Khảo sát ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật và một số chất hữu cơ trong nuôi cấy mô Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.. HỒ CHÍ MINH KHOA NÔNG HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KH O S T NH HƯ NG C A MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƯ NG THỰC VẬT VÀ MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA NÔNG HỌC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KH O S T NH HƯ NG C A MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƯ NG THỰC VẬT VÀ MỘT SỐ CHẤT HỮU

CƠ TRONG NUÔI CẤY IN VITRO

S M NG C LINH

(Panax vietnamensis Ha et Grushv.)

S v t ự : TH N TH MINH PHƯƠNG

Ngành: NÔNG H C Niên Khóa: 2007 – 2011

TP Hồ C í M , t á g 08/2011

KH O S T NH HƢ NG C A MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƢ NG THỰC VẬT VÀ MỘT SỐ CHẤT HỮU

CƠ TRONG NUÔI CẤY IN VITRO

T HCM á g 08 ă 2011

THÂN THỊ MINH PHƯƠNG

T g i 3: T g ế các c ỉ i e õi i ờ g MS c ổ g

thêm 1 mg BA/l v g c NAA ấ c ự ái i c ồi â Ngọc Li in

vitro S 60 g i cấ c ồi ái i c c iề c 25 33 v ạ ọ g g

M C L C

T g ự i

Lời cả ii

T iii

Mục ục v

D ác các c ữ viế viii

Danh ác các ả g ix

D ác các ả viii

C ƣơ g 1 M ĐẦU 1.1 Đ vấ ề 1

1.2 Mục c c 2

1.2.1 Mục c 2

1.2.2 Y c 2

1.3 Giới ạ ề i 3

C ƣơ g 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới i ổ g q về câ â Ngọc Li (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 4

2.1.1 P â ại â 4

2.1.2 Ng ồ g c â â Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 5

2.1.3 Đ c i ái â Ngọc Li (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 6

2.1.4 Đ c i i ái â â Ngọc Li (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 7

2.1.5 Giá ị c i v giá ị i ế củ â Ngọc Li (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 7

2.2 T ồ g â Ngọc Li ại Vi N 8

2.3 Mộ g i cứ về i cấ in vitro â Ngọc Li (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 10

2.3.1 S c về g á i cấ in vitro 10

2.3.2 Các g i cứ về i cấ in vitro â Ngọc Li 13

C ươ g 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PH P NGHIÊN CỨU 3.1 Nội g g i cứ 16

3.2 T ời gi v ị i g i cứ 16

3.3 V i g i cứ 16

3.4 Các g i iế 18

3.4.1 Thí nghi m 1: Khảo sát sự ả ởng của 2,4-D v TDZ ến sự tạo mô s o từ cu ng lá sâm Ngọc Linh in vitro 18

3.4.2 T g i 2: K ả á ả ở g củ ồ g ộ BA ế với ồ g ộ NAA ế ự ă g ở g i â Ngọc Li in vitro 19

3.4.3 T g i 3: K ả á ả ở g củ ồ g ộ BA ế với ồ g ộ NAA ế ự ái i c ồi â Ngọc Li in vitro 21

3.4.4 T g i 4: K ả á ả ở g củ ồ g ộ i â ớc ừ ế ự ă g ở g c ồi â Ngọc Li in vitro 23

C ươ g 4 KẾT QU VÀ TH O LUẬN 4.1 Thí nghi m 1: Ả ởng của 2,4-D v TDZ ến sự tạo mô s o của cu ng lá sâm Ngọc Linh in vitro 25

4.1.1 Ả ởng của 2,4-D và TDZ ến sự cảm ứng tạo mô s o từ cu ng lá sâm Ngọc Linh 25

4.1.2 Ả ởng của 2,4-D v TDZ ến trọ g g v ờng kính mô s o sâm Ngọc Linh 26

4.2 Thí nghi 2: K ả á ả ở g củ ồ g ộ BA ế với ồ g ộ NAA ế ự ă g ở g i â Ngọc Li in vitro 28

4.2.1 Ả ởng của nồ g ộ BA kết h p với nồ g ộ NAA ến sự ă g ờng kính phôi sâm Ngọc Linh 28

4.2.2 Ả ởng của nồ g ộ BA kết h p với nồ g ộ NAA ến trọ g g i

phôi sâm Ngọc Linh 29

4.3 Thí nghi 3: K ả á ả ở g củ ồ g ộ BA ế với ồ g ộ NAA ế ự ái i c ồi â Ngọc Li in vitro 31

4.3.1 Ả ởng của nồ g ộ BA kết h p với NAA ến sự tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro q các gi i ạn 31

4.3.2 Ả ởng của nồ g ộ BA kết h p với nồ g ộ NAA ến s lá/chồi tái sinh sâm Ngọc Linh in vitro 34

4.3.3 Ả ởng của nồ g ộ BA kết h p với nồ g ộ NAA ến chiều cao chồi tái sinh và trọ g g i c ồi tái sinh sâm Ngọc Linh in vitro 36

4.4 T g i 4: K ả á ả ở g củ ồ g ộ i â ớc ừ ế ự ă g ở g c ồi â Ngọc Li in vitro 39

4.4.1 Ả ởng của nồ g ộ i â ớc dừ ến sự ă g c iều cao chồi và trọ g ng chồi sâm Ngọc Linh 39

C ƣơ g 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGH 5.1 Kết lu n 42

5.2 Đề nghị 42

TÀI LIỆU THAM KH O 43

PH L C 1: GI TR CHUYỂN ĐỔI SỐ LIỆU 46

PH L C 2: KẾT QU XỬ LÝ THỐNG KÊ 49

EDTA : Ethylene Diamino Tetra Acetic Acid

IAA : Indole-3-Acetic Acid

DANH S CH C C B NG

Bả g 3.1 M i ờ g c ả MS (M ige v S g, 1962) 17

Bả g 4.1 Tỷ ạ â Ngọc Li q các gi i ạ 25

Bả g 4.2 Đ ờ g v ọ g g â Ngọc Li 30 g i cấ 26

Bả g 4.3 Đ ờ g i â Ngọc Li 60 g i cấ 28

Bả g 4.4 T ọ g g i g â Ngọc Li 60 g i cấ 30

Bả g 4.5 Tỷ ái i c ồi â Ngọc Li in vitro q các gi i ạ i cấ 32

Bả g 4.6 S á g /c ồi ái i â Ngọc Li q các gi i ạ i cấ 35

Bả g 4.7 C iề c c ồi ái i c ồi ái i â Ngọc Li 60 g i cấ 37

Bả g 4.8 T ọ g g i c ồi ái i â Ngọc Li 60 g i cấ 38

Bả g 4.9 C iề c c ồi v ọ g g c ồi â Ngọc Li 30 g i cấ 39

C g 1

M ĐẦU

1.1 Đ t vấ đề

Sâ Ngọc Li (Panax vietnamensis H e G v.) cò gọi â Vi N

â K Nă ( â K5) â úc câ c giấ L ại â q ý c ấ

ại iề g T g Bộ Vi N Sâ Ngọc Li ại â ứ 20 c ấ

ế giới - ộ g ữ g ại â c g i iề ấ g ự

V c giá ị i ế c â Ngọc Li ị i ác cạ i v ứ g ớc

g c c ủ g c ế ả g g ác ực v Vi N (1994)

Nă 2009 Sở Y ế Q ả g N c ủ g i ực 40.000 câ â Ngọc Li ừ ỉ úi Ngọc Li về các T C P ớc Lộc á i Tỷ câ g v á i ờ g ạ 80 Kế q ả các

g i ấ ừ â Ngọc Li i ực, do Trung tâm Ki g i c T ờ g Đại ọc Y D c TP.HCM i g i c ấ c ấ g g g ồ g với â g c ủ g ọc ự i ại vù g úi Ngọc Li (H g A , 2009)

C g g ă 2009 Vi D c i ạ ạ i ực 1.000 câ â Ngọc Li về ồ g ại T ạ g i cứ ồ g câ c T Đả v ỉ úi T i

T ị - i c ấ củ ỉ úi T Đả S ộ ă i ực ế vù g ấ

ới câ â i ở g v á i ấ ỷ g ạ 72 (Lâ Đ A , 2011)

Câ â c i â Ngọc Li ộ câ ồ g ấ i ở g

ấ c ộ ă c ỉ ă g ở g c 1 - 2 g c ấ Sâ ự i c ỉ ạc sau 7 ă ồ g Ng i câ â ấ gi g v â gi g Hạ â ấ

ải ộ ă ới ứ Tỷ ại ấ ấ c ỉ ả g 30 -

i cấ in vitro c c ục c ữ g ở gại củ iề i g ại cả ồ g

ời c ạ ộ g ớ câ gi g ồ g ề v ạc g ột ời

gi g Các c ấ iề ò i ở g ực v BA, NAA, TDZ, 2,4-D v các

- T e õi các c ỉ i về ự ă g ở g c ồi â Ngọc Li

1.3 G đề t

Đề i c ực i trong 4 tháng ừ á g 2/2011 ế á g 6/2011 V ời gian c ạ c ỉ c g i ạ ă g ở g phôi, ái i c ồi

v ự ă g ở g củ c ồi c ực i g i ạ v ạ câ c ỉ

C g 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 G t u tổ g u về ây sâ Ngọ L (Panax vietnamensis Ha et

Đ â (Salvia miltiorrhiza ọ L i ce e): c

B c â (Hibicus sagittifolius ọ M v ce e): ọc g v c ả

Điề ấ â â ( â ấ , Panax pseudoginseng ọ A i ce e)

Sâ N Bả (Panax japonicas ọ A i ce e)

Sâ H K (Panax quinquefolius): cò gọi â B c M , sâm Hoa K

c c i c á g i g ịc với â â c ấ

i (theo Albert leung, 1984)

Sâ Tâ Bá L i Á (Eleutherococcus senticosus ọ A i ce e): cò gọi

sâm Siberi, sâm Liên Xô

2.1.2 Nguồ gố , â ố sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)

- T ớc i c ự á i ừ các ọc â Ngọc Li c

các ồ g â ộc i g T g Bộ ụ g ộ ại củ ừ g c ữ

iề ại e các g ức cổ ề Nă 1973 Y ế g T g ộ

c cá ộ i iề á i câ â e ớ g c â úi Ngọc Li ộc

Đ c T - ỉ K T S iề g iế á i c ộ vù g â

ộ g ớ ộc Tâ úi Ngọc Li S 15 g g i cứ i về

ái i ái q q ạc â , i c v á á c Đ Ki L g

ác ị úi Ngọc Li q g củ câ â ới, c i q ý iế D c

Đ Ki L g ọc củ câ â Ngọc Li Panax articulatus

KL Dao

Nă 1979 T Y ế Q ả g N ổ c ức iề ở 5 củ T M với

ự giú củ Đại ọc Y D c T Hồ C Mi á i iề củ â

q ý c ổi ời 50 ă ổi c c câ ả g 82 ă ổi c củ v â

i Nă 1985 â Ngọc Li với ọc Panax

- Q ả v ạ : Q ả ọc g ở g â củ á i ả g 0 8 - 1 c

ộ g ả g 0 5 - 0 6 c S i á g c ừ ế

2.1.4 Đ đ ể s t á â sâ Ngọ L (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)

Câ â c á i ở ộ c ừ 1.200 ở c ới ới c ỉ á

i c â Ngọc Li ở K T v Q ả g N Sâ ọc g ới c â úi Ngọc Li ộ gọ úi c 2.578 m Sâm ọc c ủ ế ới á ừ g gi c g

ấ ấ v g á g i 50 c c ộ ù c i Sâ Ngọc Li c với c ờ g ộ á á g ế 1/3 á á g ờ g ọc

c ủ 8 ại ci i c iế c c ; 20 g vi g g c Fe M

C Se K v các ác g ci i (Đỗ H B c v cộ g ự, 2004)

T e ế q ả g iê cứ ừ ă 1978 củ Bộ Y ế g â củ Sâ Ngọc

Li c ứ 50 ạ c ấ g c 26 c ấ i c cấ úc á ọc

iế v 24 i c cấ úc ới g c g các ại â â ác ( g i

Sâ H Q c c ỉ c ả g 25 ại saponin) (T L Q â v cộ g ự 2001)

iề ấ ă g v ộ g ă g ớ g ác ụ g ức c ế ở iề c i với

i ; ă g i ực c g ại ự i giú ồi ục ức ực g ự â

â ; ă g ự c g i củ c ớc ữ g ấ i củ iề i i ờ g g; ác ụ g ả v ế giú ồi ục ồ g c ạc c ị giả ; ă g ội iế

i ục; á g vi ; iề ạ ộ g củ i ; ạ c e e á c g

vữ ộ g ạc ; giải ộc g v ác ụ g á g ấ i với S e c cc

gâ vi ọ g (Ng Mi Đức v cộ g ự 1999)

H c ấ ọc ạ g v ác ụ g ực i i với ức e củ c g ời

iế â Ngọc Li i c á ị ờ g với giá g c g c

c cò c â T iề Ti iề H ế ữ â Ngọc Li ộ ại

â q ý v iế ấ giá ị củ ị ờ g c g c c Giá

ă 90 giá â Ngọc Li cò â T iề Ti iề Vi c i ác

Đ ả v v á i câ c q ý cù g ộ câ c i ác, ại

ồ g g i ại vực ới ại Đ Lạ S ộ ă i ữ g

câ gi g v â Ngọc Li á c g i với iề i ổ

g củ Đ Lạ , tỷ câ g ạ á c (trên 75%) g ộ câ

củ (Hứ T i V g, 2010)

C ế c g ác i ục ại vù g ồ g â Ngọc Li ại K T

c g ạ c iề q ả Tổ g cộ g i c ồ g â Ngọc Li ạ

20 gồ củ ớc, g i â v củ ồ g â ộc i (T ả M , 2010)

2.3 Một số g ứu về uô ấy in vitro sâ Ngọ L (Panax vietnamensis Ha

et Grushv.)

2.3.1 Sơ ƣ về ƣơ g á uô ấy in vitro

2.3.1.1 Cơ sở ọ v g ủ uô ấy in vitro tr g ô g g

Cơ sở ọ ủ uô ấy in vitro:

2.3.1.2 Sơ ư về ột số ất đ ều ò s trưở g v á ất ữu ơ sử d ng trong ô trư g uô ấy

- A i : Tác ụ g i ý củ i c ủ ế ă g c củ ế c

c ự ự i ở g củ c ồi ự ụ g

ụ g q ả A i ạ các c ấ c â ( ei ce e ec i ) v gă

cả ự â giải c ú g A i c e e ực v q ọ g ấ v chúng có vai ò ấ c ả g q á i i ở g v i ế c

iế c ự á i ờ g củ ực v A i cù g với ộ c ấ iề

c ỉ ác ả ả c ự ạ i các ế g â c i c ực

v c ỉ T g i cấ ờ g ụ g các c ấ : I ce ic ci (IAA), Naphthyl acetic acid (NAA), 2,4-Dichlorphenol acetic acid (2,4D), Indol

ự v c c ấ i g v ữ g c ấ ữ c (Ng Mi C , 2004)

TDZ c ấ c cấ úc ộc c ấ e e c ạ gi g cytokinin (M v cộ g ự 1983; T v K e 1986) TDZ c ụ g

c â gi g ực v g q c ờ g á i c q v á i i

iề i g ực v ác (M i v S e 1992; Z v cộ g ự 1994) TDZ c c c cả ứ g v â c ồi cả i c ù g i g v i ù g ế với các c ấ iề ò ác Ở câ i á TDZ c ả ă g c c ạ

c ồi (M i v cộ g ự 1996; E e v cộ g ự 1998) T i vi c ụ g TDZ g â gi g ực v ộ á c á cá (D g Tấ N ự 2010)

- N ớc ừ : C ấ c ạ c g ớc ừ i c c ứ g i -i i ( -i i ) v ộ ci i ác T g ớc ừ c c ứ 0 05

i ; 0 56 ci ic; 0 25 K i; 0 69 c ci i ; 0 59 g e i i v nhiề ác ờ g (T Vă Mi , 1994) T e Ng Đức

L g v L T ị T ủ Ti (2006), – i i c c ứ g i c c ự

i ở g củ ế i ực v

- K i â : Đ c ổ g v i ờ g i cấ ộ ữ

c T g g 100 g i â c : hydratcabon 19 g ( g c 15 g i ộ ; 2,2 g c ấ ); 0 1 g c ấ ; 3 g protein và 79 g ớc B cạ i â cò

c ứ vi c ấ i g giá ị c i về các vi i ( gồ vi i B1: 0 08 mg (8%), vitamin B2 0,03 mg (2%), vitamin B3 1,11 mg (7%), vitamin B6 (19%), vitamin

C 20 g (33 ) cù g với ữ g á g c ấ c i 12 g; 1 8 g; gi 23 mg; photpho 57 mg; kali 421 mg; natri 6 mg (T g Bú 2011)

2.3.2 Cá g ứu về uô ấy in vitro sâ Ngọ L

â Ngọc Li i ờ g MS c ổ g 3 mg NAA/l 30 g/ c e v 8 g/

g V i ờ g i c ự â i i c ở á ụ g g

i e c v i c â i i ờ g SH c ổ g 3 mg NAA/l, 30 g/l sucrose

ă g ý B g ộc q ề á g c ế ại Cục Sở ữ ạ giải ấ Hội g ị K

vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro” Đ ác ị i ờ g MS c ổ g 30 g

cc / 8 g g / 3 g 2 4D/ c ế q ả ừ củ v ấ ị

ấ 2 á g i cấ M i ờ g ă g i i ấ ị ả q ấ c

ự c ọ i ờ g W i e c ổ g 30 g succorse/l, 8 g agar/l, 3 mg NAA/l

Nă 2009 T g ọ T c H Đă g ă i iế v g i cứ

i ờ g SH c ổ g 1mg BA/l v 0,5 mg NAA/l, 50 g sucrose/l, 2 g

ạ / v c g iề i á á g LED 70 30

ấ 1000 cây sâm in vitro 6 á g ồ g g i vực v ờ c ấ c ộ

i ở g v á i với câ â Ngọc Li ồ g g ạ với ỷ

* Môi trư g uô ấy

* Cá ất đ ều ò s trưở g: BA, NAA, 2,4-D, TDZ củ g MECK

* Cá ất ữu ơ: khoai tây ớc ừ

3.4.1 Thí nghi m 1: Khảo sát sự ả ƣởng của 2,4-D v TDZ đến sự t o mô sẹo

từ cuống lá sâm Ngọc Linh in vitro

A1B4 A2B2 A2B1 A1B2 A1B1 A2B4 A2B3 A1B3

A2B4 A1B2 A2B2 A1B4 A2B1 A1B1 A1B3 A2B3

A2B3 A1B1 A1B3 A2B2 A2B4 A1B4 A1B2 A2B1

- C iề c c ồi g (m /c ồi): v g ứ 60 cấ Dù g giấ

c c i i i e c ấ ù g giấ cấ Đ c iề i c ồi ừ

â c ồi ái i ế c á

* C t u t d

- C iề c c ồi g (m /c ồi): v g ứ 30 cấ Dù g giấ

c c i i i e c ấ ù g giấ cấ Đ c iề i c ồi ừ

Ghi chú: Trong cùng một cột các giá trị trung bình không cùng ký tự thì khác biệt rất

có ý nghĩa trong thống kê (**: sự khác biệt ở mức α = 0,01)

ỷ 0 80 Ở ồ g ộ 2 mg/l MS 14 g i cấ ỷ ạ .là 0,56 Ở ồ g ộ 3 mg/l MS sau 28 g i cấ ỷ ạ là 0,33 v ự

ác i giữ các g i ức ấ c ý g g g ( ≤ 0,01)

Đ i với TDZ ỷ ạ ấ ấ c ấ ở ồ g ộ 0,1 mg/l MS với

ỷ ạ là 0,51 28 g cấ v ự ác i với các ồ g ộ TDZ khác ấ c ý g g g ( ≤ 0,01) Ở các ồ g ộ 0,2 mg/l MS và 0,3 mg/l

MS ỷ ạ ấ ấ v c i g ị ạc g v â TDZ c ác ụ g ạ ế 2 4-D ở ồ g ộ TDZ ạ ớ ấ (0,1 mg/l MS) ỷ ạ (0,51) v ấ ỷ ạ ở ồ g ộ 2 4-D ạ

ứ g ứ i (0,57 ở 2 mg 2,4-D/l MS) v ự ác i ác c ý g g

g ( ≤ 0,01)

T ại: T g i ờ g c ổ g 2 4-D c ác ụ g ạ ừ c g

á â Ngọc Li i ờ g c ổ g TDZ T g i ờ g MS c ổ sung 1 mg 2,4-D/l c ỷ ạ ấ

4.1.2 ƣở g ủ 2,4-D v TDZ đế trọ g ƣ g và đƣ g í ô sẹ sâm Ngọ L

Ghi chú: Trong cùng một cột các giá trị trung bình không cùng ký tự thì khác biệt rất

có ý nghĩa trong thống kê (**: sự khác biệt ở mức α = 0,01)

Từ ế q ả ả g 4.2 c ấ :

Về ờ g : Đ i với 2 4-D ồ g ộ c ớ ấ 1 g/

MS ( ờ g 15 33 ) i ă g ồ g ộ 2 4-D lên 2 mg/l MS và 3 mg/l MS ạ c ờ g v ự ác i giữ các ồ g ộ 2,4-D ấ c ý g g g (p ≤ 0,01) TDZ ạ ế 2 4-D ồ g

ộ TDZ ạ ớ ấ c g 0 1 g/ MS ( ờ g 10,00 mm)

g c ỉ g g với ồ g ộ 2 4-D c ớ ứ i ( ờ g 10,67 mm) K i ă g ồ g ộ TDZ 0 2 g/ MS và 0,3 mg/l MS c

Kế q ả ả g 4.3 c ấ :

M i ờ g MS c ổ g NAA c ả ở g ế ự ă g ờ g i v

ự ác i ấ c ý g về g g giữ i ờ g c ổ g 0 1 mg/l MS

và 0,5 mg/l MS (p ≤ 0,01) T g ấ i ờ g MS c ổ g 0 5 mg NAA/l ( ờ g i ạ 20,83 mm 60 g i cấ )

c ự ế giữ 2 mg BA/l MS với 0 1 mg NAA/l MS v i ờ g ế giữ 2

mg BA/l MS với 0 5 mg NAA/l MS ờ g i g c ự ác i g

g

T ại: i ờ g MS c ự ế giữ 1 mg BA/l và 0,5 mg NAA/l giúp

ă g ờ g i ấ v i ờ g ế giữ 1 mg BA/l và 0,1 mg NAA/l

NAA c ả ở g ế ự ă g ọ g g i i â Ngọc Li v ự

ác i ấ c ý g g g ( ≤ 0 01) NAA ở ồ g ộ 0 5 g/ MS cho

ọ g g i ớ ấ ( ọ g g i i g ạ 792,50 mg sau 60 ngày

i cấ )