ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA XÉT NGHIỆM HÀM LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐOÁN SỚM MANG THAI TRÊN BÒ KHÔNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CÔNG TY CỔ PHẦN BÒ SỮA ĐỒNG NAI docx

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA XÉT NGHIỆM HÀM LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐOÁN SỚM MANG THAI TRÊN BỊ KHƠNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHƠNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CƠNG TY CỔ PHẦN BỊ SỮA ĐỒNG NAI Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: TRẦN CAO THÁI Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC *********************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA XÉT NGHIỆM HÀM LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐỐN SỚM MANG THAI TRÊN BỊ KHÔNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CƠNG TY CỔ PHẦN BÒ SỮA ĐỒNG NAI Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS DƯƠNG NGUYÊN KHANG TRẦN CAO THÁI BSTY LÊ THỊ THU HÀ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm tạ:  Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Mơn Công Nghệ Sinh Học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho suốt trình học trường  TS.Dương Nguyên Khang tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành khố luận  Bác sỹ thú y Lê Thị Thu Hà tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt thời gian thực tập  Ban giám đốc Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt trình thực tập  Các bạn bè thân yêu lớp cơng nghệ sinh học khóa 28 chia xẻ vui buồn thời gian học hết lịng hỗ trợ, giúp đỡ tơi thời gian thực tập  Xin dâng tặng thành học tập lên ba mẹ, anh chị động viên hy sinh nhiều để có ngày hơm TPHCM ngày 05 tháng 09 năm 2007 Trần Cao Thái TÓM TẮT Đề tài: “Ứng dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đốn sớm mang thai bị khơng động dục phối nhiều lần không đậu điều trị kích thích tố Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai” tiến hành cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai Thời gian từ tháng đến tháng năm 2007 Số liệu ghi nhận 40 sữa sinh sản bình thường, bị sau sinh 90 ngày trở lên mà khơng có biểu động dục phối nhiều lần khơng đậu 30 bị sữa sau sinh khơng có biểu động dục phối nhiều lần không đậu điều trị PGF2α bị tồn hồng thể, tiêm Gonestrone bị u nang nỗn tiêm huyết ngựa chửa bò teo buồng trứng Tiến hành lấy mẫu sữa xét nghiệm hàm lượng progesterone kỹ thuật ELISA vào ngày 0, 7, 14, 21 24 sau phối Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa chẩn đốn tình trạng mang thai sớm bị có kết sau: + Hàm lượng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bị sinh sản bình thường dao động từ 0,52 đến 2,86 ng/ml Đối với nhóm bị có hàm lượng progesterone sữa thấp, hàm lượng progesterone sữa trung bình dao động từ 0,25 đến 0,60 ng/ml Tỷ lệ đậu thai 40% + Hàm lượng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bị tồn hồng thể dao động từ 0,74 đến 2,77 ng/ml Đối với nhóm có hàm lượng progesterone sữa thấp, hàm lượng progesterone sữa trung bình dao động từ 0,11 đến 0,95 ng/ml Tỷ lệ đậu thai 30% + Hàm lượng progestereone sữa trung bình theo nhóm cao bị u nang nỗn dao động từ 0,59 đến 2,48 ng/ml Đối với nhóm có hàm lượng progesterone sữa thấp, có hàm lượng progesterone sữa trung bình dao động từ 0,04 đến 0,29 ng/ml Tỷ lệ đậu thai 40% + Hàm lượng progesterone sữa trung bình theo nhóm cao bò teo buồng trứng dao động từ 0,24 đến 2,22 ng/ml Đối với nhóm có hàm lượng progesterone sữa thấp, có hàm lượng progesterone sữa trung bình dao động từ 0,06 đến 0,30 ng/ml Tỷ lệ đậu thai 30% MỤC LỤC TRANG Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Mục lục iv Danh sách hình vii Danh sách biểu đồ…………………………………………………………….vii Danh sách bảng ix Danh sách chữ viết tắt x Phần ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Chu kỳ sinh sản .3 2.1.1 Sự thành thục tính dục 2.1.2 Chu kỳ động dục bò .3 2.1.3 Các nhân tố ảnh hưởng đến chu kỳ động dục 2.2 Quá trình mang thai sinh đẻ 2.3 Các hormone điều hòa trình sinh sản 2.3.1 Các hormone sinh sản 2.3.2 Chức vùng đồi – tuyến yên – buồng trứng điều tiết chu kỳ động dục 2.4 Một số bệnh sinh sản gây chậm sinh bò sữa 10 2.4.1 Buồng trứng không hoạt động 10 2.4.2 U nang buồng trứng 11 2.4.3 Viêm buồng trứng 13 2.4.4 Viêm tử cung 13 2.5 Động thái progesterone chu kỳ động dục bình thường, mang thai số trường hợp rối loạn sinh sản 14 2.5.1 Động thái progesterone chu kỳ động dục bình thường 14 2.5.2 Động thái progesterone lúc mang thai 15 2.5.3 Động thái progesterone u nang noãn tồn hồng thể bị sữa 16 2.6 Các định ứng dụng xét nghiệm progesterone sữa 16 2.6.1 Xác nhận động dục 16 2.6.2 Chẩn đốn bị mang thai khơng mang thai 17 2.6.3 Bị có vấn đề sinh sản 17 2.6.4 Các chương trình cấy truyền phôi .18 2.7 Nguyên tắc xét nghiệm hàm lượng progesterone kỹ thuật ELISA .18 2.8 Các cơng trình nghiên cứu liên quan 19 2.8.1 Các nghiên cứu nước 19 2.8.2 Các nghiên cứu nước 19 2.9 Vài nét điểm thực tập 20 2.9.1 Sơ lược Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai 20 2.9.2 Tổ chức sản xuất 21 Phần NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 26 3.1 Thời gian, địa điểm đối tượng khảo sát 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.3 Vật liệu hóa chất 26 3.4 Phương pháp tiến hành .27 3.4.1 Bố trí điều trị bị khơng lên giống phối nhiều lần khơng đậu .27 3.4.2 Bố trí số mẫu sữa khảo sát 28 3.5 Kỹ thuật ELISA 30 3.6 Tính tốn kết hiệu kinh tế 32 3.7 Phương pháp xử lý số liệu 32 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Hàm lượng progesterone sữa trung bình bị sinh sản bình thường, bị tồn hồng thể, u nang nỗn teo buồng trứng 33 4.1.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị sinh sản bình thường 34 4.1.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị tồn hồng thể 35 4.1.3 Hàm lượng progesterone sữa bị u nang nỗn theo nhóm 37 4.1.4 Hàm lượng progesterone sữa bò teo buồng trứng theo nhóm 38 4.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm máu bị sinh sản bình thường, bị chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn teo buồng trứng 39 4.2.1 Hàm lượng progesterone sữa bị sinh sản bình thường theo nhóm máu 39 4.2.2 Hàm lượng progesterone bò tồn hồng thể theo nhóm máu 41 4.2.3 Hàm lượng progesterone bị u nang nỗn theo nhóm máu 43 4.2.4 Hàm lượng progesterone bò teo buồng trứng theo nhóm máu 44 4.3 Hàm lượng progesterone theo lứa đẻ bị sinh sản bình thường, bị chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn teo buồng trứng .46 4.3.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa .47 4.3.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa .48 4.3.3 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa .49 4.3.4 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa .50 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Đề nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 55 DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Sơ đồ 2.1 Mối quan hệ nội tiết tố trình sinh đẻ Hình 2.1 Hình thái u nang noãn buồng trứng 11 Hình 2.2 Diễn biến hình thành u nang noãn 12 Hình 2.3 Hình thái u hồng thể bị 12 Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng ELISA 18 Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng ELISA 18 Biểu đồ 2.1 Động thái progesterone chu kỳ động dục bình thường bị 14 Biểu đồ 2.2 Động thái progesterone giúp chẩn đốn sớm có thai 15 Biểu đồ 2.3 Động thái progesterone u nang nỗn u hồng thể bị sữa 16 DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị sinh sản bình thường .34 Biểu đồ 4.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị tồn hồng thể 35 Biểu đồ 4.3 Hàm lượng progesterone sữa bò u nang nỗn theo nhóm 37 Biểu đồ 4.4 Hàm lượng progesterone bị teo buồng trứng theo nhóm máu 38 Biểu đồ 4.5 Hàm lượng progesterone sữa bò sinh sản bình thường theo nhóm máu 40 Biểu đồ 4.6 Hàm lượng progesterone bị tồn hồng thể theo nhóm máu 42 Biểu đồ 4.7 Hàm lượng progesterone bị u nang nỗn theo nhóm máu .43 Biểu đồ 4.8 Hàm lượng progesterone theo nhóm bị teo buồng trứng .45 Biểu đồ 4.9 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa 47 Biểu đồ 4.10 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa 48 Biểu đồ 4.11 Hàm lượng progesterone theo nhóm bị lứa 49 Biểu đồ 4.12 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa 50 DANH SÁCH CÁC BẢNG B ẢNG TRANG Bảng 2.1 Phân biệt u nang nỗn u hồng thể 13 Bảng 2.2 Cơ cấu đàn bị Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai 21 Bảng 2.3 Định mức loại thực liệu phần ăn cho nhóm bị 24 Bảng 3.1 Bố trí điều trị bị chậm động dục phối nhiều lần không đậu 28 Bảng 3.2 Bố trí chung 28 Bảng 3.3 Số mẫu sữa khảo sát bò không lên giống phối nhiều lần không đậu 28 Bảng 3.4 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ bò sinh sản bình thường 29 Bảng 4.1 Hàm lượng progesterone sữa bò sinh sản bình thường bị chẩn đốn chậm động dục tổn hồng thể, u nang nỗn teo buòng trứng 33 Bảng 4.2 Hàm lượng progesterone sữa bị sinh sản bình thường theo nhóm máu .39 Bảng 4.3 Hàm lượng progesterone bị tồn hồng thể theo nhóm máu 41 Bảng 4.4 Hàm lượng progesterone sữa bị u nang nỗn theo nhóm máu 43 Bảng 4.5 Bảng 4.5 Hàm lượng progesterone sữa bỏ teo buồng trứng theo nhóm máu .45 Bảng 4.6 Hàm lượng progesterone sữa theo lứa đẻ bò sinh sản bình thường, bị chẩn đốn tồn hồng thể, u nang noãn teo buồng trứng .46 42 ng/ml Tỷ lệ khám thai qua trực tràng 60%, kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone ngày thứ 24 cho thấy nhóm bị có rụng trứng, thể vàng phát triển tốt Ở nhóm bị F3 có hàm lượng progesterone thấp có hàm lượng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu lúc gieo tinh, 7, 14, 21 24 ngày sau gieo tinh thấp 0,18; 0,46; 0,67, 0,56 0,50 ng/ml Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone ngày thứ 24 cho thấy nhóm bị có rụng trứng, thể vàng hình thành tiết progesterone, song thể vàng bị tiêu biến Theo Chung Anh Dũng (2002), tỷ lệ máu bò Holstein Friesian (HF) tăng lên làm giảm tỷ lệ thụ thai cách rõ rệt (50% HF: 73,1%; 75% HF: 67,0%; 87,5% HF: 63,3%) Điều chứng tỏ tăng tỷ lệ máu bò HF nhóm bị lai khả thích nghi với mơi trường giảm Qua kiểm tra chúng tơi nhận thấy bị nhóm máu F2 có tỷ lệ đậu thai 20% thấp so với bò sữa nhóm máu F3 60%, kết thấp so với tác giả số lượng khảo sát chúng tơi nên chưa đánh giá xác hiệu nhóm bị 13.2.2 Hàm lượng progesterone bị tồn hồng thể theo nhóm máu Kết khảo sát bị tồn hồng thể theo nhóm máu F2, F3 trình bày qua Bàng 4.3 Bảng 4.3 Hàm lượng progesterone bò tồn hồng thể theo nhóm máu Nhóm Nhóm máu Số bị F2 3 F3 Cao Thấp Cao Thấp Tỷ lệ đậu thai Hàm lượng progesterone ng/ml Ngày 0,73 ± 0,13 0,11± 0,06 0,74 ± 0,11 0,56 ± 0,11 Ngày 1,78 ± 0,13 0,76 ± 0,32 1,29 ± 0,19 0,8 ± 0,14 Ngày 14 2,02 ± 0,07 0,86 ± 0,50 1,83 ± 0,73 0,95 ± 0,13 Ngày 21 3,09 ± 0,08 0,86 ± 0,16 2,56 ± 0,85 0,82 ± 0,11 Ngày 24 3,20 ± 0,13 0,79 ± 0,17 2,82 ± 0,68 0,76 ± 0,08 n % 40 40 43 Biểu đồ 4.6 Hàm lượng progesterone bị tồn hồng thể theo nhóm máu Qua Bảng 4.3 Biểu đồ 4.6 cho thấy hàm lượng progesterone sữa bị F2 nhóm có hàm lượng progesterone cao có biến động theo chiều hướng tăng lên qua thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21, 24 tương ứng 0,62; 1,29; 2,40; 2,64; 2,84 ng/ml Đối với bị nhóm máu F2 có hàm lượng progesterone sữa thấp, có hàm lượng progesterone thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,29; 0,51; 0,59; 0,54 0,36 ng/ml Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone bị F3 có hàm lượng progesterone cao qua thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,49; 1,33; 2,25; 2,92 3,07 ng/ml Đối với bị nhóm máu F3 có hàm lượng progesterone sữa thấp qua thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,18; 0,46; 0,87; 0,56 0,50 ng/ml Nhận xét: qua kết khảo sát bị tồn hồng thể theo nhóm máu, sau bốn lần lấy mẫu sữa khảo sát chúng tơi thấy có hàm lượng progesterone trung bình cao Mặc dù hàm lượng progesterone trung bình nhóm bị có biến động lên xuống không giống kết lâm sàng biểu giống 44 13.2.3 Hàm lượng progesterone bị u nang nỗn theo nhóm máu Kết khảo sát hàm lượng progesterone bị u nang nỗn theo nhóm máu trình bày qua Bảng 4.4 Bảng 4.4 Hàm lượng progesterone sữa bị u nang nỗn theo nhóm máu Nhóm máu F2 F3 Cao Thấp Cao Thấp Số 3 Hàm lựong progesterone Ngày 0,62 ± 0,09 0,11 ± 0,05 0,57 ± 0,31 0,09 Ngày 1,52 ± 0,37 0,55 ± 0,15 1,61 ± 0,43 0,11 ± 0,04 Ngày 14 2,06 ± 0,59 0,60 ± 0,16 2,02 ± 0,36 0,11 ± 0,06 Ngày 21 2,78 ± 1,07 0,53 ± 0,15 2,27 ± 0,32 0,10 ± 0,03 Ngày 24 2,98 ± 0,88 0,51 ± 0,15 2,39 ± 0,28 0,09 ± 0,02 Tỷ lệ đậu thai n % 20 0 60 0 Biểu đồ 4.7 Hàm lượng progesterone sữa bị u nang nỗn theo nhóm máu Theo kết cho thấy, bị lai F2 có hàm lượng progesterone cao, kết xét nghiêm hàm lượng progesterone thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21, 24 0,62;1,52; 2,06; 2,78 2,98 ng/ml Tỷ lệ đậu thai bị u nang nỗn nhóm máu F2 có hàm lượng progesterone cao 20%, tỷ lệ thấp so với kết Chung Anh Dũng (2002)là 73,1% Tỷ lệ đậu thai nhóm bị thấp tác dụng kích thích tố nhóm chưa tốt khám qua trực tràng thấy bị bị tồn hồng thể kích thích tố từ tuyến thượng thận thấp 45 Đối với nhóm bị F2 có hàm lượng progesterone thấp, có hàm lượng progesterone sữa tương ứng thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,11; 0,56; 0,60; 0,53 0,51 ng/ml Qua xét nghiệm ELISA chúng tơi thấy bị có hàm lương progesterone thấp bị khơng đậu thai Kết hợp với việc khám qua trực tràng 60 ngày sau thấy bị bị bị tình trạng u nang nặng, tiếc điều kiện để khảo sát hàm lượng progesterone máu để xem bò bị u nang Đối với nhóm bị F3 có hàm lượng progesterone cao tương ứng với thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,57; 1,61; 2,02; 2,27 2,39 ng/ml Đối với bị F3 có hàm lượng progesterone thấp hàm lượng progesterone tương ứng thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,09; 0,11; 0,10; 0,11 0,09 ng/ml Từ kết nhận thấy bị có hàm lượng progesterone thấp bị khơng đậu thai, điều trị khơng đạt bị bị tình trạng u nang nặng Ở nhóm bị F3 có hàm lượng progesterone cao tỷ lệ đậu thai 60% Theo Phan Văn Kiểm (2003) tỷ lệ đậu thai bị u nang nỗn sau điều trị 64,3%, kết khảo sảt hàm lượng progesterone theo nhóm máu F3 chúng tơi phù hợp với nghiên cứu tác giả Nhận xét:qua năm lần lấy mẫu hai nhóm bị F2 F3 cho thấy hàm lượng progesterone thấp, tỷ lệ đậu thai bò F2 20% cho thấy tác dụng kích thích tố nhóm cịn thấp, tỷ lệ đậu thai bò F3 60% cho thấy tác dụng kích thích tố nhóm bị đạt hiệu tốt 46 13.2.4 Hàm lượng progesterone bị teo buồng trứng theo nhóm máu Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa bò teo buồng trứng trình bày qua Bảng 4.5 Bảng 4.5 Hàm lượng progesterone sữa bị teo buồng trứng theo nhóm máu Nhóm máu F2 F3 Hàm lượng progesterone Số Cao Thấp Cao Thấp 3 Ngày 0,20 ± 0,02 0,13 ± 0,09 0,27 ± 0,19 0,09 ± 0,04 Ngày 1,12 ± 0,23 0,59 ± 0,40 1,31 ± 0,,36 0,69 ± 0,30 Ngày 14 1,63 ± 0,07 0,65 ± 0,39 1,55 ± 0,42 0,89 ± 0,10 Ngày 21 2,00 ± 0,03 0,51 ± 0,29 2,36 ± 0,40 0,45 ± 0,44 Ngày 24 2,32 ± 0,06 0,45 ± 0,27 2,57 ± 0,38 0,41 ± 0,40 Tỷ lệ đậu thai n % 20 0 40 0 Biểu đồ 4.8 Hàm lượng progesterone theo nhóm bò teo buồng trứng Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa nhóm bị F2 cho thấy hàm lượng progesterone sữa theo nhóm cao vào thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,20; 1,13; 1,62; 2,0 2,32 ng/ml Đối với nhóm có hàm lượng progesterone thấp, hàm lượng progesterone sữa thời điểm lấy mẫu tương ứng 0,13; 0,59; 0,65; 0,51 0,45 ng/ml Từ kết chúng tơi nhận thấy bị F2 có có thuộc nhóm có hàm lượng progesterone cao đậu thai Kết hợp 47 với việc khám qua trực tràng sau 60 ngày thấy lại bị tồn hồng thể nên có hàm lượng progesterone vào ngày 21 tăng cao Ở nhóm bị F3, hàm lượng progesterone sữa thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,27; 1,31; 1,56; 2,36 2,57 ng/ml Hàm lượng progesterone tăng dần sau gieo tinh Kết xét nghiệm ELISA kết hợp với khàm thai qua trực tràng sau 60 ngày thấy có 2/3 có hàm lượng progesterone cao có thai Một lại bị tồn thể vàng, lấy mẫu ngày 42 thấy có hàm lượng progesterone cao Đối với bị F3 có hàm lượng progesterone sữa thấp tương ứng thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,09; 0,69; 0,89; 0,45 0,41 ng/ml Những bị có hàm lượng progesterone thấp bị khơng đậu thai teo buồng trứng nặng có nghĩa buồng trứng khơng có khả hoạt động trở lại bình thường Nhận xét: qua kết khảo sát nhận thấy hàm lượng progesterone bò teo buồng trứng tương đối thấp hai nhóm bị Xét nghiệm ELISA giúp ta chẩn đốn xác tình trạng bị qua kết thấy gần tất bị lên giống sau điều trị kích thích tố 13.3 Hàm lượng progesterone theo lứa đẻ bị sinh sản bình thường, bị chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn teo buồng trứng 40 bị chẩn đốn sinh sản bình thường, tồn hồng thể, u nang noãn teo buồng trứng điều trị kích thích tố lên giống phối Sau tiến hành lấy sữa thời điểm 0, 7, 14, 21 24 để xác định hàm lượng progesterone sữa Kết trình bày qua bảng 4.6 48 Bảng 4.6 Hàm lượng progesterone sữa theo lứa đẻ bị sinh sản bình thường, bị chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn teo buồng trứng Lứa Nhóm Lứa Lứa Lứa Lứa Cao Thấp Cao Thấp Cao Thấp Cao Thấp 3 Hàm lượng progesterone n Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 24 0,53 ± 0,29 0,19 ± 0,19 0,54 ± 0,21 0,18 ± 0,18 0,92 0,15 ± 0,14 0,30 ± 0,24 0,31 ± 0,29 1,51 ± 0,30 0,60 ± 0,33 1,34 ± 0,36 0,72 ± 0,26 1,55 0,32 ± 0,24 1,29 ± 0,43 0,80 ± 0,14 1,91 ± 0,37 0,69 ± 0,33 1,89 ± 0,46 0,93 ± 0,28 2,57 0,33 ± 0,24 2,00 ± 0,95 0,83 ± 0,05 2,51 ± 0,62 0,47 ± 0,31 2,50 ± 0,55 0,76 ± 0,16 3,58 0,36 ± 0,27 2,63 ± 0,79 0,81 ± 0,15 2,71 ± 0,54 0,43 ± 0,29 2,71 ± 0,46 0,59 ± 0,33 3,70 0,33 ± 0,25 2,80 ± 0,69 0,76 ± 0,12 Tỷ lệ đậu thai n % 1 38,69 50 14,28 16,66 13.3.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa Kết khảo sát hàm lượng progesterone sữa bị lứa trình bày qua Bảng 4.6 Biểu đồ 4.9 Biểu đồ 4.9 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa Qua bảng 4.6 biểu đồ 4.9 cho thấy nhóm bị có hàm lượng progesterone cao có hàm lượng progesterone trung bình vào ngày thụ tinh nhân tạo thấp 0,53 ng/ml, tăng nhanh từ ngày thứ đến ngày thứ 14 có hàm lượng progesterone 1,51 1,91 ng/ml tiếp tục tăng từ ngày 21 đến ngày thứ 24 2,51 2,71 ng/ml Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone sữa ngày thứ 24 khám qua trực tràng cho thấy có 5/13 bị lứa đậu thai chiếm tỷ lệ 38,69% 49 có 5/7 bị có hàm lượng progesterone cao đậu thai chiếm tỷ lệ 71,4% Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone ngày thứ 24 khám qua trực tràng thấy 2/7 bị có hàm lượng progesterone cao khơng đậu thai bị bị tồn hồng thể Đối với nhóm bị có hàm lượng progesterone thấp có hàm lượng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,19; 0,60; 0,69; 0,47 0,43 ng/ml Kết hợp với việc khám qua trực tràng 60 ngày sau cho thấy bị có hàm lượng progesterone thấp bị khơng đậu thai nhóm bị có rụng trứng, thể vàng hình thành hoạt động nên nuôi hợp tử sau thối hóa 13.3.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa Kết khảo sát hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa trình bày qua bảng 4.6 biểu đồ 4.10 Biểu đồ 4.10 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa Qua Bảng 4.6 Biểu đồ 4.10 cho thấy nhóm bị có hàm lượng progesterone cao có hàm lượng progesterone trung bình vào thời điểm lầy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,54; 1,34; 1,89; 2,50 2,71 ng/ml Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa kết hợp với khám qua trực tràng chúng tơi nhận thấy có 7/14 bị đậu thai chiếm tỷ lệ 50% Trong số bị có hàm lượng progesterone cao có bị khơng có thai bị tồn hồng thể Đối với nhóm bị có hàm lượng progesterone thấp, hàm lượng progesterone trung bình vào thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,18; 0,72; 50 0,93; 0,76 0,59 ng/ml Kết hợp việc kiểm tra hàm lượng progesterone sữa với việc khám qua trực tràng cho thấy nhóm bị bị u nang nỗn teo buồng trứng 13.3.3 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa trình bày qua bảng 4.6 biểu đồ 4.11 Biểu đồ 4.11 Hàm lượng progesterone theo nhóm bị lứa Qua Bảng 4.6 Biểu đồ 4.11 thấy hàm lượng progesterone theo nhóm bị lứa có hàm lượng progesterone trung bình thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,92; 1,55; 2,57; 3,58 3,70 ng/ml Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterne sữa ngày thứ 24 khám qua trực tràng chúng tơi thấy có 1/7 có thai 100% bị có hàm lượng progesterone cao đậu thai Kỹ thuật xét nghiệm ELISA giúp chẩn đốn xác tình trạng mang thai bị Đối với nhóm bị lứa có hàm lượng progesterone thấp, có hàm lượng progesterone tương ứng thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 0,15; 0,32; 0,33; 0,36 0,33 ng/ml Chúng tơi thấy bị lứa nhóm có hàm lượng progesterone thấp bị khơng đậu thai Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone ngày thứ 24 khàm qua trực tràng nhận thấy bị có hàm lượng progesterone thấp bị bị u nang nỗn teo buồng trứng 51 13.3.4 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bò lứa Kết xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa trung bình theo nhóm bị lứa trình bày qua Bảng 4.6 Biều đồ 4.12 Biểu đồ 4.12 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm bị lứa Qua Bảng 4.6 Biểu đồ 4.12 chúng tơi thấy nhóm bị có hàm lượng progesterone cao có hàm lượng progesterone sữa trung bình vào thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,30; 1,29; 2,00; 2,63 2,80 ng/ml Hàm lượng progesterone tăng qua thời điểm lấy mẫu Kết hợp với việc kiểm tra hàm lượng progesterone ngày thứ 24 khám qua trực tràng cho thấy nhóm bị rụng trứng, thể vàng phát trriển tơt có 1/6 đậu thai chiếm tỷ lệ 16,67% số bị có hàm lượng progesterone cao có bị khơng thai Sau xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa ngày thứ 24 khám qua trực tràng chúng tơi thấy bị bị tồn thể vàng Đối với nhóm bị có hàm lượng progesterone thấp, hàm lượng progesterone sữa trung bình vào thời điểm lấy mẫu ngày 0, 7, 14, 21 24 tương ứng 0,31; 0,80; 0,83; 0,81 0,76 ng/ml Kết hợp với việckiểm tra hàm lượng progesterone sữa khám qua trực tràng nhận định nhóm bị có thành lập hồng thể hoạt động nên nuôi sống hợp tử sau thối hóa Theo Chung Anh Dũng (2002) lứa đẻ gia tăng tỷ lệ thụ thai tăng lên Điều bò đẻ từ lứa trở lên, máy sinh sản hoạt động điều hòa 52 giúp bò dễ dàng thụ thai Tỷ lệ thụ thai lứa 1, 2, tương ứng 65,5; 67,9; 73,5 69,7% Tỷ lệ thụ thai cao bò lứa 80% Tuy nhiên bị lớn tuổi tỷ lệ thụ thai giảm xuống, nhóm bị đẻ thứ tỷ lệ thụ thai 62,5% Tỷ lệ thụ thai theo lứa đẻ theo lứa 1, 2,3 lần lựợt 38,69; 50; 14,28 16,6 % thấp so với nghiên cứu tác giả Nguyên nhân số lượng bị chúng tơi khảo sát số bò lứa khác 53 Phần 14 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 14.1 Kết luận Qua thời gian thực đề tài rút số kết luận sau: + Kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa đánh giá xác tình trạng sinh sản bị sữa khơng có mang thai Kỹ thuật giúp xác định xác bị khơng mang thai ngày 21 sau phối, lúc kỹ thuật xác định hàm lượng progesterone cao sữa bò mang thai tồn hồng thể Do muốn biết bị tồn hồng thể phải kiểm tra thai qua trực tràng 60 ngày sau Kỹ thuật ELISA cơng cụ tốt cho quy trình chẩn đốn bị mang thai sớm, chậm lên giống phối nhiều lần không đậu + Sử dụng kích thích tố để điều trị bị chậm sinh có tỷ lệ động dục lại 100% + Xác định hàm lượng progesterone sữa kỹ thuật ELISA bò chậm sinh cho thấy: hàm lượng progesterone sữa bốn thời điểm lấy mẫu từ 0,68 đến 2,02 ng/ml, bò xác định tồn hoàng thể; hàm lượng progesterone biến động từ 0,09 đến 0,12 ng/ml, bò xác định u nang noãn; hàm lượng progesterone biến động từ 0,05 đến 0,18 ng/ml, bò xác định teo buồng trứng 14.2 Đề nghị Khuyến cáo dẫn người chăn nuôi sử dụng kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm chẩn đoán tình trạng rối loạn sinh sản để có biện pháp điều trị thích hợp Khuyến cáo người chăn nuôi thực quản lý sinh sản có chế độ ni dưỡng thích hợp trước sau sinh cho bò sữa 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Chung Anh Dũng, 2002 Sử dụng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ số biện pháp kỹ thuật để nâng cao hiệu gieo tinh nhân tạo cho bò lai hướng sữa Luận văn Tiến sĩ Nông Nghiệp Viện Khoa Học Nông Nghiệp Miền Nam Phan Văn Kiểm, Đào Đức Thà, Trịnh Quang Phong, Đỗ Hữu Hoan, Trịnh Văn Thăng, Nguyễn Thị Hoa, Vũ Ngọc Hiếu, Nguyễn Quý Quỳnh Hoa, 2006 Xác định hàm lượng progesterone bò lai hướng sữa kỹ thuật miễn dịch enzyme (ELISA) Tạp chí chăn ni – 2006 Tăng Xuân Lưu (2004) Nghiên cứu động thái progesterone kỹ thuật ELISA bò chậm động dục Luận Văn Tốt Nghiệp Khoa Chăn Nuôi Thú Y Thư viện trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Nguyễn Văn Thành, 2002 Giáo trình Sản Khoa Gia Súc Khoa Chăn Nuôi Thú Y – Đại học Nông Lâm TPHCM TÀI LIỆU TIẾNG ANH Allrich D.R., 2001 Ovarian cysts in Dairy cattle Purdue University, cooperate extention service Indiana Bage R., 2005 Female Reproductive Physiology Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science SLU, Uppsala, Sweden Blowey R.W (1992), “Milk progesterone profile in untreated cystic ovarian disease”, Veterinary Record 130, page: 429 British PHỤ LỤC 55 Bảng Hàm lượng progesterone bò sinh sản bình thường Nhóm máu Lứa F2 F2 F2 F2 F2 F3 F3 F3 F3 F3 1 2 4 (1) Ngày lấy mẫu Chẩn đoán 42 ngày khám qua Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày 14 21 24 0.06 0.08 0.09 0.05 0.04 (1) 0.56 0.86 0.92 0.82 0.72 (1) 0.62 1.29 2.40 2.64 2.84 Có thai 0.09 0.46 0.62 0.60 0.05 (1) 0.44 0.64 0.72 0.68 0.64 (1) 0.55 1.78 3.01 3.54 3.60 Có thai 0.18 0.46 0.67 0.56 0.50 (1) 0.21 0.85 1.55 2.40 2.60 Có thai 0.92 1.55 2.57 3.58 3.70 Có thai 0.28 1.14 1.86 2.14 2.38 Tồn hồng thể Ghi chú: hoàng thể thành lập, hoạt động nên khơng thể ni sống hợp tử, sau thối hóa Bảng Hàm lượng progesterone bị tồn hồng thể Nhóm máu Lứa 644F2 609F2 747F2 685F2 932F2 118F3 868F3 879F3 650F3 882F3 2 1 2 Ngày 0.64 0.05 0.82 0.16 0.12 0.73 0.86 0.64 0.48 0.64 Ngày 1.87 1.10 1.68 0.46 0.73 1.49 1.26 1.12 0.76 0.96 Ngày lấy mẫu Ngày Ngày 14 21 1.99 3.03 1.35 0.92 2.04 3.14 0.36 0.68 0.86 0.98 1.60 2.01 2.64 3.54 1.24 2.12 1.04 0.90 0.86 0.74 Ngày 24 3.13 0.88 3.26 0.60 0.90 2.48 3.60 2.38 0.82 0.70 Chẩn đoán 42 ngày khám qua Có thai Điều trị khơng đạt Có thai Điều trị không đạt Điều trị không đạt Tồn hồng thể Có thai Tồn hồng thể Điều trị khơng đạt Điều trị không đạt 56 Bảng Hàm lượng progesterone bị u nang nỗn Nhóm Lứa máu 669F2 576F2 617F2 653F2 901F2 940F3 898F3 636F3 909F3 896F3 2 1 3 Ngày 0.10 0.68 0.55 0.06 0.16 0.80 0.24 0.68 0.09 0.09 Ngày lấy mẫu Ngày Ngày Ngày 14 21 0.44 0.56 0.50 1.26 1.64 2.02 1.78 2.48 3.54 0.48 0.46 0.40 0.72 0.78 0.70 1.86 1.92 2.14 1.12 1.68 2.04 1.86 2.45 2.64 0.13 0.15 0.12 0.08 0.07 0.08 Ngày 24 0.48 2.36 3.60 0.38 0.68 2.30 2.16 2.70 0.10 0.07 Chẩn đoán 42 ngày khám qua trực tràng Điều trị khơng đạt Tồn hồng thể Có thai Điều trị khơng đạt Điều trị khơng đạt Có thai Có thai Có thai U nang nặng U nang nặng Bảng Hàm lượng progesterone sữa bò teo buồng trứng Ngày lấy mẫu Nhóm Lứa máu 617F2 526F2 606F2 663F2 604F2 675F3 880F3 623F3 634F3 557F3 1 2 1 2 Ngày 0.11 0.18 0.21 0.22 0.05 0.12 0.26 0.46 0.06 0.08 Ngày 0.86 1.28 0.96 0.78 0.13 0.90 1.68 1.28 0.48 0.96 Ngày 14 0.92 1.58 1.68 0.82 0.20 0.96 1.96 1.56 0.82 1.12 Ngày 21 0.74 2.02 1.98 0.60 0.18 0.14 2.82 2.06 0.76 2.20 Ngày 24 0.70 2.28 2.36 0.50 0.16 0.12 3.00 2.28 0.70 2.43 Chẩn đoán 42 ngày khám qua trực tràng Điều trị khơng đạt Tồn hồng thể Có thai Điều trị khơng đạt Teo buồmg trứng nặng Điều trị khơng đạt Có thai Có thai Điều trị khơng đạt Tồn hồng thể ... tài: ? ?Ứng dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đoán sớm mang thai bị khơng động dục phối nhiều lần khơng đậu điều trị kích thích tố Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai? ??... dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đoán sớm mang thai bị khơng động dục phối nhiều lần khơng đậu điều trị kích thích tố Cơng ty cổ phần bị sữa Đồng Nai? ?? 1.2 Mục... LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐOÁN SỚM MANG THAI TRÊN BỊ KHƠNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHƠNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CƠNG TY CỔ PHẦN BỊ SỮA ĐỒNG NAI Giáo viên hướng dẫn: