-Rubella( hay còn gọi là bệnh sởi Đức), ảnh hưởng chủ yếu lên da và hạch bạch huyết. Bệnh thường bị lây nhiễm bởi dịch tiết mũi và họng. Virus cũng có thể đi qua đường máu người mẹ nhiễm vào thai nhi.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUỐC TẾ HỒNG BÀNG KHOA : XÉT NGHIỆM Y HỌC BỘ MÔN : THỰC HÀNH VI SINH LỚP:XNDH17-XN1 CHUYÊN ĐỀ: TEST NHANH XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ VIRUS RUBELLA (Nanosign Rubella IgG/IgM) Chuyên đề 7: Giảng viên hướng dẫn: Ths Võ Thị Trinh GV: Nguyễn Thị Thanh Mai Các thành viên : Nguyễn Trọng Nghĩa Phạm Thị Ngọc Ngân Nguyễn Thị Dương NGUYÊ NỘI DUNG: N LÝ CHUẨ TEAS N T ĐOÁN NHAN XN H RUBE LA THUỐ CÁCH C THỰC THỬ- HIỆN DỤNG CỤ ĐỌC KẾT QUẢ VIRUS RUBELLA A.ĐẠI CƯƠNG: • Rubella( hay cịn gọi bệnh sởi Đức), ảnh hưởng chủ yếu lên da hạch bạch huyết. • Bệnh thường bị lây nhiễm dịch tiết mũi họng Virus qua đường máu người mẹ nhiễm vào thai nhi • Đây bệnh nhẹ trẻ em, nên mối nguy hiểm Rubella phụ nữ có thai, gây hội chứng Rubella bẩm sinh • Nhiễm Rubella phụ nữ có thai trước 20 tuần tuổi thường nguy có dấu hiệu dị dạng thai tỷ lệ cao phụ nữ có thai 12 tuần tuổi Khoảng 90% số trẻ sinh bị mắc Hội chứng Rubella bẩm sinh (CRS: Congenital Rubella Syndrome) người mẹ bị nhiễm bệnh tháng đầu mang thai • - Bởi vậy, điều quan trọng phải sàng lọc kháng thể Rubella phụ nữ mang thai Rubella có hai kháng thể IgM IgG IgM xuất vài ngày sau nhiễm bệnh, biến sau 1-3 tháng IgG xuất sau IgM tồn thể Chẩn đoán xét nghiệm: ELISA tìm kháng thể chuyên biệt: nhạy cảm dễ thực (Hemagglutination inhibition): ức chế ngưng kết hồng cầu IHA (Indirect Hemagglutination): ngưng kết hồng cầu thụ động LA (Latex Agglutination): ngưng kết Latex IgM đặc hiệu Phân lập siêu vi gây bệnh: hỗ trợ nghiên cứu Ở thai phụ xác định hiệu giá kháng thể tăng lên lần thời kỳ cấp tính thời kỳ khỏi bệnh kỹ thuật miễn dịch enzyme(ELISA) Phân lập virus từ họng bệnh nhân tuần trước đến hai tuần sau phát ban Chẩn đoán xác định CRS I MỤC ĐÍCH: -Phát kháng thể IgG/ IgM virus Rubella huyết TEST NHANH XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ VIRUS RUBELLA (NanoSign Rubella IgG/IgM) / huyết tương máu toàn phần người II NGUYÊN LÝ XÉT NGHIỆM: Bộ kit Rubella IgG/IgM kit dùng kỹ thuật sắc ký miễn dịch cho chẩn đốn định tính kháng thể IgG/IgM virus Rubella huyết huyết tương máu tồn phần giúp chẩn đốn Rubella người Trong xét nghiệm này, kháng nguyên Rubella phủ vùng thử nghiệm test Trong q trình thử nghiệm, tồn mẫu máu, huyết huyết tương phản ứng với hạt phủ kháng thể dê kháng thể IgG/IgM người màng strip vùng xét nghiệm Hỗn hợp sau di chuyển phía trước màng hoạt động mao dẫn phản ứng với kháng nguyên Rubella màng vùng xét nghiệm tương ứng Sự diện vạch màu vùng test (vùng T) cho thấy kết dương tính nhiễm Rubella, khơng có vạch màu vùng test cho kết âm tính Để kiểm sốt quy trình, vạch màu xuất tương ứng hai vùng đối chứng màng strip (vùng C) biết thể tích mẫu thêm vào đủ thấm hút màng xảy III THUỐC THỬ-DỤNG CỤ: Test có chứa: Kit Nanosign Rubella IgG/IgM Device gồm: kháng IgG người người Bufer kháng IgM Hướng dẫn sử dụng Kháng thể Chuột • • Kháng thể Dê ẩm Các test xét nghiệm chất hút Rubella Một streptavidin-IgG sử dụng hệ thống vùng đối chứng • Kháng ngun Lưu ý -Tính ổn định của hóa chất xét nghiệm bị ảnh hưởng độ Không dùng kit hạn, không để kit tủ đơng -Dùng cho chẩn đốn phịng xét nghiệm -Đeo găng tay thao tác, rửa tay xét nghiệm -Loại bỏ găng tay, swab, ống nghiệm test sử dụng theo yêu cầu GLP -Không dùng với hóa chất loại kit khác -Loại bỏ mẫu xét nghiệm phát mẫu nhiễm khuẩn hay nấm IV BẢO QUẢN MẪU BỆNH PHẨM: -Thu nhận thao tác theo tiêu chuẩn PTN -Huyết thanh: để máu lắng kết ly tâm để tách huyết -Huyết tương: Thu nhận máu vào ống nghiệm chứa chất kháng đông heparin, citrat, hay EDTA Ly tâm máu tách huyết tương -Máu tồn phần từ ngón tay: - Rửa tay bệnh nhân xà phòng nước ấm lau tăm Để khô - Mát xa tay mà không chạm vào chỗ đâm cách chà xát tay phía đầu ngón tay ngón tay ngón tay đeo nhẫn - Đâm vào vị trí da cần lấy máu lancet vơ trùng Lau giọt máu - Nhẹ nhàng chà xát tay từ cổ tay đến lịng bàn tay để ngón tay tạo thành giọt t máu tròn vị trí đâm - Xét nghiệm phải thực -Nên xét nghiệm mẫu tách Nếu phải lưu giữ, nên giữ - 8°C khoảng 24 hay -20°C muốn giữ lâu VI BẢO QUẢN ,LƯU TRỮ VÀ HẠN SỬ DỤNG - Test xét nghiệm NanoSign Rubella IgG/ IgM nên lưu giữ nhiệt độ từ - 30 °C (36 - 86° F ) - Hạn sử dụng: 24 tháng kể từ ngày sản xuất VII THỰC HIỆN XÉT NGHIỆM: -Bước 1: Để mẫu test nhiệt độ phòng trước tiến hành xét nghiệm ( 15 - 20 phút ) -Bước 2: Khi sẵn sàng xét nghiệm, Xé test khỏi phôi, đặt test thử mặt phẳng nằm ngang khô và đánh dấu tên hay mã bệnh nhân tương ứng -Bước 3: Cho 20 ul mẫu (huyết tương, huyết máu toàn phần) vào giếng sau thêm giọt buffer vào -Bước 4: Đọc kết vịng 15 phút LƯU Ý: Khơng đoc kết 20p VIII ĐỌC KẾT QUẢ: Lưu ý: vạch màu xét nghiệm T đậm hay nhạt tùy thuốc vào nồng độ kháng thể Rubella có mẫu g (C) chứn đối (C) chứng ệm T băng đối nghi xét băng Xuất tnh: ng Dươ Chỉ xuất Âm tnh: Dương tính chia làm trường hợp: Dương tnh IgM Dương tnh IgG Dương tnh IgM IgG DƯƠNG TÍNH IgM -Xuất vạch (T) vạch đối chứng (C) test IgM KẾT QUẢ: Nhiễm virus Rubella cấp DƯƠNG TÍNH IgG -Xuất vạch (T) vạch đối chứng (C) test IgG KẾT QUẢ: Cho thấy BN nhiễm virus Rubella trước tiêm chủng Dương tính IgM IgG • • • -Xuất vạch xét nghiệm (T) vạch đối chứng (C) hai test IgM IgG Nếu có triệu chứng lâm sàng trước chuẩn đốn bệnh nhân bị nhiễm Rubella cấp tính Nếu khơng có dấu hiệu lâm sàng, IgM dương tính kháng thể IgM tồn lâu thể IgM không đặc hiệu • Cần làm thêm xét nghiệm với Rubella IgG -Nếu sau 20 phút, không xuất vạch đối chứng (C) có vạch xét nghiệm (T) test IgM IgG kết khơng có giá trị Thực Kết không giá trị: lại xét nghiệm với test ƯU ĐIỂM: - Test NanoSign Rubella Igg/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu cho thấy độ xác 97% - Test NanoSign Rubella IgG/IgM Device so sánh với test Rubella EIA thương mại hàng đầu Kết cho thấy test có độ nhạy độ đặc hiệu cao: HẠN CHẾ -Test NanoSign Rubella IgG/IgM dùng chẩn đoán in vitro Test nên sử dụng để phát kháng thể IgM IgG virus Rubella máu, huyết huyết tương Không xác định giá trị định lượng tỉ lệ nồng độ IgM IgG kháng thể Rubella test xét nghiệm định tnh -Test NanoSign Rubella IgG/IgM xác định diện kháng thể IgM IgG Rubella mẫu không nên sử dụng làm tiêu chuẩn cho chẩn đoán nhiễm Rubella Như với tất xét nghiệm chẩn đoán, tất kết phải xem xét với thông tin lâm sàng khác từ bác sĩ -Nếu kết xét nghiệm âm tnh triệu chứng lâm sàng tồn tạ, xét nghiệm bổ sung theo dõi phương pháp lâm sàng khác đề xuất Một kết âm tnh lúc không loại trừ khả nhiễm Rubella