BÀI ĐỊNH LƯỢNG ALKALOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP ACID-BASE Mục tiêu Sau thực hành, sinh viên phải: - Định lượng alkaloid toàn phần Canh ki na phương pháp acid base - Định lượng strychnin Mã tiền phương pháp acid base - Định lượng alkaloid từ dược liệu cụ thể phương pháp acid base theo quy trình cho I CƠ SỞ LÝ THUYẾT Dựa vào tính kềm alkaloid, xác định hàm lượng alkaloid dung dịch phương pháp chuẩn độ acid-base Tùy theo chất alkaloid điều kiện tiến hành, áp dụng phương pháp sau: - Định lượng gián tiếp (chuẩn độ thừa trừ, chuẩn độ ngược): dùng cho đa số alkaloid - Định lượng trực tiếp: áp dụng cho alkaloid có tính kiềm mạnh Trong trường hợp này, hỗn hợp cồn nước thường dùng làm dung môi - Định lượng môi trường khan (hay dùng acid acetic băng): thường áp dụng cho alkaloid có tính kiềm yếu Alkaloid thường chuẩn độ acid percloric môi trường acid acetic băng, với thị tím tinh thể Khi định lượng mơi trường nước, thường chuẩn độ dung dịch HCl, H 2SO4 NaOH (nồng độ từ 0,01 - 0,1N) Chỉ thị màu thường dùng methyl đỏ (vì hầu hết muối alkaloid có pH phân ly vùng chuyển màu thị này, pH 4,2-6,3) Methyl da cam (helianthin, pH 3,1-4,4) dùng Cũng dùng hỗn hợp thị để dễ quan sát vùng chuyển màu (ví dụ: dùng methyl đỏ + methylen xanh làm thị định lượng alkaloid vỏ Canh ki na) II THỰC HÀNH Dược liệu - Mã tiền - Canh ki na Định lượng strychnin hạt Mã tiền Cân xác khoảng 5g bột hạt Mã tiền vào erlen 250ml Kiềm hóa lượng vừa đủ NH4OH đậm đặc, đậy kín, để yên 15 phút thêm 50ml hỗn hợp ether-cloroform (3:1), lắc 15 phút để yên (thỉnh thoảng lắc đều) Gạn/lọc dịch chiết vào bình lắng gạn có chứa sẵn 25ml H2SO4 2% Bã dược liệu lắc tiếp với ether-cloroform (3:1) (3 lần x 20ml) dịch chiết khơng cịn phản ứng alkaloid Gộp chung dịch chiết ether - cloroform vào bình lắng gạn, lắc tách lấy lớp acid Chiết tiếp phần alkaloid base hỗn hợp ether – cloroform H2SO4 5% (10, 10, 10ml…) dịch chiết khơng cịn phản ứng alkaloid Gộp dịch chiết acid vào bình lắng gạn, kiềm hóa NH4OH đậm đặc đến pH 10 Chiết alkaloid base CHCl3 (20, 10, 10ml) hết alkaloid Gộp dịch chiết CHCl3 vào becher bay dung môi bếp cách thủy (trong tủ hốt!) cắn Hòa tan cắn hỗn hợp 10ml H2SO4 5% 2ml HNO3 50% Thêm vào dung dịch vài tinh thể NaNO2, để yên khoảng 20 phút tủ hốt chuyển vào bình lắng gạn có chứa sẵn 20ml NaOH 10% Tráng becher 5ml nước cất cho chung vào bình lắng gạn Lắc bình lắng gạn chiết strychnin CHCl3 (10, 10, 5ml…) dịch CHCl3 khơng cịn phản ứng alkaloid Gộp dịch CHCl3 vào bình lắng gạn Rửa lớp CHCl3 5ml NaOH 10%, rửa lớp clorofom nước cất (5ml x n lần) trung tính Cho dịch CHCl3 rửa vào becher 100ml làm khan khoảng 1g bột Na2SO4 khan lọc vào erlen 100ml Rửa lớp Na2SO4 CHCl3 (3ml x lần) gộp dịch rửa vào dịch CHCl3 lọc Bay dung môi cắn bếp cách thủy (trong tủ hốt!) Hòa tan cắn 10ml (chính xác) H2SO4 0,1N thêm giọt methyl đỏ Định lượng H2SO4 thừa dung dịch NaOH 0,1N 1ml dung dịch H2SO4 0,1N tương đương với 0,0334g strychnin (C21H22N2O2 = 334) Hệ số hiệu chỉnh lượng strychnin hao hụt phép định lượng k = 1,02 Định lượng alkaloid vỏ Canh ki na Cân xác khoảng 2g bột vỏ Canh ki na cho vào erlen 250ml, làm ẩm với lượng vừa đủ NaOH 10% 15 phút Thêm vào erlen 40ml hỗn hợp ether-cloroform (2:1) lắc 30 phút, lọc qua Chiết tiếp với lần 20ml dung mơi dịch chiết khơng cịn phản ứng alkaloid Gộp chung dịch chiết vào bình lắng gạn 250ml, lắc với dung dịch acid sulfuric 5% (20, 10, 10 ml…) dịch acid âm tính với thuốc thử Valse-Mayer Gộp dịch chiết acid vào bình lắng gạn 250ml, kiềm hóa NaOH 10% đến pH 10 Chiết alkaloid base cloroform (20, 10, 10ml…) hết alkaloid Gộp dịch cloroform vào bình lắng gạn, rửa với nước cất (3 lần x 5ml); lấy lớp cloroform cho vào erlen 250ml miệng rộng bốc cách thủy (trong tủ hốt!) hết cloroform Hòa tan cắn erlen với 15ml cồn 96% trung tính cách đun nhẹ bếp cách thủy Pha loãng với 15ml nước cất, thêm giọt methyl đỏ (CT) giọt dung dịch methylen xanh 0,15% Định lượng alkaloid toàn phần dung dịch dung dịch HCl o,1N có màu tím tro 1ml dung dịch HCl 0,1N tương ứng 0,03094g alkaloid tồn phần tính theo hỗn hợp đồng phân tử quinin (C20H24N2O2 = 324,4) cinchonin (C19H22N2O2 = 294,4) Hàm lượng % alkaloid toàn phần dược liệu (A) biểu thị hỗn hợp đồng phân tử quinin cinchonin tính theo cơng thức: n: số ml dung dịch HCl 0,1N dùng cho mẫu thử a: khối lượng dược liệu đem định lượng (g) h: độ ẩm mẫu định lượng ... strychnin CHCl3 (10, 10, 5ml…) dịch CHCl3 khơng cịn phản ứng alkaloid Gộp dịch CHCl3 vào bình lắng gạn Rửa lớp CHCl3 5ml NaOH 10%, rửa lớp clorofom nước cất (5ml x n lần) trung tính Cho dịch CHCl3 rửa... lượng H2SO4 thừa dung dịch NaOH 0,1N 1ml dung dịch H2SO4 0,1N tương đương với 0, 033 4g strychnin (C21H22N2O2 = 33 4) Hệ số hiệu chỉnh lượng strychnin hao hụt phép định lượng k = 1,02 Định lượng... ether-cloroform (3: 1), lắc 15 phút để yên (thỉnh thoảng lắc đều) Gạn/lọc dịch chiết vào bình lắng gạn có chứa sẵn 25ml H2SO4 2% Bã dược liệu lắc tiếp với ether-cloroform (3: 1) (3 lần x 20ml) dịch