Nghiên cứu sự hình thành synnema của isaria tenuipes (PECK ) samson bằng phương pháp lên men bề mặt luận văn tốt nghiệp đại học

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH -------------- TRỊNH THỊ MINH THÀNH NGHIÊN CỨU SỰ HÌNH THÀNH SYNNEMA CỦA Isaria tenuipes (PECK.) SAMSON BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN BỀ MẶT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NGÀNH: NÔNG HỌC Vinh – 2011 2 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH -------------- NGHIÊN CỨU SỰ HÌNH THÀNH SYNNEMA CỦA Isaria tenuipes (PECK.) SAMSON BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN BỀ MẶT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NGÀNH: NÔNG HỌC Người thực hiện : Trịnh Thị Minh Thành Lớp : 48K2 – Nông học Người hướng dẫn : PGS.TS. Trần Ngọc Lân Vinh – 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực, các số liệu được thu thập qua các thí nghiệm do bản thân tiến hành và chưa từng sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan các thí nghiệm để thu thập số liệu trong luận văn đã được chính bản thân tôi tiến hành tại phòng thí nghiệm Công Nghệ Sinh học Nông nghiệp, khoa Nông Lâm Ngư, trường Đại Học Vinh với sự đồng ý và hướng dẫn của PGS. TS Trần Ngọc Lân, giáo viên hướng dẫn và các kĩ thuật viên phụ trách phòng thí nghiệm. Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn gốc. Vinh, ngày 20 tháng 7 năm 2011 Tác giả Trịnh Thị Minh Thành 3 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu đề tài luận văn tốt nghiệp ngành kĩ sư Nông học, tôi đã nhận được nhiều sự giúp đỡ quý báu từ phía thầy cô, bạn bè, người thân. Với tấm lòng chân thành và sự biết ơn sâu sắc nhất, tôi xin được gửi lời cảm ơn đặc biệt tới PGS. TS. Trần Ngọc Lân, Th.S Nguyễn Thị Thúy, KS Trần Văn Cảnh, những người hướng dẫn tôi từ những bước đầu làm nghiên cứu khoa học, đã rất tận tâm và nhiệt tình hướng dẫn tôi suốt thời gian làm đề tài luận văn tốt nghiệp. Tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô giáo trong tổ bộ môn Bảo vệ thực vật, các giáo viên phụ trách, các kĩ thuật viên phòng thí nghiệm đã tạo mọi điều kiện về cơ sở vật chất cũng như sự hướng dẫn, giúp đỡ và góp ý kiến cho tôi trong suốt quá trình làm đề tài. Và tôi xin được chân thành cảm ơn những người thân trong gia đình, bạn bè đã động viên khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn này. Vinh, ngày 20 tháng 7 năm 2011 Tác giả Trịnh Thị Minh Thành 4 DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1. Thành phần loài Isaria tại VQG Pù Mát và Khu BTTN Pù Huống 23 Bảng 3.1. Đặc điểm hình thái của Isaria tenuipes trong tự nhiên và nhân tạo 33 Bảng 3.2. Khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt môi trường 35 Bảng 3.3. Ảnh hưởng của môi trường lỏng đến thời gian hình thành synnema 36 Bảng 3.4. Ảnh hưởng của thành phần môi trường đến sản lượng synnema 38 Bảng 3.5. Khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt theo thời gian 39 Bảng 3.6. Ảnh hưởng của khối lượng cơ chất đến thời gian hình thành synnema 40 Bảng 3.7. Ảnh hưởng của khối lượng cơ chất đến sự sản lượng Synnema 43 Bảng 3.8. Khả năng phát triển của sợi nầm trên bề mặt cơ chất theo thời gian 44 Bảng 3.9. Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến thời gian hình thành synnma 45 Bảng 3.10. Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến sản lượng synnema 47 Bảng 3.11. Ảnh hưởng của nguồn vi lượng đến khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt cơ chất 49 Bảng 3.12. Ảnh hưởng của nguồn dinh dưỡng bổ sung đến thời gian hình thành synnema 50 Bảng 3.13 Ảnh hưởng của nguồn dinh dưỡng bổ sung đến sản lượng synnema 51 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình Nội dung Trang Hình 1.1. Chu trình xâm nhiễm của nấm ký sinh côn trùng 07 Hình 1.2. Cơ chế xâm nhiễm của nấm ký sinh côn trùng 10 Hình 2.1 . Sơ đồ quy trình nghiên cứu sự hình thành synnema trên môi trường rắn nhân tạo 25 5 Hình 3.1. Mẫu vật, cấu trúc sinh bào tử và PDA của I. tenuipes 34 Hình 3.2 Khả năng phát triển sợi nấm trên bề mặt môi trường lỏng 35 Hình 3.3. Khả năng bao phủ của sợi nấm trên bề mặt môi trường 35 Hình 3.4. Thời gian sinh trưởng của synnema trên các môi trường lỏng 36 Hình 3.5. Các giai tăng trưởng synnema của I. tenuipes 37 Hình 3.6. Số synnema trên các môi trường lỏng 38 Sản lượng synnema trên môi trường lỏng 38 Hình 3.7. Synnema thu được trên môi trường lỏng 38 Hình 3.8. Khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt cơ chất 39 Hình 3.9. Ảnh hưởng của khối lượng cơ chất đế khả năng hình thành synnema 41 Hình 3.10. Các giai đoạn tăng trưởng của synnema 41 Khả năng bao phủ trên bề mặt môi trường 41 Sự phát triển của hệ sợi nấm 41 Khả năng phát triển mầm 41 Sự tăng trưởng của synnema 41 Hình 3.11. Ảnh hưởng của khối cơ chất đến sảnlượng synnnema 43 Hình 3.12. Synnema thu được trên các mức cơ chất khác nhau 43 Hình 3.13. Khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt cơ chất theo thời gian 44 Hình 3.14. Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến thời gian hình thành synnma 45 Hình 3.15. Kích thước của synnma 48 Sản lượng của synnema 48 Hình 3.16. Synnema thu được khi nuôi trong vật liệu nuôi khác nhau 48 Hình 3.17. Khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt cơ chất 49 Hình 3.18 Thời gian hình thành synnema 50 Hình 3.19 . Kích thước synnema 52 Sản lượng synnema Hình 3.20. Synnema thu được khi bổ sung nguồn vi lượng khác nhau 52 6 DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung bt Bào tử C Các bon C. Cordyceps CT Công thức Cv% Độ biến động của mẫu ĐTHT Đông trùng - Hạ thảo EPF Entomology Pathogenic Fungi - Nấm ký sinh côn trùng Lsd 0,05 Phương sai N Ni tơ PDA Potato Dextrose Agar PDB Potato Dextrose Broth VQG Vườn Quốc Gia MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Danh mục các bảng số liệu iii Danh mục các hình vẽ iv 7 Danh mục chữ cái viết tắt v MỞ ĐẦU 1 1. Lý do chọn đề tài 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 3 2.1. Mục tiêu tổng quát 3 2.2. Mục tiêu cụ thể 4 3. Đối tượng, phạm vi và nội dung nghiên cứu 4 3.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu 4 3.2. Phạm vi nghiên cứu 4 3.3. Nội dung nghiên cứu 4 4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 4 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 6 1.1. Nấm ký sinh côn trùng 6 1.1.1. Khái niệm 6 1.1.2. Chu trình sống và lây nhiễm của nấm ký sinh côn trùng 7 1.2. Lược sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng 11 1.2.1. Nghiên cứu về đa dạng sinh học và nguồn lợi nấm ký sinh côn trùng 11 1.2.2. Nghiên cứu nhân sinh khối nấm ký sinh côn trùng dược phẩm và làm thực phẩm chức năng 16 1.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng nấm Isaria Tenuipes 17 1.4. Tiềm năng và tình hình nghiên cứu Isaria tenuipes ở Việt Nam 22 CHƯƠNG II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1. Quy trình nghiên cứu 25 2.1.1. Quy trình nghiên cứu 25 2.1.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 26 2.2 Nguyên vật liệu 26 2.2.1. Trang thiết bị, vật tư, hoá chất 26 2.2.2 Chủng nấm và phương pháp thu thập, phân lập 26 2.2.2.1 . Chủng nấm 26 2.2.2.2 . Phương pháp phân lập và nuôi cấy 26 2.3. Phương pháp nhân nuôi synnema 28 2.3.1. . Thiết kế thí nghiệm 28 2.3.1.1 . So sánh các môi trường lỏng khác nhau 28 2.3.1.2 . So sánh khối lượng khác nhau trong vật chứa 28 2.3.1.3 . So sánh các loại vật liệu chứa 29 8 2.3.1.4 . So sánh các nguồn dinh dưỡng bổ sung khác nhau 29 2.4. Chuẩn bị môi trường 29 2.4.1. Giống gốc (trên đĩa PDA) 29 2.4.2. Nhân giống lỏng cho lây nhiễm 30 2.4.3. Chuẩn bị môi trường (cơ chất) rắn 31 2.5. Phương pháp thu thập và xử lý số liệu 31 2.5.1. Phương pháp thu chỉ tiêu 31 2.5.2. Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1. So sánh đặc điểm hình thái của I. tenuipes trong tự nhiên và nhân tạo 33 3.2. Ảnh hưởng của môi trường lỏng khác nhau đến sự hình thành synnema 34 3.2.1. Ảnh hưởng của môi trường lỏng đến khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt môi trường 34 3.2.2. Ảnh hưởng của môi trường lỏng đến thời gian hình thành synnema 36 3.2.3. Ảnh hưởng của thành phần môi trường lỏng đến sản lượng synnema 38 3.3. Ảnh hưởng của khối lượng cơ chất đến khả năng hình thành synnema 39 3.3.1. Ảnh hưởng của lượng cơ chất đến khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt 39 3.3.2 Ảnh hưởng của lượng cơ chất đến thời gian hình thành synnema 40 3.3.3 Ảnh hưởng của khối lượng cơ chất đến sản lượng synnema 42 3.4 Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến hình thành synnema 44 3.4.1 Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến khả năng phát triển sợi nấm trên bề mặt cơ chất 44 3.4.2. Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đên thời gian hình thành synnema 45 3.4.3 Ảnh hưởng của vật liệu nuôi đến sản lượng synnema 46 3.5 Ảnh hưởng của nguồn vi lượng đến sự hình thành synnema 49 3.5.1. Ảnh hưởng của nguồn vi lượng bổ sung vào cơ chất đến khả năng phát triển của sợi nấm trên bề mặt cơ chất 49 3.5.2. Ảnh hưởng của nguồn dinh dưỡng bổ sung đến thời gian hình thành synnema 50 3.5.3. Ảnh hưởng của nguồn dinh dưỡng bổ sung đến sản lượng synnema 52 3.6 Quy trình kỹ thuật sản xuất synnema của Isaria tenuipes VN1342 (Peck.) Samson 53 9 Một số hình ảnh sản phẩm thu được 57 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 Kết luận 58 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 I. Tài liệu tiếng Việt 59 II. Tài liệu tham khảo nước ngoài. 60 Phục lục 10