ỨNG DỤNG XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG CHUỖI NHẸ TRONG BỆNH LÝ TĂNG GAMMAGLOBULIN ĐƠN DỊNG TS.BS Vũ Đức Bình Viện Huyết học-Truyền máu Trung ương Cấu trúc chức Immunoglobulin (Ig) • Phân tử immunoglobulin chứa chuỗi nặng chuỗi nhẹ • Chuỗi nặng xác định loại Ig: alpha (IgA), delta (IgD), epsilon (IgE), gamma (IgG), mu (IgM) • Chuỗi nhẹ kappa (κ) lambda (λ) IgG molecule: red = heavy chain blue = light chain • Mỗi tế bào plasma chuyên biệt sản xuất kháng thể chuyển biệt, nghĩa có chuỗi nặng chuỗi nhẹ chuyên biệt • Khi chuỗi nhẹ tăng nhẹ phát lưu hành thể dạng tự do, nghĩa dạng chuỗi nhẹ không liên kết để trở thành phân tử immunoglobulin toàn vẹn huyết tương 30-18-11582-01-76 Author | Department Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 250 2500 200 2000 150 1500 Huyết Nước tiểu 100 50 1000 500 10 11 12 Thời gian (tháng) http://www.specialtylabs.com/education/download_PDF/TN_1185.pdf 30-18-11582-01-76 Nước tiểu FLC (Mg/L) Huyết FLC (Mg/L) Chuỗi nhẹ tự (FLC) huyết so với nước tiểu Thay đổi huyết FLC nước tiểu / tăng kích thước khối u NR = Giá trị bình thường Author | Department Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Chuỗi nhẹ tự (FLC) vs Chuỗi nhẹ tồn phần (TLC) Trong máu/Huyết tương: • Lượng lớn chuỗi nhẹ có gắn kết chuỗi nặng + lượng nhỏ chuỗi nhẹ tự • Lượng chuỗi nhẹ có gắn kết 500-1000 lần so với FLC • Sự thay đổi lớn κ λ : tính tốn tỷ lệ κ/λ • FLC lọc thận, độ lọc cầu thận giảm -> tăng FLC Trong nước tiểu: • Có lượng nhỏ IgG (và chuỗi nhẹ gắn kết) • Nồng độ FLC phụ thuộc vào nồng độ huyết tương • Lượng nhỏ tương đương κ λ: tính toán tỷ lệ κ/λ 30-18-11582-01-76 Author | Department Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Chuỗi nhẹ tự (FLC) vs Chuỗi nhẹ tồn phần (TLC) • Xét nghiệm Chuỗi nhẹ tự FLC dùng để chẩn đoán bệnh lý gamma đơn dịng • Tuy nhiên, thường có nhầm lẫn FLC TLC • Xét nghiệm TLC xác định chuỗi nhẹ gắn kết với chuỗi nặng chuỗi nhẹ tự (unbound) • Có khác biệt lớn độ nhạy hai xét nghiệm • Xét nghiệm TLC phát chuỗi nhẹ tự nồng độ g/L, xét nghiệm FLC phát chuỗi nhẹ đơn dòng nồng độ theo mg/L -> Sự cải thiện độ nhạy quan trọng chẩn đoán theo dõi bệnh nhân MG *Monitoring claim for the Siemens Healthineers N Latex FLC Assay currently not FDA-cleared for the http://dx.doi.org/10.1016/j.bjhh.2015.11.003 30-18-11582-01-76 Author | Department Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Những yếu tố ảnh hướng đến nồng độ FLC FLC tăng κ/λ Tuổi κ/λ không bị ảnh hưởng Kích thích đa dịng κ/λ khơng bị ảnh hưởng Suy thận κ/λ ảnh hưởng nhẹ Bệnh lý gamma đơn dòng κ/λ bất thường Bệnh lý gamma đơn dịng • • • • Tăng FLC kappa FLC lambda Tỷ lệ κ/λ cao kappa MGs Tỷ lệ κ/λ thấp lambda myeloma non-involved light chain có thể: • Bình thường • Giảm ức chế tế bào B • Tăng nhẹ giảm chức thận 30-18-11582-01-76 Author | Department Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Các loại bệnh lý gamma đơn dòng 30-18-11582-01-76 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Bệnh lý gamma đơn dịng (MG) • Bệnh lý gamma đơn dịng • Rối loạn chức tế bào plasma • Tăng sinh đơn dòng tế bào plasma Myeloma Type • Hiện diện immunoglobulin đơn dịng • Hồn chỉnh (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD) • Khơng hồn chỉnh (LCD or HCD) • Rất hiếm: thể khơng tiết • Xuất M-protein paraprotein huyết và/hoặc nước tiểu • MG thể khơng triệu chứng (MGUS) Percent IgG 55% IgA 25% IgD 1–2% IgM 1% Light chain disease (LCD) 20% Heavy chain disease (HCD) Non-secretors IgE 100: ultra high risk Prognostic value of involved/uninvolved free light chain ratio determined by Freelite and N Latex FLC assays for identification of high-risk smoldering myeloma patients, Basile Henriot at al., Clin Chem Lab Med 2019 Slide 47 Unrestricted © Siemens Healthcare GmbH, 2020 Hướng dẫn IMWG: Tiêu chí đáp ứng điều trị cho bệnh MM AL với FLC Đáp ứng phần Đáp ứng hoàn toàn Đáp ứng hoàn toàn nghiêm ngặt Tiến triển Normal rFLC & CR by IFE & BM ND iFLC ↑ 50% (> 100 mg/L) Normal rFLC & CR by IFE & BM ↑ 50% dFLC No measurable disease1 AL iFLC ↓ 50% MM dFLC ↓ 50% Measurable disease1 MM Normal rFLC & CR by IFE & BM Measurable includes serum M-protein ≥ 10 g/L or a urine M-protein ≥ 200 mg/day for myeloma patients (100 mg/day for AL patients) iFLC – Involved FLC ; d FLC – Difference FLC International Myeloma Working Group guidelines for serum-free light chain analysis in multiple myeloma and related disorders, 10.1038/leu.2008.307 Slide 48 Unrestricted © Siemens Healthcare GmbH, 2020 Xét nghiệm N Latex FLC Kappa Lambda 30-18-11582-01-76 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Tiêu chí xét nghiệm FLC • Chính xác • Độ đặc hiệu cao • Dải đo rộng 10 g/L • Độ ổn định lô cao Cần thiết trường hợp theo dõi bệnh nhân thời gian dài 30-18-11582-01-76 Author | Department 50 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Xét nghiệm Siemens Healthineers N Latex FLC Kappa Lambda Đặc điểm • Xét nghiệm sử dụng kháng thể đơn dịng • Độ tái lập tốt lơ • Vượt ngưỡng kháng nguyên an toàn Tăng độ tin cậy • Kit xét nghiệm linh hoạt • Thuốc thử bổ sung, controls, thuốc thử chuẩn riêng biệt Sử dụng hiệu 30-18-11582-01-76 Author | Department 51 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Tính kỹ thuật N Latex FLC Siemens Healthineers N Latex FLC Assay Characteristics Hướng dẫn sử dụng Định lượng chuỗi nhẹ tự (FLC), kappa lambda mẫu huyết Đo FLC sử dụng để hỗ trợ chẩn đoán đa u tủy MM thối hóa tinh bột Ngun tắc xét nghiệm Kỹ thuật đo độ đục kháng thể đơn dòng Loại mẫu Serum, heparin, and EDTA plasma Dải tham chiếu FLC kappa: 8.24–28.9 mg/L FLC lambda: 9.1–32.6 mg/L FLC κ:λ ratio: 0.53–1.51 Dải đo ban đầu FLC kappa: 3.4–110 mg/L 1:100 FLC lambda: 1.9–60 mg/L 1:20 Dải đo tổng FLC kappa: 0.174 to ≥9000 mg/L FLC lambda: 0.470 to ≥6000 mg/L An toàn vượt kháng nguyên Độ ổn định hóa chất mở Tần suất calib FLC kappa: đến 23,000 mg/L FLC lambda: đến 57,000 mg/L tuần tuần Độ ổn định máy Tối thiểu ngày, 8h/ngày (tùy thuộc BN sử dụng) Thời gian 12 phút (bao gồm tiền phản ứng) Đóng gói Chất chuẩn, control, bổ trợ khơng phụ thuộc vào lô sử dụng cho xét nghiệm N Latex FLC kappa lambda 30-18-11582-01-76 Author | Department 52 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 Kết luận • Sử dụng xét nghiệm chuỗi nhẹ giúp cải thiện độ nhạy quy trình sàng lọc phát chẩn đốn đa u tủy thối hóa tinh bột AL • Bên cạnh xét nghiệm khác, xét nghiệm chuỗi nhẹ tự huyết cung cấp thông tin giá trị cho chẩn đoán bệnh nhân nghi ngờ mắc bệnh lý gamma đơn dịng • Sử dụng xét nghiệm chuỗi nhẹ tự để theo dõi đáp ứng điều trị sớm xét nghiệm khác điện di protein • Sử dụng tỷ lệ kappa/lambda giúp tiên lượng khả tiến triển ác tính bệnh gamma đơn dịng • Phương pháp đo độ đục nephelometry khuyến cáo sử dụng xét nghiệm chẩn đoán theo hướng dẫn ESMO, IMWG • Độ ổn định hóa chất theo lơ giúp dễ dàng đánh giá theo dõi bệnh nhân thời gian dài *Monitoring claim for N Latex FLC Assay currently not FDA-cleared for the U.S 30-18-11582-01-76 Author | Department 55 Unrestricted © Siemens Healthcare Diagnostics Inc., 2020 60 ... Chuỗi nhẹ tự (FLC) vs Chuỗi nhẹ toàn phần (TLC) • Xét nghiệm Chuỗi nhẹ tự FLC dùng để chẩn đốn bệnh lý gamma đơn dịng • Tuy nhiên, thường có nhầm lẫn FLC TLC • Xét nghiệm TLC xác định chuỗi nhẹ. .. Healthcare GmbH, 2020 Ứng dụng FLC huyết sàng lọc chẩn đốn định xét nghiệm chuỗi nhẹ tự đánh giá, quản lý bệnh đa u tủy bệnh tương bào liên quan (PCD) Tầm soát: Định lượng chuỗi nhẹ tự huyết kết hợp... Inc., 2020 Chuỗi nhẹ tự (FLC) vs Chuỗi nhẹ toàn phần (TLC) Trong máu /Huyết tương: • Lượng lớn chuỗi nhẹ có gắn kết chuỗi nặng + lượng nhỏ chuỗi nhẹ tự • Lượng chuỗi nhẹ có gắn kết 500-1000 lần so