KHẢO SÁT ĐỘ TIN CẬY CỦA KÍT ELISA XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG PCV2 VÀ ĐÁP ỨNG CỦA HEO ĐỐI VỚI VẮCXIN PHÒNG HỘI CHỨNG GẦY CÒM TRÊN HEO SAU CAI SỮA (PMWS)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐẠO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH **************** NGUYỄN HỒNG MỸ KHẢO SÁT ĐỘ TIN CẬY CỦA KÍT ELISA XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG PCV2 VÀ ĐÁP ỨNG CỦA HEO ĐỐI VỚI VẮC-XIN PHÒNG HỘI CHỨNG GẦY CÒM TRÊN HEO SAU CAI SỮA (PMWS) LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐẠO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH **************** NGUYỄN HOÀNG MỸ KHẢO SÁT ĐỘ TIN CẬY CỦA KÍT ELISA XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG PCV2 VÀ ĐÁP ỨNG CỦA HEO ĐỐI VỚI VẮC-XIN PHÒNG HỘI CHỨNG GẦY CỊM TRÊN HEO SAU CAI SỮA (PMWS) Chun ngành: Cơng nghệ sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN TẤT TOÀN PGS TS TRẦN THỊ DÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2011 KHẢO SÁT ĐỘ TIN CẬY CỦA KÍT ELISA XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG PCV2 VÀ ĐÁP ỨNG CỦA HEO ĐỐI VỚI VẮC-XIN PHÒNG HỘI CHỨNG GẦY CÒM TRÊN HEO SAU CAI SỮA (PMWS) NGUYỄN HOÀNG MỸ Hội đồng chấm luận văn Chủ tịch: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Trường Đại học Nông Lâm TP HCM Thư ký: TS LÊ THỊ DIỆU TRANG Viện CNSH Môi trường, ĐH Nông Lâm TP HCM Phản biện 1: PGS TS TRẦN ĐÌNH TỪ Hội thú y Việt Nam Phản biện 2: TS THÁI THỊ THỦY PHƯỢNG Cục Thú y Văn phòng Ủy viên: PGS TS TRẦN THỊ DÂN Hội thú y Việt Nam ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH HIỆU TRƯỞNG LÝ LỊCH CÁ NHÂN Tơi tên Nguyễn Hoàng Mỹ, sinh ngày 15 tháng năm 1984, phường Quyết Thắng, thành phố Biên Hòa, tỉnh Đồng Nai Con ơng Nguyễn Hồng Năng bà Nguyễn Thị Hường Tốt nghiệp Trung học phổ thông Trường trung học phổ thông chuyên Lương Thế Vinh tỉnh Đồng Nai năm 2002 Tốt nghiệp Đại học ngành Sinh học, hệ đại học quy Đại học Khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh năm 2007 Tháng năm 2007 theo học Cao học ngành Công nghệ sinh học Đại học Nông Lâm, Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh Từ tháng năm 2008 đến tháng năm 2011 làm việc Khoa Môi trường & Công nghệ sinh học, Đại học Kỹ thuật công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, chức vụ: Giảng viên Từ tháng năm 2011 đến làm việc Viện Khoa học công nghệ & Quản lý môi trường, Đại học Cơng nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, chức vụ: Giảng viên Tình trạng gia đình: Chồng Trần Bình Hậu, kết hôn năm 2010 Địa liên lạc: 108/5/4 Cách mạng Tháng 8, phường Quyết Thắng, thành phố Biên Hòa, tỉnh Đồng Nai Điện thoại: 0613.843633 – 0988411701 i LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Học viên thực luận văn Nguyễn Hoàng Mỹ ii LỜI CẢM TẠ Lời đầu tiên, xin bày tỏ lời cảm ơn trân trọng đến tất quý Thầy, Cô trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học, Khoa Chăn nuôi Thú y cho nhiều kiến thức làm tảng, định hướng cho thời gian học tập nghiên cứu trường; Thầy, Cơ Phòng Sau đại học, Ban giám hiệu Nhà trường tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành tốt khóa học Tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Tiến sĩ Nguyễn Tất Tồn Phó giáo sư – Tiến sĩ Trần Thị Dân dành nhiều thời gian công sức hướng dẫn nghiên cứu, sửa chữa giúp tơi hồn thành luận văn Tơi chân thành cảm ơn Thầy Cô Hội đồng, Thầy Cơ phản biện tận tình dẫn, giúp tơi hồn thiện luận văn tốt Cuối cùng, xin dành lời cảm ơn ba mẹ gia đình, người ln bên cạnh ủng hộ, động viên tơi lúc khó khăn Nguyễn Hồng Mỹ iii TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát độ tin cậy kít ELISA xét nghiệm kháng thể kháng PCV2 đáp ứng heo vắc-xin phòng hội chứng gầy còm heo sau cai sữa (PMWS)” thực thời gian 2/2009-12/2009 với hai nội dung chính: (i) đánh giá độ tin cậy kít SERELISA® PCV2 Ab Mono Blocking (kỹ thuật ELISA) cách tính hệ số biến động (CV) hiệu giá kháng thể (HGKT) mẫu lặp lại lần, hệ số biến động nhóm HGKT (cao, vừa thấp) từ kết xác định HGKT kháng PCV2 525 mẫu huyết heo hai trại chăn nuôi cơng nghiệp tỉnh Bình Dương (trại A) Đồng Nai (trại B); (ii) đánh giá đáp ứng heo với vắc-xin Circumvent phòng PMWS thơng qua tiêu HGKT, công thức bạch cầu vào thời điểm tiêm văc-xin thành phần loại tế bào dịch phế quản – phổi heo vào thời điểm xuất chuồng Kết cho thấy kít có độ tin cậy đạt yêu cầu để xét nghiệm kháng thể kháng PCV2 mẫu huyết heo Việt Nam Hệ số biến động HGKT lần lặp lại mẫu huyết 1,99% Hệ số biến động nhóm HGKT cao, vừa thấp 5,09% Các kết nằm giới hạn cho phép (thấp 10%) đánh giá độ tin cậy quy trình ELISA Kết đánh giá đáp ứng heo vắc-xin cho thấy HGKT cao bắt đầu gia tăng vào giai đoạn sớm sau tiêm mũi HGKT cao vào thời điểm 75 ngày tuổi đạt 4531 Eu trại A 7585 Eu vào thời điểm 165 ngày tuổi trại B Tổng số bạch cầu trại A tăng cao vào thời điểm 75 ngày tuổi, trại B 42 ngày tuổi Trong đó, chủ yếu tăng mạnh bạch cầu đơn nhân, giảm bạch cầu trung tính bạch cầu lympho Kết khảo sát dịch phế quản – phổi vào thời điểm xuất chuồng cho thấy tế bào đơn nhân chiếm 64%, tế bào biểu mô chiếm 16% tế bào lympho chiếm 8% Các kết có khác biệt lơ đối chứng lơ thí nghiệm cho thấy heo tiêm vắc-xin có đáp ứng miễn dịch nhanh hiệu so với heo không tiêm ngừa iv ABSTRACT The project “Study the precision of ELISA kit for detecting anti-PCV2 antibodies and the responses to vaccine against post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) in pig” was carried out during 2/2011 – 12/2011 in two parts: (i) detection of anti-PCV2 antibodies in 525 pig-serum samples at two industrial farms in Binh Duong (fram A) and Dong Nai (farm B) by SERELISA® PCV2 Ab Mono Blocking kit (based on ELISA technique), from which, coefficient of variation (CV) of samples in triplicate, and that of three titer groups - high, medium and low, were calculated to assess the kit’s reliability; (ii) evaluation of the pig responses to vaccine against PMWS based on antibody titers, white blood cell formula in the timing of vaccine administration and cell components in bronchoalveolar lavage fluid (BAL) at slaughter age The study results demonstrated the kit were reliable to determine anti-PCV2 antibodies in pig serum in Vietnam Average CV of samples in triplicate were 1.99% Average CV of high, medium and low titer groups were 5.09% These results were within permissible limits (less than 10%) of ELISA technique The vaccine trials showed that antibody titers began to rise in the early days after the second dose The highest antibody titers reached 4531 Eu at 75 days old in farm A and 7585 Eu at 165 days old in farm B The total number of white blood cell was highest in farm A at 75 days old, in farm B at 42 days old, due mainly to increase of monocytes and decrease of neutrophils and lymphocytes BAL results at slaughter age showed that monocytes accounted for 64%, epithelial cells 16% and lymphocytes 8% The differences in results between control lot and experimental lot demonstrated the immune responses of vaccinated pigs were quick and effective than the non-vaccinated pigs v MỤC LỤC TRANG Trang tựa Trang chuẩn y Lý lịch cá nhân i Lời cam đoan .ii Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục vi Danh sách chữ viết tắt x Danh sách hình xii Danh sách biểu đồ xiii Danh sách sơ đồ xiv Danh sách bảng xv Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN 2.1 Hội chứng gầy còm heo sau cai sữa 2.1.1 Lịch sử phát bệnh 2.1.2 Dấu hiệu lâm sàng 2.1.3 Bệnh tích 2.1.3.1 Bệnh tích đại thể 2.1.3.2 Bệnh tích vi thể 2.2 Porcine circovirus 2.2.1 Đặc điểm cấu trúc porcine circovirus 2.2.1.1 Đặc điểm 2.2.1.2 Cấu trúc 10 vi 2.2.2 PCV2 hệ miễn dịch heo 12 2.2.2.1 Ảnh hưởng PCV2 lên tế bào hệ miễn dịch 12 2.2.2.2 Đáp ứng miễn dịch heo bệnh PMWS 13 2.2.3 Sinh bệnh học 15 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình phát triển bệnh PMWS 17 2.3 Chẩn đoán bệnh PMWS phát PCV2 18 2.3.1 Chẩn đoán bệnh PMWS 18 2.3.2 Các phương pháp phát PCV2 19 2.3.3 Phương pháp ELISA dùng phát PCV2 20 2.3.3.1 Phương pháp ELISA 20 2.3.3.2 ELISA dùng phát PCV2 23 2.3.3.3 Kít ELISA dùng đề tài 25 2.4 Kiểm sốt – Điều trị - Phòng bệnh PMWS 26 2.4.1 Kiểm soát bệnh 26 2.4.2 Điều trị 26 2.4.3 Phòng bệnh 26 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 31 3.2 Nội dung nghiên cứu 31 3.3 Đối tượng nghiên cứu 32 3.4 Phương pháp tiến hành 32 3.4.1 Thí nghiệm tiêm vắc-xin 32 3.4.2 Khảo sát độ tin cậy kít ELISA 33 3.4.2.1 Mục đích 33 3.4.2.2 Dụng cụ hóa chất mẫu khảo sát 33 3.4.2.3 Phương pháp thực 34 3.4.2.4 Các tiêu theo dõi cơng thức tính 37 3.4.3 Đánh giá hiệu giá kháng thể kháng PCV2 mẫu huyết heo thời điểm khác sau tiêm phòng vắc-xin 37 vii tiêm vắc-xin có đáp ứng miễn dịch nhanh hiệu so với heo không tiêm ngừa 65 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua tiêu khảo sát, đưa số kết luận sau: - Quy trình ELISA kít SERELISA® PCV2 Ab Mono Blocking có độ tin cậy đạt yêu cầu để xác định hiệu giá kháng thể kháng PCV2 mẫu huyết heo Việt Nam - Heo có đáp ứng miễn dịch tốt với vắc-xin Circumvent Hiệu giá kháng thể cao bắt đầu gia tăng vào giai đoạn sớm sau tiêm mũi Các tiêu sinh lý máu dịch phế quản phổi cao trì đến xuất chuồng cho thấy hoạt động tế bào bạch cầu hệ miễn dịch mạnh mẽ heo tiêm ngừa 5.2 Kiến nghị - Tiếp tục sử dụng kít quy mô số trại số mẫu lớn - Khảo sát độ tin cậy kít thực song song kít ELISA thương mại khác Việt Nam - Thực đánh giá tình trạng viêm nhiễm phổi với số lượng mẫu lớn vào giai đoạn khác - Thực xét nghiệm sinh học phân tử, kết hợp đánh giá lâm sàng mơ bệnh học để có đầy đủ sơ kết luận tình trạng nhiễm PCV2 bệnh PMWS 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Tiến Hà, 2008 Ghi nhận tình hình nhiễm, phân lập giám định Porcine Circovirus type (ORF2) heo số tỉnh thành phía Nam Luận văn thạc sĩ, Đại học Nông Lâm TpHCM Nguyễn Thị Thu Hồng, Phan Hoàng Dũng, Đặng Hùng, Nguyễn Tiến Hà Chris Morrissy, 2006 Bước đầu khảo sát tình hình nhiễm PCV2 đàn heo ni số tỉnh thành phía Nam Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y 3: 67-69 Lâm Thị Thu Hương, Đường Chi Mai Trần Hoàng Vũ, 2005 Bước đầu ghi nhận diện Porcine Circovirus type (ORF2) heo biểu còi số trại heo công nghiệp thành phố HCM vùng phụ cận Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp 2: 108-110 Trần Thị Dân Dương Nguyên Khang, 2006 Sinh lý vật ni Nhà xuất Nơng nghiệp TpHCM TIẾNG NƯỚC NGỒI Allan G.M., McNeilly F., Kennedy S., Daft B., Clarke E.G., Ellis J.A., Haines D.M., Meehan B.M and Adair B.M., 1998 Isolation of porcine circoviruslike viruses from pigs with a wasting disease in USA and Europe Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 10: 3-10 Antonio E.M and Segalés J., 2009 Characterization of immune responses to procine circovirus type (PCV2) infection and vaccination in pigs Universitat Autonoma of Barcelona, Bellaterra, 149 pages Bimczok D and Rothkother H J., 2006 Lymphocyte migration studies Veterinary Research 37: 325-338 Blanchard P., Mahe D., Cariolet R., Truong C., Dimma M L., Arnauld C., Rose N., Eveno E., Albina E., Madec F and Jestin A., 2003 An ORF2 proteinbased ELISA for porcine circovirus type antibodies in post-weaning multisystemic wasting syndrome Journal of Veterinary Microbiology 94: 183-194 67 Burch G.S.D., 2008 Porcine Circovirus Type Vaccines - An Update The Pig World, 10 Burch G.S.D, 2009 Control of PCV2-Associated Disease Through Vaccination International Pig Topic, 11 Carasova P., Celer V., Takacova K., Tryndova M., Molinkova D., Lobova D., Smola J., 2007 The levels of PCV2 specific antibodies and viramia in pigs Research in Veterinary Science 93: 274 – 278 12 Chae C., 2004 Postweaning multisystemic wasting syndrome: a review of aetiology, diagnosis and pathology The Veterinary Journal 168: 41–49 13 Chae C., 2005 A review of porcine circovirus 2-associated syndromes and diseases The Veterinary Journal 169: 326–336 14 Chang H.W., Jeng C.R and Pang V.F., 2003 Effects of porcine circovirus type and porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection, singular or combinated, on swine alveolar macrophages The 4th International Symposium on Emerging and Re-emerging Pig Diseases, June 29th – July 2nd, Rome 15 Chang H.W., Jeng C.R., Lin T.L., Lui J.J., Chiou M.T., Tsai Y.C., Chia M.Y., Jan T.T and Pang V.F., 2006 Immunopathological effects of porcine circovirus type (PCV2) on swine alveolar macrophages by in vitro inoculation Veterinary Immunology and Immunopathology 110: 207-219 16 Crowther J R., 2000 The ELISA guidebook 1st edition, Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, 150 pages 17 Fenaux M., Halbur P.G., Gill M., Toth T.E and Meng X.J., 2000 Genetic characterization of type porcine circovirus (PCV-2) from pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome in different geographic regions of north America and development of a differential PCR-Restriction fragment length polymorphism assay to detect and differentiate between Infections with PCV-1 and PCV-2 Journal of Clinical Microbiol 38: 24942503 18 Ganter M and Hensel A., 1997 Cellular variables in bronchoalveolar lavage fluids (BALF) in selected healthy pigs Research in Veterinary Science 63: 215-217 68 19 Harbeck R J., 1998 Immunophenotyping of bronchoalveolar lavage lymphocytes Clinical and diagnostic laboratory immunology 5: 271-277 20 Horner G.H., Tham K.M and Wilcox G., 2004 Porcine circovirus infection Australia and New Zealand Standard Diagnostic Procedures pages 1- 13 21 Jantafong T., BoonsoongnernA., Lekcharoensuk C., Wongnarkpet S., Poolperm P., Urairong K and Lekcharoensuk P., 2008 Association between PCV2 and production loss from PMWS in piglets In Proceedings, The 15th Congress of FAVA - OIE Joint Symposium on Emerging Disease, 27-30 October, Bangkok, Thailand, page 215-218 22 Ju C., Fan H., Tan Y., Liu Z., Xi X., Cao S., Wu B and Chen H., 2005 Immunogenicity of a recombinant pseudorabies virus expressing ORF1 – ORF2 fusion protein of porcine circovirus type Veterinary Microbiology 109: 179 – 190 23 L.T.T Huong, N.D Nhan, N.T.T Tinh and H.L Too, 2009 Evaluation of maternal antibody, PCV2 fecal shedding and post weaning groth performance in piglets born from sows vaccinated with circovac (merial) in Vietnam The Proceeding of the 4th Congress of Asian Veterinary Society., Ibaraki, Japan 26-28 October, 2009 24 Lin C.M., Jeng C.R., Chang H.W and Pang V.F., 2008 The susceptibility of swine lymphocytes to porcine circovirus type The Pig Journal < www.thepigsite.com/pigjournal> 25 Lefebvre D.J., Costers S., Doorsselaere V.J., Misinzo G., Delputte H and Nauwynck H J., 2008 Antigenic differences among porcine circovirus type strains, as demonstrated by the use of monoclonal antibodies Journal of General Virology 89: 177-187 26 Matue E A and Segalés J., 2009 Characterization of immune responses to porcine circovirus type (PCV2) infection and vaccination in pigs Univiersal Autonoma de Barcelona, Bellaterra, 55 trang 27 McNeilly F., Allan G.M., Foster J.C., Adair B.M and McNulty M.S., 1996 Effect of porcine circovirus infection on porcine alveolar macrophage function Veterinary Immunology and Immunopathology 49: 295-306 28 McKeown N E., Opriessnig T., Thomas P., Guenette D K., Elvinger F., Fenaux M., Halbur P G and Meng X J., 2005 Effects of porcine circovirus type 69 (PCV2) maternal antibodies on experimental infection of piglets with PCV2 Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 12: 1347 – 1351 29 Nawagitgul P., Morozov I., Bolin S.R., Harms P.A., Sorden S.D and Paul P.S., 2000 Open reading frame of porcine circovirus type encodes a major capsid protein Journal of General Virology 81: 2281-2287 30 Nawagitgul P., Harms P.A., Morozov I., Thacker B J., Sorden S.D., Lekcharoensuk C and Paul P.S., 2002 Modified indirect porcine circovirus (PCV) type 2-based and recombinant capsid protein (ORF2)-based enzymelinked immunosorbent assay dor detection of antubodies to PCV Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 9: 33-40 31 Opriessnig T., McKeown N.E, Zhou E.M., Meng X.J and Halbur P.G , 2006 Genetic and experimental comparison of porcine circovirus type (PCV2) isolates from cases with and without PCV2-associated lesions provides evidence for differences in virulence Journal of General Virology 87: 29232932 32 Opriessnig T.H:\file pdf\moi\hay.htm - FN150, Meng X.Z.H:\file pdf\moi\hay.htm FN150 and Halbur P.G.H:\file pdf\moi\hay.htm - FN150, 2007 Porcine Circovirus Type 2–associated disease: Update on current terminology, clinical manifestations, pathogenesis, diagnosis, and intervention strategies Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 19: 591-615 33 Patterson A R., Johnson J., Ramamoorthy S., Meng X J., Halbur P G and Opriessnig T., 2008 Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 10:744751 34 Potter M.L., 2009 Genetics influence growth rate response to porcine circovirus type (PCV2) Vaccines International Pig Topic, www.thepigsite.com 35 Psikal I., Kosinova E., Marcekova Z., Tesaril R and Bendova J., 2006 The Proceeding of the 19th IPVS Congress, Copenhagen, Denmark, Vol 2, pages: 82 36 Segalés J., Rodríguez J., Resendes A., 2005 Proc Intern Conf Animal Circoviruses and Associated Disease 37 Segalés J., 2009 Immunology against PCV2: What difference is there between a subclinically affected animal and an animal with porcine circovirus? 70 38 Suradhat D.V.M S., 2008 Immunology of PCV2 Faculty of Veterinary Science, Chulalongkorn University, Bangkok, Thailand 39 Thacker E L., 2006 Lung inflammotory responses Veterinary Research 37: 469-486 40 Timmusk S., Fossum C and Berg M., 2006 Porcine circovirus type replicase binds the capsid protein and an intermediate filament-like protein Journal of General Virology 87: 3215-3223 41 Tucker A.W and Donadeu M., 2006 Porcine multi-systemic wasting syndrome (PMWS): a review The Pig Journal < www.thepigsite.com/pigjournal> 42 Vicente J., Segalés J., Hofle U., Balasch M., Joan D., Domingo M and Gortázan C., 2004 Epidemiological study on porcine circovirus type (PCV2) infection in the European wild boar Veterinary Research EDP Sciences 35: 243–253 43 Walker I W., Konoby C A., Jewhurst V A., Nair I M., Neilly F M., Meehan B M., Cottrell T S., Ellis J A., Allan G M., 2000 Development and application of competitive enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of serum antibodies to porcine circovirus type Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 12: 400-405 44 Weingartl H.M., 2002 Porcine circovirus structure and replication: a minireview Journal of Agricultura 1:11-14 45 Wikström F.H., 2008 Interaction Between Porcine Circovirus type and the Immune System of the Pig Doctoral Thesis, Swedish University of Agricultural Sciences TỪ HỆ THỐNG INTERNET 46 ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay 47 Assay Validation 48 Elisa-Validation 71 72 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Hệ số biến động mẫu lặp lại OD OD OD Log Log Log Trung Lệch 100 1000 10000 OD100 OD1000 OD10000 bình chuẩn 7751 9723 9605 3.88935 3.98780 3.98249 3.95321 0,05537 1,40059 10159 7991 9905 4.00685 3.90260 3.99585 3.96843 0,05728 1,44336 5466 2400 2694 3.73767 3.38021 3.43039 3.51609 0,19353 5,50397 10224 9267 9003 4.00962 3.96694 3.95438 3.97698 0,02895 0,72804 10928 9433 9433 4.03854 3.97464 3.97464 3.99594 0,03689 0,92312 Mẫu CV trungbinh Sai số CV % 1,99982 1,15596 PHỤ LỤC Hệ số biến động nhóm hiệu giá kháng thể Hiệu giá kháng thể Log10 (Hiệu giá kháng thể) Lần Trung bình Độ lệch chuẩn CV (%) 1,49136 1,49136 1,48756 0,01799 1,20968 1,20412 1,30103 1,25527 1,27571 0,05953 4,66708 1,23044 0,77815 1,20412 1,11394 1,08166 0,20840 19,26678 3,49899 3,51693 3,50078 3,48029 3,49925 0,01499 0,42846 3,48072 2,33243 2,30749 2,32838 2,61226 0,57908 22,16778 3,45803 3,24919 3,44373 3,39967 3,38765 0,09559 2,82171 4,17609 4,17609 4,17609 4,17559 4,17596 0,00024 0,00589 4,17609 4,17609 4,17609 4,17609 4,17609 0 4,17609 4,17609 4,16808 4,17609 4,17409 0,00400 0,09590 1,20412 1,20412 1,17609 1,07918 1,16587 0,05928 5,08534 2,20139 2,32221 2,25042 2,21218 2,24655 0,05465 2,43268 3,30749 3,32919 3,30341 3,30599 3,31152 0,01190 0,35935 3,55254 3,50379 3,45954 3,50785 3,50593 0,03800 1,08401 3,51772 3,43759 3,49540 3,51547 3,49154 0,03734 1,06957 3,52504 2,40483 2,36548 2,42651 2,68046 0,56361 21,02678 4,17609 4,16990 4,17609 4,17609 4,17454 0,00309 0,07404 4,17609 3,39515 4,17609 4,17609 3,98085 0,39047 9,80868 4,17609 4,17609 4,17609 4,17609 4,17609 0 Mẫu Lần đầu Lần Lần Lần Lần đầu Lần Lần A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 29 22 17 3155 3025 2871 15000 15000 15000 16 159 2030 3569 3294 3350 15000 15000 15000 32 16 3288 215 1775 15000 15000 15000 16 210 2134 3190 2739 254 14788 2484 15000 31 20 16 3168 203 2778 15000 15000 14726 15 178 2011 2881 3129 232 15000 15000 15000 31 18 13 3022 213 2510 14983 15000 15000 12 163 2023 3220 3277 267 15000 15000 15000 1,46239 1,50515 1,34242 CV Trung bình (%) 5,0891 PHỤ LỤC Hiệu giá kháng thể trại A 14 Ngày tuổi Hàm lượng 42 ĐC TN 75 ĐC TN 168 ĐC TN ĐC TN Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % – 1000 13,33 0,00 14,14 49 81,67 11 57,89 13 23,21 7,69 11 35,48 1000 – 2000 6,67 0,00 27,59 10,00 36,84 12,5 0,00 12,9 2000 – 3000 6,67 6,67 31,00 6,67 5,26 10 17,9 15,4 6,45 3000 – 4000 20,00 20,00 13,79 3,33 0,00 8,93 0,00 9,68 4000 – 5000 13,33 0,00 3,45 1,67 0,00 8,93 0,00 9,68 5000 – 6000 0,00 6,67 0,00 0,00 0,00 3,57 7,69 9,68 6000 – 7000 0,00 6,67 0,00 0,00 0,00 0,00 7,69 3,22 7000 – 8000 13,33 6,67 0,00 1,67 0,00 0,00 7,69 0,00 8000 – 9000 13,33 13,33 0,00 0,00 0,00 3.57 7,69 6,45 9000 – 10000 0,00 6,67 0,00 0,00 0,00 5,36 7,69 0,00 10000 – 11000 0,00 13,33 0,00 0,00 0,00 3,57 23,78 0,00 11000 – 12000 0,00 6,67 0,00 0,00 0,00 1,78 7,69 3,22 12000 – 13000 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 13000 – 14000 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,78 7,69 0,00 14000 – 15000 13,33 13,3 0,00 0,00 0,00 8,93 0,00 3,23 TC 15 100 15 100 29 100 60 100 19 100 56 100 13 100 31 100 PHỤ LỤC Hiệu giá kháng thể trại B 21 Ngày tuổi Hàm lượng 42 ĐC TN Số Tỷ lệ Số mẫu % mẫu Tỷ lệ % 84 ĐC TN 165 ĐC TN ĐC TN Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % mẫu % – 1000 12 34,29 12 34,29 18 56,25 13 39,39 15 48,39 17,14 3,70 6,67 1000 – 2000 14,29 17,14 9,38 18,18 16,13 0,00 3,70 0,00 2000 – 3000 20,00 14,28 15,62 10 30,30 12,90 20,00 3,70 16,67 3000 – 4000 8,57 14,28 15,63 3,03 6,45 14,28 0,00 3,33 4000 – 5000 5,71 5,71 0,00 9,09 6,45 8,57 0,00 10,00 5000 – 6000 0,00 0,00 3,13 0,00 3,22 11,43 11,11 13,33 6000 – 7000 2,86 2,86 0,00 0,00 3,22 5,71 0,00 3,33 7000 – 8000 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,86 0,00 0,00 8000 – 9000 5,71 2,86 0,00 0,00 3,23 0,00 3,70 6,67 9000 – 10000 2,86 5,71 0,00 0,00 0,00 2,86 3,70 0,00 10000 – 11000 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,33 11000 – 12000 2,86 0,00 0,00 0,00 0,00 8,57 33,33 16,67 12000 – 13000 2,86 0,00 0,00 0,00 0,00 2,86 22,22 3,33 13000 – 14000 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 14000 – 15000 0,00 2,86 0,00 0,00 0,00 5,71 14,81 16,67 TC 35 100 35 100 32 100 33 100 31 100 35 100 27 100 30 100