THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CÓ ALKALOID

ĐẠI HỌC DUY TÂN – KHOA DƯỢC Môn: Dược liệu (MCC 401) Giảng viên: Nguyễn Thị Thúy An Mail: nguyentthuyan16@dtu.edu.vn BỘ MÔN: THỰC VẬT DƯỢC - DƯỢC LIỆU - DƯỢC CỔ TRUYỀN MỤC TIÊU Sau thực hành, sinh viên phải: - Trình bày nội dung cần thực để kiểm nghiệm dược liệu chứa alcaloid - Kiểm nghiệm dược liệu : Mã tiền, Cà độc dược, Trà NỘI DUNG I CƠ SỞ LÝ THUYẾT II THỰC HÀNH Kiểm nghiệm hạt Mã tiền Kiểm nghiệm Cà độc dược Kiểm nghiệm Trà I CƠ SỞ LÝ THUYẾT  PP1: Chiết dung môi hữu môi trường kiềm Bột dược liệu (5g) - Kiềm hóa NH4OH đậm đặc (vừa đủ ẩm) - Chiết nóng 20-30ml CHCl3 (Đun nóng nhẹ/Bếp cách thủy 10 phút, lọc chiết Sohxlet) Dịch chiết CHCl3 H2SO4 2% (5ml x lần) Dịch chiết nước acid Định tính thuốc thử chung Định tính thuốc thử đặc hiệu NH4OH đậm đặc → pH 10 Chiết CHCl3 (10ml x 2-3 lần) Dịch chiết CHCl3 Định tính phương pháp sắc ký Bốc tới cắn khô Cắn alcaloid base Định tính thuốc thử đặc hiệu I CƠ SỞ LÝ THUYẾT  Phương pháp 2: Chiết nước acid Bột dược liệu (5g) Làm ẩm bột dược liệu 10 phút 20ml dung dịch H2SO4 2% Đun BM 15 phút, lọc (2 lần x 20ml) Dịch chiết nước acid NH4OH đậm đặc → pH 10 CHCl310ml x lần Dịch chiết CHCl3 Định tính phương pháp sắc ký Định tính thuốc thử đặc hiệu H2SO4 2% (5ml x lần) Dịch chiết nước acid Định tính thuốc thử chung Định tính thuốc thử đặc hiệu I CƠ SỞ LÝ THUYẾT Phương pháp 3: Chiết cồn acid Bột dược liệu (5g) Làm ẩm bột dược liệu 10 phút 20-30ml cồn có 5% acid (sulfuric, hydrochlorid, acetic) Đun hồi lưu/BM 10 phút, lọc Dịch chiết cồn acid - Trung hòa đến pH 5-6 (nếu cần) - Bay cồn bếp cách thủy đến cắn - Hịa tan cắn nước nóng (10ml x lần), lọc Dịch chiết nước acid Định tính thuốc thử chung Định tính thuốc thử đặc hiệu NH4OH đậm đặc → pH 10 Chiết CHCl3 (10ml x 2-3 lần) Dịch chiết CHCl3 Định tính phương pháp sắc ký Định tính thuốc thử đặc hiệu Chiết với H2SO4 2% (5ml x lần) Dịch chiết nước acid Định tính thuốc thử chung Định tính thuốc thử đặc hiệu I CƠ SỞ LÝ THUYẾT • Trong kiểm định dược liệu chứa alcaloid mặt hóa học, ngồi việc sử dụng thuốc thử chung alcaloid để định tính, người ta cịn sử dụng phản ứng với thuốc thử đặc hiệu (phản ứng màu) để phát có mặt alcaloid nhóm alcaloid đặc trưng dược liệu • Thực cắn alcaloid (môi trường khan), dung mơi hữu hay dung dịch nước • Màu bền chuyển nhanh từ màu sang màu khác → quan sát màu cho thuốc thử II THỰC HÀNH Kiểm nghiệm hạt Mã tiền Bộ phận dùng hạt Mã tiền (Strychnos nux-vomica L., Loganiaceae) II THỰC HÀNH 1.1 Bột dược liệu Bột màu vàng xám nhạt, không mùi, vị đắng Quan sát kính hiển vi thấy: Lơng che chở dày, mượt II THỰC HÀNH 1.2 Định tính phản ứng đặc hiệu Chiết xuất: chiết 3g bột dược liệu theo phương pháp đến giai đoạn alcaloid base cloroform Cho dịch cloroform vào chén sứ, cách thủy tới cắn khơ Định tính Strychnin Định tính Brucin Cắn alcaloid base khan Cắn alcaloid base khan giọt H2SO4 đậm đặc Cắn alcaloid sulfat HNO3 đđặc Màu đỏ máu (phản ứng cacothelin) K2Cr2O7 tinh thể Kéo lê tím  hồng vàng  nâu đen (phản ứng sulfocromic) 10 II THỰC HÀNH Kiểm nghiệm Cà độc dược Bộ phận dùng hay hạt Cà độc dược (Datura metel L., Solanaceae) 11 II THỰC HÀNH 2.1 Bột dược liệu (lá Cà độc dược) Bột màu xanh lục hay lục nâu Quan sát kính hiển vi thấy: 12 II THỰC HÀNH 2.2 Định tính thuốc thử đặc hiệu Lấy 5g bột dược liệu, chiết theo phương pháp 1, thu dịch alcaloid base cloroform (đã qua giai đoạn nước acid) Làm khan dịch CHCl3 Na2SO4 khan Bốc dung dịch cloroform chén sứ cắn khô Phản ứng Vitali-Morin (Khung tropan) Alcaloid base khan + Vài giọt HNO3 đậm đặc, cô khô Alcaloid muối a Rửa bỏ HNO3 dư 0,5 ml aceton b Thêm 1-2 giọt KOH 5% /MeOH) Màu tím khơng bền 13 II THỰC HÀNH Kiểm nghiệm Trà Dược liệu Trà (Camellia sinensis (L.) O Kuntze = Thea chinensis L., Theaceae) 14 II THỰC HÀNH 3.1 Bột dược liệu Bột màu xanh lục hay lục nâu, mùi trà Quan sát kính hiển vi thấy: Lơng che chở đơn bào; Cương thể Mô mềm nhiều tinh thể Ca oxalat hỉnh cầu gai 15 II THỰC HÀNH 3.2 Định tính phản ứng đặc hiệu Chiết dược liệu phương pháp (chiết nước acid) đến giai đoạn dịch alcaloid base cloroform Dịch CHCl3 làm khan với tí Na2SO4 khan cho vào chén sứ nhỏ Bốc dịch CHCl3 bếp cách thủy đến cắn khô Phản ứng Murexid Cắn alcaloid base khan giọt HClđđ + giọt H2O2 Cô khô Cắn alcaloid muối khan Vài giọt NH4OHđđ Màu tím sim (cafein) 16 CÂU HỎI THẢO LUẬN Trong quy trình chiết alcaloid hạt Mã tiền khơng có bước làm khan với Na2SO4 quy trình chiết alcaloid Cà độc dược phải làm khan với Na2SO4 trước đem cô cắn? 17 XEM VIDEO Một vài thử nghiệm hóa học với alcaloid (alkaloid): https://www.youtube.com/watch?v=k_uSKIJ09UY&list =PLfoWhdLj0xtiHsMwOG760fw7dR_WpACCo&index=1 18 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Thanh Kỳ (2011) Dược liệu học tập II Thành phố Hà Nội, Việt Nam: Nhà xuất Y học Bộ môn Dược liệu - Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh (2016) Giáo trình thực tập Dược liệu Thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Bộ Y tế (2018) Dược điển Việt Nam V Thành phố Hà Nội, Việt Nam: Nhà xuất Y học Khoa Dược - Đại học Duy Tân (2019) Bài giảng thực hành Dược liệu Thành phố Đà Nẵng, Việt Nam: Đại học Duy Tân, lưu hành nội 19 20 ... pháp 2: Chiết nước acid Bột dược liệu (5g) Làm ẩm bột dược liệu 10 phút 20 ml dung dịch H2SO4 2% Đun BM 15 phút, lọc (2 lần x 20 ml) Dịch chiết nước acid NH4OH đậm đặc → pH 10 CHCl310ml x lần Dịch... (Datura metel L., Solanaceae) 11 II THỰC HÀNH 2. 1 Bột dược liệu (lá Cà độc dược) Bột màu xanh lục hay lục nâu Quan sát kính hiển vi thấy: 12 II THỰC HÀNH 2. 2 Định tính thuốc thử đặc hiệu Lấy 5g bột... hiệu NH4OH đậm đặc → pH 10 Chiết CHCl3 (10ml x 2- 3 lần) Dịch chiết CHCl3 Định tính phương pháp sắc ký Định tính thuốc thử đặc hiệu Chiết với H2SO4 2% (5ml x lần) Dịch chiết nước acid Định tính