LUậN 51 KIếN NGHị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ADN acid desoxyribonucleic BL Bạch linh CH Cúc hoa CKT Câu kỷ tử DĐVN V Dược điển Việt Nam V DĐTQ Dược điển Trung Quốc DL/N Dược liệu/nước DB Đơn bì GSH Glutathion HS Hoài sơn HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu cao kl/tt khối lượng/ thể tích MeOH Methanol PL phụ lục pư Phản ứng QC Kiểm soát chất lượng RSD độ lệch chuẩn tương đối ROS q trình oxy hóa nội bào SD độ lệch chuẩn SKLM Sắc kí lớp mỏng ST Sơn thù TD Thục địa tt thuốc thử TT Trạch tả UPLC Sắc ký lỏng hiệu cực cao DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Hóa chất, dung mơi 17 Bảng 2.2 Trang thiết bị sử dụng phân tích 18 Bảng 3.1 Hàm ẩm dược liệu ban đầu 27 Bảng 3.2 Hàm ẩm, thể chất, tỷ lệ cao chiết mẫu cao đặc 28 Bảng 3.3 Kết đo pH cao đặc Kỷ cúc địa hoàng 28 Bảng 3.4 Kết định tính số nhóm chất mẫu cao thuốc 29 Bảng 3.5 Kết Rf cao đặc ST chuẩn, chất chuẩn loganin sau 30 phun thuốc thử Bảng 3.6 Kết Rf củacao đặc, TĐ chuẩn bước sóng 254 nm 31 Bảng 3.7 Kết Rf cao đặc ĐB chuẩn bước sóng 254 nm 32 Bảng 3.8 Kết Rf củacao đặc BL chuẩn bước sóng 254 nm 33 Bảng 3.9 Kết Rf củacao đặc TT chuẩn bước sóng 254 nm 34 Bảng 3.10 Kết Rf củacao đặc CH chuẩn bước sóng 254 nm 35 Bảng 3.11 Kết Rf củacao đặc CKT chuẩn bước sóng 254 nm 36 Bảng 3.12 Kết Rf củacao đặc HS chuẩn bước sóng 254 nm 37 Bảng 3.13 Chương trình dung mơi cho chế độ rửa giải gradient 38 Bảng 3.14 Chương trình dung mơi cho chế độ rửa giải gradient 38 Bảng 3.15 Các thông số sắc ký ứng với chương trình dung mơi 39 Bảng 3.16 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống 41 Bảng 3.17 Kết khảo sát khoảng tuyến tính 41 Bảng 3.18 Kết đánh giá độ lặp lại độ xác trung gian phương 43 pháp Bảng 3.19 Kết đánh giá độ cao đặc Kỷ cúc địa hoàng 43 Bảng 3.20 Kết xác định nồng độ giới hạn 44 Bảng 3.21 Kết định lượng loganin số mẫu cao đặc Kỷ cúc địa 45 hoàng Bảng 4.1 Các phương pháp phân tích định lượng loganin HPLC 49 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Các dược liệu phương thuốc Kỷ cúc địa hồng 17 Hình 2.2 Sơ đồ bào chế cao đặc chiết nước 20 Hình 3.1 Sắc ký đồ định tính cắn ethylacetat từ cao đặc ST chuẩn sau 30 phun thuốc thử Hình 3.2 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc TĐ chuẩn bước 31 sóng 254 nm Hình 3.3 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc ĐB chuẩn bước 32 sóng 254 nm Hình 3.4 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc BL chuẩn bước 33 sóng 254 nm Hình 3.5 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc TT chuẩn bước 34 sóng 254 nm Hình 3.6 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc CH chuẩn bước 35 sóng 254 nm Hình 3.7 Sắc ký đồ định tính cắn methanol từ cao đặc CKT chuẩn bước 36 sóng 254 nm Hình 3.8 Sắc ký đồ định tính cắn cloroform từ cao đặc HS chuẩn bước 37 sóng 254 Hình 3.9 Sắc ký đồ chương trình dung mơi 38 Hình 3.10 Sắc ký đồ chương trình dung mơi 39 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu placebo, mẫu chuẩn loganin mẫu cao, mẫu 40 cao thêm chuẩn Hình 3.12 Phổ UV loganin mẫu cao mẫu chuẩn 40 Hình 3.13 Đường chuẩn phương trình hồi quy tuyến tính loganin 42 Hình 3.14 Sắc ký đồ HPLC mẫu cao N8T3 loganin chuẩn 45 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh suy giảm chức gan, thận bệnh mãn tính ngày phổ biến Chức gan, thận suy giảm làm tăng nguy ung thư gan Theo số liệu thống kê hội gan mật Việt Nam năm 2018, năm có vạn người chết biến chứng xơ gan giai đoạn nặng ung thư gan Bệnh lý gan, thận gây rối loạn thị lực số bệnh lý mắt mờ mắt, chảy nước mắt, Đặc biệt mơi trường nhiễm bụi, khói, sinh hoạt chưa hợp lý vấn đề mắt dễ xảy Trong lý luận Y học cổ truyền, can khai khiếu mắt: khí can tốt thị lực tốt, ngược lại mắt mờ, thị lực suy giảm, nhìn vào mắt biết trạng thái can Bài thuốc Kỷ cúc địa hoàng có chứa tám loại thảo dược sử dụng để làm giảm triệu chứng hoa mắt, chóng mặt can thận âm hư từ hàng ngàn năm Từ quan điểm y học cổ truyền, người ta tin chế Kỷ cúc địa hồng liên quan đến việc bổ can thận âm, sáng mắt, điều hòa hoạt động can, thận Ngồi ra, thuốc Kỷ cúc địa hoàng làm giảm triệu chứng hoa mắt, chóng mặt tăng huyết áp, dùng phối hợp với thuốc tăng huyết áp để điều trị bệnh tăng huyết áp nguyên phát không rõ nguyên nhân Tăng huyết áp nguy hàng đầu cho bệnh tim mạch – nguyên nhân hàng đầu gây tử vong năm 2020 [58] Về mặt tác dụng dược lý, Kỷ cúc địa hồng có hiệu tốt việc làm giảm nồng độ angiotensin huyết tương tim, làm giảm hàm lượng endothelin cải thiện dòng máu thận chuột bị tăng huyết áp [19] Cách sử dụng thông thường thuốc phương pháp sắc Phương pháp sử dụng từ hàng ngàn năm phổ biến sống thường ngày Khi sử dụng thuốc sắc có nhược điểm tốn nhiều thời gian để nấu thuốc, sau nấu xong phải sử dụng Bởi tiến hành nghiên cứu điều chế dạng cao đặc thuốc để khắc phục nhược điểm dạng thuốc truyền thống Với dạng bán thành phẩm cao đặc, thuốc Kỷ cúc địa hồng tiếp tục phát triển dạng thuốc khác cách dễ dàng hơn: dạng viên nén, viên nang….Xuất phát từ lý trên, đề tàiNghiên cứu điều chế xây dựng số tiêu chất lượng cao đặc Kỷ cúc địa hoàngđược thực nhằm giải hai mục tiêu sau: - Điều chế cao đặc Kỷ cúc địa hoàng - Khảo sátmột số tiêu định tính, định lượng cao đặc Kỷ cúc địa hồng CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét phương thuốc Kỷ cúc địa hoàng * Phương thuốc Kỷ cúc địa hoàng bao gồm vị thuốc sau: Thục địa(Radix Rehmanniae glutinosae praeparata) 24g Hoài sơn(Rhizoma Dioscoreae persimilis) 12g Sơn thù(Fructus Corni officinalis) 12g Đơn bì(Cortex Paeoniae suffruticosae) 9g Bạch linh(Poria) 9g Trạch tả(Rhizoma Alisma plantago) 9g Câu kỷ tử(Fructus Lycii) 9g Cúc hoa(Flos Chrysanthemi indici) 9g * Công năng: Bổ thận dưỡng can, ích tinh sáng mắt[19] * Chủ trị: Thận âm hư, hư hỏa bốc lên, cổ lưng đầu gối đau mỏi, đầu đau, mắt hoa, choáng váng, tai ù, hay mồ hôi trộm, tăng huyết áp [3], [19] * Xuất sứ thuốc : Kỷ cúc địa hồng hồn trích từ «Tiểu Nhi Dược Chứng Trực Quyết» Bài bắt nguồn từ thuốc cổ phương «Lục vị địa hồng hồn» gia vị Câu kỷ tử, Cúc hoa thành thuốc «Kỷ cúc địa hồng hồn» [3], [19] * Phân tích ý nghĩa thuốc theo YHCT: Bài thuốc Kỷ cúc địa hồng khơng chữa thận âm hư mà chữa can thận bất túc Thục địa có tác dụng bổ thận thủy, Trạch tả giúp tuyên tiết chất trọc thận, Sơn thù để ơn sáp can có Đơn bì để tả can hỏa, Hồi sơn thu nhiếp tỳ kinh lại có Bạch phục linh thẩm thấp điều hòa Bài thuốc có sáu vị mà có mở có đóng chữa can thận bất túc với mục đích thuốc bổ Trên sở thuốc tác giả thời xưa gia thêm vị Câu kỷ tử Cúc hoa để tạo thành thuốc Kỷ cúc địa hồng có tác dụng nâng cao hiệu chữa can thận suy mắt hoa, nhìn mờ, chân tay buồn bực, người khó chịu Cúc hoa có tác dụng tân lương giải biểu đồng thời làm cho mắt sáng, Câu kỷ tử có tác dụng bổ dưỡng can thận, khí huyết [3], [19] * Thành phần hóa học: Kỷ cúc địa hồng có thành phần ... mắt - Vitamin B2 giúp giác mạc nhận ánh sáng, giúp tổng hợp glutathion có tác dụng ngăn ngừa q trình oxy hóa mắt - Vitamin B12 cải thi n phòng ngừa giảm thị lực bệnh nhân bị glaucom, ngăn ngừa thoái... endothelin cải thi n dòng máu thận chuột bị tăng huyết áp [19] Kỷ cúc địa hồng giúp kiểm sốt huyết áp [62] Kỷ cúc địa hồng kết hợp với thuốc hạ huyết áp có hiệu việc hạ thấp huyết áp cải thi n điều... sức chịu đựng thể điều kiện thi u oxy, chống lão hố, tăng trí nhớ, chống viêm, kháng khuẩn, bảo hộ tế bào gan thận, chống ngưng huyết, thúc đẩy trình tạo hồng cầu, cải thi n tuần hoàn não, làm giảm