TỐI ƯU HÓA QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT TINH DẦU BƯỞI DA XANH

+ TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ KHOA DƢỢC–ĐIỀU DƢỠNG KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH DƢỢC HỌC MÃ SỐ: 7720201 TỐI ƢU HĨA QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT VÀ ỨNG DỤNG SẮC KÝ KHÍ GC–MS KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TINH DẦU BƢỞI (Citrus grandis (L.) Osbeck) CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS TRÌ KIM NGỌC DƢ THANH TUYỀN MSSV: 14D720401503 LỚP: ĐẠI HỌC DƢỢC 9G Cần Thơ, 2019 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình tham gia nghiên cứu để hồn thành khóa luận môn Dƣợc Liệu trƣờng Đại Học Tây Đô, em nhận đƣợc nhiều quan tâm, hƣớng dẫn tận tình nhiều lời khun bổ ích thầy cô bạn bè Đầu tiên, em xin chân thành gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Trì Kim Ngọc dành nhiều thời gian, cơng sức tận tình bảo hƣớng dẫn cho em suốt thời gian thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tồn thể thầy mơn Dƣợc Liệu tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em q trình em thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô môn khoa Dƣợc–Điều dƣỡng trƣờng Đại Học Tây Đô truyền đạt cho em đầy đủ kiến thức để em có đƣợc tảng vững cho việc hồn thành tốt khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến Cha Mẹ, ngƣời tạo điều kiện để em theo học thực ƣớc mơ Vì thời gian thực đề tài có hạn nhƣ kiến thức có đƣợc cịn hạn chế, q trình thực khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em xin đón nhận ý kiến đóng góp nhƣ phản hồi từ thầy cô Em xin chân thành cảm ơn ! Sinh viên Dƣ Thanh Tuyền i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi với hướng dẫn ThS Trì Kim Ngọc Các số liệu, kết nêu Khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Cần Thơ, ngày … tháng …năm 2019 Dƣ Thanh Tuyền ii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Chi Citrus chi đƣợc trồng phổ biến có Bƣởi có nhiều cơng dụng mang đến giá trị kinh tế cao Tuy nhiên, chƣa có nhiều nghiên cứu sâu rộng trình chiết tách nhƣ khảo sát thành phần hóa học có tinh dầu Bƣởi da xanh Đề tài góp phần tìm hiểu thêm Bƣởi da xanh phƣơng pháp chiết tinh dầu với nội dung: Khảo sát thực vật học, tối ƣu hóa quy trình chiết xuất tinh dầu Bƣởi da xanh phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh sắc ký khí ghép khối phổ Gas Chromatography Mass Spectometry Đối tƣợng nghiên cứu Dƣợc liệu vỏ quả, thân, lá, rễ Bƣởi da xanh Citrus grandis (L.) Osbeck thu hái vào tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 tỉnh Trà Vinh Phƣơng pháp nghiên cứu - Khảo sát hình thái, mô tả đặc điểm thực vật dựa quan sát mẫu vỏ quả, thân, lá, rễ tƣơi khảo sát vi học bột dƣợc liệu Bƣởi da xanh - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc gồm: Cách sơ chế, độ chia nhỏ, thời gian chiết, tỷ lệ nguyên liệu-nƣớc - Khảo sát phƣơng pháp hỗ trợ làm tăng hiệu suất chiết gồm: Thời gian siêu âm, nồng độ muối NaCl để xây dựng quy trình chiết tối ƣu Phân tích hàm lƣợng thành phần hợp chất mẫu tinh dầu vỏ Bƣởi da xanh - phƣơng pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC–MS Kết kết luận - Định danh xác tên khoa học mẫu thực vật thu hái đƣợc dùng nghiên cứu Citrus grandis (L.) Osbeck thuộc họ Rutaceae - Quan sát thấy đƣợc đặc điểm vi phẫu gồm mô phận vỏ quả, - - thân, lá, rễ Bƣởi da xanh Khảo sát đặc điểm vi học bột dƣợc liệu Bƣởi da xanh quan sát thấy đƣợc cấu tử: Mảnh mạch vịng, lơng che chở đơn bào, khối nhựa màu, tinh thể calci oxalat hình cầu gai, mảnh mơ mềm, mảnh biểu bì mang lỗ khí, mạch điểm, mạch vạch Xây dựng đƣợc quy trình chiết tối ƣu sau thu đƣợc kết từ yếu tố ảnh hƣởng phƣơng pháp hỗ trợ Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh phƣơng pháp sắc ký khí GC-MS biết đƣợc hàm lƣợng thành phần d-Limonen, mycen có hàm lƣợng cao bảng thành phần iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN i TÓM TẮT KHÓA LUẬN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ viii MỞ ĐẦU x CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Một số giống Bƣởi Việt Nam 1.1.3 Giới thiệu Bƣởi da xanh 1.2 TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Tổng quan hàm lƣợng tinh dầu 1.2.2 Các hợp chất khác 1.3 TÁC DỤNG DƢỢC LÝ VÀ CÔNG DỤNG CỦA CÂY BƢỞI 1.3.1 Tác dụng dƣợc lý 1.3.2 Công dụng y học cổ truyền 1.4 GIỚI THIỆU CÁC PHƢƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT TINH DẦU 1.4.1 Phƣơng pháp chiết xuất dung môi 1.4.2 Phƣơng pháp ƣớp 1.4.3 Phƣơng pháp ép 10 1.4.4 Phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc 10 1.4.5 Các phƣơng pháp chiết tinh dầu đại 12 1.5 GIỚI THIỆU SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ GAS CHROMATOGRAPHY MASS SPECTOMETRY 14 1.5.1 Sắc ký khí Gas Chromatography 14 1.5.2 Khối phổ Mass Spectometry 15 iv 1.5.3 Sắc ký khí ghép khối phổ Gas Chromatography Mass Spectometry 15 1.6 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Dung mơi hóa chất 17 2.1.3 Dụng cụ, trang thiết bị 17 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Nghiên cứu thực vật học 17 2.2.2 Chiết phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc 18 2.2.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất chiết tinh dầu 18 2.2.4 Phƣơng pháp hỗ trợ làm tăng hiệu suất chiết tinh dầu 19 2.2.5 Xây dựng quy trình chiết tối ƣu 19 2.2.6 Phân tích hàm lƣợng thành phần hợp chất tinh dầu vỏ Bƣởi da xanh phƣơng pháp sắc ký ghép khối phổ Gas Chromatography Mass Spectometry 19 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 KẾT QUẢ 21 3.1.1 Nghiên cứu thực vật học 21 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 22 3.1.3 Soi bột Bƣởi da xanh (40X) 26 3.1.4 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng 27 3.1.5 Kết phƣơng pháp hỗ trợ 33 3.1.6 Quy trình chiết tối ƣu 37 3.1.7 Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh 38 3.2 BÀN LUẬN 39 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 41 4.1 KẾT LUẬN 41 4.2 ĐỀ XUẤT 42 PHỤ LỤC PL1 v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ý nghĩa Chữ tắt Chữ nguyên DĐVN Dƣợc điển Việt Nam GC-MS Gas Chromatography Mass Spectometry MeOH Methanol Sắc ký khí ghép khối phổ PCGr02 Bƣởi khơ PCGr03 Bƣởi héo PCGr01A Bƣởi tƣơi xay mịn PCGr01B Bƣởi tƣơi xay nhuyễn PCGr01C Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có hỗ trợ siêu âm Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có ngâm muối PCGr01D TT Thuốc thử TLTK Tài liệu tham khảo UV–Vis Ultraviolet and Visible vi Tử ngoại khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Khảo sát cách sơ chế nguyên liệu 27 Bảng 3.2 Kết khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi xay nhuyễn, héo, khô .28 Bảng 3.3 Khảo sát độ chia nhỏ nguyên liệu 29 Bảng 3.4 Kết khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi xay mịn, xay nhuyễn 30 Bảng 3.5 Khảo sát thời gian chiết 31 Bảng 3.6 Khảo sát lƣợng nƣớc 32 Bảng 3.7 Khảo sát thời gian siêu âm 33 Bảng 3.8 Kết khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi có hỗ trợ siêu âm 34 Bảng 3.9 Khảo sát nồng độ muối NaCl 35 Bảng 3.10 Kết khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi có ngâm muối 36 Bảng 3.11 Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi xay nhuyễn Bƣởi tƣơi có hỗ trợ siêu âm 38 vii DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Cây Bƣởi Hình 1.2 Bƣởi Phúc Trạch Hình 1.3 Bƣởi Đoan Hùng Hình 1.4 Bƣởi Năm roi Hình 1.5 Bƣởi da xanh Hình 1.6 Phƣơng pháp ƣớp 10 Hình 1.7 Máy ép tinh dầu 10 Hình 1.8 Bộ dụng cụ cất tinh dầu 11 Hình 1.9 Bể siêu âm 13 Hình 1.10 Hệ thống sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS 16 Hình 2.11 Quy trình chiết xuất khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh 20 Hình 3.12 Toàn cây, lá, rễ Bƣởi da xanh 21 Hình 3.13 Hoa, quả, hạt Bƣởi da xanh 21 Hinh 3.14 Biểu bì có lỗ khí kiểu hỗn bào Bƣởi da xanh 22 Hình 3.15 Hình vi phẫu chi tiết Bƣởi da xanh 23 Hình 3.16 Hình vi phẫu chi tiết thân Bƣởi da xanh 24 Hình 3.17 Hình vi phẫu chi tiết rễ Bƣởi da xanh 25 Hình 3.18 Vi phẫu túi tiết vỏ Bƣởi da xanh 25 Hình 3.19 Bột Bƣởi da xanh 26 Hình 3.20 Các cấu tử bột Bƣởi da xanh 26 Hình 3.21 Biểu đồ khảo sát cách sơ chế nguyên liệu dựa hiệu suất chiết 27 Hình 3.22 Biểu đồ khảo sát độ chia nhỏ nguyên liệu dựa hiệu suất chiết 29 Hình 3.23 Biểu đồ khảo sát thời gian chiết 31 Hình 3.24 Biểu đồ khảo sát lƣợng nƣớc 32 Hình 3.25 Biểu đồ khảo sát thời gian siêu âm 33 viii Hình 3.26 Biểu đồ khảo sát nồng độ muối NacCl 35 Hình 3.27 Sơ đồ quy trình chiết tối ƣu 37 Hình 3.28 Phiếu kết PL-1 Hình 3.29 Phiếu kết PL-2 Hình 3.30 Phiếu kết PL-3 Hình 3.31 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay mịn (PCGr01A) PL-4 Hình 3.32 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn (PCGr01B) PL-4 Hình 3.33 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn hỗ trợ siêu âm (PCGr01C) PL-5 Hình 3.34 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có ngâm muối (PCGr01D) PL-5 Hình 3.35 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi khô (PCGr02) PL-6 Hình 3.36 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi héo (PCGr03) PL-6 Hình 3.37 Hình vi phẫu PL-7 ix 3.1.7 Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh Qua bảng kết khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi xay nhuyễn Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có hỗ trợ siêu âm thấy hàm lƣợng hoạt chất nhƣ d-Limonen tỷ lệ cao Mặc dù Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có hỗ trợ siêu âm có xuất số thành phần khác nhƣng hàm lƣợng thấp Kết luận: Nguyên liệu Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có hỗ trợ siêu âm tối ƣu cho hiệu suất chiết tinh dầu cao thành phần hóa học tinh dầu gần nhƣ không thay đổi Bảng 3.11 Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi tƣơi xay nhuyễn Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có hỗ trợ siêu âm TT Rt Tên chất Hàm lƣợng (%) PCGr01B (Bƣởi tƣơi xay nhuyễn) PCGr01C (Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có siêu âm) 7,40 1R-α-Pinen 0,64 0,59 9,12 Sabinen 0,22 0,17 10,06 β-Myrcen 1,58 1,60 10,63 α-Phellandren 0,49 1,07 11,75 Cymen 0,19 - 12,10 d-Limonen 95,82 95,29 13,19 cis-Ocimen 0,12 0,16 14,52 cis-Linalool oxid 0,22 0,28 15,49 trans-Linalool oxid 0.09 0,16 10 16,33 Linalool 0,18 0,20 11 21,06 α-Terpineol 0,28 0,30 12 29,13 Caryophyllen 0,17 0,18 38 3.2 BÀN LUẬN Nghiên cứu thực vật học Theo khảo sát thực vật học (Đỗ Huy Bích cs, 2006) quan sát thực tế bên ngồi thấy đặc điểm Bƣởi da xanh phù hợp với khảo sát trƣớc Vi phẫu Kết vi phẫu vỏ quả, thân, lá, rễ Bƣởi da xanh thấy đƣợc đầy đủ mô có hầu hết lồi thực vật, quan sát thấy đƣợc số túi tiết tinh dầu Khảo sát vi học bột dược liệu Quan sát thấy đƣợc cấu tử nhƣ: Mảnh mạch vòng, mạch điểm, mạch vạch, tinh thể calci oxalat hình cầu gai, tế bào biểu bì mang lỗ khí… Khảo sát yếu tố ảnh hưởng - Qua kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng trình chiết xuất tinh dầu Bƣởi da xanh phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc cho thấy lƣợng tinh dầu tăng lên yếu tố thích hợp - Hiệu suất tinh dầu đạt cao nguyên liệu Bƣởi tƣơi đƣợc làm nhỏ kích thƣớc vừa phải, không to không nhỏ Nếu dƣợc liệu đƣợc xay nhỏ mịn trình chiết kéo theo chất khơng xác định Vì vậy, ngun liệu cần đƣợc chia nhỏ kích thƣớc thích hợp - Tỷ lệ nguyên liệu-nƣớc thích hợp tỷ lệ (1:2), lƣợng nƣớc nguyên liệu bị khô dẫn đến cháy khét làm ảnh hƣởng chất lƣợng tinh dầu, nƣớc nhiều khơng có lợi tinh dầu có số thành phần dễ tan nƣớc - Thời gian chiết tinh dầu gần nhƣ đạt hiệu suất nhƣ tối ƣu 90 phút, tiếp tục lƣợng tinh dầu không tăng thêm nhiều mà làm tốn lƣợng thời gian So sánh với nghiên cứu khác - Theo đề tài nghiên cứu khoa học Nguyễn Minh Hoàng tiến hành chiết xuất tinh dầu Bƣởi da xanh phƣơng pháp chƣng cất nƣớc cổ điển với quy trình chiết 200 g nguyên liệu, 600 mL nƣớc, chiết 90 phút hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc 1,58% (Nguyễn Minh Hoàng, 2006) So với quy trình mà đề tài xây dựng (2,35%) hiệu suất chiết thấp - Theo đề tài Tối ƣu hóa quy trình chiết xuất d-Limonen từ vỏ Cam, Chanh cơng nghệ vi sóng khơng dung mơi hiệu suất vỏ Cam Chanh thu đƣợc lần lƣợt 3,7% 2,0% với công suất tƣơng ứng 1000 W thời gian 10 phút Phân tích cho thấy d-Limonen tinh dầu vỏ Cam Chanh chiếm cao Tóm lại quy trình cho hiệu suất cao, khai thác nhanh hiệu quả, tránh tiêu thụ nƣớc, dung môi cho phép tiết kiệm lƣợng đáng kể (Auta M et al., 2018) 39 - Dựa theo kết hai quy trình xây dựng thấy phƣơng pháp chiết xuất cơng nghệ vi sóng khơng dung mơi cho hiệu suất tối ƣu thuộc chi Citrus Phương pháp hỗ trợ Khảo sát thêm yếu tố hỗ trợ có thấy siêu âm 15 phút làm tăng thể tích thành phần hóa học tinh dầu khơng thay đổi đáng kể Cịn phƣơng pháp khảo sát nồng độ muối làm giảm hiệu suất chiết nên khơng đƣợc áp dụng Phân tích hàm lượng thành phần hợp chất tinh dầu vỏ Bưởi da xanh phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ Gas Chromatography Mass Spectometry - Thu đƣợc 12 cấu tử tinh dầu, cấu tử d-Limonen có hàm lƣợng chiếm cao bảng thành phần - Theo khảo sát thành phần hóa học tinh dầu vỏ Bƣởi Phạm Thanh Kỳ tinh dầu vỏ Bƣởi Việt Nam có thành phần d-Limonen (41,45-84,62%) (Phạm Thanh Kỳ, 2015) thực tế khảo sát thành phần hóa học tinh dầu phƣơng pháp sắc ký khí GC-MS cho kết giống hàm lƣợng d-Limonen chiếm cao (96,73%), myrcen chiếm hàm lƣợng cao bảng thành phần tinh dầu vỏ Bƣởi - Sự khác biệt hàm lƣợng d-Limonen tinh dầu vỏ Bƣởi khác biệt mơi trƣờng sinh trƣởng, nguồn gốc, điều kiện chăm sóc phần nơi thu đƣợc hái Các yếu tố ngoại cảnh: - Trong trình chiết xuất phƣơng pháp chƣng cất lôi theo nƣớc, lƣợng tinh dầu thu đƣợc qua lần chiết có thay đổi yếu tố ngoại cảnh tác động nhƣ: Chất lƣợng Bƣởi non già, nhiệt độ phòng cao làm giảm hiệu suất chiết, nhiệt độ ống sinh hàn không đủ lạnh ảnh hƣởng phần hiệu suất tinh dầu thu đƣợc - Nhiệt độ sôi yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất nhiệt độ cao làm phân hủy tinh dầu, để hạn chế ảnh hƣởng chƣng cất nên đƣợc thực thời gian ngắn nhiệt độ khơng q cao Ngồi đề tài có ý nghĩa thực tế nhƣ: - Tận dụng đƣợc vỏ Bƣởi để thu đƣợc tinh dầu quy trình chiết xuất tối ƣu - Tạo tiền đề xây dựng tiếp quy trình chiết xuất tối ƣu giống thuộc chi Citrus để mang lại lợi ích nâng cao giá trị kinh tế loại tinh dầu khác 40 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Nghiên cứu thực vật học Khảo sát hình thái thực vật, mơ tả đặc điểm thực vật học dựa quan sát mẫu tƣơi Vi phẫu Tế bào biểu bì gân có kích thƣớc nhỏ tế bào biểu bì phiến Mặt mặt dƣới phiến nhẵn Mơ mềm giậu hai bên phiến có cấu tạo lớp tế bào Lớp mơ dày góc nằm sát biểu bì dƣới gân Tế bào mơ cứng xếp thành vịng bao quanh bó libe-gỗ gân gân phụ Bó libe-gỗ tạo thành vịng cung dƣới có tạo thành vịng khép kín, libe ngồi, gỗ trong, mơ mềm đạo Vi phẫu thân Tiết diện gần nhƣ trịn Ngồi lớp biểu bì Trong lớp mơ mềm vỏ có túi tiết tinh dầu Các đám sợi mơ cứng xếp thành vịng trịn bao quanh bó libe Các bó libe xếp bên ngồi bó gỗ Mơ mềm tủy đạo gồm nhiều tế bào hình trịn gần trịn, kích thƣớc khơng đều, vách có nhiều lỗ, hóa gỗ vùng tủy Vi phẫu rễ Vùng vỏ: Lớp bần gồm 2-3 lớp tế bào, vách dày Mô mềm vỏ 4-5 lớp tế bào hình bầu dục, tế bào xếp lộn xộn, tế bào có đạo nhỏ Vùng trung trụ: Gồm cụm libe cấp xếp xung quanh bó gỗ Gỗ chiếm tâm Khảo sát vi học bột dược liệu - Soi kính hiển vi vật kính 40X thấy cấu tử: + Tinh thể calci oxalat hình khối nhiều + Mãnh biểu bì mang khí khổng + Mạch có nhiều dạng: Mạch vạch, mạch xoắn, mạch vịng + Mãnh biểu bì + Tinh thể canxi oxalat hình cầu gai Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng Nguyên liệu vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn đƣợc chiết tỷ lệ nguyên liệu nƣớc (1:2) có hỗ trợ siêu âm 15 phút , thời gian chiết tối ƣu khoảng 90 phút thu đƣợc thể tích tinh dầu cao có chiết thêm thể tích tinh dầu khơng tăng nhiều mà tốn thêm lƣợng Phƣơng pháp hỗ trợ Phƣơng pháp cất kéo nƣớc có hỗ trợ siêu âm làm tăng hiệu suất chiết tinh dầu 41 Phân tính hàm lƣợng thành phần hợp chất mẫu tinh dầu vỏ Bƣởi phƣơng pháp sắc ký khí ghép khối phổ Gas Chromatography Mass Spectometry Ở mẫu tinh dầu hàm lƣợng d-Limonen chiếm cao tất thành phần hóa học Tuy nhiên mẫu Bƣởi xay mịn, Bƣởi héo, Bƣởi khơ, Bƣởi có siêu âm Bƣởi ngâm muối hàm lƣợng d-Limonen thấp so với Bƣởi tƣơi xay nhuyễn, có xuất số chất khác chất không xác định Tuy nhiên hàm lƣợng không đáng kể 4.2 ĐỀ XUẤT Do thời gian có hạn điều kiện nghiên cứu, kiến thức hạn chế, đề tài đạt đƣợc kết quy mơ phịng thí nghiệm Sau đề xuất đề tài tiếp tục: - Tiến hành chiết xuất tinh dầu vỏ Bƣởi da xanh quy mô công nghiệp để thu - đƣợc tinh dầu có chất lƣợng tốt nâng cao giá trị Bƣởi da xanh Xây dựng thêm quy trình chiết tối ƣu giống Bƣởi thuộc chi Citrus khác 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Sách [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn, 2006 Cây thuốc động vật làm thuốc, tập I Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Trang 274-407 [2] Lã Đình Mỡi, 2001 Tài nguyên thực vật có tinh dầu Việt Nam Nhà xuất Nông Nghiệp Trang 79-94 [3] Lê Ngọc Thạch, 2003 Tinh dầu NXB Đại học Quốc gia, Thành phố Hồ Chí Minh Trang 12-22 [4]Lƣơng Đức Vinh, 2014 Nghiên cứu trích ly tinh dầu vỏ Bƣởi năm roi Trƣờng Đại Học Bà Rịa Vũng Tàu Trang 19-34 [5] Nguyễn Thị Tâm, 2003 Những tinh dầu lƣu hành thị trƣờng NXB Khoa học Kỹ thuật Trang 19-26 [6] Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phƣơng pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia, Thành phố Hồ Chí Minh Trang 18-26 [7] Phạm Thanh Kỳ, 2015 Dƣợc liệu học, tập II, tái lần thứ Nhà xuất Y học Hà Nội Trang 174-199 [8] Auta M., Musa U., Tsado D G., Faruq A A , Isah A G., Raji S & Nwanisobi C., 2018 Optimization of citrus peels d-Limonene extraction using solvent-free microwave green technology Vol 205 p.789-796 Đề tài nghiên cứu khoa học [9] Nguyễn Minh Hoàng, 2006 Khảo sát tinh dầu vỏ trái giống Citrus họ Rutaceae Trang web [10] Bƣởi Năm Roi http://giongcayanqua.edu.vn/cay-giong-buoi-nam-roi-cach-trongcham-soc-buoi-nam-roi.html Truy cập ngày 6/9/2018 [11] Bƣởi Đoan Hùng http://giongcayanqua.edu.vn/cay-giong-buoi-doan-hung-cachtrong-cham-soc-buoi-doan-hung.html Truy cập ngày 6/9/2018 [12] Bƣởi Phúc Trạch http://giongcayanqua.edu.vn/cay-giong-buoi-phuc-trach-cachtrong-cham-soc-buoi-phuc-trach.html Truy cập ngày 6/9/2018 [13] Bƣởi Diễn http://giongcayanqua.edu.vn/cay-giong-buoi-dien-cach-trong-chamsoc-buoi-dien.html Truy cập ngày 6/9/2018 [14] Bƣởi Da Xanh http://giongcayanqua.edu.vn/cay-giong-buoi-da-xanh-cach-trongcham-soc-buoi-da-xanh.html Truy cập ngày 6/9/2018 [15] Hệ thống sắc ký khối phổ http://www.thietbisinhhoc.com/2015/06/he-thong-sacky-khoi-pho-gc-ms-itq-900.html Truy cập ngày 7/9/2018 43 [16] Bƣởi Da Xanh https://www.cayantrai.org/buoi-da-xanh/ Truy cập ngày 10/9/2018 [17]Chiết xuất tinh dầu công nghệ CO2 siêu tới hạn https://tinhdauthaoduoc.net/chiet-xuat-tinh-dau-bang-cong-nghe-co2-sieu-toi-hanbid91.html Truy cập ngày 10/9/2018 [18] Máy ép tinh dầu http://www.mayvacongnghe.com/may-ep-may-nghien/may-eptinh-dau.html Truy cập ngày 10/9/2018 [19] Phạm Thanh Hiền Huỳnh Hồng Quang http://www.impe-qn.org.vn/impeqn/vn/portal/Infodetail.jsp?area=58&cat=1092&ID=2115 [20] Thành phần hóa học https://duoclieu.edu.vn/cay-buoi/ Truy cập ngày 10/9/2018 [21] Tác dụng dƣợc lý http://www.buoidaxanh.com.vn/sptubuoi/baithuoc/260-khoedep-nho-buoi.html Truy cập ngày 10/09/2018 [22] Tác dụng dƣợc lý http://www.ktktna.edu.vn/10-tac-dung-cua-buoi-voi-suc-khoecon-nguoi-2880.html Truy cập ngày 10/09/2018 44 PHỤ LỤC PHỤC LỤC PL1 PHIẾU KẾT QUẢ Hình 3.28 Phiếu kết PL – PHỤC LỤC PL2 PHIẾU KẾT QUẢ Hình 3.29 Phiếu kết PL – PHỤC LỤC PL3 PHIẾU KẾT QUẢ Hình 3.30 Phiếu kết PL – PHỤC LỤC PL4 PHỔ SẮC KÝ GC-MS Hình 3.31 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay mịn (PCGr01A) Hình 3.32 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn (PCGr01B) PL – PHỤC LỤC PL5 PHỔ SẮC KÝ GC-MS Hình 3.33 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có siêu âm (PCGr01C) Hình 3.34 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi tƣơi xay nhuyễn có ngâm muối (PCGr01D) PL – PHỤC LỤC PL6 PHỔ SẮC KÝ GC-MS Hình 3.35 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi khơ (PCGr02) Hình 3.36 Phổ sắc ký GC-MS vỏ Bƣởi héo (PCGr03) PL – PHỤ LỤC PL7 HÌNH VI PHẪU Vi phẫu Vi phẫu thân Vi phẫu vỏ Vi phẫu vỏ Vi phẫu rễ Soi bột Mảnh mạch vịng Lơng che chở đơn bào Khối nhựa màu Tinh thể calci oxalat hình cầu gai Mảnh mơ mềm Mảnh biểu bì mang lỗ khí Mạch điểm Mạch vạch Hình 3.37 Hình vi phẫu PL – ... dụng ngâm muối Quy trình chiết xuất tinh dầu thu đƣợc hiệu suất cao Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi Hình 2.11 Quy trình chiết xuất khảo sát thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh 20 CHƢƠNG... q trình chiết tách nhƣ khảo sát thành phần hóa học có tinh dầu Bƣởi da xanh Đề tài góp phần tìm hiểu thêm Bƣởi da xanh phƣơng pháp chiết tinh dầu với nội dung: Khảo sát thực vật học, tối ƣu hóa. .. phút Chiết chƣng cất lôi theo nƣớc Chiết 90 phút Tinh dầu thu đƣợc Hình 3.27 Sơ đồ quy trình chiết tối ƣu 37 3.1.7 Thành phần hóa học tinh dầu Bƣởi da xanh Qua bảng kết khảo sát thành phần hóa