-Rubella( hay còn gọi là bệnh sởi Đức), ảnh hưởng chủ yếu lên da và hạch bạch huyết. Bệnh thường bị lây nhiễm bởi dịch tiết mũi và họng. Virus cũng có thể đi qua đường máu người mẹ nhiễm vào thai nhi.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUỐC TẾ HỒNG BÀNG Khoa: XÉT NGHIỆM Y HỌC Bộ Môn: THỰC HÀNH VI SINH Lớp: XN17DH-XN1 CHUYÊN ĐỀ: TEST NHANH XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ VIRUS RUBELLA Giảng viên hướng dẫn: ThS.Võ Thị Trinh GV Nguyễn Thị Thanh Mai Thành viên nhóm: +Phạm Thị Ngọc Ngân: 171302036 +Nguyễn Thị Dương : 171302034 +Nguyễn Trọng Nghĩa : 171302001 TP.HCM,Ngày 17 tháng 10 năm 2020 VIRUS RUBELLA A.ĐẠI CƯƠNG: -Rubella( hay gọi bệnh sởi Đức), ảnh hưởng chủ yếu lên da hạch bạch huyết Bệnh thường bị lây nhiễm dịch tiết mũi họng Virus qua đường máu người mẹ nhiễm vào thai nhi -Nói chung, bệnh nhẹ trẻ em, nên mối nguy hiểm Rubella phụ nữ có thai, gây hội chứng Rubella bẩm sinh Nếu phụ nữ mang thai bị nhiễm virus rubella giai đoạn sớm, virus rubella gây hại đến phôi bên tử cung qua đường máu -Do đó, phụ nữ mang thai sinh non, thai nhi chết bụng mẹ thai nhi bị dị dạng,Nhiễm Rubella phụ nữ có thai trước 20 tuần tuổi thường nguy có dấu hiệu dị dạng thai tỷ lệ cao phụ nữ có thai 12 tuần tuổi Khoảng 90% số trẻ sinh bị mắc Hội chứng Rubella bẩm sinh (CRS: Congenital Rubella Syndrome) người mẹ bị nhiễm bệnh tháng đầu mang thai Tỉ lệ giảm dần thời gian nhiễm Rubella virus gần ngày sinh em bé - Bởi vậy, điều quan trọng phải sàng lọc kháng thể Rubella phụ nữ mang thai Rubella có hai kháng thể IgM IgG IgM xuất vài ngày sau nhiễm bệnh, biến sau 1-3 tháng IgG xuất sau IgM tồn thể ● Chẩn đốn xét nghiệm: - ELISA tìm kháng thể chun biệt: nhạy cảm dễ thực - HI (Hemagglutination inhibition): ức chế ngưng kết hồng cầu - IHA (Indirect Hemagglutination): ngưng kết hồng cầu thụ động - LA (Latex Agglutination): ngưng kết Latex - IgM đặc hiệu - Phân lập siêu vi gây bệnh: hỗ trợ nghiên cứu - Bệnh Rubella đặc biệt thai phụ xác định hiệu giá kháng thể tăng lên lần thời kỳ cấp tính thời kỳ khỏi bệnh kỹ thuật miễn dịch enzyme(ELISA) - Phân lập virus từ họng bệnh nhân tuần trước đến hai tuần sau phát ban Các mẫu máu nước tiểu phân dùng để xét nghiệm virus (10-14 ngày) - Chẩn đốn xác định CRS dựa vào : +Phát kháng thể IgM đặc hiệu trẻ sơ sinh Kháng thể không qua thai, diện hệ miễn dịch tổng hợp từ trẻ chưa đời +Sự tồn hiệu giá kháng thể IgG từ mẹ truyền sang phân lập virus từ họng, nước tiểu kéo dài năm TEST NHANH XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ VIRUS RUBELLA (NanoSign Rubella IgG/IgM) B.KỸ THUẬT I MỤC ĐÍCH: -Phát kháng thể IgG/ IgM virus Rubella huyết / huyết tương máu toàn phần người Thử nghiệm rubella sử dụng để : - Xác nhận diện kháng thể đầy đủ để bảo vệ chống lại virus rubella ( miễn dịch) - Phát nhiễm trùng bị nhiễm - Xác định người chưa tiếp xúc với virus người chưa tiêm phòng - Xác minh tất phụ nữ mang thai người lập kế hoạch mang thai có số lượng đủ kháng thể rubella để bảo vệ khỏi bị nhiễm trùng II NGUYÊN LÝ XÉT NGHIỆM: -Bộ kit Rubella IgG/IgM kit dùng kỹ thuật sắc ký miễn dịch cho chẩn đốn định tính kháng thể IgG/IgM virus Rubella huyết huyết tương máu tồn phần giúp chẩn đốn Rubella người -Trong xét nghiệm này, kháng nguyên Rubella phủ vùng thử nghiệm test -Trong trình thử nghiệm, toàn mẫu máu, huyết huyết tương phản ứng với hạt phủ kháng thể dê kháng thể IgG/IgM người màng strip vùng xét nghiệm -Hỗn hợp sau di chuyển phía trước màng hoạt động mao dẫn phản ứng với kháng nguyên Rubella màng vùng xét nghiệm tương ứng -Sự diện vạch màu vùng test (vùng T) cho thấy kết dương tính nhiễm Rubella, khơng có vạch màu vùng test cho kết âm tính -Để kiểm sốt quy trình, vạch màu ln xuất tương ứng hai vùng đối chứng màng strip (vùng C) biết thể tích mẫu thêm vào đủ thấm hút màng xảy ● Làm rõ test: Rubella IgM -Khi mẫu chứa kháng thể IgM virus Rubella, kháng thể tạo thành phức hợp với kháng thể đa dòng cộng hợp hạt vàng trước đó, di chuyển phía trước theo ngun sắc kỹ miễn dịch phản ứng với kháng nguyên vùng xét nghiệm Do đó, tạo vạch màu vùng xét nghiệm (vạch T) dung dịch tiếp tục di chuyển phản ứng với chất đối chứng vùng đối chứng (vạch C), kết đọc dương tính Nếu vạch T khơng xuất vạch mà có vạch C, kết đọc âm tính Rubella IgG -Khi mẫu chứa kháng thể IgG virus rubella, kháng thể tạo thành phức hợp với kháng thể đa dòng cộng hợp hạt vàng trước đó, di chuyển phía trước theo ngun tắc sắc kỹ miễn dịch phản ứng với kháng nguyên vùng xét nghiệm Do đó, tạo vạch màu vùng xét nghiệm (vạch T) dung dịch tiếp tục di chuyển phản ứng với chất đối chứng vùng đối chứng (vạch C), kết đọc dương tính Nếu vạch T khơng xuất vạch mà có vạch C, kết đọc âm tính -Để kiểm sốt quy trình, vạch màu xuất tương ứng hai vùng đối chứng màng strip biết thể tích mẫu thêm vào III THUỐC THỬ-DỤNG CỤ: -Test có chứa: ✔ Kháng thể Dê kháng IgM người ✔ Kháng thể Chuột kháng IgG người ✔ Kháng nguyên Rubella ✔ Một streptavidin-IgG sử dụng hệ thống vùng đối chứng Kit Nanosign Rubella IgG/IgM Device gồm: Stt Thành phần Test thử túi riêng (1 khây hút ẩm) Buffer Hướng dẫn sử dụng Số lượng 1 Lưu ý: Chỉ sử dụng cho xét nghiệm chẩn đốn -Tính ổn định của hóa chất xét nghiệm bị ảnh hưởng độ Không dùng kit hạn, không để kit tủ đơng -Dùng cho chẩn đốn phịng xét nghiệm -Đeo găng tay thao tác, rửa tay xét nghiệm -Loại bỏ găng tay, swab, ống nghiệm test sử dụng theo yêu cầu GLP -Khơng dùng với hóa chất loại kit khác -Loại bỏ mẫu xét nghiệm phát mẫu nhiễm khuẩn hay nấm IV BẢO QUẢN MẪU BỆNH PHẨM: -Thu nhận thao tác theo tiêu chuẩn PTN -Huyết thanh: để máu lắng kết ly tâm để tách huyết -Huyết tương: Thu nhận máu vào ống nghiệm chứa chất kháng đông heparin, citrat, hay EDTA Ly tâm máu tách huyết tương -Máu tồn phần từ ngón tay: - Rửa tay bệnh nhân xà phòng nước ấm lau tăm Để khô - Mát xa tay mà không chạm vào chỗ đâm cách chà xát tay phía đầu ngón tay ngón tay ngón tay đeo nhẫn - Đâm vào vị trí da cần lấy máu lancet vơ trùng Lau giọt máu - Nhẹ nhàng chà xát tay từ cổ tay đến lòng bàn tay để ngón tay tạo thành giọt t máu trịn vị trí đâm - Xét nghiệm phải thực -Nên xét nghiệm mẫu tách Nếu phải lưu giữ, nên giữ - 8°C khoảng 24 hay -20°C muốn giữ lâu V BẢO QUẢN, LƯU TRỮ VÀ HẠN SỬ DỤNG: -Test xét nghiệm NanoSign Rubella IgG/ IgM nên lưu giữ nhiệt độ từ - 30 °C ( 36 - 86° F ) Hạn sử dụng: 24 tháng kể từ ngày sản xuất VI KIỂM SỐT: -Quy trình nội kiểm soát test bao gồm hai phần Phải có hai vạch màu xuất vùng đối chứng C Điều lượng mẫu sử dụng đủ quy trình thao tác Các kiểu sốt khuẩn không cung cấp theo kit này: Tuy nhiên khuyến cáo việc kiểm soát mẫu âm dương nên thực thêm phịng thí nghiệm khác để khác để xác nhận lại quy trình đánh giá hiệu suất test có phù hợp VII THỰC HIỆN XÉT NGHIỆM: -Bước 1: Để mẫu test nhiệt độ phòng trước tiến hành xét nghiệm ( 15 - 20 phút ) -Bước 2: Khi sẵn sàng xét nghiệm, Xé test khỏi phôi, đặt test thử mặt phẳng nằm ngang khô và đánh dấu tên hay mã bệnh nhân tương ứng -Bước 3: Cho 20 ul mẫu (huyết tương, huyết máu toàn phần) vào giếng sau thêm giọt buffer vào -Bước 4: Đọc kết vòng 15 phút Lưu ý: không đọc kết sau 20 phút VIII ĐỌC KẾT QUẢ: -Âm tính: Chỉ xuất băng đối chứng (C) -Dương tính: Xuất băng xét nghiệm T đối chứng (C) Lưu ý vạch màu xét nghiệm T đậm hay nhạt tùy thuộc vào nồng độ kháng thể Rubella có mẫu -Dương tính IgM: Xuất vách IgM vạch đối chứng (C) -Dương tính IgG: Xuất vạch IgG vạch đối chứng (C) -Dương tính với IgM IgG: Xuất vạch vị trí IgG IgM băng đối chứng C -Kết không giá trị: Nếu sau 20 phút, không xuất vạch đối chứng C có vạch IgM hay IgG test Thực lại xét nghiệm với test IX ƯU ĐIỂM: -Test NanoSign Rubella Igg/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu cho thấy độ xác 97% -Test NanoSign Rubella IgG/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu Kết cho thấy test có độ nhạy độ đặc hiệu cao: X HẠN CHẾ: -Test NanoSign Rubella IgG/IgM dùng chẩn đoán in vitro Test nên sử dụng để phát kháng thể IgM IgG virus Rubella máu, huyết huyết tương Không xác định giá trị định lượng tỉ lệ nồng độ IgM IgG kháng thể Rubella test xét nghiệm định tính -Test NanoSign Rubella IgG/IgM xác định diện kháng thể IgM IgG Rubella mẫu không nên sử dụng làm tiêu chuẩn cho chẩn đoán nhiễm Rubella Như với tất xét nghiệm chẩn đoán, tất kết phải xem xét với thông tin lâm sàng khác từ bác sĩ -Nếu kết xét nghiệm âm tính triệu chứng lâm sàng tồn tạ, xét nghiệm bổ sung theo dõi phương pháp lâm sàng khác đề xuất Một kết âm tính lúc khơng loại trừ khả nhiễm Rubella XI ĐẶC ĐIỂM HIỆU XUẤT CỦA TEST: Độ nhạy độ đặc hiệu -Test NanoSign Rubella IgG/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu Kết cho thấy test có độ nhạy độ đặc hiệu cao: NanoSign Kết Rubella EIA (IgM) Dương tính Âm tính Kết tổng Rubella Dương tính 57 IgG/IgM Âm tính Kết tổng 61 Độ nhạy tương ứng: 93,4% Độ đặc hiệu tương ứng: 99,0% Độ xác: 98,1%*khoảng tin cậy 307 301 Rubella EIA (IgG) NanoSign Kết Dương tính Âm tính Rubella Dương tính 56 43 IgG/IgM Âm tính 306 Kết tổng 61 349 Độ nhạy tương ứng: 91,8% Độ đặc hiệu tương ứng: 98,7% Độ xác: 97,6%*khoảng tin cậy 60 311 371 Kết tổng 99 311 410 Độ xác: ✔ Ngoại kiểm: +Độ xác xác định cách sử dụng 10 lần lặp lại ba loại mẫu : âm tính, dương tính thấp dương tính cao Với mẫu âm, dương thấp cao đánh giá có xác > 99% thời điểm thực ✔ Nội kiểm: +Độ xác lần kiểm tra xác định 10 xét nghiệm độc lập ba mẫu vật: âm tính, dương tính thấp dương tính cao Ba lơ khác test NanoSign Rubella IgG/ IgM thử nghiệm pháp khoảng thời gian 10 ngày mẫu âm tính, dương tính thấp dương tính cao Các mẫu xác định với độ xác > 99% thời điểm thực ✔ Phản ứng chéo: +Tets nanoSign Rubella IgG/ IGM xét nghiệm với mẫu dương tính với HAV HBV, HCV, HIV, RF, giang mai, H Pylori, CMV, TOXO, HSV, 1/2 Kết cho thấy khơng có phản ứng chéo ✔ Chất gây nhiễu: +Các hợp chất sau thử nghiệm với test NanoSign Rubella IgG/ IgM không thấy ảnh hưởng quan sát thấy: Acetaminophen: 20 mg/dl Cafein: 20mg/dl ADTA: 20 mg/dl; Axit Acetylsalicylic: 20mg/dl, Axid Gentisic: 20mg/dl; Ethanol: 10% Axit ascorbic: 2g/dl; Phenylpropanolamin: 20mg/dl, Glucose: 20 mg/dl; Bilirubin: 1000mg/dl, Salicylic Acid: 20 mg/dl; Phenothiazin: 20mg/dl ■ TÀI LIỆU THAM KHẢO: Mellinger AK, Cragan ID Atkinson WL cộng Tỷ lệ mắc hội chứng rubella bẩm sinh cao sau phát bệnh rubella Pedi - Infect Dis J 1995: 14: 573-5 Herrman KL: Virus rubella Trong: Lennette EH, Balows Ac Hausler WJ, Shadomy HJ eds , Sổ tay Vi sinh lâm sàng ' Hiệp hội Vi sinh vật Hoa Kỳ, Washington DC Ch 76 tr.779-754 năm 1985 ... bệnh nhẹ trẻ em, nên mối nguy hiểm Rubella phụ nữ có thai, gây hội chứng Rubella bẩm sinh Nếu phụ nữ mang thai bị nhiễm virus rubella giai đoạn sớm, virus rubella gây hại đến phơi bên tử cung... NGHIỆM KHÁNG THỂ VIRUS RUBELLA (NanoSign Rubella IgG/IgM) B.KỸ THUẬT I MỤC ĐÍCH: -Phát kháng thể IgG/ IgM virus Rubella huyết / huyết tương máu toàn phần người Thử nghiệm rubella sử dụng để : -... ƯU ĐIỂM: -Test NanoSign Rubella Igg/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu cho thấy độ xác 97% -Test NanoSign Rubella IgG/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại