Nghiên cứu bổ sung các chất hợp chất hữu cơ vào môi trường nuôi cấy cho thấy kích thích sinh trưởng rễ tóc và tăng hàm lượng saponin trong rễ tóc sâm Ngọc Linh. Hướng đến mục đích không sử dụng chất điều hoà sinh trưởng. Đề tài sử dụng HPLC để phân tích dữ liệu.
KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT HỮU CƠ ĐẾN SỰ NHÂN NHANH SINH KHỐI VÀ TÍCH LŨY SAPONIN Ở RỄ TÓC SÂM NGỌC LINH (PANAX VIENAMENSIS HA ET GRUSHV.) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số ngành: TP HỒ CHÍ MINH BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu Luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực Luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn Luận văn rõ nguồn gốc Học viên thực Luận văn (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian làm việc học tập trường Đại học Công Nghệ TP.HCM Trung tâm Công Nghệ Sinh Học TP.HCM, giúp đỡ giảng dạy tận tình thầy cô, anh chị bạn bè Lời em xin chân thành gửi lời cám ơn đến Ban Giám Hiệu trường Đại học Công Nghệ TP.HCM, quý thầy cô giảng dạy Khoa Công nghệ sinh học Thực phẩm - Môi trường tất thầy cô truyền dạy kiến thức khoa học vô quý báu cho em suốt năm học vừa qua Em xin cảm ơn Ban Giám đốc Trung tâm Công Nghệ sinh Học TP.HCM tạo điều kiện sở vật chất, trang thiết bị hóa chất để em hoàn thành luận văn Đặc biệt em xin cảm ơn đến chị Hà Thị Loan Phó Giám đốc Trung tâm Công Nghệ Sinh Học TP.HCM người hướng dẫn suốt thời gian qua hỗ trợ, định hướng, quan tâm, giúp đỡ em đưa lời khuyên dạy điều tốt để em hồn thành tốt khóa luận Em xin gửi lời cám ơn đến chị Quyên, Trung Huy phòng Thực Nghiệm trồng nhiệt tình giúp đỡ giải vấn đề em gặp khó khăn trình học tập làm việc Trung tâm Xin bày tỏ lòng biết ơn đến anh Long môn dược liệu trường đại học Y dược TP.HCM bảo hướng dẫn em tìm kiếm phân tích số liệu tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành tốt đề tài Và cuối cùng, lời cảm ơn dành cho gia đình ln bên cạnh ủng hộ, động viên lúc khó khăn, người ln thương u theo sát bước đường khóa luận Đỗ Thị Mai Trinh TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát ảnh hưởng chất hữu đến nhân nhanh sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vienamensis Ha et Grushv.)” thực từ tháng năm 2019 đến tháng 11 năm 2019 Trung tâm Công Nghệ Sinh Học TP.HCM Trong nghiên cứu này, cụm rễ tóc sâm Ngọc Linh tạo thành từ việc lây nhiễm vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes ATCC 15834 từ dạng hoang dại vào cuống sâm Ngọc Linh, sử dụng nguồn vật liệu nhằm đánh giá ảnh hưởng chất hữu yeast extract, pepton, L-tyrosine casein hydrolysate lên khả tăng sinh khối tích lũy saponin - hợp chất chủ yếu định đến tác dụng dược lý đặc hiệu loài sâm Sau 60 ngày nuôi cấy, việc bổ sung chất hữu vào mơi trường ni cấy cho thấy kích thích sinh trưởng rễ tóc sâm Ngọc Linh làm gia tăng hàm lượng saponin Các cụm rễ tơ nuôi cấy mơi trường SH có bổ sung 60 g/L sucrose bốn chất hữu cho thấy diện G-Rg1, M-R2, V-R2, V-R1, G-Rb1, G-Rd G-Rg2 với hàm lượng khác phân tích HPLC Các thí nghiệm bố trí dịng rễ tóc sâm Ngọc Linh (dịng rễ số 5) Thí nghiệm ni cấy sinh khối nghiệm thức lặp lại lần, kết đề tài sau: Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng dịch chiết nấm men (Yeast extract) lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Cho thấy: Dịch chiết nấm men nồng độ 4,0 g/L cho saponin tổng số hàm lượng saponin cao so với nghiệm thức đối chứng Khi bổ sung nồng độ 4,0 g/L thích hợp cho tăng trưởng tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng pepton lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Kết cho thấy pepton không ảnh hưởng tăng sinh khối khơ có kích thích tổng hợp số saponin Saponin tổng số cao bổ sung pepton nồng độ 1,0 g/L Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng L-tyrosine lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Kết thí nghiệm cho thấy bổ sung L-tyrosine nồng độ 30 mg/L saponin tổng số đạt cao Khi bổ sung L-tyrosine thí nghiệm nồng độ 30,0 mg/L thích hợp cho tăng trưởng tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng casein hydrolysate lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Kết cho thấy bổ sung nồng độ casein hydrolysate kích thích tổng hợp số saponin, nhận thấy nồng độ 0,5 g/L thích hợp cho tăng trưởng tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh ABSTRACT The project "Investigation of the effects of organics substances on the rapid multiplication of biomass and and saponin accumulation of Panax vietnamensis Ha et Grushv hairy roots” were made from March to November 2019 at HCMC of Biotechnology Center In this research, In-vitro hairy roots of Panax vietnamensis were formed from the infection of Agrobacterium rhizogenes ATCC 15834 from wild type into the stem of Ngoc Linh ginseng leaves, was used as material for examining the effect of organics such as yeast extract, pepton, L-tyrosine and casein hydrolysate on the ability to grow and accumulate saponins - the most valuable chemical of this ginseng After 60 days of culture, supplementation one of these organics into culture medium can stimulate growth of hairy roots and increase the saponins content Hairy root which cultured on SH medium supplemented with 60 g/l sucrose and four organic substances show the presence of different ginsenoside include G-Rg1, M-R2, V-R2, V-R2, G-Rb1, G-Rd and G-Rg2 when tested with HPLC method Experiments were designed on hairy root lines (hairy root line 5) Each experiment was repeated times, the results were shown below: Experiment 1: Effect of yeast extract on stimulating growth and saponin accumulate on hairy root of Panax vietnamensis The total saponin content and amount of ginsenoside largest when supplemented g/L yeast extract The analysis showed that at concentration of yeast extract at 4,0 g/L was most suitable for stimulate growth and saponin acumulate on hairy root of Pannax Vietnamsis Experiment 2: Effect of pepton on stimulate growth and saponin accumulate on hairy root of Panax vietnamensis The results showed that peptones not affect dry biomass growth but stimulated the synthesis of some saponins supplementing pepton stimulate synthesis of many saponins Total saponin content highest at concentration 1,0 g/L pepton Experiment 3: Effect of L-tyrosine on stimulate growth and saponin accumulate on hairy root of Panax vietnamensis The results showed that the higher the concentration of L-tyrosine added in culture media, the higher the amount of saponin accumulate The analysis show that at concentration of L-tyrosine at 30,0 mg/L is most suitable for stimulate growth and saponin acumulate on hairy root of Pannax vietnamsis Experiment 4: Effect of casein hydrolysate on stimulate growth and saponin accumulate on hairy root of Panax vietnamensis The results showed that supplementing casein enhances synthesis of some saponins The analysis showed that at concentration of casein hydrolysate at 0,5 g/L have the highest effect MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT .iii ABSTRACT v MỤC LỤC vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT x DANH MỤC BẢNG .xi DANH MỤC HÌNH xiii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chi Panax 1.2 Giới thiệu sâm Ngọc Linh 1.2.1.Nguồn gốc lịch sử phát triển 1.2.2.Phân loại 1.2.3.Danh pháp khoa học 1.2.4.Đặc điểm hình thái 1.2.5.Phân bố 11 1.2.6.Thành phần hóa học 12 1.2.7.Tác dụng dược lý sâm Ngọc Linh 18 1.2.8.Tình hình nghiên cứu sâm Ngọc Linh phương pháp nuôi cấy mô giới Việt Nam 20 1.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy rễ tóc sâm Ngọc Linh 23 1.3.1.Nhiệt độ 23 1.3.2.Ánh sáng .24 1.3.3.Giá thể nuôi cấy 24 1.4 Elicitor kích kháng ni cấy in vitro .24 1.4.1.Khái niệm .25 1.4.2.Phân loại 25 1.4.3.Dịch chiết nấm men 26 1.4.4.Peptone 27 1.4.5.L-tyrosine .27 1.4.6.Dịch thủy phân casein (Casein hydrolysate-CH) 28 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Địa điểm thời gian thực đề tài nghiên cứu 30 2.2 Vật liệu nghiên cứu 30 2.2.1.Vật liệu 30 2.2.2.Hóa chất trang thiết bị thực thí nghiệm 31 2.2.3.Mơi trường nuôi cấy .32 2.2.4.Điều kiện thí nghiệm .32 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.4 Nội dung nghiên cứu .34 2.4.1.Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết nấm men (Yeast extract) lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 34 2.4.2.Khảo sát ảnh hưởng pepton lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) .35 2.4.3.Khảo sát ảnh hưởng L-tyrosine lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 36 2.4.4.Khảo sát ảnh hưởng casein hydrolysate lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 37 2.5 Phương pháp định lượng saponin sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 38 2.5.1.Tách chiết mẫu .38 2.5.2.Làm mẫu 38 2.5.3.Phân tích HPLC 41 2.5.4.Tính kết 42 2.6 Thống kê xử lý số liệu 43 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Ảnh hưởng dịch chiết nấm men (Yeast extract) lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) .44 [51] Moharrami et al (2017) ‘Effects of yeast extract on antioxidant activity and tropane alkaloids production in hairy roots cultures of Hyoscyamus reticulatus L.’ Iran J Med Aromat Plants, 33 (3), pp 466–479 [52] Długosz, Markowski, and Pączkowski (2018) ‘Source of nitrogen as a factor limiting saponin production by hairy root and suspension cultures of Calendula officinalis L.’ Acta Physiol Plant., 40 (2), pp 1–14 [53] Yu, Gao, and Paek (2000) ‘Improvement of ginsenoside production by jasmonic acid and some other elicitors in hairy root culture of ginseng (Panax ginseng C A Meyer)’ Vitr Cell Dev Biol - Plant, 36 (5), pp 424–428 [54] Zhou et al (2007) ‘Salidroside production by hairy roots of Rhodiola sachalinensis obtained after transformation with Agrobacterium rhizogenes’ Biol Pharm Bull., 30 (3), pp 439–442, 2007 [55] Putalun, Yusakul, and Patanasethanont (2009) ‘Dicentrine production from a hairy roots culture of Stephania suberosa Zeitschrift fur Naturforsch.’ - Sect C J Biosci., 64 (9–10), pp 692–697 [56] Kah Hong et al (2012) ‘Detection of elicitation effect on hyoscyamus niger L root cultures for the root growth and production of tropane alkaloids’ Rom Biotechnol Lett., 17 (3), pp 7340–7351 [57] Ghosh, Ghosh, and Jha (2006) ‘Aluminium chloride enhances colchicine production in root cultures of Gloriosa superba’ Biotechnol Lett., 28 (7), pp 497–503 PHỤ LỤC PHỤ LỤC A: MƠI TRƯỜNG NI CẤY Mơi trường SH (Schenk and Hildebrandt Including Vitamin, 1972) mg/L Macro Elements CaCl2.2H2O 200 KNO3 2500 MgSO4.7H2O 400 (NH)4H2PO4 Micro Element 300 CoCl2.6H2O 0,1 CuSO4.5H2O 0,2 FeSO4.7H2O 15,0 H3BO3 5,0 KI 1,0 MnSO4.H2O 10,0 Na2MoO4.2H2O 0,1 ZnSO4.7H2O 1,0 20,0 Na2EDTA Vitamins Myo-Inositol 1000,0 Nicotinic acid (Niaxin) 5,0 Pyridoxine HCl (Vitamin B6) 0,5 Thiamine HCl (Vitamin B1) 5,0 PHỤ LỤC B: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SỐ LIỆU BẰNG CHƯƠNG TRÌNH STATISTICAL ANALYSIS SYSTEMS 9.4 (SAS) Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng dịch chiết nấm men (Yeast extract) lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) KHOI LUONG TUOI CUA YEAST The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 375.4911700 93.8727925 7.71 0.0014 Error 15 182.5578500 12.1705233 Corrected Total 19 558.0490200 R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.672864 11.55825 3.488628 30.18300 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 375.4911700 93.8727925 7.71 0.0014 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 15 Error Mean Square 12.17052 Critical Value of t 2.13145 Least Significant Difference 5.2579 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean N T 36.100 Y5 33.358 Y4 29.583 Y3 28.425 Y2 23.450 Y1 A B A B B B B C C C KHOI LUONG KHO CUA YEAST The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 1.82243200 0.22780400 7.80 0.0003 Error 16 0.46722400 0.02920150 Corrected Total 24 2.28965600 R-Square Coeff Var Root MSE KLKHO Mean 0.795941 6.358255 0.170884 2.687600 Source DF KHOI NTHUC Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.06353600 0.01588400 0.54 0.7059 1.75889600 0.43972400 15.06 F Model 271.7835600 67.9458900 1.91 0.1858 Error 10 356.2320000 35.6232000 Corrected Total 14 628.0155600 R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.432766 21.60471 5.968517 27.62600 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 271.7835600 67.9458900 1.91 0.1858 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 35.6232 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 10.858 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean N T 32.570 P5 31.633 P4 27.420 P3 25.683 P2 20.823 P1 A B A B A B A B A B A B B KHOI LUONG KHO CUA PEPTON The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.19365600 0.04841400 0.75 0.5670 Error 20 1.28380000 0.06419000 Corrected Total 24 1.47745600 R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.131074 12.25370 0.253357 2.067600 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 0.19365600 0.04841400 0.75 0.5670 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 20 Error Mean Square 0.06419 Critical Value of t 2.08596 Least Significant Difference 0.3342 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 2.2160 P2 2.1200 P4 2.0100 P3 2.0100 P5 1.9820 P1 A A A A A A A A Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng L-tyrosine lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) KHOI LUONG TUOI CUA L-TYROSINE The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 12.59099000 2.51819800 0.80 0.5609 Error 24 75.59224000 3.14967667 Corrected Total 29 88.18323000 R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.142782 8.603931 1.774733 20.62700 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 12.59099000 2.51819800 0.80 0.5609 Duncan's Multiple Range Test for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 24 Error Mean Square 3.149677 Number of Means Critical Range 2.317 2.433 2.508 2.561 2.600 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping A Mean N NTHUC 21.6600 20.9740 20.8040 20.5460 5 20.2080 19.5700 A B A B A B A B A B A B A B A B B KHOI LUONG KHO CUA L-TYROSINE The ANOVA Procedure Dependent Variable: KLKHO Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.22825667 0.02536185 1.37 0.2641 Error 20 0.36944000 0.01847200 Corrected Total 29 0.59769667 R-Square Coeff Var Root MSE KLKHO Mean 0.381894 6.422038 0.135912 2.116333 Mean Square F Value Pr > F Source DF Anova SS KHOI 0.10468000 0.02617000 1.42 0.2647 NTHUC 0.12357667 0.02471533 1.34 0.2889 Duncan's Multiple Range Test for KLKHO Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 20 Error Mean Square 0.018472 Number of Means Critical Range 1793 1882 1939 1978 2007 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N NTHUC A 2.17600 2.17000 2.16800 2.10200 2.08600 5 1.99600 A A A A A A A A A A Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng Casein hydrolysate lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) KHOI LUONG TUOI CUA CASEIN The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 32.44181333 3.60464593 1.79 0.1328 Error 20 40.21750667 2.01087533 Corrected Total 29 72.65932000 R-Square Coeff Var 0.446492 6.776514 Root MSE KLTUOI Mean 1.418053 20.92600 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F KHOI 7.31525333 1.82881333 0.91 0.4774 NTHUC 25.12656000 5.02531200 2.50 0.0650 Duncan's Multiple Range Test for KLTUOI Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 20 Error Mean Square 2.010875 Number of Means Critical Range 1.871 1.964 2.023 2.064 2.094 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N NTHUC A 22.1300 21.7840 21.1720 20.9600 5 A B A B A B A C B A C B A C B C B C 19.8880 19.6220 C C KHOI LUONG KHO CUA CASEIN The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.38870000 0.04318889 1.15 0.3743 Error 20 0.74930000 0.03746500 Corrected Total 29 1.13800000 R-Square Coeff Var Root MSE KLKHO Mean 0.341564 9.926091 0.193559 1.950000 Mean Square F Value Pr > F Source DF Anova SS KHOI 0.12150000 0.03037500 0.81 0.5330 NTHUC 0.26720000 0.05344000 1.43 0.2577 Duncan's Multiple Range Test for KLKHO Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 20 Error Mean Square 0.037465 Number of Means Critical Range 2554 2680 2761 2817 2859 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping A Mean N NTHUC 2.0580 2.0580 A A A A 2.0060 1.8980 5 1.8460 1.8340 A A A A A A PHỤ LỤC C: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH HPLC ĐỊNH LƯỢNG CÁC SAPONIN DƯỚI TÁC ĐỘNG ĐƠN LẺ CỦA CÁC CHẤT HỮU CƠ TRONG NI CẤY RỄ TĨC SÂM NGỌC LINH Mẫu 0: Đối chứng 29.866 27.141 27.828 24.457 22.056 20.080 19.087 17.887 16.716 0.05 11.388 0.10 9.512 AU 0.15 28.689 0.20 0.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.871 27.160 27.853 24.494 19.162 18.001 16.801 13.714 0.10 11.495 AU 0.20 28.699 Mẫu Y1: Ảnh hưởng 0,1 g/l dịch chiết nấm men 30.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.876 27.163 27.847 24.487 19.126 17.918 11.463 0.10 16.744 0.20 9.540 AU 0.30 28.718 Mẫu Y2: Ảnh hưởng 0,2 g/l dịch chiết nấm men 30.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.876 28.703 27.161 27.838 24.489 23.176 22.061 19.110 16.721 13.629 11.423 0.10 9.521 AU 0.20 17.897 Mẫu Y3: Ảnh hưởng 0,3 g/l dịch chiết nấm men 30.00 29.873 27.163 27.835 24.483 22.080 19.125 16.794 0.20 18.017 0.40 11.331 AU 0.60 28.752 Mẫu Y4: Ảnh hưởng 0,4 g/l dịch chiết nấm men 0.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 12.00 16.00 Mẫu P2: Ảnh hưởng 0,2 g/l pepton 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.912 27.148 24.393 23.017 18.981 13.414 14.00 14.830 0.05 12.488 0.10 11.275 AU 0.15 21.970 17.727 0.20 28.700 Mẫu P1: Ảnh hưởng 0,1 g/l pepton 30.00 0.04 29.659 28.714 27.153 24.406 0.06 14.816 13.387 12.401 AU 0.08 17.698 0.10 0.02 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 Mẫu P3: Ảnh hưởng 0,3 g/l pepton 0.05 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.636 28.699 27.142 25.343 24.375 23.016 21.961 0.10 14.806 13.376 12.381 AU 0.15 18.945 17.695 0.20 30.00 0.05 12.00 14.00 16.00 18.00 24.395 23.000 21.965 0.10 13.397 12.392 AU 0.15 20.00 22.00 Minutes 27.145 17.705 0.20 24.00 28.706 Mẫu P4: Ảnh hưởng 0,4 g/l pepton 26.00 28.00 30.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.897 27.138 27.833 24.390 22.940 18.955 17.726 14.721 13.403 0.10 11.285 0.20 10.321 AU 0.30 28.720 Mẫu T1: Ảnh hưởng 2,0 mg/l L-tyrosine 30.00 Mẫu T2: Ảnh hưởng 5,0 mg/l L-tyrosine 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.855 27.105 27.799 24.328 23.051 21.941 18.963 17.846 13.493 11.284 0.10 10.370 AU 0.20 28.674 0.30 30.00 Mẫu T3: Ảnh hưởng 10,0 mg/l L-tyrosine 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 29.840 28.649 27.090 27.773 23.064 18.960 0.10 13.539 0.20 11.251 AU 0.30 24.308 17.920 0.40 30.00 29.823 28.621 24.260 18.946 17.967 15.001 13.554 11.210 0.10 10.420 AU 0.20 27.070 27.759 Mẫu T4: Ảnh hưởng 20,0 mg/l L-tyrosine 0.00 16.00 18.00 Mẫu T5: Ảnh hưởng 30,0 mg/l L-tyrosine 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 27.075 27.761 24.274 23.080 21.898 13.550 0.10 11.229 0.20 AU 0.30 18.954 18.015 0.40 24.00 26.00 Mẫu C1: Ảnh hưởng 0,1 g/l Casein hydrolysate 27.086 27.766 28.637 24.349 18.980 17.974 14.915 0.10 13.547 9.448 AU 0.20 11.187 0.30 28.00 30.00 29.826 14.00 30.00 29.826 12.00 28.644 10.00 0.00 -0.10 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 29.830 24.391 22.017 20.033 19.012 17.887 14.951 0.10 13.544 11.294 9.476 AU 0.20 27.101 27.788 28.654 Mẫu C2: Ảnh hưởng 0,3 g/l Casein hydrolysate 0.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 Minutes 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes 22.00 24.00 28.682 25.467 24.480 22.075 20.106 17.813 14.999 12.598 0.05 9.532 AU 0.10 13.587 Mẫu C3: Ảnh hưởng 0,5 g/l Casein hydrolysate 26.00 28.00 26.00 28.00 0.04 24.423 23.079 22.024 20.030 17.789 14.907 12.508 0.06 9.470 AU 0.08 13.499 0.10 28.650 Mẫu C4: Ảnh hưởng 0,7 g/l Casein hydrolysate 0.02 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 Minutes Mẫu C5: Ảnh hưởng 1,0 g/l Casein hydrolysate 22.00 24.00 30.00 ... lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) .35 2.4.3 .Khảo sát ảnh hưởng L-tyrosine lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax. .. lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 49 3.3 Ảnh hưởng L-tyrosine lên tăng sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis... ? ?Khảo sát ảnh hưởng chất hữu đến nhân nhanh sinh khối tích lũy saponin rễ tóc sâm Ngọc Linh (Panax vienamensis Ha et Grushv.)? ?? c Mục tiêu đề tài Mục tiêu tổng quát: Khảo sát ảnh hưởng chất hữu