CHỦ đề PHƯƠNG PHÁP LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHẨN ĐOÁN PHÂN TỬ VÀ LIỆU PHÁP GEN CHỦ ĐỀ PHƯƠNG PHÁP LOOP- MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION Người thực hiện: Vũ Hương Giang • Mục lục • Lịch sử phương pháp • Ngun lí phương pháp • Cơ chế • Kĩ thuật RT-LAMP • Ưu nhược điểm kĩ thuật LAMP • Kĩ thuật MB-LAMP • Liên hệ thực tế • Tài liệu tham khảo Lịch sử phương pháp LAMP 1.1 Giới thiệu chung 1.2 Nét đặc trưng 1.1 Giới thiệu chung • Phương pháp chuẩn đốn khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp-LAMP (là viết tắt từ Loopmediated isothermal amplification) phát triển Tsugunori Notomi cộng • Nghiên cứu đăng Nucleic Acids Research, tập 28, số 12, ngày 15 tháng năm 2000 Tsugunori Notomi Nguồn: https://www.eiken.co.jp/en/ company/officers.html •Loop-Mediated Isothermal Amplification có nghĩa khuếch đại DNA điều kiện đẳng nhiệt thông qua cấu trúc vịng hay móc •Phương pháp chẩn đốn LAMP phương pháp khuếch đại DNA có tính đặc hiệu, hiệu cao thời gian ngắn (109-1010 lần 15-60 phút ) cách tận dụng ưu điểm khuếch đại chuỗi Bst polymerase có khả thay mạnh loạt mồi thiết kế đặc biệt để nhận diện tồn trình tự cách xa DNA đích Nguồn:http://loopamp.eiken •Kĩ thuật kì vọng khuếch đại trình tự mục tiêu với độ co.jp/e/lamp/principle.html chọn lọc cao Nguyên nhân kĩ thuật LAMP phát minh? Nhược điểm PCR • u cầu tuần hồn nhiệt xác cao nên hạn chế sử dụng rộng rãi phòng khám tư nhân, bệnh viện dã chiến, Nhược điểm NASBA & 3SR • Khơng thể khuếch đại DNA mạch đơi khơng có bước biến tính ( sử dụng nhiệt độ tương đối thấp để khếch đại khoảng 40°C) Nhược điểm SDA • Tạo đoạn DNA rời rạc Một số đoạn DNA phụ thuộc vào vị trí Nicking 1.2 Nét đặc trưng phương pháp LAMP • Khơng cần biến tính DNA sợi kép thành sợi đơn • Tồn phản ứng khuếch đại diễn liên tục điều kiện đẳng nhiệt • Hiệu khuyếch đại cao Tổng chi phí giảm xuống • Bằng cách thiết kế đoạn mồi để nhận vùng riêng biệt, phương pháp LAMP khuếch đại gen mục tiêu cách cụ thể • Các sản phẩm khuếch đại có cấu trúc bao gồm lần lặp lại xen kẽ ngược lại với trình tự đích sợi • Q trình khuếch đại thực với khn mẫu RNA theo quy trình tương tự với khuôn mẫu DNA, bổ sung enzyme phiên mã ngược Ngun lí phương pháp • Nhiệt độ phản ứng: giai đoạn đầu 95°C, trình sau 65°C • Kích thước amplicon: