THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI ĐỊNH LƯỢNG ALCALOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP ACIDBASE

ĐẠI HỌC DUY TÂN KHOA DƯỢC Bộ Môn Thực Vật Dược – Dược Liệu – Dược Cổ Truyền BÀI ĐỊNH LƯỢNG ALCALOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP ACID-BASE Môn: Dược liệu (MCC 401) Giảng viên: Nguyễn Thị Thúy An Mail: nguyentthuyan16@dtu.edu.vn MỤC TIÊU Sau thực hành, sinh viên phải: - Định lượng alcaloid toàn phần Canh ki na phương pháp acid base - Định lượng strychnin Mã tiền phương pháp acid base - Định lượng alcaloid từ dược liệu cụ thể phương pháp acid base theo quy trình cho NỘI DUNG 1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT DƯỢC LIỆU CÁCH TIẾN HÀNH NỘI DUNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT Dựa vào tính kiềm alcaloid, xác định hàm lượng alcaloid dung dịch phương pháp chuẩn độ acid-base Tùy theo chất alcaloid điều kiện tiến hành, áp dụng phương pháp sau: - Định lượng gián tiếp (chuẩn độ thừa trừ, chuẩn độ ngược) - Định lượng trực tiếp - Định lượng môi trường khan CƠ SỞ LÝ THUYẾT Khi định lượng môi trường nước, thường chuẩn độ dung dịch HCl, H2SO4 NaOH (nồng độ từ 0,01 - 0,1N) Chỉ thị màu thường dùng methyl đỏ Chỉ thị màu methyl đỏ CƠ SỞ LÝ THUYẾT Methyl da cam (helianthin, pH 3,1-4,4) dùng Chỉ thị màu methyl da cam Acid Trung tính Kiềm DƯỢC LIỆU Mã tiền Canh ki na CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Cân xác khoảng 5g bột hạt Mã tiền vào erlen 250ml Kiềm hóa NH4OH đậm đặc, đậy kín, để yên 15 phút thêm 50ml hỗn hợp ether-cloroform (3:1), lắc 15 phút để yên (thỉnh thoảng lắc đều) Erlen 250 ml CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Gạn/lọc dịch chiết vào bình lắng gạn có chứa sẵn 25ml H2SO4 2% Bã dược liệu lắc tiếp với ether-cloroform (3:1) (3 lần x 20ml) dịch chiết khơng cịn phản ứng alcaloid Bình gạn CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Gộp chung dịch chiết ether - cloroform vào bình lắng gạn, lắc tách lấy lớp acid Chiết tiếp phần alcaloid base hỗn hợp ether – cloroform H2SO4 5% (10, 10, 10ml…) dịch chiết khơng cịn phản ứng alcaloid 10 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Gộp dịch chiết acid vào bình lắng gạn, kiềm hóa NH4OH đậm đặc đến pH 10 Chiết alcaloid base CHCl3 (20, 10, 10ml) hết alcaloid Gộp dịch chiết CHCl3 vào becher bay dung môi bếp cách thủy (trong tủ hốt!) cắn Becher 11 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Hòa tan cắn hỗn hợp 10ml H2SO4 5% 2ml HNO3 50% Thêm vào dung dịch vài tinh thể NaNO2, để yên khoảng 20 phút tủ hốt chuyển vào bình lắng gạn có chứa sẵn 20ml NaOH 10% Tráng becher 5ml nước cất cho chung vào bình lắng gạn Tinh thể NaNO2 12 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Lắc bình lắng gạn chiết strychnin CHCl3 (10, 10, 5ml…) dịch CHCl3 khơng cịn phản ứng alcaloid  Gộp dịch CHCl3 vào bình lắng gạn Rửa lớp CHCl3 5ml NaOH 10%, rửa lớp clorofom nước cất (5ml x n lần) trung tính Cho dịch CHCl3 rửa vào becher 100ml làm khan khoảng 1g bột Na2SO4 khan lọc vào erlen 100ml Rửa lớp Na2SO4 CHCl3 (3ml x lần) gộp dịch rửa vào dịch CHCl3 lọc 13 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền Na2SO4 khan 14 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền  Bay dung môi cắn bếp cách thủy (trong tủ hốt!)  Hịa tan cắn 10ml (chính xác) H2SO4 0,1N thêm giọt methyl đỏ Định lượng H2SO4 thừa dung dịch NaOH 0,1N  1ml dung dịch H2SO4 0,1N tương đương với 0,0334g strychnin (C21H22N2O2 = 334)  Hệ số hiệu chỉnh lượng strychnin hao hụt phép định lượng k = 1,02 15 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng alcaloid vỏ Canh ki na  Cân xác khoảng 2g bột vỏ Canh ki na cho vào erlen 250ml, làm ẩm với lượng vừa đủ NaOH 10% 15 phút Thêm vào erlen 40ml hỗn hợp ether-cloroform (2:1) lắc 30 phút, lọc qua Chiết tiếp với lần 20ml dung môi dịch chiết không phản ứng alcaloid 16 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng alcaloid vỏ Canh ki na  Gộp dịch chiết vào bình lắng gạn 250 ml, lắc với acid sulfuric 5% (20, 10, 10ml…) dịch acid âm tính với thuốc thử Valse-Mayer  Gộp chung dịch chiết vào bình lắng gạn 250ml, kiềm hóa NaOH 10% đến pH 10 Chiết alcaloid base cloroform (20, 10, 10ml…) hết alcaloid  Gộp dịch cloroform vào bình lắng gạn, rửa với nước cất (3 lần x 5ml); lấy lớp cloroform cho vào erlen 250ml miệng rộng bốc cách thủy (trong tủ 17 hốt!) hết cloroform CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng alcaloid vỏ Canh ki na  Hòa tan cắn erlen với 15ml cồn 96% trung tính cách đun nhẹ bếp cách thủy Pha loãng với 15ml nước cất, thêm giọt methyl đỏ (CT) giọt dung dịch methylen xanh 0,15% Định lượng alcaloid toàn phần dung dịch dung dịch HCl o,1N có màu tím tro  1ml dung dịch HCl 0,1N tương ứng 0,03094g alcaloid tồn phần tính theo hỗn hợp đồng phân tử quinin (C20H24N2O2 = 324,4) cinchonin (C19H22N2O2 = 294,4) 18 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng alcaloid vỏ Canh ki na  Hàm lượng % alcaloid toàn phần dược liệu (A) biểu thị hỗn hợp đồng phân tử quinin cinchonin tính theo công thức: n: số ml dung dịch HCl 0,1N dùng cho mẫu thử a: khối lượng dược liệu đem định lượng (g) h: độ ẩm mẫu định lượng 19 CÂU HỎI THẢO LUẬN Trong quy trình định lượng strychnin hạt Mã tiền, phải sử dụng ether – cloroform để chiết? Nếu sử dụng cloroform có khơng? Vì sao? 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Thanh Kỳ (2011) Dược liệu học tập II Thành phố Hà Nội, Việt Nam: Nhà xuất Y học Khoa Dược Duy Tân (2018) Bài giảng thực hành Dược liệu Đà Nẵng, Việt Nam: Trường Đại học Duy Tân 21 22 ... strychnin CHCl3 (10, 10, 5ml…) dịch CHCl3 không phản ứng alcaloid  Gộp dịch CHCl3 vào bình lắng gạn Rửa lớp CHCl3 5ml NaOH 10%, rửa lớp clorofom nước cất (5ml x n lần) trung tính Cho dịch CHCl3 rửa... làm khan khoảng 1g bột Na2SO4 khan lọc vào erlen 100ml Rửa lớp Na2SO4 CHCl3 (3ml x lần) gộp dịch rửa vào dịch CHCl3 lọc 13 CÁCH TIẾN HÀNH Định lượng strychnin hạt Mã tiền Na2SO4 khan 14 CÁCH TIẾN... lượng H2SO4 thừa dung dịch NaOH 0,1N  1ml dung dịch H2SO4 0,1N tương đương với 0, 033 4g strychnin (C21H22N2O2 = 33 4)  Hệ số hiệu chỉnh lượng strychnin hao hụt phép định lượng k = 1,02 15 CÁCH TIẾN