CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƯỞI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO MÔN PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO BÁO CÁO MÔN PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU

Lớp cao học khóa 2016 - 2018

CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƯỞI Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền

Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC TÔN NỮ THỊ NHƯ QUỲNH

Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO

TP HCM, 05/2018

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO BÁO CÁO MÔN PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU

Lớp cao học khóa 2016 - 2018

CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƯỞI Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền

Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC TÔN NỮ THỊ NHƯ QUỲNH

Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO

\

TP HCM, 05/2018

I NGUYÊN LIỆU CHIẾT

1 1 Tên gọi

Tên khoa học: Citrus grandis (L.) Osbeck

Tên gọi khác: Citrus maxima (Burm.) và Citrus decumana L Họ Cam (Rutacea), Chi

Citrus [2], [3], [4]

1.2 Đặc điểm thực vật

Bưởi là loại cây ăn quả Cây nhỡ cao từ 5-15 m, gai nhỏ mọc ở kẽ lá Lá có hình trứng hoặc bầu dục đấy tròn hoặc hình tim, mép lá nguyên hoặc xẻ thùy nông, lấm tấm nhiều túi tinh dầu, cuống là có hình cánh tim ngược, rộng cỡ 7 cm

Hoa mọc đơn độc ở nách lá hoặc từng chùm vài bông hoa, hoa mẫu 5, cánh hoa trắng, nhị 25- 30, bầu noãn có 11-16 noãn Quả mọng hình cầu hay hình lê, đường kính 10-30 cm, màu vàng xanh nhiều túi tinh dầu, vỏ dày 1- 4 cm, múi to màu hồng hoặc vàng nhạt Hạt vàng nhạt hoặc trắng, dẹt và có 1 phôi

Bưởi được trồng ở khu vực Đông Nam Á, Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, các nước vùng Địa Trung Hải Ở Việt Nam bưởi được trồng ở hầu hết các tỉnh Những nơi nổi tiếng bưởi ngon: Đoan Hùng (Phú Thọ), Mê Linh (Vĩnh Phúc), Phúc Trạch, Hương Khê (Hà Tĩnh), Thanh Trà (Huế), Biên Hòa (Đồng Nai), Diễn (Hà Nội) [3], [4]

1.3 Bộ phận dùng, trồng trọt -thu hái

Hầu hết các bộ phận của cây bưởi (quả, hoa, lá) đều có nhiều ứng dụng trong thực phẩm,

y học Với cùi bưởi (phần trắng của vỏ bưởi) – chứa lượng lớn hoạt chất naringin Bưởi được nhân giống bằng hạt, ghép mắt và chiết cành Ở Đông Nam Á và Việt Nam chủ yếu

là phương pháp chiết cành [4]

II TÍNH CHẤT CỦA NARINGIN

2.1 Công thức hoá học của Naringin

 Tên khoa học:

7-((2-O-(6-Deoxy-α-L-mannopyranosyl)-β-D- glucopyranosyl)oxy)-2,3-dihydro-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-on

 Công thức phân tử: C27H32O14

 Phân tử gam: 580,54 g/mol

2.2 Tính chất vật lý của Naringin

 Bột kết tinh không màu hoặc hơi vàng, không mùi, vị rất đắng Nhiệt độ nóng chảy: 171℃ [7], [8], [9]

 Độ tan: Naringin không tan trong ether, benzen, cloroform Tan tốt trong các dung môi phân cực như ethanol, ethylacetat, aceton, nước nóng, nhưng chỉ tan rất ít trong nước lạnh (1/2000 ở nhiệt độ 20 ℃) [6], [8], [10]

2.3 Tính chất hóa học của Naringin

 Tính acid yếu: Trong dung dịch kiềm loãng, naringin tạo muối phenolat tan trong

nước

 Phản ứng cyanidin: Phản ứng khử nhóm carbonyl của nhân ɣ-pyron tạo anthocyan có

màu

 Phản ứng với muối diazo: Phản ứng của hydro linh động với muối diazo tạo sản phẩm

azoic màu đỏ

 Phản ứng tạo phức: Phản ứng tạo phức chelat với muối kim loại nặng của nhóm

carbonyl ở C4 và hydroxy ở C5

 Dễ bị oxy hóa: dễ bị oxy hóa bởi các tác nhân khử do có chứa 2 nhóm

– OH gắn với nhân thơm [1]

2.4 Tác dụng dược lý của Naringin

 Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng naringin có tác dụng làm giảm cholesterol, làm giảm LDL oxidation và có thể giúp ngăn ngừa tăng cholesterol máu, làm giảm nguy cơ xơ vữa động mạch

 Chống oxy hóa, chống ung thư ác tính

 Ức chế virus Sindbis neurovirulent

 Được sử dụng trong điều trị các tổn thương dạ dày

 Giảm độc tế bào

 Tăng cường quá trình trao đổi chất ethanol, giảm tác động tiêu cực của ethanol, tăng cường chuyển hóa lipid

 Là một chất ức chế aldose reductase có nghĩa là nó có thể giúp chống bệnh võng mạc liên quan đến bệnh nhân tiểu đường

 Naringin có thể gây trở ngại cho một số loại thuốc như thuốc chẹn kênh canxi, thuốc

an thần, thuốc làm giảm cholesterol và estrogen [9], [12], [13]

III QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ VỎ BƯỞI VÀ NHẬN XÉT

3.1 Nghiên cứu Paul L David trong Florida State horticultural society năm 1966 [11]

So sánh phương pháp chiết naringin bằng Shoxlet với phương pháp chiết của Kesterson-Hendrickson

3.1.1 Nguyên liệu

Cùi Bưởi xấy khô và nghiền nhỏ

3.1.2 Cách tiến hành

Chiết Shoxlet

Chiết 40 g bột cùi Bưởi với 50 ml ethanol Sau 3 giờ, gạn lấy dịch chiết

Phương pháp chiết của Kesterson-Hendrickson

Chiết bột cùi Bưởi lần thứ nhất với cồn bằng phương pháp ngâm lạnh trong 16 giờ thu dịch chiết cồn

Phần cùi Bưởi còn lại tiếp tục ngâm với nước cho thêm Calcium oxid trong 2 giờ lọc lấy dịch chiết nước kiềm

Phần cùi Bưởi tiếp tục được chiết lần thứ 3 bằng cách ngâmvới nước nóng ở 95 o

C trong

2 giờ, lọc lấy dịch chiết nước

3.1.3 Kết quả chiết xuất

Phương

pháp chiết

Phần trăm naringin chiết được so với khối lượng dược liệu tươi

(%)

Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 4 Lần 5 Lần 6 Lần 7 Chiết

Shoxlet 0,93 0,92 0,89 1,05 0,87 0,88 0,90

Kesterson-Hendrickson 0.88 0,90 0,89 1,00 0,83 0,82 0,84

3.1.4 Nhận xét

Phân tích riêng các chất chiết được từ mỗi bước trong quy trình chiết của Kesterson-Hendrickson cho thấy khoảng 72% naringin được chiết xuất trong lần chiết đầu tiên (dung môi cồn); 18% trong lần thứ hai (nước canxi oxit); và 10% trong lần thứ ba (nước nóng)

Khi chiết xuất từ hai quy trình so sánh hàm lượng naringin gần như tương đương nhau Tuy nhiên chiết bằng Shoxlet có thời gian ngắn và thao tác đơn giản hơn

3.2 Nghiên cứu của Nguyễn Cẩm Vân, tạp chí Dược học quân sự năm 2015 [5]

khảo sát chiết xuất naringin từ cùi Bưởi bằng 3phương pháp: chiết shoxlet, chiết ngấm kiệt và chiết siêu âm gia nhiệt

3.2.1 Nguyên liệu

Cùi Bưởi được thu mua tại khu vực ngoại thành Hà Nội, mẫu tại Khoa Dược liệu, Trung

tâm Đào tạo Nghiên cứu Dược, Học viện Quân y

Chiết siêu âm

50 g bột cùi Bưởi được chiết với 200 ml ethanol 96o ở nhiệt độ 75 oC Sau 1 giờ, gạn lấy dịch chiết Chiết tiếp tục bã dược liệu với ethanol (200 ml x 2 lần)

Chiết Shoxlet

Chiết 50 g bột cùi Bưởi với 200 ml ethanol 96o Sau 6 giờ, gạn lấy dịch chiết

Chiết ngấm kiệt

Cho 50 g bột cùi Bưởi vào bình ngấm kiệt, thêm ethanol 96o tới ngập dược liệu 2 - 3 cm Sau 24 giờ, rút từ từ dịch chiết, đồng thời bổ sung dung môi vào bình ngấm kiệt Tiến hành chiết tới khi thu được 300 ml dịch chiết

Dịch chiết ethanol được cô chân không ở nhiệt độ 50 oC tới cao 1/1

3.2.3 Kết quả chiết xuất

3.2.4 Nhận xét

Phương pháp ngấm kiệt cho hiệu suất chiết 38,38%, thấp hơn nhiều so với phương pháp chiết siêu âm và chiết Shoxlet Do đó, phương pháp này không được lựa chọn cho nghiên cứu tiếp theo Tuy nhiên, tạp chất của phương pháp ngấm kiệt ít hơn so với phương pháp chiết siêu âm và chiết Shoxlet, do không bị tác động bởi nhiệt độ (tác nhân làm tạp tan nhiều trong dung môi chiết xuất) Vì vậy, trong một số nghiên cứu vẫn

có thể sử dụng phương pháp này Hiệu suất chiết của phương pháp chiết siêu âm và phương pháp chiết Shoxlet tương đương nhau (43,90 ± 1,1% và 44,53 ± 2,9%) (p > 0,1) Tuy nhiên, so với phương pháp chiết siêu âm, phương pháp chiết Shoxlet có thời gian chiết dài, việc khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết xuất khó thực hiện hơn Hơn nữa, phương pháp chiết Shoxlet chỉ có thể triển khai ở quy mô nhỏ trong

phòng thí nghiệm, khó có khả năng triển khai ở quy mô công nghiệp Vì vậy,

phương pháp chiết siêu âm được lựa chọn để tiếp tục nghiên cứu

TÀI LIỆU THAM KHẢO

TIẾNG VIỆT

1 Bộ môn công nghiệp dược (2016), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, trường Đại học

Dược Hà Nội, Hà Nội

2 Bộ Y Tế (2007), Dược liệu học tập 1, , Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr.353-383

3 Bộ Y Tế (2007), Thực vật học, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr.224-284

4 Bộ Y Tế (2007), Dược liệu học tập 2, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr.198-200

5 Nguyễn Cẩm Vân (2015), Nghiên cứu chiết xuất naringin bằng dung môi ethanol từ

cùi bưởi (Citrus maxima), tạp chí Dược học quân sự, số 1, tr 19-25

TIẾNG ANH

6 Almeida Verônica M, Branco Carla RC, et al (2012), "Synthesis of naringin

6"-ricinoleate using immobilized lipase", Chemistry Central Journal, 6(1), pp 41

7 Benavente-García Obdulio, Castillo Julian, et al (1997), "Uses and properties of

citrus flavonoids", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 45(12), pp 4505-4515

8 GIANNUZZO Amelia N, NAZARENO Mónica A, et al (2000), "Extracción de naringina de Citrus paradisi L estudio comparativo y optimización de técnicas

extractivas", Sociedade Brasileira de Ciência e Tecnologia de Alimentos

9 Kim Hye-Jin, Oh Goo Taeg, et al (2004), "Naringin alters the cholesterol biosynthesis and antioxidant enzyme activities in LDL receptor-knockout mice under

cholesterol fed condition", Life sciences, 74(13), pp 1621-1634

10 Linke Harald AB, Eveleigh Douglas E (1975), "Dihydrochalcones and Chalcones of

Some Flavanone Glycosides: Qualitativeand Quantitative Determinations", Zeitschrift für

Naturforschung B, 30(11-12), pp 940- 942

11 Paul L David (1966), A rapid procedure for extraction of naringin from Grapefruit rind, Florida State horticultural society, pp 325-326

12 Rajadurai M, Prince Mainzen, et al (2006), "Preventive effect of naringin on lipids, lipoproteins and lipid metabolic enzymes in isoproterenol‐induced myocardial infarction in

wistar rats", Journal of biochemical and Molecular Toxicology, 20(4), pp 191-197

13 Rajadurai M, Stanely Mainzen Prince P (2007), "Preventive effect of naringin on cardiac mitochondrial enzymes during isoproterenol‐ induced myocardial infarction in rats: A transmission electron microscopic study", Journal of biochemical and molecular toxicology, 21(6), pp 354-361