BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ KHOA DƢỢC - ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO MÔN PHƢƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƢỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƢỞI Chuyên ngành: Dƣợc liệu – Dƣợc học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC TÔN NỮ THỊ NHƯ QUỲNH Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO TP HCM, 05/2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ KHOA DƢỢC - ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO MƠN PHƢƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƢỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƢỞI Chuyên ngành: Dƣợc liệu – Dƣợc học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC TƠN NỮ THỊ NHƯ QUỲNH Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO \ TP HCM, 05/2018 I NGUYÊN LIỆU CHIẾT 1 Tên gọi Tên khoa học: Citrus grandis (L.) Osbeck Tên gọi khác: Citrus maxima (Burm.) Citrus decumana L Họ Cam (Rutacea), Chi Citrus [2], [3], [4] 1.2 Đặc điểm thực vật Bưởi loại ăn Cây nhỡ cao từ 5-15 m, gai nhỏ mọc kẽ Lá có hình trứng bầu dục tròn hình tim, mép nguyên xẻ thùy nông, lấm nhiều túi tinh dầu, cuống có hình cánh tim ngược, rộng cỡ cm Hoa mọc đơn độc nách chùm vài hoa, hoa mẫu 5, cánh hoa trắng, nhị 25- 30, bầu nỗn có 11-16 nỗn Quả mọng hình cầu hay hình lê, đường kính 10-30 cm, màu vàng xanh nhiều túi tinh dầu, vỏ dày 1- cm, múi to màu hồng vàng nhạt Hạt vàng nhạt trắng, dẹt có phơi Bưởi trồng khu vực Đông Nam Á, Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, nước vùng Địa Trung Hải Ở Việt Nam bưởi trồng hầu hết tỉnh Những nơi tiếng bưởi ngon: Đoan Hùng (Phú Thọ), Mê Linh (Vĩnh Phúc), Phúc Trạch, Hương Khê (Hà Tĩnh), Thanh Trà (Huế), Biên Hòa (Đồng Nai), Diễn (Hà Nội) [3], [4] 1.3 Bộ phận dùng, trồng trọt -thu hái Hầu hết phận bưởi (quả, hoa, lá) có nhiều ứng dụng thực phẩm, y học Với cùi bưởi (phần trắng vỏ bưởi) – chứa lượng lớn hoạt chất naringin Bưởi nhân giống hạt, ghép mắt chiết cành Ở Đông Nam Á Việt Nam chủ yếu phương pháp chiết cành [4] II TÍNH CHẤT CỦA NARINGIN 2.1 Cơng thức hố học Naringin Tên khoa học: 7-((2-O-(6-Deoxy-α-L-mannopyranosyl)-β-D- glucopyranosyl)oxy)-2,3-dihydro-5- hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-on Công thức phân tử: C27H32O14 Phân tử gam: 580,54 g/mol 2.2 Tính chất vật lý Naringin Bột kết tinh không màu vàng, khơng mùi, vị đắng Nhiệt độ nóng chảy: 171℃ [7], [8], [9] Độ tan: Naringin không tan ether, benzen, cloroform Tan tốt dung môi phân cực ethanol, ethylacetat, aceton, nước nóng, tan nước lạnh (1/2000 nhiệt độ 20 ℃) [6], [8], [10] 2.3 Tính chất hóa học Naringin Tính acid yếu: Trong dung dịch kiềm loãng, naringin tạo muối phenolat tan nước Phản ứng cyanidin: Phản ứng khử nhóm carbonyl nhân ɣ-pyron tạo anthocyan có màu Phản ứng với muối diazo: Phản ứng hydro linh động với muối diazo tạo sản phẩm azoic màu đỏ Phản ứng tạo phức: Phản ứng tạo phức chelat với muối kim loại nặng nhóm carbonyl C4 hydroxy C5 Dễ bị oxy hóa: dễ bị oxy hóa tác nhân khử có chứa nhóm – OH gắn với nhân thơm [1] 2.4 Tác dụng dƣợc lý Naringin Các nghiên cứu naringin có tác dụng làm giảm cholesterol, làm giảm LDL oxidation giúp ngăn ngừa tăng cholesterol máu, làm giảm nguy xơ vữa động mạch Chống oxy hóa, chống ung thư ác tính Ức chế virus Sindbis neurovirulent Được sử dụng điều trị tổn thương dày Giảm độc tế bào Tăng cường trình trao đổi chất ethanol, giảm tác động tiêu cực ethanol, tăng cường chuyển hóa lipid Là chất ức chế aldose reductase có nghĩa giúp chống bệnh võng mạc liên quan đến bệnh nhân tiểu đường Naringin gây trở ngại cho số loại thuốc thuốc chẹn kênh canxi, thuốc an thần, thuốc làm giảm cholesterol estrogen [9], [12], [13] III QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƢỞI VÀ NHẬN XÉT 3.1 Nghiên cứu Paul L David Florida State horticultural society năm 1966 [11] So sánh phương pháp chiết naringin Shoxlet với phương pháp chiết KestersonHendrickson 3.1.1 Nguyên liệu Cùi Bưởi xấy khô nghiền nhỏ 3.1.2 Cách tiến hành Chiết Shoxlet Chiết 40 g bột cùi Bưởi với 50 ml ethanol Sau giờ, gạn lấy dịch chiết Phƣơng pháp chiết Kesterson-Hendrickson Chiết bột cùi Bưởi lần thứ với cồn phương pháp ngâm lạnh 16 thu dịch chiết cồn Phần cùi Bưởi lại tiếp tục ngâm với nước cho thêm Calcium oxid lọc lấy dịch chiết nước kiềm Phần cùi Bưởi tiếp tục chiết lần thứ cách ngâmvới nước nóng 95 oC giờ, lọc lấy dịch chiết nước 3.1.3 Kết chiết xuất Phƣơng Phần trăm naringin chiết đƣợc so với khối lƣợng dƣợc liệu tƣơi pháp chiết (%) Chiết Shoxlet KestersonHendrickson Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần 0,93 0,92 0,89 1,05 0,87 0,88 0,90 0.88 0,90 0,89 1,00 0,83 0,82 0,84 3.1.4 Nhận xét Phân tích riêng chất chiết từ bước quy trình chiết KestersonHendrickson cho thấy khoảng 72% naringin chiết xuất lần chiết (dung môi cồn); 18% lần thứ hai (nước canxi oxit); 10% lần thứ ba (nước nóng) Khi chiết xuất từ hai quy trình so sánh hàm lượng naringin gần tương đương Tuy nhiên chiết Shoxlet có thời gian ngắn thao tác đơn giản 3.2 Nghiên cứu Nguyễn Cẩm Vân, tạp chí Dƣợc học quân năm 2015 [5] khảo sát chiết xuất naringin từ cùi Bưởi 3phương pháp: chiết shoxlet, chiết ngấm kiệt chiết siêu âm gia nhiệt 3.2.1 Nguyên liệu Cùi Bưởi thu mua khu vực ngoại thành Hà Nội, mẫu Khoa Dược liệu, Trung tâm Đào tạo Nghiên cứu Dược, Học viện Quân y 3.2.2 Cách tiến hành Chiết siêu âm 50 g bột cùi Bưởi chiết với 200 ml ethanol 96o nhiệt độ 75 oC Sau giờ, gạn lấy dịch chiết Chiết tiếp tục bã dược liệu với ethanol (200 ml x lần) Chiết Shoxlet Chiết 50 g bột cùi Bưởi với 200 ml ethanol 96o Sau giờ, gạn lấy dịch chiết Chiết ngấm kiệt Cho 50 g bột cùi Bưởi vào bình ngấm kiệt, thêm ethanol 96o tới ngập dược liệu - cm Sau 24 giờ, rút từ từ dịch chiết, đồng thời bổ sung dung môi vào bình ngấm kiệt Tiến hành chiết tới thu 300 ml dịch chiết Dịch chiết ethanol cô chân không nhiệt độ 50 oC tới cao 1/1 3.2.3 Kết chiết xuất Phƣơng pháp chiết Hiệu suất chiết (%) Chiết siêu âm 43,90 ± 1,1 Chiết Shoxlet 44,53 ± 2,9 Chiết ngấm kiệt 38,38 ± 3,0 3.2.4 Nhận xét Phương pháp ngấm kiệt cho hiệu suất chiết 38,38%, thấp nhiều so với phương pháp chiết siêu âm chiết Shoxlet Do đó, phương pháp khơng lựa chọn cho nghiên cứu Tuy nhiên, tạp chất phương pháp ngấm kiệt so với phương pháp chiết siêu âm chiết Shoxlet, không bị tác động nhiệt độ (tác nhân làm tạp tan nhiều dung mơi chiết xuất) Vì vậy, số nghiên cứu sử dụng phương pháp Hiệu suất chiết phương pháp chiết siêu âm phương pháp chiết Shoxlet tương đương (43,90 ± 1,1% 44,53 ± 2,9%) (p > 0,1) Tuy nhiên, so với phương pháp chiết siêu âm, phương pháp chiết Shoxlet có thời gian chiết dài, việc khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất khó thực Hơn nữa, phương pháp chiết Shoxlet triển khai quy mơ nhỏ phòng thí nghiệm, khó có khả triển khai quy mơ cơng nghiệp Vì vậy, phương pháp chiết siêu âm lựa chọn để tiếp tục nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn công nghiệp dược (2016), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Bộ Y Tế (2007), Dược liệu học tập 1, , Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.353-383 Bộ Y Tế (2007), Thực vật học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.224-284 Bộ Y Tế (2007), Dược liệu học tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.198-200 Nguyễn Cẩm Vân (2015), Nghiên cứu chiết xuất naringin dung môi ethanol từ cùi bưởi (Citrus maxima), tạp chí Dược học quân sự, số 1, tr 19-25 TIẾNG ANH Almeida Verônica M, Branco Carla RC, et al (2012), "Synthesis of naringin 6"ricinoleate using immobilized lipase", Chemistry Central Journal, 6(1), pp 41 Benavente-García Obdulio, Castillo Julian, et al (1997), "Uses and properties of citrus flavonoids", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 45(12), pp 4505-4515 GIANNUZZO Amelia N, NAZARENO Mónica A, et al (2000), "Extracción de naringina de Citrus paradisi L estudio comparativo y optimización de técnicas extractivas", Sociedade Brasileira de Ciência e Tecnologia de Alimentos Kim Hye-Jin, Oh Goo Taeg, et al (2004), "Naringin alters the cholesterol biosynthesis and antioxidant enzyme activities in LDL receptor-knockout mice under cholesterol fed condition", Life sciences, 74(13), pp 1621-1634 10 Linke Harald AB, Eveleigh Douglas E (1975), "Dihydrochalcones and Chalcones of Some Flavanone Glycosides: Qualitativeand Quantitative Determinations", Zeitschrift für Naturforschung B, 30(11-12), pp 940- 942 11 Paul L David (1966), A rapid procedure for extraction of naringin from Grapefruit rind, Florida State horticultural society, pp 325-326 12 Rajadurai M, Prince Mainzen, et al (2006), "Preventive effect of naringin on lipids, lipoproteins and lipid metabolic enzymes in isoproterenol‐induced myocardial infarction in wistar rats", Journal of biochemical and Molecular Toxicology, 20(4), pp 191-197 13 Rajadurai M, Stanely Mainzen Prince P (2007), "Preventive effect of naringin on cardiac mitochondrial enzymes during isoproterenol‐ induced myocardial infarction in rats: A transmission electron microscopic study", Journal of biochemical and molecular toxicology, 21(6), pp 354-361 ... Tiến hành chiết tới thu 300 ml dịch chiết Dịch chiết ethanol cô chân không nhiệt độ 50 oC tới cao 1/1 3.2.3 Kết chiết xuất Phƣơng pháp chiết Hiệu suất chiết (%) Chiết siêu âm 43,90 ± 1,1 Chiết Shoxlet... quy trình chiết KestersonHendrickson cho thấy khoảng 72% naringin chiết xuất lần chiết (dung môi cồn); 18% lần thứ hai (nước canxi oxit); 10% lần thứ ba (nước nóng) Khi chiết xuất từ hai quy... oxid lọc lấy dịch chiết nước kiềm Phần cùi Bưởi tiếp tục chiết lần thứ cách ngâmvới nước nóng 95 oC giờ, lọc lấy dịch chiết nước 3.1.3 Kết chiết xuất Phƣơng Phần trăm naringin chiết đƣợc so với