Nghiên cứu chiết xuất naringin từ cùi bưởi ( citrus grandis l)

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRỊNH QUỐC TUẤN Mã sinh viên: 1201674 NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ CÙI BƢỞI (Citrus grandis L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2017 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRỊNH QUỐC TUẤN Mã sinh viên: 1201674 NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT NARINGIN TỪ CÙI BƢỞI (Citrus grandis L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Văn Hân Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp dƣợc HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn trân trọng sâu sắc tới TS Nguyễn Văn Hân, tổ Chiết xuất- môn Công nghiệp dược- Trường đại học Dược Hà Nội tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn DS Trần Trọng Biên tập thể cán bộ, giảng viên môn Công nghiệp dược Trường đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện giúp em hoàn thành đề tài Trong trình học tập, triền khai làm đề tài đạt hôm nay, em xin cảm ơn công lao giảng dạy hướng dẫn thầy cô giáo trường đại học Dược Hà Nội Và em cũng xin cảm ơn gia đình, bạn bè, anh chị người bên em, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập, nghiên cứu, hoàn thành đề tài Trường đại học Dược Hà Nội Dù có nhiều cố gắng, song đề tài có thiếu sót Kính mong nhận chia sẻ nhận ý kiến đóng góp quý báu thầy cô giáo Em xin trân trọng cảm ơn Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Trịnh Quốc Tuấn MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Vài nét Bưởi 1.1.1 Tên gọi, vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Bộ phận dùng, trồng trọt -thu hái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Công dụng 1.2 Đại cương hoạt chất naringin 1.2.1 Công thức, tên khoa học 1.2.2 Tính chất vật lý 1.2.3 Tính chất hóa học 1.2.4 Tác dụng dược lý 1.3 Một số nghiên cứu chiết xuất naringin CHƢƠNG II NGUYÊN VẬT LIỆU, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.2 Hóa chất, thiết bị 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp xác định hàm ẩm 2.3.2 Phương pháp định tính naringin nguyên liệu cùi bưởi 2.3.3 Phương pháp định lượng naringin 10 2.3.4 Phương pháp chiết xuất 13 2.3.5.Xác định cấu trúc sản phẩm 13 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 14 3.1 Kết xây dựng đường chuẩn biểu thị mối liên hệ mật độ quang nồng độ naringin 14 3.2 Kết định tính định lượng citroflavonoid nguyên liệu 15 3.2.1 Kết định tính citroflavoid nguyên liệu 15 3.2.2 Kết định lượng citroflavonoid nguyên liệu 16 3.3 Kết nghiên cứu chiết xuất citroflavonoid từ cùi bưởi 17 3.3.1 Lựa chọn dung môi chiết xuất 17 3.3.2.Lựa chọn phương pháp chiết xuất 18 3.3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng tới quy trình chiết xuất 19 3.4 Quy trình chiết xuất tinh chế naringin từ cùi bưởi 24 3.5.1 Tiến hành chiết xuất 24 3.5.2 Tinh chế naringin từ sản phẩm chiết xuất 25 3.5 Xác định cấu trúc sản phẩm 26 CHƢƠNG IV: BÀN LUẬN……………………………………………… 30 CHƢƠNG V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………… 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………33 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ DĐVN IV Dược Điển Việt Nam IV EtOH 96% Ethanol 96% IR Phổ hồng ngoại (Infra-red) LDL Lipoprotein tỷ trọng thấp NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân STT Số thứ tự UV-VIS Phổ tử ngoại - khả kiến (Ultraviolet Visible) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh mục hóa chất sử dụng Bảng 3.1 Mối liên quan mật độ quang nồng độ naringin (µg/ml) 14 Bảng 3.2 Kết định lượng citroflavonoid nguyên liệu cùi bưởi 16 Bảng 3.3 Kết ảnh hưởng dung môi chiết xuất 17 Bảng 3.4 Kết ảnh hưởng phương pháp chiết xuất 18 Bảng 3.5 Kết ảnh hưởng thể tích dung môi ngâm nguyên liệu 20 Bảng 3.6 Kết ảnh hưởng thời gian ngâm nguyên liệu 21 Bảng 3.7 Kết ảnh hưởng số lần ngâm nguyên liệu 23 Bảng 3.8 Kết ảnh hưởng pH tới trình kết tinh sản phẩm 24 Bảng 3.9 Phổ 1H-NMR 28 Bảng 3.10 Phổ 13C-NMR 29 DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Công thức naringin Hình 3.1 Phổ UV-VIS naringin chuẩn nồng độ 11,71 µg/ml 14 ethanol 96% Hình 3.2 Đường chuẩn biếu thị mối liên quan mật độ quang 15 nồng độ naringin Hình 3.3 Kết định tính hóa học nguyên liệu 15 Hình 3.4 Sắc ký đồ dịch chiết nguyên liệu 16 Hình 3.5 Ảnh hưởng thời gian ngâm tới khối lượng sản phẩm 21 hiệu suất chiết Hình 3.6 Sản phẩm chiết naringin từ cùi bưởi 26 Hình 3.7 Sắc ký đồ sản phẩm 26 Hình 3.8 Phổ UV-VIS naringin sản phẩm nồng độ 12 µg/ml 27 ethanol 96% Hình 3.9 Cấu tạo naringin 27 Sơ đồ 3.1 Sơ đồ quy trình chiết naringin từ cùi bưởi aceton 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn công nghiệp dược (2016), kỹ thuật chiết xuất dược liệu, trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Bộ Y Tế (2007), dược liệu học tập 1, tr.353-383, Nhà xuất Y học, Hà Nội, Bộ Y Tế (2007), thực vật học, tr.224-284, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y Tế(2007), dược liệu học tập 2, tr.198-200, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Thị Chung (1990), Nghiên cứu chiết xuất dạng bào chế Flavonoid từ vỏ số loài Citrus Việt Nam, trường đại học Dược Hà Nội, Thư viện quốc gia Việt Nam, Hà Nội Phạm Thị Hảo (2010), Nghiên cứu chiết xuất phân lập số Flavonoid từ vỏ số loài Citrus, trường đại học Dược Hà Nội, Bộ Y Tế Võ Văn Lẹo, Lê Thị Minh Châu, Ngô Văn Thu, Trần Hùng (2001), "Khảo sát flavonoid từ vỏ bưởi citrus grandis L.", in tạp chí dược học (2), khoa Dược, Trường đại học y dược thành phố Hồ Chí Minh, Bộ Y Tế Đinh Phương Liên (2012), Nghiên cứu chiết xuất citroflavonoid đánh giá tác dụng sinh học chế phẩm chiết xuất, trường đại học Dược Hà Nội, Bộ Y Tế Nguyễn Cẩm Vân, Nguyễn Minh Chính, Đào Văn Đôn, Nguyễn Tuấn Quang, Nguyễn Quỳnh Ngọc, Nguyễn Văn Thuận (2014)," Nghiên cứu chiết xuất naringin dung môi ethanol từ cùi bưởi", tạp chí Y Dược học quân 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG NƢỚC NGOÀI 10 Almeida Verônica M, Branco Carla RC, et al (2012), "Synthesis of naringin 6"-ricinoleate using immobilized lipase", Chemistry Central Journal, 6(1), pp 41 11 Benavente-García Obdulio, Castillo Julian, et al (1997), "Uses and properties of citrus flavonoids", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 45(12), pp 4505-4515 12 Crandall PG, Kesterson JW (1976), "Recovery of naringin and pectin from grapefruit albedo", Proc Fla State Hort Soc,pp 189-191 13 El-Nawawi SA (1995), "Extraction of citrus glucosides", Carbohydrate polymers, 27(1), pp 1-4 14 GIANNUZZO Amelia N, NAZARENO Mónica A, et al (2000), "Extracción de naringina de Citrus paradisi L estudio comparativo y optimización de técnicas extractivas", Sociedade Brasileira de Ciência e Tecnologia de Alimentos 15 Kim Hye-Jin, Oh Goo Taeg, et al (2004), "Naringin alters the cholesterol biosynthesis and antioxidant enzyme activities in LDL receptor-knockout mice under cholesterol fed condition", Life sciences, 74(13), pp 1621-1634 16 Linke Harald AB, Eveleigh Douglas E (1975), "Dihydrochalcones and Chalcones of Some Flavanone Glycosides: Qualitativeand Quantitative Determinations", Zeitschrift für Naturforschung B, 30(11-12), pp 940942 34 17 Negi P, Jayaprakasha G (2001), "Antibacterial activity of grapefruit (Citrus paradisi) peel extracts", European Food Research and Technology, 213(6), pp 484-487 18 Poore HD (1934), "Recovery of naringin and rectin from grapefruit residue", Industrial & Engineering Chemistry, 26(6), pp 637-639 19 Pulley George N (1936), "Solubility of naringin in water", Industrial & Engineering Chemistry Analytical Edition, 8(5), pp 360-360 20 Rajadurai M, Prince Mainzen, et al (2006), "Preventive effect of naringin on lipids, lipoproteins and lipid metabolic enzymes in isoproterenol‐induced myocardial infarction in wistar rats", Journal of biochemical and Molecular Toxicology, 20(4), pp 191-197 21 Rajadurai M, Stanely Mainzen Prince P (2007), "Preventive effect of naringin on cardiac mitochondrial enzymes during isoproterenol‐ induced myocardial infarction in rats: A transmission electron microscopic study", Journal of biochemical and molecular toxicology, 21(6), pp 354-361 22 Seshadri TR, Veeraraghaviah J (1940), "Chemical investigation of Indian fruits", Proceedings Mathematical Sciences, 11(6), pp 505-511 23 Sudto Kanokorn, Pornpakakul Surachai, et al (2009), "An efficient method for the large scale isolation of naringin from pomelo (Citrus grandis) peel", International journal of food science & technology, 44(9), pp 1737-1742 24 Zhang Jiye, Zhang Peipei, et al (2015), "Solubility of naringin in ethanol and water mixtures from 283.15 to 318.15 K", Journal of Molecular Liquids, 203, pp 98-103 35 PHỤ LỤC PHỔ IR PHỔ 1H- NMR PHỔ 13C- NMR 1.Phổ IR 36 2.Phổ 1H NMR 37 38 39 40 41 3.Phổ 13C-NMR 42 43 44 45 46 47 ... naringin Để cung cấp naringin nguyên liệu đầu vào cho trình sản xuất thuốc đó, tiến hành đề tài “ Nghiên cứu chiết xuất naringin từ cùi bưởi (Citrus grandis L.)” với mục tiêu: 1- Chiết xuất naringin. .. hưởng tới quy trình chiết xuất 19 3.4 Quy trình chiết xuất tinh chế naringin từ cùi bưởi 24 3.5.1 Tiến hành chiết xuất 24 3.5.2 Tinh chế naringin từ sản phẩm chiết xuất 25 3.5... trình chiết xuất citroflavoid từ cùi bưởi: dung môi chiết xuất, phương pháp chiết xuất, thể tích dung môi chiết, thời gian chiết, số lần chiết, pH dung dịch kết tinh  Xây dựng quy trình chiết naringin