Tính hiệu quả của kỹ thuật kích hoạt noãn trong thụ tinh ống nghiệm

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - NGUYỄN THỊ TRÀ MY TÍNH HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT KÍCH HOẠT NỖN TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành Công nghệ sinh học Thái Nguyên – 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ TRÀ MY TÍNH HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT KÍCH HOẠT NỖN TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM Ngành : Công nghệ sinh học Mã số ngành: 84.20.20.1 LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành Công nghệ sinh học Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS DƯƠNG VĂN CƯỜNG Thái Nguyên -2020 i LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu đề tài “ Tính hiệu kỹ thuật kích hoạt nỗn thụ tinh ống nghiệm” trung thực, hồn toàn thực Khoa Hỗ trợ sinh sản – Bệnh viện A Thái Nguyên Ngoài ra, báo cáo có sử dụng số nguồn tài liệu tham khảo trích dẫn rõ ràng phép cơng bố Em xin hồn tồn chịu trách nhiệm tính trung thực nội dung khác đề tài Học viên ii LỜI CẢM ƠN Trong q trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp, em nhận giúp đỡ nhiều mặt cấp lãnh đạo, tập thể cá nhân Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến giáo viên hướng dẫn PGS.TS Dương Văn Cường ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt q trình thực hồn thành luận văn Em xin bày tỏ lời cảm ơn đến Bệnh viện A Thái Nguyên, Khoa Hỗ trợ sinh sản cán bộ, quý đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu Cuối em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng 11 năm 2020 Học Viên iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG .vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ .viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN ix MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài .1 Mục tiêu nghiên cứu 2.1 Mục tiêu chung 2.2 Mục tiêu cụ thể 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn .3 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cở sở khoa học vấn đề nghiên cứu 1.1.1 Thụ tinh tự nhiên 1.1.2 Tiếp xúc màng suốt 1.1.3 Phản ứng cực đầu .5 1.1.4 Xuyên màng suốt .7 1.1.5 Sự hòa nhập tinh trùng noãn 1.1.6 Hoạt hóa nỗn iv 1.2.7 Phản ứng vỏ chế ngăn chặn đa thụ tinh 10 1.2.8 Sự hình thành hòa nhập hai tiền nhân 11 1.2 Thụ tinh ống nghiệm 12 1.2.1 Kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) 12 1.2.2 Hoạt hóa nỗn nhân tạo 16 1.3 Tổng quan kết nghiên cứu Việt Nam giới 17 CHƯƠNG .19 ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 19 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 2.3 Trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 19 2.3.1 Trang thiết bị .19 2.3.2 Dụng cụ .19 2.3.3 Hóa chất nghiên cứu 20 2.4 Nội dung nghiên cứu 20 2.5 Phương pháp 20 2.5.1 Phương pháp kích hoạt noãn 20 2.5.2 Các phương pháp đánh giá 20 2.5.3 Phương pháp thu thập số liệu 25 2.5.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 2.6 Quy trình 26 2.6.1 Chuẩn bị 26 2.6.2 Thực 26 CHƯƠNG .28 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Đánh giá ảnh hưởng phương pháp hoạt hóa noãn đến tỉ lệ thụ tinh sau ICSI 28 v 3.2 Đánh giá ảnh hưởng phương pháp hoạt hóa nỗn đến chất lượng phơi hữu dụng ngày 30 3.3 Đánh giá ảnh hưởng phương pháp hoạt hóa nỗn đến tỉ lệ lên phôi ngày chất lượng phôi ngày 34 3.4 Đánh giá ảnh hưởng phương pháp hoạt hóa nỗn đến tỉ lệ có thai 39 KẾT LUẬN 41 KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt LH AOA Ca2+ cAMP DNA EBP GVBD hCG ICM ICSI IP3 IVF MAPK mRNA NF OAT PESA PPIP2 PLCζ RNA TE WHO ZP 45 sperm acquisition of fertilizing capacity and acrosome reaction”, Frontiers in Bioscience, 5, pp 110-123 [17] Evangelos G Papanikolaou, Elke D’haeseleer, Greta Verheyen, Hilde Van de Velde, Michael Camus, Andre Van Steirteghem, Paul Devroey, Herman Tournaye (2005), “Live birth rate is significantly higher after blastocyst transfer than after cleavage-stage embryo transfer when at least four embryos are available on day of embryo culture A randomized prospective study”, Human Reproduction, 20 (11), pp 3198 - 3203 [18] Figueira R., Selti A., Baraga D et al (2010), “Blastomere multinucleation: Contributing factors and effects on embryo development and clinical outcome, [19] Frauke Vanden Meerschaut, Dimitra Nikiforaki, Bjoărn Heindryckx, Petra De Sutter (2014), “Assisted oocyte activation following ICSI fertilization failure”, [20] French DB., Sabanegh ES., Goldfarb J and Desai N ( 2010 ), “Does severe teratozooospermia affect blastocyst formation , live birth rate and other clinical outcome parameters in ICSI cycles ?”, Fertil Steril , 93, pp 1097-1103 [21] Gardner D., Lan M and Schoolcraft W ( 2000 ), “Culture and transfer of viable blastocyst , a feasible proposi tion for human IVF”, Hum Reprod , 6, pp 9-23 [22] Heytens E., Gerris J., Dhont M., De Sutter P., Parrington J., Young C., Coward K., Lambrecht S., Deforce D., Cuvelier C (2008), “First evidence of distribute expression of the oocyte-activating factor PCLζ in globozoospermic men”, Hum Reprod, 23, pg 103 [23] Jones, K.T., (2005), “Mammalian egg activation: from Ca2+ spiking to cell cycle progression”, Reproduction, 130, pp 813-823 [24] Machaty Z (2016), “Signal transduction in mammalian oocytes during fertilization”, Cell Tissue Res, 363(1), pp 169–183 46 [25] Machaty Z., Miller AR., Zhang L (2017), Egg activation at fertilization, Adv Exp Med Biol, 953, pp.1–47 [26] Mansour R., Fahmy I., Tawad N., Kamal A., El-Demery J., Aboulghar M., et al (2009), “Electrical activation of oocytes after intracytoplasmic sperm injection: a controlled randomized study”, Fertil Steril, 91, pp 133-139 [27] Miller N., Biron-Shental T., Sukenik-Halevy R., Klement A H., Sharony R and Berkovitz A (2016), "Oocyte activation by calcium ionophore and congenital birth defects: a retrospective cohort study", Fertil Steril, 106(3), pp 590-596 [28] Mohammad HN, Shahnaz R, Zeinab J and Marziyeh T (2008), “Artificial oocyte activation in severe teratozoospermia undergoing intracytoplasmic sperm injection”, Fetil Steril, 90 (6), pp 2231-2337 [29] Murugesu, S., S Saso, B P Jones, T Bracewell-Milnes, T Athanasiou, A Mania, P Serhal and J Ben-Nagi (2017), "Does the use of calcium ionophore during artificial oocyte activation demonstrate an effect on pregnancy rate? A meta-analysis", Fertil Steril, 108(3), pp 468-482 [30] Nagy Z.P., Liu J., Joris H et al (1995), “The result of intracytoplasmic sperm injection is not related to any three basic sperm parameters”, Hum Reprod, 10, pp 1123-1129 [31] Nasr-Esfahani, M.H., Deemeh, M.R., and Tavalaee, M (2010), “Artificial oocyte activation and intracytoplasmic sperm injection”, Fertil Steril., 94, pp 520–526 [32] Neri QV., Lee B., Rosenwaks Z., Machaca K., Palermo GD 2014 Unders tanding fertilization through intracytoplasmic sperm injection (ICSI) Cell Calcium 55:24–37 [33] Niakan K, Han J, Roger A et al (2012), “Human pre-implantation embryo development”, Development, 139, pp 829-841 47 [34] Okuyama N., Takeuchi T., Aono N., Oka N., ObataR., Yanagihori S., Okuda T., Kyono K (2015), “Impact of assisted oocyte activation on morphokinetics of early human embryos”, Fertil Steril, 114(3), pp 303-304 [35] Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., and Van Steirteghem, A.C (1992), “Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte”, Lancet, 340, pp 17–18 [36] Palermo, G.D., Neri, Q.V., Takeuchi, T., and Rosenwaks, Z (2009), “ICSI: where we have been and where we are going”, Semin Reprod Med., 27, pp 191– 201 [37] Şafak Hatırnaz, Mine Kanat Pektaş (2017), “Day embryo transfer versus day blastocyst transfers: A prospective randomized controlled trial”, Turk J Obstet Gynecol, 14(2), pp 82–88 [38] Salicioni, A.M et al., (2007), “Signalling pathways in- volved in sperm capacitation”, Soc Reprod Fertil Suppl, 65, pp.245-259 [39] Saunders, C.M., Larman, M.G., Parrington, J., Cox, L.J., Royse, J., Blayney, L.M., Swann, K., Lai, F.A (2002), “PLC zeta: a sperm-specific trigger of Ca(2+) oscillations in eggs and embryo development”, Development, 129, pp 3533-3544 [40] Scott L.A (2000), “Oocyte and embryo polarity”, Seminars in Reproductive Medicine, 18, pp 171-183 [41] Seda Karabulut , Özlem Aksünger, Can Ata, Yusuf Sağıroglu, İlknur Keskin (2018), “Artificial oocyte activation with calcium ionophore for frozen sperm cycles”, Syst Biol Reprod Med, 64(5), pp 381-388 [42] Sermondade N, Hafhouf E, Dupont C, Bechoua S, Palacios C, Eustache F, Sifer C (2011), “Successful childbirth after intracytoplasmic morphologically selected sperm injection without assisted oocyte activation in a patient with globozoospermia”, Hum Reprod, 26, pp 2944–2949 [43] Speroff L., Fritz MA (2005), “Clinical gynecologic endocrinology and Intertility”, Lippincott Williams and Wilkins, 7, pp 233-258 48 Steptoe PC , Edwards RG ( 1978 ), “Birth after the preimplantation of a human embryo”, Lancet, 2, pp 366 [44] [45] Suh BC, Hille B., (2005), “Regulation of ion channels by phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate”, Curr Opin Neurobiol, 15(3), pp 370-378 [46] Swain JE, Pool TB (2008), ART failure: oocyte contributions to unsuccessful fertilization, Hum Reprod Update, 14, pp 431–446 [47] Takisawa T., Sato Y., Tasaka A., Ito Y., Nakamura Y and Hattori H (2011), “Effect of oocyte activation by calcium ionophore A23187 or strontium chloride in patients with low fertilization rates and follow-up of babies”, Fertileand Steril, 96 (3) [48] Taylor SL, Yoon SY, Morshedi MS, Lacey DR, Jellerette T, Fissore RA, Oehninger S (2010), “Complete globozoospermia associated with PLC deficiency treated with calcium ionophore and ICSI results in pregnancy”, Reprod Biomed Online, 20, pp 559–564 [49] Tosti E & Ménézo Y (2016), “Gamete activation : ba- sic knowledge and clinical applications”, 22(4), pp 420- 439 [50] Tosti, E & Boni, R (2004), “Electrical events during gamete maturation and fertilization in animals and hu- mans”, Human Reproduction Update, 10(1), pp 53-65 [51] Thorir Hardarson, Gunilla Caisander, Anita Sjögren, Charles Hanson, Lars Hamberger, Kersti Lundin (2003), “A morphological and chromosomal study of blastocysts developing from morphologically suboptimal human pre‐embryos compared with control blastocysts”, Human Reproduction, 18(2), pp 399-407 Vanden Meerschaut F., Dimitra Nikiforaki, Bjoărn Heindryckx *, Petra De Sutter (2014), “Assisted oocyte activation following ICSI fertilization failure”, [52] Vanden Meerschaut F., Nikiforaki D., De Roo C., Lierman S., Qian C., Schmitt-John T., De Sutter P., Heindryckx B (2013), “Comparison of pre and [53] 49 post implantation development following the application of three artificial activating stimuli in a mouse model with round headed sperm cells deficient for oocyte activation”, Hum Reprod, 28(5), pp 1118–1190 [54] Vanden Meerschaut, F., L Leybaert, D Nikiforaki, C Qian, B Heindryckx and P De Sutter (2013), "Diagnostic and prognostic value of calcium oscillatory pattern analysis for patients with ICSI fertilization failure", Hum Reprod, 28(1), pp 87-98 [55] Vanden Meerschaut, F., Nikiforaki, D., De Gheselle, S., Dullaerts, V., Van den Abbeel, E., Gerris, J., Heindryckx, B., and De Sutter, P (2012), “Assisted oocyte activation is not beneficial for all patients with a suspected oocyte-related activation deficiency”, Hum Reprod., 27, pp 1977-1984 [56] Vergouw C, Nofal M, Kostelijk H et al (2013), “The association of the blastomere volume index (BVI), the blastomere symmetry index (BSI) and the mean ovality (MO) with ongoing implantation after single embryo transfer”, Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 30(4), pp 587-592 [57] World Health Organization (2010), WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen, [58] Yeste M, Jones C, Amdani SN, Coward K (2017), “Oocyte activation and fertilisation: crucial contributors from the sperm and oocyte”, Results Probl Cell Differ, 59, pp 213–239 50 PHỤ LỤC Xử lý số liệu phần mềm SPSS Tỉ lệ thụ tinh T-Test Group Statistics THUTINH KHONG TILE AOA Independent Samples Test Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed 51 Phôi ngày loại T-Test PHOIN3L1 KHONG tile AOA Independent Samples Test Equal variances assumed LOAI1 Equal variances not assumed Equal variances assumed LOAI1 Equal variances not assumed Equal variances assumed LOAI1 Equal variances not assumed 52 Phôi ngày loại T-Test Group Statistics PHOIN3L2 KHONG Tile AOA Independent Samples Test Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed 53 Phôi ngày loại T-Test Group Statistics PHOIN3L3 KHONG Tile AOA Independent Samples Test Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed Equal variances assumed Tile Equal variances not assumed 54 Tỉ lệ lên phôi ngày T-Test Group Statistics NUOIN5 KHONG PHOIN5 AOA Independent Samples Test Equal variances assumed PHOIN5 Equal variances not assumed Equal variances assumed PHOIN5 Equal variances not assumed Equal variances assumed PHOIN5 Equal variances not assumed 55 Tỉ lệ phôi lên ngày loại T-Test PHOIN5L1 KHONG TILE AOA Independent Samples Test Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed 56 Tỉ lệ phôi lên ngày loại T-Test PHOIN5L2 KHONG TILE AOA TILE Equal variances assumed Equal variances not assumed TILE Equal variances assumed Equal variances not assumed TILE Equal variances assumed Equal variances not assumed 57 Tỉ lệ phôi lên ngày loại T-Test PHOIN5L3 KHONG TILE AOA Independent Samples Test Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed Equal variances assumed TILE Equal variances not assumed 58 Tỉ lệ chuyển phơi có thai T-Test Group Statistics CHUYENPHOI KHONG THAI A0A Independent Samples Test Levene's Test for Equality of F Equal variances assumed THAI Equal variances not assumed Equal variances assumed THAI Equal variances not assumed Equal variances assumed THAI Equal variances not assumed ... 2PN 1.2 Thụ tinh ống nghiệm 1.2.1 Kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) Giới thiệu kỹ thuật ICSI Thụ tinh ống nghiệm (IVF – Invitro Fertilization) kết hợp noãn tinh trùng ống nghiệm. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ TRÀ MY TÍNH HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT KÍCH HOẠT NỖN TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM Ngành : Công nghệ sinh học Mã số ngành: 84.20.20.1 LUẬN VĂN... Đánh giá khả thụ tinh Sự thụ tinh đánh giá khoảng 16 sau ICSI Sự thụ tinh bình thường xác nhận diện nhân (PN) xuất thể cực thứ hai Sau dấu hiệu thụ tinh tế bào noãn quan sát, nỗn thụ tinh ni cấy