Đang tải... (xem toàn văn)
Ngày nay, xã hội càng phát triển nhu cầu về chất dinh dưỡng càng cao, màu sắc trong thực phẩm càng được cải thiện nhằm tăng giá trị cảm quan cho thực phẩm. Vệ sinh thực phẩm luôn là vấn đề ưu tiên hàng đầu của nước ta và thế giới. Thực phẩm nếu không đảm bảo vệ sinh sẽ gây bệnh và ảnh hưởng lâu dài đến sức khỏe người tiêu dùng. Đặc biệc là thịt, cá, rau… ở chợ và một số cửa hàng khác có nguy cơ nhiễm bẩn gây ngộ độc cho người tiêu dùng. Đa số các vụ ngộ độc đều là do vi sinh vật gây ra. Có nhiều bài báo, phóng sự nói về nói về các nguy hiểm, hậu quả của nó. Nhưng tình trạng ngộ độc thực phẩm vẫn còn nghiêm trọng. Các vi sinh vật gây ngộ độc thực phẩm thường là Clostridium botinium, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa … Nhưng Salmonella đặc biệt là vi khuẩn Salmonella typhi là nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm. Salmonella typhi xâm nhập vào cơ thể con người thông qua các sản phẩm thịt, cá,… mang nó. Khi vào cơ thể vi khuẩn này gây ra ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe của con người. Ngoài ra các tiêu chuẩn nước ta và nước ngoài quy định rất chặt chẽ sự xuất hiện của Salmonella typhi trong thực phẩm. Đặc biệt hơn các sản phẩm như sữa, thịt, phomat,…. Nếu có mặt Salmonella typhi thì không được chấp nhận Theo tông tư 052012TTBYT. Chính vì vậy cần có nhiều kỹ thuật phân tích Salmonella typhi để có thể xác định một các chính xác và khách quan.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM SALMONELLA STYPHI GVHD: NGUYỄN THÀNH LUÂN SVTH: TRÀ NGỌC TRÍ NHÂN MSSV: 2005190427 LỚP: 10DHTP9 NGUYỄN THỊ THỦY NGÂN MSSV: 2005191178 LỚP: 10DHTP5 MAI HOÀNG THANH MAI MSSV:2005191156 LỚP: 10DHTP9 NGUYỄN HỒNG PHẤN MSSV: 2005191214 LỚP: 10DHTP3 NGUYỄN THỊ QUẾ TRÂN MSSV: 2005190704 LỚP: 10DHTP5 TP HỒ CHÍ MINH, 2021 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM SALMONELLA STYPHI GVHD: NGUYỄN THÀNH LUÂN SVTH: TRÀ NGỌC TRÍ NHÂN MSSV: 2005190427 LỚP: 10DHTP9 NGUYỄN THỊ THỦY NGÂN MSSV: 2005191178 LỚP: 10DHTP5 MAI HOÀNG THANH MAI MSSV:2005191156 LỚP: 10DHTP9 NGUYỄN HỒNG PHẤN MSSV: 2005191214 LỚP: 10DHTP3 NGUYỄN THỊ QUẾ TRÂN MSSV: 2005190704 LỚP: 10DHTP5 TP HỒ CHÍ MINH, 2021 PHIẾU GIAO NHIỆM VỤ Trang đính kèm phiếu giao nhiệm vụ GVHD BẢN NHẬN XÉT CỦA GVHD Trang đính kèm nhận xét LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, trước hết chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy Nguyễn Thành Luân khoa Công nghệ sinh học trường Đại học Công nghiệp thực phẩm Tp Hồ Chí Minh truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho chúng em suốt trình học tập rèn luyện trường Dù cố gắng khơng thể tránh khỏi sai sót Rất mong thơng cảm đóng góp ý kiến q thầy bạn để khóa luận hồn thiện Cuối cùng, xin kính chúc thầy bạn sức khỏe, thành công công việc sống Chúng em xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, tháng 09, năm 2021 SVTH i MỤC LỤC PHIẾU GIAO NHIỆM VỤ iii BẢN NHẬN XÉT CỦA GVHD iv LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv DANH MỤC BẢNG BIỂU vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Nêu đôi nét salmonella ( Đặc điêm, độc tố, ngộ độc, nguồn lây nhiễm, biện pháp phòng ngừa) 1.1.1 Đặc điểm hình thái Salmonella typhi .3 1.1.2 Độc tố: .3 1.1.3 Các nguồn lây nhiễm: 1.1.4 Triệu chứng: 1.1.5 Biện pháp phòng ngừa .5 1.2 Tầm quan trọng S typhi 1.3 Vì phải sử dụng phương pháp phân tích Salmonella Typhy khác nhau.6 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 2.1 Nghiên cứu 1: Enrichment-ELISA để phát Salmonella typhi từ thực phẩm nước 2.1.1 Nội dung nghiên cứu: 2.1.2 Kết nghiên cứu: 2.2 Nghiên cứu 2: Phát nhanh vi khuẩn Salmonella typhi trứng bị ô nhiễm cách sử dụng RT - PCR 11 2.2.1 Tổng quan: .11 2.2.2 Nguyên liệu nghiên cứu 12 2.2.3 Vật liệu phương pháp nghiên cứu .12 2.2.4 Kết 13 2.3 Nghiên cứu 3: Phát trực tiếp Salmonella typhi sản phẩm tươi sống cách sử dụng cảm biến sinh học từ tính đàn hồi dựa phage 15 2.3.1 Vật liệu phương pháp .16 2.4 Nghiên cứu 4: Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật Multiplex Pcr phát vi khuẩn Salmonella sp.s enterica gây ngộ độc thực phẩm 19 2.4.1 Nội dung nghiên cứu .19 2.4.2 Nguyên liệu nghiên cứu 19 2.4.3 Phương pháp xác định ngưỡng phát phản ứng multiplex PCR loại vikhuẩn Salmonella sp Staphylococcus aureus 19 2.4.4 Kết nghiên cứu 20 2.4.5 Đề xuất quy trình multiplex PCR cặp mồi để phát nhanh đồng thời vi khuẩn Salmonella sp Staphylococcus aureus thực phẩm gen invasive gen nuclease 21 ii 2.4.6 KẾT LUẬN 22 2.5 Nghiên cứu 5: Phương pháp lai huỳnh quang chỗ (FISH) để phát nhanh Salmonella thịt cừu băm nhỏ 23 2.5.1 Đầu dò Oligonucleotide 23 2.5.2 FISH protocol 23 2.5.3 Hiệu FISH .24 2.5.4 Phát vi khuẩn Salmonella thịt cừu băm nhỏ 24 2.5.5 Kết nghiên cứu 25 CHƯƠNG KIẾN NGHỊ 26 3.1 Nhận định phương pháp Enrichment-ELISA để phát Salmonella typhi 26 3.2 Nhận định phương pháp RT - PCR 26 3.3 Nhận định phương pháp sử dụng cảm biến sinh học từ tính đàn hồi dựa phage 26 3.4 Nhận định phương pháp Multiplex Pcr .27 3.5 Nhận định phương pháp lai huỳnh quang chỗ (FISH) 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 iii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình chụp salmonella ( nhuộm màu đỏ) kính hiển vi Hình 2.1 Độ nhạy phương pháp sandwich ELISA kháng thể kép để phát S typhi (Đường ngang thể giá trị ngưỡng cho sELISA) 10 Hình 2.2 Kết tối ưu hóa nhiệt độ ủ mồi gen fimC S Typhi 14 Hình 2.3 Đường cong khuếch đại nuôi cấy dự trữ vi khuẩn Salmonella typhi với mẫu DNA nồng độ 56 nanogam đối chứng âm tính 14 Hình 2.4 Đường cong nóng chảy (melting curve) Salmonella typhi nuôi cấy với mẫu DNA 56 nanogam 15 Hình 2.5 Đường cong khuếch đại đường cong kiểm tra độ nhạy gen fimC Salmonella typhi 15 Hình 2.6 Đường cong khuếch đại đường cong nóng chảy đánh giá xác nhận fimC-F (mồi thuận) fimC-R (mồi ngược) Salmonella Typhi với ba mẫu trứng 15 Hình 2.7 Sơ đồ quy trình sử dụng để phát trực tiếp Salmonella typhi bề mặt cà chua cảm biến sinh học ME 17 Hình 2.8 Hiển thị số lượng lớn tế bào Salmonella bề mặt cảm biến 17 Hình 2.9 ảnh SEM hiển thị số lượng giới hạn nhỏ hơnSalmonella tế bào đến bề mặt cảm biến 18 Hình 2.10 Ảnh chụp SEMphotomicrograph bề mặt cà chua có gai Salmonella 18 Hình 2.11 Sự thay đổi đo tần số cộng hưởng cảm biến sinh học ME cảm biến điều khiển sau tiếp xúc với bề mặt cà chua tăng đột biến với nồng độ khác Salmonella 18 Hình 2.12 Kết điện di kiểm tra mật độ tế bào Salmonella sp Staphylococcus aureus ni cấy phát phản ứng multiplex PCR 21 Hình 2.13 Kết phản ứng multiplex PCR phát đồng thời Salmonella sp Staphylococcus aureus .21 Hình 2.14.Tế bào S Typhi nhuộm DAPI mức độ ô nhiễm nhân tạo khác 24 Hình 2.15 Tế bào S Typhi phát đầu dò Salm63 mức độ ô nhiễm nhân tạo khác 25 iv DANH MỤC BẢNG BIỂU BẢNG 2.1 Định lượng S typhi môi trường tiền tăng sinh khác để phát sELISA 10 BẢNG 2.2 Định lượng S typhi chất lỏngtăng sinh khác để phát sELISA 10 BẢNG DANH MỤC BẢNG BIỂU Phát S typhi mẫu thực phẩm khác Enrichment-ELISA 11 Bảng 2.4 Độ tinh khiết nồng độ DNA phân lập mẫu nuôi cấy gốc mẫu trứng bị nhiễm vi khuẩn Salmonella typhi 13 Bảng 2.5 Mật độ tế bào Salmonella sp Và Staphylococcus aureus ni cấycó thể phát phản ứng multiplex PCR 19 Bảng 2.6 Trình tự Oligonucleotide mẫu dị Salm63 22 v MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ngày nay, xã hội phát triển nhu cầu chất dinh dưỡng cao, màu sắc thực phẩm cải thiện nhằm tăng giá trị cảm quan cho thực phẩm Vệ sinh thực phẩm vấn đề ưu tiên hàng đầu nước ta giới Thực phẩm không đảm bảo vệ sinh gây bệnh ảnh hưởng lâu dài đến sức khỏe người tiêu dùng Đặc biệc thịt, cá, rau… chợ số cửa hàng khác có nguy nhiễm bẩn gây ngộ độc cho người tiêu dùng Đa số vụ ngộ độc vi sinh vật gây Có nhiều báo, phóng nói nói nguy hiểm, hậu Nhưng tình trạng ngộ độc thực phẩm nghiêm trọng Các vi sinh vật gây ngộ độc thực phẩm thường Clostridium botinium, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa … Nhưng Salmonella đặc biệt vi khuẩn Salmonella typhi nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm Salmonella typhi xâm nhập vào thể người thông qua sản phẩm thịt, cá,… mang Khi vào thể vi khuẩn gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người Ngoài tiêu chuẩn nước ta nước quy định chặt chẽ xuất Salmonella typhi thực phẩm Đặc biệt sản phẩm sữa, thịt, phomat,… Nếu có mặt Salmonella typhi khơng chấp nhận Theo tơng tư 05/2012/TT-BYT Chính cần có nhiều kỹ thuật phân tích Salmonella typhi để xác định xác khách quan Xuất phát từ mong muốn biết thêm Salmonella typhi chất độc, thực phẩm thường nhiễm, phương phương pháp định danh định tính … Nên nhóm định làm đề tài “Salmonella typhi” để tìm hiểu rõ Mục tiêu đề tài Tìm hiểu sơ S typhi Biết phương pháp dùng để xác định S typhi Nội dung nghiên cứu Tìm hiểu S typhi Các phương pháp dùng xác định S typhi Bố cục luận văn gồm có phần Phần 1: Mở đầu: trang đến trang Phần 2: Tổng quan: từ trang đến trang ... chứng bệnh sốt thương hàn (Salmonella typhi, Salmonella paratyphi) Hình TỔNG salmonella kính QUAN.1 Hình chụp ( nhuộm màu đỏ) hiển vi Salmonella enterica serotype typhi (Salmonella typhi),thuộc nhóm... 1.3 Vì phải sử dụng phương pháp phân tích Salmonella Typhy khác nhau.6 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 2.1 Nghiên cứu 1: Enrichment-ELISA để phát Salmonella typhi từ thực phẩm nước ... tiếp Salmonella typhi bề mặt cà chua cảm biến sinh học ME 17 Hình 2.8 Hiển thị số lượng lớn tế bào Salmonella bề mặt cảm biến 17 Hình 2.9 ảnh SEM hiển thị số lượng giới hạn nhỏ hơnSalmonella
