• Phương pháp chuẩn bị
Từ giống gốc trên môi trường thạch PDA, 5mm thạch sợi nấm cấy vào môi
trường lỏng PDB trong bình tam giác. Đem nuôi trên máy lắc tại 150v/p ở 25oC
• Cách tính nồng độ bào tử
Nồng độ bào tử nấm được xác định bằng buồng đếm hồng cầu. • Cấu tạo buồng đếm hồng cầu
- Đó là 1 lam kính dày (kích thước 7 cm x 3 cm x 0,5 cm), có 4 rãnh ngang và 1 rãnh dọc, có 225 ô vuông lớn. Trong đó có 25 ô lớn chính giữa được chia thành các ô vuông nhỏ (1 ô lớn có 16 ô nhỏ).
- Kích thước của mỗi ô nhỏ như sau: mỗi cạnh bằng 1/20 mm và sâu 1/10 mm. - Thể tích của 1 ô vuông nhỏ là: 1/20 x 1/20 x 1/10 = 1/4000 (mm3)
• Phương pháp đếm
- Đối với môi trường PDA lấy phần khuẩn lạc của nấm cho vào 1 cốc đong
nhỏ cùng với 10ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh khuấy để cho các bào tử hòa tan vào trong nước.
- Đối với môi trường lên men xốp: Lấy 1g hỗn hợp cơ chất môi trường cho vào cốc đong nhỏ với 10ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh đánh đều.
- Sau đó, dùng lưới lọc mịn (tấm lưới lọc của Nhật Bản) lọc hỗn hợp dung
dịch vừa pha chế để đảm bảo chỉ có bào tử được lọt qua. Nhỏ vào dịch lọc 1 - 2 giọt hỗn hợp gồm Tween 80 và cồn 960 với tỷ lệ 1 : 1, khuấy đều. Hỗn hợp này có tác dụng giúp ổn định các bào tử trong dịch lọc để đễ dàng cho việc đếm hơn.
- Nhỏ 1 giọt bào tử đã pha loãng lên buồng đếm, đậy lamen lên, dùng giấy thấm để thấm những dịch thừa xung quanh.
- Đặt buồng đếm lên kính hiển vi điều chỉnh kính hiển vi ở vật kính 40x. - Đếm số lượng bào tử trong 5 ô lớn, mỗi ô lớn có 16 ô nhỏ.
- Chọn 4 ô, ở 4 góc và một ô chính giữa buồng đếm (phương pháp 5 điểm chéo góc). Đếm 3 lần lấy giá trị trung bình.
• Công thức tính bào tử
- Cách tính bào tử trung bình: X = (a + b + c)/3
Trong đó: X : là giá trị trung bình của 5 ô vuông.
- Sử dụng 1 µl chất lỏng bào tử cho vào 25 ô vuông, số bào tử tập trung trong 1 ml sẽ là: c = X × 5 ×104 (đơn vị tính là bào tử)
- Cho n là số lần pha loãng và C là số bào tử tập trung trong nguồn gốc dung dịch:
C = c × n