1. Trang chủ
  2. Giáo Dục - Đào Tạo

Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

52 10 0
Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ĐTĐ Đái tháo đường IFG Rối loạn đường huyết lúc đói (Impaired fasting glucose) IGT Rối loạn dung nạp glucose (Impaired glucose tolerance) HbA1c Lượng glucose gắn với hemoglobin (Hemoglobin glycated) WHO Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) GDM Đái tháo đường thai kỳ (Gestational diabetes mellitus) ADA Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kỳ (American Diabetes Association) BN Bệnh nhân OD Mật độ quang (Optical density) BL Mẫu trắng (Blank) DANH MỤC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Tiêu chuẩn xét nghiệm bệnh ĐTĐ tiền ĐTĐ người lớn triệu chứng theo Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kỳ (American Diabetes Association) Bảng 1.2 Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh ĐTĐ theo ADA 2020 Bảng 2.1 Vị trí tra mẫu chuẩn vào khay 96 giếng 19 Bảng 3.1 OD khay 96 giếng 21 Bảng 3.2 Tỉ lệ 1/10, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 22 30; 60; 120; 240; 480 μg/mL Bảng 3.3 Tỉ lệ 1/10, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL 23 Bảng 3.4 Tỉ lệ 1/10, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL 24 Bảng 3.5 Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính tốn giá trị pvalue cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, tỉ lệ 1/10 25 Bảng 3.6 Tỉ lệ 1/20, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240; 480 μg/mL 26 Bảng 3.7 Tỉ lệ 1/20, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL 27 Bảng 3.8 Tỉ lệ 1/20, OD đo protein chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL 28 Bảng 3.9 Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính tốn giá trị pvalue cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, tỉ lệ 1/20 29 Bảng 3.10 Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính tốn giá trị 32 p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL, tỉ lệ 1/20 Bảng 3.11 Vị trí tra mẫu protein chuẩn mẫu thử vào khay 96 giếng 32 Bảng 3.12 OD đo khay 96 giếng gồm protein chuẩn mẫu 33 BN Bảng 3.13 Xử lý OD dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL BN ĐTĐ để vẽ đường chuẩn 34 Bảng 3.14 Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính tốn giá trị p-value cho phương trình đường chuẩn BN ĐTĐ 34 Bảng 3.15 OD mẫu protein BN ĐTĐ 34 Bảng 3.16 Nồng độ protein huyết tương mẫu pha loãng 300 lần (μg/mL) 35 Bảng 3.17 Nồng độ protein huyết tương mẫu BN ban đầu (g/L) 35 Bảng 3.18 Phần trăm độ lệch nồng độ protein đo phương pháp Bradford máy hóa sinh bán tự động BV E 37 DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1 Biểu đồ biểu diễn thành phần protein huyết tương Hình 3.1 Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 22 μg/mL Hình 3.2 Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 23 960 μg/mL Hình 3.3 Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 24 1920 μg/mL Hình 3.4 Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL sau phương pháp kiểm định trị số P Hình 3.5 Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL 25 Hình 3.6 Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 27 26 μg/mL Hình 3.7 Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920 μg/mL 28 Hình 3.8 Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL sau kiểm định trị số P 29 Hình 3.9 Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, tỉ lệ 1/10 sau kiểm định trị số P 30 Hình 3.10 So sánh đường chuẩn tối ưu tỉ lệ 1/10 1/20 30 Hình 3.11 Đường chuẩn định lượng protein huyết tương BN ĐTĐ 33 [Date] MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương - TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Đái tháo đường 1.1.1 Dịch tễ bệnh ĐTĐ 1.1.2 Khái niệm .2 1.1.3 Triệu chứng biến chứng 1.1.4 Chẩn đoán 1.1.5 Phân loại 1.2 Tổng quan protein huyết tương người 1.2.1 Khái niệm huyết tương người 1.2.2 Đặc điểm, thành phần, phân loại hệ protein huyết tương người 1.2.3 Chức protein huyết tương 1.2.4 Ý nghĩa việc nghiên cứu hệ protein huyết tương 10 1.3 Tổng quan phương pháp định lượng protein 10 1.3.1 Phương pháp Western blot- Định lượng protein phương pháp kháng thể 11 1.3.2 Định lượng protein phương pháp khối phổ 11 1.3.3 Định lượng protein phương pháp đo quang 12 1.4 Tổng quan phương pháp Bradford .13 1.4.1 Giới thiệu chung 13 1.4.2 Cơ chế 13 1.4.3 Thuốc thử .14 1.4.4 Ưu điểm hạn chế .14 Chương - VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Vật liệu nghiên cứu .15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 16 2.1.3 Hóa chất .16 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu .16 2.2.1 Thu nhận mẫu máu từ bệnh nhân 16 2.2.2 Phân lập huyết tương từ mẫu máu bệnh nhân, vận chuyển, bảo quản lưu trữ 16 2.2.3 Tối ưu hóa quy trình thử nghiệm Bradford .17 2.2.4 Xác định nồng độ protein mẫu huyết tương bệnh nhân ĐTĐ type phương pháp Bradford 20 2.3 Phương pháp xử lý số liệu .21 2.4 Đạo đức nghiên cứu 21 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .22 3.1 Kết tối ưu hóa quy trình xác định hàm lượng protein mẫu huyết tương phương pháp Bradford 22 3.2 Kết xác định hàm lượng protein mẫu huyết tương phương pháp Bradford .33 3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết đo nồng độ protein huyết tương phương pháp Bradford .39 3.4 Một số lưu ý 40 3.5 Một số hạn chế đề tài .41 KẾT LUẬN 42 KIẾN NGHỊ .42 TÀI LIỆU THAM KHẢO [Date] ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh không lây nhiễm ảnh hưởng lớn đến sức khỏe người dân toàn giới, gây tác động lớn đến toàn giới kỷ XXI Tại Việt Nam, có tới 3,53 triệu người “chung sống” với bệnh ĐTĐ, ngày có 80 trường hợp tử vong biến chứng liên quan [2, 7] Trong đó, đa phần ĐTĐ type 2, chiếm đến 90 – 95 % số lượng bệnh nhân mắc phải Cùng với tế bào máu, huyết tương đóng vai trị quan trọng sinh lý thể Phân tích huyết tương lâm sàng quy trình chẩn đốn phổ biến y học dấu ấn sinh học huyết tương sử dụng để phân loại bệnh nhân hỗ trợ định điều trị [15] Định lượng protein huyết tương bước quan trọng để xử lý mẫu protein, phân lập xác định đặc tính; bước tiên trước gửi protein để phân tích phân tách sắc ký, điện di hóa miễn dịch [8, 13] Hiện nay, có nhiều phương pháp dùng để định lượng nồng độ protein huyết tương, đó, xét nghiệm protein đo màu, chẳng hạn xét nghiệm Bradford, xét nghiệm Lowry, xét nghiệm axit bicinchoninic xét nghiệm biuret … sử dụng rộng rãi Mỗi thử nghiệm có ưu điểm nhược điểm liên quan đến độ nhạy, tính dễ thực hiện, khoảng tuyến tính, độ xác thay đổi phịng thí nghiệm khác [13] Điểm mấu chốt phương pháp sử dụng để định lượng nồng độ protein cần hiệu chuẩn thường xuyên [19] Phương pháp Bradford phân tích protein phương pháp thực nhanh, ứng dụng nhiều nơi với hóa chất, thiết bị bản, chi phí thấp, có độ nhạy cao Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài “Xây dựng quy trình Bradford phân tích protein tổng số huyết tương bệnh nhân Đái tháo đường type 2” với hai mục tiêu: Xây dựng quy trình Bradford tối ưu định lượng nồng độ protein huyết tương Ứng dụng quy trình để phân tích nồng độ protein BN ĐTĐ type2 Chương - TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Đái tháo đường 1.1.1 Dịch tễ bệnh ĐTĐ Đái tháo đường bệnh khơng lây nhiễm có gia tăng nhanh chóng tỉ lệ mắc biến chứng toàn cầu Trên giới, năm 2015, 415 triệu người (độ tuổi từ 20- 79) mắc bệnh đái tháo đường, có 318 triệu người trưởng thành bị rối loạn dung nạp glucose, khiến họ có nguy cao mắc bệnh tương lai [18] Đến năm 2019, ĐTĐ đứng thứ tổng số 10 nguyên nhân hàng đầu gây tử vong nguyên nhân thứ tư gây tử vong phụ nữ [11] Tại Việt Nam, năm 2015, ước tính có 3,5 triệu người trưởng thành từ 20–79 tuổi mắc ĐTĐ, nguyên nhân gây 53.400 ca tử vong Các nghiên cứu gần báo cáo tỷ lệ mắc bệnh đái tháo đường người trưởng thành Việt Nam từ năm 2004 đến năm 2016 3,7–6,0% [18] Mỗi ngày có 80 trường hợp tử vong biến chứng liên quan ĐTĐ [2] Dự báo, số người mắc bệnh tăng lên 6,3 triệu vào năm 2045 Với số liệu nói trên, Việt Nam xếp nằm 10 quốc gia có tỷ lệ gia tăng bệnh nhân ĐTĐ cao giới với tỷ lệ bệnh nhân tăng 5,5% năm Tuy nhiên, theo Bộ Y tế nước có có 29% người bệnh ĐTĐ quản lý sở y tế, số chưa quản lý theo số liệu thống kê năm 2015 71% [2] 1.1.2 Khái niệm Đái tháo đường (ĐTĐ) tình trạng mạn tính xảy thể sản xuất không đủ insulin khơng thể sử dụng insulin, chẩn đốn dựa vào nồng độ glucose máu Insulin loại hormone sản xuất tuyến tụy, có chức vận chuyển glucose từ máu vào tế bào thể để chuyển hóa thành lượng Việc thiếu hoạt động không hiệu insulin người bị bệnh đái tháo đường có nghĩa glucose lưu thông máu không vận chuyển vào tế bào Theo thời gian, nồng độ cao glucose máu (được gọi tăng đường huyết) gây tổn thương nhiều mô thể, dẫn đến phát triển biến chứng sức khỏe gây tàn phế đe dọa tính mạng [7, 18] 1.1.3 Triệu chứng biến chứng Sự tăng đường huyết mạn tính bệnh đái tháo đường có liên quan đến tổn thương lâu dài, rối loạn chức suy quan khác nhau, đặc biệt mắt, thận, thần kinh, tim mạch máu [5] Một số q trình có liên quan đến phát triển bệnh đái tháo đường bao gồm phá hủy tự miễn dịch tế bào β tuyến tụy dẫn đến việc tiết insulin không đầy đủ bất thường dẫn đến kháng lại hoạt động insulin làm giảm phản ứng mô insulin nhiều điểm đường hoạt động phức tạp hormone Hai yếu tố thường tồn bệnh nhân [5] Sự thiếu insulin hoạt động mơ đích sở gây bất thường chuyển hóa carbohydrate, chất béo protein bệnh đái tháo đường Các triệu chứng tăng đường huyết rõ rệt bao gồm “4 nhiều”: đái nhiều, uống nhiều, ăn nhiều, gầy sút cân nhiều mờ mắt Hậu cấp tính, đe dọa tính mạng bệnh nhân tăng đường huyết với nhiễm toan ceton tình trạng tăng thẩm thấu tăng glucose máu Các biến chứng lâu dài bệnh ĐTĐ bao gồm bệnh võng mạc với khả thị lực; bệnh thận dẫn đến suy thận; bệnh thần kinh ngoại biên với nguy loét bàn chân, cắt cụt chi khớp; bệnh thần kinh tự trị gây triệu chứng tiêu hóa, sinh dục, tim mạch rối loạn chức tình dục Bệnh nhân mắc ĐTĐ có tỷ lệ mắc bệnh tim mạch, động mạch ngoại biên mạch máu não xơ vữa động mạch tăng Tăng huyết áp bất thường chuyển hóa lipoprotein thường thấy người bệnh ĐTĐ.[5] 1.1.4 Chẩn đoán 1.1.4.1 Đối tượng nguy cao “Tiền ĐTĐ” thuật ngữ thực tế dùng để tình trạng rối loạn đường huyết lúc đói (Impaired Fasting Glucose), rối loạn dung nạp glucose (Impaired Glucose Tolerance) hemoglobin glycated (HbA1c) từ 6,0% đến 6,4%, loại khiến người bệnh có nguy cao phát triển bệnh ĐTĐ biến chứng bệnh [4] Nên theo dõi tình trạng thể thường xuyên để sàng lọc chẩn đoán sớm ĐTĐ Các thử nghiệm chẩn đoán xác định ĐTĐ nên xem xét thực đối tượng sau: Bảng 1.1 Tiêu chuẩn xét nghiệm bệnh ĐTĐ tiền ĐTĐ người lớn khơng có triệu chứng theo Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kỳ (American Diabetes Association)[4] Thử nghiệm nên xem xét người thừa cân béo phì (chỉ số khối thể BMI ≥25 kg / m ≥23 kg / m người Mỹ gốc Á) người lớn có nhiều yếu tố nguy sau: • Người thân cấp cha, mẹ, anh, chị, em ruột mắc bệnh ĐTĐ Chủng tộc / dân tộc có nguy cao (ví dụ: Người Mỹ gốc Phi, Người Latinh, Người Mỹ địa, Người Mỹ gốc Á, Người dân đảo Thái Bình Dương) • • Tiền sử bệnh tim mạch • Tăng huyết áp (≥140/90 mmHg điều trị tăng huyết áp) Mức cholesterol HDL 250 mg / dL (2,82 mmol / L) • • Phụ nữ mắc hội chứng buồng trứng đa nang • Khơng hoạt động thể chất Các tình trạng lâm sàng khác liên quan đến kháng insulin (ví dụ: béo phì nặng, acanthosis nigricans) • Bệnh nhân tiền ĐTĐ (HbA1c ≥5,7% [39 mmol / mol], IGT, IFG) nên kiểm tra hàng năm Những phụ nữ chẩn đoán mắc ĐTĐ thai kỳ (Gestational Diabetes Mellitus) nên làm xét nghiệm suốt đời năm lần Đối với tất bệnh nhân khác, xét nghiệm nên 45 tuổi Nếu kết bình thường, việc thử nghiệm nên lặp lại tối thiểu khoảng thời gian năm, có cân nhắc việc thử nghiệm thường xuyên tùy thuộc vào kết ban đầu tình trạng rủi ro OD TỶ LỆ 1/10 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 y = 0,002x R² = 0,932 50 100 150 200 Nồng độ (μg/mL) 250 300 250 300 OD TỶ LỆ 1/20 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 y = 0,0012x R² = 0,9699 50 100 150 200 Nồng độ (μg/mL) Hình 3.10 So sánh đường chuẩn tối ưu tỉ lệ 1/10 1/20 Hệ số R2 đường chuẩn tỉ lệ 1/20 lớn 0,95, đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL tỷ lệ 1/20 sử dụng để làm kết trình tối ưu hóa quy trình thử nghiệm Bradford Như vậy, trình thử nghiệm Bradford để xác định nồng độ protein huyết tương người tuân theo bước xây dựng đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL tỷ lệ 1/20, bao gồm: • Tiến hành pha loãng dung dịch protein chuẩn 3840 μg/mL thành dung dịch protein có nồng độ: 0, 30, 60, 120, 240 μg/mL ống Eppendorf 1,5 mL • Tiến hành tra mẫu chuẩn, mẫu thử thuốc thử vào khay 96 giếng theo vị trí, mẫu thực lần, giếng bao gồm 10 μL protein chuẩn protein thử/ 190 μL thuốc thử 32 3.2 Kết xác định hàm lượng protein mẫu huyết tương phương pháp Bradford Tỉ lệ pha loãng protein huyết tương chọn 1/300 Giải thích cho mức độ pha lỗng sau: nồng độ protein huyết tương người bình thường rơi vào khoảng 60-70g/l, khoảng tuyến tính đường chuẩn 0-240 μg/mL Như vậy, pha loãng 300 lần nồng độ protein huyết tương mẫu nằm khoảng tuyến tính Sử dụng OD protein chuẩn để vẽ đường chuẩn thử nghiệm đo nồng độ protein toàn phần BN ĐTĐ, với dãy nồng độ protein chuẩn 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, tỉ lệ 1/20, mẫu lặp lại lần Các mẫu protein BN tra vào giếng theo thứ tự ghi bảng 3.11 với trình tra mẫu tiến hành sau: Tiến hành tra mẫu chuẩn, mẫu thử thuốc thử vào khay 96 giếng theo vị trí, mẫu thực lần, theo vị trí ghi bảng, giếng bao gồm 10 μL protein chuẩn protein thử/ 190 μL thuốc thử Bảng 3.11 Vị trí tra mẫu protein chuẩn mẫu thử vào khay 96 giếng 10 11 12 A BL BL 7 36 36 61 61 91 91 123 123 B 0 13 13 41 41 67 67 92 92 127 127 C 30 30 16 16 45 45 72 72 101 101 134 134 D 60 60 21 21 48 48 73 73 115 115 138 138 E 120 120 23 23 49 49 76 76 117 117 139 139 F 240 240 26 26 50 50 83 83 119 119 143 143 G 60 60 29 29 58 58 86 86 120 120 150 150 33 33 59 59 89 89 121 121 163 163 H Kết OD đo khay 96 giếng bao gồm OD protein chuẩn protein mẫu BN thể bảng 3.12 33 Bảng 3.12 OD đo khay 96 giếng gồm protein chuẩn mẫu BN 0,263 0,267 0,588 0,580 0,561 0,585 0,621 0,567 0,492 0,564 0,554 0,559 0,268 0,267 0,576 0,554 0,560 0,568 0,557 0,581 0,478 0,507 0,577 0,584 0,337 0,378 0,556 0,551 0,590 0,500 0,568 0,567 0,564 0,552 0,577 0,587 0,381 0,393 0,560 0,586 0,509 0,523 0,587 0,561 0,583 0,602 0,449 0,528 0,423 0,411 0,579 0,546 0,561 0,544 0,568 0,560 0,596 0,598 0,551 0,551 0,553 0,553 0,560 0,568 0,586 0,562 0,552 0,558 0,560 0,568 0,577 0,590 0,380 0,397 0,594 0,569 0,586 0,524 0,571 0,580 0,570 0,585 0,574 0,525 0,590 0,600 0,538 0,545 0,597 0,568 0,554 0,559 0,580 0,586 Chúng sử dụng số liệu OD đo protein chuẩn để tính tốn dựng đường chuẩn, cách tính trình bày bảng 3.13 Bảng 3.13 Xử lý OD dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL BN ĐTĐ để vẽ đường chuẩn Nồng độ OD lần OD lần OD trung bình OD trừ BL BL 0,263 0,267 0,265 0,268 0,267 0,2675 0,0025 30 0,337 0,338 0,3375 0,0725 60 0,381 0,393 0,387 0,122 120 0,423 0,411 0,417 0,152 240 0,553 0,553 0,553 0,288 60 0,380 0,397 0,3885 0,1235 Đường chuẩn dựng dựa thể mối quan hệ OD trừ BLvà nồng độ protein, biểu diễn đồ thị 3.14 34 0.35 y = 0,0013x R² = 0,9717 0.3 OD 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 50 100 150 200 Nồng độ (μg/mL) 250 300 Hình 3.11 Đường chuẩn định lượng protein huyết tương BN ĐTĐ Dùng phương pháp kiểm định trị số P cho đường chuẩn vừa dựng, thu kết bảng 3.14 Bảng 3.14 Sử dụng phương pháp kiểm định trị số p tính tốn giá trị pvalue cho phương trình đường chuẩn BN ĐTĐ p-value Hệ số tự Hệ số nồng độ 0,271905 0,005534 Từ bảng số liệu thu được, thấy p-value hệ số tự phương trình > 0,05, hệ số tự khơng có ý nghĩa thống kê Phương trình viết khơng sử dụng hệ số tự Từ OD đo khay 96 giếng, chúng tơi tính tốn OD trung bình lần tra mẫu, sau trừ OD mẫu BL để thu OD thực mẫu protein BN bảng 3.15 35 Bảng 3.15 OD mẫu protein BN ĐTĐ Mã BN OD Mã BN OD Mã BN OD Mã BN OD Mã BN OD 0,319 36 0,306 61 0,308 91 0,338 123 0,329 13 0,300 41 0,292 67 0,299 92 0,298 127 0,304 16 0,289 45 0,306 72 0,280 101 0,269 134 0,303 21 0,308 48 0,283 73 0,251 115 0,290 138 0,309 23 0,298 49 0,289 76 0,288 117 0,291 139 0,299 26 0,299 50 0,312 83 0,309 119 0,292 143 0,290 29 0,317 58 0,313 86 0,290 120 0,283 150 0,311 33 0,330 59 0,304 89 0,277 121 0,306 163 0,318 Dùng OD thu bảng 3.15 hồi quy sử dụng phương trình đường chuẩn đồ thị 3.14, thu nồng độ protein huyết tương mẫu thử sau pha loãng 300 lần sau: Bảng 3.16 Nồng độ protein huyết tương mẫu pha loãng 300 lần (μg/mL) Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ 245,38 36 235,00 61 236,92 91 260,00 123 253,08 13 230,77 41 224,62 67 230,00 92 228,85 127 233,85 16 221,92 45 235,00 72 215,38 101 206,92 134 232,69 21 236,92 48 217,31 73 193,08 115 223,08 138 237,69 23 228,85 49 221,92 76 221,15 117 223,85 139 230,00 26 230,00 50 240,00 83 237,69 119 224,62 143 223,08 29 243,46 58 240,38 86 223,08 120 217,31 150 238,85 33 253,85 59 233,85 89 212,69 121 235,38 163 244,23 36 Từ nồng độ protein pha loãng 300 lần (tính theo μg/mL), tính nồng độ protein mẫu lúc chưa pha loãng, kết thể bảng 3.17 Bảng 3.17 Nồng độ protein huyết tương mẫu BN ban đầu (g/L) Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ 73,62 36 70,50 61 71,08 91 78,00 123 75,92 13 69,23 41 67,38 67 69,00 92 68,65 127 70,15 16 66,58 45 70,50 72 64,62 101 62,08 134 69,81 21 71,08 48 65,19 73 57,92 115 66,92 138 71,31 23 68,65 49 66,58 76 66,35 117 67,15 139 69,00 26 69,00 50 72,00 83 71,31 119 67,38 143 66,92 29 73,04 58 72,12 86 66,92 120 65,19 150 71,65 33 76,15 59 70,15 89 63,81 121 70,62 163 73,27 Sử dụng kết thu bảng để so sánh với nồng độ protein đo bệnh viện E tiêu chuẩn Độ lệch tính theo % nồng độ protein đo phương pháp Bradford so với sử dụng máy hóa sinh tự động Beckman Coulter AU5800 thể bảng sau: Bảng 3.18 Phần trăm độ lệch nồng độ protein đo phương pháp Bradford máy hóa sinh bán tự động BV E Độ lệch (%) 3,69 36 Độ lệch (%) 6,16 61 Độ lệch (%) 2,50 13 3,44 41 0,91 67 7,13 92 7,77 127 2,26 16 3,55 45 4,44 72 6,75 101 6,65 134 3,84 21 0,73 48 17,04 73 19,78 115 4,67 138 0,54 23 5,18 49 3,23 76 4,39 117 8,51 139 12,75 26 6,15 50 20,81 83 3,25 119 4,96 143 0,86 29 7,25 58 1,15 86 6,54 120 1,23 150 10,57 33 19,36 59 12,24 89 1,61 121 13,35 163 1,34 Mã BN Mã BN Mã BN 37 91 Độ lệch (%) 19,82 123 Độ lệch (%) 8,15 Mã BN Mã BN Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2016, chúng tơi tính giá trị trung bình độ lệch 6,9% với độ lệch chuẩn 5,8% Như vậy, nhìn tổng thể, khác biệt nồng độ protein huyết BN đo thử nghiệm Bradford đo bệnh viện E 6,9 ± 5,8 % Cũng từ liệu thu được, thấy 9/40 kết thu có độ lệch 10% so với nồng độ protein đo bệnh viện E Khơng hồn tồn rõ ràng khác biệt lại phát sinh; nhiên, khác biệt phương pháp, hóa chất, thiết bị dụng cụ phịng thí nghiệm thân người thực nguyên nhân dẫn đến sai khác Do đó, ln nên xây dựng khoảng tham chiếu bình thường cho thử nghiệm Bradford chấp nhận giá trị tính tốn cách thận trọng Sử dụng kiểm định T-student để so sánh giá trị trung bình phần trăm độ lệch nồng độ protein đo phương pháp Bradford máy hóa sinh bán tự động BV E với 0, kết thu bảng 3.19 Bảng 3.19 So sánh giá trị trung bình phần trăm độ lệch nồng độ protein đo phương pháp Bradford máy hóa sinh bán tự động BV E với Độ lệch % So với Gía trị trung bình 6,86375 Phương sai 33,79813686 Số mẫu 40 df 39 P(T

Ngày đăng: 17/09/2021, 17:36

Xem thêm:

Hình ảnh liên quan

Bảng 1.2. Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh ĐTĐ theo ADA 2020 [4] - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 1.2..

Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh ĐTĐ theo ADA 2020 [4] Xem tại trang 11 của tài liệu.
Bảng 2.1. Vị trí tra mẫu chuẩn vào khay 96 giếng - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 2.1..

Vị trí tra mẫu chuẩn vào khay 96 giếng Xem tại trang 26 của tài liệu.
Bảng 3.1. OD nền khay 96 giếng - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.1..

OD nền khay 96 giếng Xem tại trang 28 của tài liệu.
Bảng 3.2. Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240; 480 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.2..

Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240; 480 μg/mL Xem tại trang 28 của tài liệu.
Hình 3.1. Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.1..

Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL Xem tại trang 29 của tài liệu.
Bảng 3.3. Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.3..

Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL Xem tại trang 29 của tài liệu.
Bảng 3.4. Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.4..

Tỉ lệ 1/10, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL Xem tại trang 30 của tài liệu.
Hình 3.2. Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.2..

Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL Xem tại trang 30 của tài liệu.
Hình 3.3. Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.3..

Tỉ lệ 1/10, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920 μg/mL Xem tại trang 31 của tài liệu.
Bảng 3.5. Giá trị p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, ở tỉ lệ 1/10 - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.5..

Giá trị p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, ở tỉ lệ 1/10 Xem tại trang 32 của tài liệu.
Hình 3.5. Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.5..

Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL Xem tại trang 33 của tài liệu.
Hình 3.6. Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.6..

Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL Xem tại trang 34 của tài liệu.
Bảng 3.7. Tỉ lệ 1/20, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.7..

Tỉ lệ 1/20, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960; 1920 μg/mL Xem tại trang 34 của tài liệu.
Bảng 3.8. Tỉ lệ 1/20, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.8..

Tỉ lệ 1/20, OD đo được của protein chuẩn ở dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920, 3840 μg/mL Xem tại trang 35 của tài liệu.
Hình 3.7. Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920 μg/mL - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.7..

Tỉ lệ 1/20, Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 240; 480; 960; 1920 μg/mL Xem tại trang 35 của tài liệu.
Bảng 3.9. Giá trị p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, ở tỉ lệ 1/20 - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.9..

Giá trị p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL, ở tỉ lệ 1/20 Xem tại trang 36 của tài liệu.
Bảng 3.10. Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính toán giá trị p- p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL, - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.10..

Sử dụng phương pháp kiểm định trị số P tính toán giá trị p- p-value cho phương trình đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL, Xem tại trang 37 của tài liệu.
Hình 3.9. Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL, ở tỉ lệ 1/10 sau kiểm định trị số P - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.9..

Đường chuẩn dãy nồng độ 0; 120; 240; 480; 960 μg/mL, ở tỉ lệ 1/10 sau kiểm định trị số P Xem tại trang 37 của tài liệu.
Hình 3.10. So sánh 2 đường chuẩn tối ưu nhất tại 2 tỉ lệ 1/10 và 1/20 - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.10..

So sánh 2 đường chuẩn tối ưu nhất tại 2 tỉ lệ 1/10 và 1/20 Xem tại trang 38 của tài liệu.
Bảng 3.11. Vị trí tra mẫu protein chuẩn và mẫu thử vào khay 96 giếng - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.11..

Vị trí tra mẫu protein chuẩn và mẫu thử vào khay 96 giếng Xem tại trang 39 của tài liệu.
Bảng 3.12. OD đo được của khay 96 giếng gồm protein chuẩn và mẫu BN - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.12..

OD đo được của khay 96 giếng gồm protein chuẩn và mẫu BN Xem tại trang 40 của tài liệu.
Bảng 3.13. Xử lý OD dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL BN ĐTĐ để vẽ đường chuẩn - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.13..

Xử lý OD dãy nồng độ 0; 30; 60; 120; 240 μg/mL BN ĐTĐ để vẽ đường chuẩn Xem tại trang 40 của tài liệu.
Hình 3.11. Đường chuẩn định lượng protein huyết tương BN ĐTĐ - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Hình 3.11..

Đường chuẩn định lượng protein huyết tương BN ĐTĐ Xem tại trang 41 của tài liệu.
Bảng 3.16. Nồng độ protein huyết tương trong mẫu đã pha loãng 300 lần (μg/mL) Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ 7 245,38 36 235,00 61 236,92 91 260,00 123 253,08 13 230,77 41 224,62 67 230,00 92 228,85 127 233,85 - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.16..

Nồng độ protein huyết tương trong mẫu đã pha loãng 300 lần (μg/mL) Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ Mã BN Nồng độ 7 245,38 36 235,00 61 236,92 91 260,00 123 253,08 13 230,77 41 224,62 67 230,00 92 228,85 127 233,85 Xem tại trang 42 của tài liệu.
Bảng 3.15. OD của mẫu protein BN ĐTĐ - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.15..

OD của mẫu protein BN ĐTĐ Xem tại trang 42 của tài liệu.
Sử dụng kết quả thu được ở bảng trên để so sánh với nồng độ protein đo ở bệnh viện E như một tiêu chuẩn - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

d.

ụng kết quả thu được ở bảng trên để so sánh với nồng độ protein đo ở bệnh viện E như một tiêu chuẩn Xem tại trang 43 của tài liệu.
Bảng 3.17. Nồng độ protein huyết tương trong mẫu BN ban đầu (g/L) - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.17..

Nồng độ protein huyết tương trong mẫu BN ban đầu (g/L) Xem tại trang 43 của tài liệu.
Bảng 3.19. So sánh giá trị trung bình phần trăm độ lệch nồng độ protein đo bằng phương pháp Bradford và bằng máy hóa sinh bán tự động tại BV E - Xây dựng quy trình bradford phân tích protein tổng số huyết tương ở các bệnh nhân đái tháo đường type 2

Bảng 3.19..

So sánh giá trị trung bình phần trăm độ lệch nồng độ protein đo bằng phương pháp Bradford và bằng máy hóa sinh bán tự động tại BV E Xem tại trang 44 của tài liệu.

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan