Khảo sát hàm lượng Progesterone trong sữa bằng kỹ thuật Elisa để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu trên bò cho sữa

Khảo sát hàm lượng Progesterone trong sữa bằng kỹ thuật Elisa để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu trên bò cho sữa



KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG PROGESTERONE TRONG SỮA BẰNG KỸ THUẬT ELISA ĐỂ CHẨN ĐOÁN MANG THAI

SỚM, CHẬM ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU TRÊN BÕ CHO SỮA TẠI CÔNG TY

CỔ PHẦN BÕ SỮA LONG THÀNH VÀ CÁC HỘ LÂN CẬN TỈNH ĐỒNG NAI

Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007

Sinh viên thực hiện: ĐẶNG SỸ KHA

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2007

***********************

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG PROGESTERONE TRONG SỮA BẰNG KỸ THUẬT ELISA ĐỂ CHẨN ĐOÁN MANG THAI

SỚM, CHẬM ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU TRÊN BÕ CHO SỮA TẠI CÔNG TY

CỔ PHẦN BÕ SỮA LONG THÀNH VÀ CÁC HỘ LÂN CẬN TỈNH ĐỒNG NAI

BSTY LÊ THỊ THU HÀ

Thành phố Hồ Chí Minh

LỜI CẢM ƠN

Trước tiên con xin chân thành cảm ơn công lao sinh thành, dạy bảo và tất cả những gì tốt đẹp nhất mà cha mẹ đã dành cho con để con có được như ngày hôm nay Và với tất cả tấm lòng thành, tôi xin chân thành cảm ơn:

Ban Giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt quá trình học tại trường

TS Dương Nguyên Khang đã hết lòng hướng dẫn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập tốt nghiệp

Ban Giám đốc, nhân viên phòng kỹ thuật và các đội ngũ chăn nuôi Công ty cổ phần bò sữa Đồng Nai đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập

BSTY Lê Thị Thu Hà đã quan tâm và tận tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập

Các hộ gia đình ở huyện Long Thành, Đồng Nai đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập

Xin bày tỏ lòng cảm ơn đến những người bạn cùng gắn bó, động viên và chia sẻ những khó khăn với tôi trong suốt những ngày tháng ngồi trên ghế giảng đường đại học

Sinh viên Đặng Sỹ Kha

TÓM TẮT KHÓA LUẬN

Đề tài “Khảo sát hàm lượng progesterone trong sữa bằng kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu trên bò cho sữa tại Công ty cổ phần bò sữa Long Thành và các hộ lân cận tỉnh Đồng Nai” được thực hiện từ tháng 03/2007 đến tháng 07/2007 Số liệu ghi nhận được trên bò sữa sinh sản bình thường, bò sữa sau khi sinh 90 ngày trở lên mà không có biểu hiện động dục hoặc phối nhiều lần không đậu Khảo sát 20 bò sinh sản bình thường và 20 bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu, tiến hành lấy mẫu sữa xét nghiệm hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA vào các ngày 0, 7, 14, 21 và 24 sau khi phối Kết quả xét nghiệm hàm lượng progesterone sẽ chẩn đoán tình trạng mang thai sớm của bò và kiểm tra tình trạng chậm sinh sản kết quả như sau:

 Bò sinh sản bình thường

Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò ở ngày gieo tinh là 0,61 ng/ml tăng lên 2,31 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 80%; 20% bò bị tồn hoàng thể

Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm thấp của bò ở ngày gieo tinh là 0,34 ng/ml, tăng từ ngày 7 đến ngày 14 lần lượt là 0,58 và 1,12 ng/ml; sau đó giảm xuống vào ngày thứ 21 là 0,87 ng/ml

 Bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu

Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò ở ngày gieo tinh là 0,46 ng/ml tăng lên 2,34 ng/ml vào ngày thứ 21 Chẩn đoán mang thai 60 ngày khám qua trực tràng đạt 60%; 40% bị tồn hoàng thể

Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm thấp của bò ở ngày gieo tinh là 0,21 ng/ml, tăng từ ngày 7 đến ngày 14 lần lượt là 0,61 và 0,87 ng/ml; sau đó giảm xuống vào ngày thứ 21 là 0,68 ng/ml Bò có buồng trứng chưa hoạt động trở lại hoặc bị u nang noãn

Tp.HCM, ngày 15 tháng 08 năm 2007 Bộ môn Công Nghệ Sinh Học

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Sơ lược về công ty cổ phần bò sữa Đồng Nai ………3

2.1.1 Quá trình hình thành……….3

2.1.2 Nhiệm vụ của công ty ……… 3

2.1.3 Tổ chức sản xuất và cơ cấu đàn bò……… 3

2.1.4 Phương pháp chăm sóc, nuôi dưỡng ………5

2.2 Vài nét về tình hình chăn nuôi của các nông hộ ………8

2.2.1 Nguồn gốc đàn bò ……….8

2.2.2 Đặc điểm đồng cỏ ……….8

2.2.3 Đặc điểm chuồng trại ……… 8

2.2.4 Phương thức chăn nuôi ……… 9

2.3 Sơ lược giống bò sữa Holstein Friesian (HF) ……… 10

2.4 Chu kỳ động dục ……… 11

2.5 Hiện tượng chậm sinh và chậm động dục sau khi sinh ……… 14

2.5.1 Bệnh ấu trĩ (hay còn gọi là chứng thiểu năng sinh dục) ……….14

2.5.2 Hiện tượng Free – matin ……….15

2.5.3 Buồng trứng teo và giảm cơ năng ……… 15

2.5.4 U nang buồng trứng ………16

2.5.5 Thoái hóa buồng trứng ……….16

2.6 Vai trò progesterone trong sinh sản ……… 17

2.6.1 Nguồn gốc progesterone ……….17

2.6.2 Bản chất, khối lượng phân tử, cấu trúc phân tử ………17

2.6.3 Vận chuyển và chuyển hóa progesterone và tác dụng của progesterone ……….18

2.6.4 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường, mang thai ……… 19

2.6.5 Các chỉ định và ứng dụng của xét nghiệm progesterone trong sữa ……….21

2.7 Nguyên lý Kỹ thuật ELISA (Progesterone – Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) ………22

Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 25

3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài ………25

3.4.1 Bố trí số mẫu sữa khảo sát theo nhóm máu ……….26

3.4.2 Bố trí số mẫu sữa khảo sát theo các lứa đẻ ……….26

3.4.3 Lấy mẫu sữa và ly tâm ……… 27

3.4.4 Kỹ thuật ELISA ……….27

3.5 Phương pháp xử lý số liệu ……….30

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31

4.1 Hàm lượng progesterone trong sữa bò sinh sản bình thường ………31

4.1.1 Hàm lượng progesterone sữa bò theo nhóm máu ……… 34

4.1.2 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa đẻ ……… 36

4.2 Hàm lượng progesterone trong sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu ……….41

4.2.1 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo nhóm máu 50 và 75% HF ……….43

4.2.2 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa đẻ ……… 46

RIA = Radio Immuno Assay

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 2.1 Sự thay đổi hàm lượng các kích thích tố trong máu ở chu kỳ

động dục bình thường của bò 12

Hình 2.2 Cơ chế tiêu hoàng thể của PGF2 trong chu kỳ động dục 14

Hình 2.3 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường ở bò 20

Hình 2.4 Động thái progesterone giúp chẩn đoán sớm có thai 21

Hình 4.1 Hàm lượng progesterone sữa bò sinh sản bình thường 32

Hình 4.2 Hàm lượng progesterone sữa bò theo nhóm máu 50% 34

Hình 4.3 Hàm lượng progesterone sữa bò theo nhóm máu 75% 35

Hình 4.4 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa 1 37

Hình 4.5 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa 2 38

Hình 4.6 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa 3 39

Hình 4.7 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa 4 40

Hình 4.8 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu 42

Hình 4.9 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo nhóm máu 50% 44

Hình 4.10 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo nhóm máu 75% 45

Hình 4.11 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa 1 47

Hình 4.12 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa 2 48

Hình 4.13 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa 3 49

Hình 4.14 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa 4 50

DANH SÁCH CÁC BẢNG

Bảng 2.1 Bảng cơ cấu đàn bò công ty 5

Bảng 2.2 Bảng định mức thức ăn cho đàn bò năm 2007 7

Bảng 3.1 Số mẫu sữa khảo sát trên bò sinh sản bình thường 26

Bảng 3.2 Số mẫu sữa khảo sát trên bò chậm động dục 26

Bảng 3.3 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ ở bò sinh sản bình thường 26

Bảng 3.4 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ ở bò chậm động dục 27

Bảng 4.1 Hàm lượng progesterone sữa bò sinh sản bình thường 31

Bảng 4.2 Hàm lượng progesterone sữa bò theo nhóm máu 34

Bảng 4.3 Hàm lượng progesterone sữa bò theo lứa đẻ 37

Bảng 4.4 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu 41

Bảng 4.5 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo nhóm máu 43

Bảng 4.6 Hàm lượng progesterone sữa bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu theo lứa đẻ 46

Chương 1 MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Nước ta là một nước có nền nông nghiệp phát triển Trong đó ngành chăn nuôi đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển kinh tế, đặc biệt là ngành chăn nuôi bò sữa Tuy mới phát triển nhưng nó lại góp phần tạo ra công ăn việc làm cho người dân, nâng cao đời sống nông thôn, đồng thời còn tạo ra sản phẩm có giá trị dinh dưỡng cao

Cùng với phát triển chăn nuôi bò sữa bằng cách tăng đàn, tăng chất lượng con giống thì các vấn đề về nuôi dưỡng, chăm sóc, phòng trị bệnh…cũng nẩy sinh do đó cần được quan tâm giải quyết nhiều hơn nữa Trong đó một số bệnh liên quan đến quá trình sinh sản trên bò như tồn hoàng thể, u nang noãn, buồng trứng kém phát triển là các vấn đề đặt ra hiện nay mà nguyên nhân chính dẫn đến các rối loạn trên chủ yếu là do xáo trộn kích thích tố sinh dục Vì thế gần đây nhiều nhà nghiên cứu đã hướng đến sử dụng các biện pháp chọn lọc dựa trên sự tương quan giữa các đặc điểm kinh tế quan trọng với một số hoạt chất trong cơ thể gia súc như kích thích tố, enzyme, các chất trao đổi trong quá trình dinh dưỡng Trong đó các loại kích thích tố liên quan đến quá trình sinh sản của gia súc như progesterone, PGF2 , FSH, LH…được chú ý đáng kể giúp chẩn đoán tình trạng chậm sinh và rối loạn sinh sản trên bò sữa nhằm hạn chế thiệt hại kinh tế do hiện tượng vô sinh trên bò sữa gây ra

Gần đây nhiều nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuật ELISA để xác định hàm lượng progesterone trong máu và sữa để tìm hiểu sự biến đổi hàm lượng progesterone trong chu kỳ động dục, từ đó chẩn đoán hoạt động của buồng trứng để kịp thời điều trị một số bệnh về sinh sản nhằm giảm loại thải những gia súc sinh sản kém, đồng thời xác định mang thai sớm làm tăng hiệu quả kinh tế trong chăn nuôi Xuất phát từ thực trạng trên, được sự chấp thuận của Bộ môn Công Nghệ Sinh Học,

Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM dưới sự hướng dẫn của TS Dương Nguyên

Khang và BSTY Lê Thị Thu Hà, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Khảo sát hàm lượng progesterone trong sữa bằng kỹ thuật ELISA để chẩn đoán mang thai sớm, chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu trên bò cho sữa tại Công ty Cổ Phần bò sữa Long Thành và các hộ lân cận tỉnh Đồng Nai”

1.2 Mục đích và yêu cầu 1.2.1 Mục đích

Khảo sát hàm lượng progesterone trong mẫu sữa bò sinh sản bình thường và bò chậm sinh bằng kỹ thuật ELISA để xác định mang thai sớm ở bò sinh sản bình thường, chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu

Chương 2

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Sơ lược về công ty cổ phần bò sữa Đồng Nai 2.1.1 Quá trình hình thành

Công ty Cổ Phần Bò Sữa Đồng Nai là một doanh nghiệp nhà nước, tọa lạc tại Km 14 – Quốc lộ 51 về hướng Vũng Tàu thuộc địa bàn xã Tam Phước – Huyện Long Thành – Tỉnh Đồng Nai Được thành lập vào tháng 04 năm 1977 với tên gọi là Trại Bò sữa An Phước, tháng 09 năm 1985 đổi tên thành xí nghiệp Bò Sữa An Phước, đến tháng 01 năm 2006 chính thức đổi tên thành Công ty Cổ Phần Bò Sữa Đồng Nai – Trực thuộc Tổng Công ty Công Nghiệp Thực Phẩm Đồng Nai

2.1.2 Nhiệm vụ của công ty

– Sản xuất, kinh doanh, xuất nhập khẩu con giống bò sữa, bò thịt và các loại gia súc khác, các loại nông sản thực phẩm, thức ăn gia súc, các loại cỏ và cây trồng

– Chuyển giao tiến bộ khoa học kĩ thuật trong chăn nuôi bò sữa đến các vùng phụ cận

– Sản xuất, thu mua, chế biến, kinh doanh sữa tươi và các sản phẩm từ sữa – Kinh doanh thuốc, vật tư thú y và dịch vụ kỹ thuật về chăn nuôi gia súc – Sản xuất kinh doanh phân hữu cơ vi sinh

– Kinh doanh dịch vụ khu vui chơi giải trí, nhà hàng, khách sạn, siêu thị… liên doanh, liên kết, đầu tư phát triển các hoạt động sản suất kinh doanh và các dịch vụ ngành nghề kinh doanh khác theo đúng quy định của pháp luật

2.1.3 Tổ chức sản xuất và cơ cấu đàn bò 2.1.3.1 Diện tích đất sử dụng

Diện tích: Đất do công ty quản lý gồm 367 ha thuộc loại đất xám bạc màu

nghèo dinh dưỡng Trong đó, diện tích đất trồng cỏ 50 ha bao gồm các loại cỏ chủ yếu như cỏ voi, cỏ sả lá lớn, cỏ sả lá nhỏ, cỏ stylosanthes Đồng cỏ chăn thả và hàng

cây phân lô 70 ha, một phần diện tích đất khác sử dụng cho xây dụng cơ bản như văn phòng công ty, nhà xưởng, chuồng trại chăn nuôi còn lại 120 ha giao khoán cho cán bộ công nhân viên làm trang trại theo Nghị định 01/CP của Chính phủ tạo

nguồn nguyên liệu cho công ty

Khí hậu: Huyện Long Thành nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, cận

xích đạo với những đặc trưng chính như nắng nhiều (trung bình khoảng 2600 – 2700 giờ/năm, lượng mưa khá (trung bình 1800 – 2000 mm/năm) nhưng phân hóa rõ rệt theo mùa, mùa mưa kéo dài từ tháng 05 đến tháng 10, mùa khô kéo dài từ tháng 11 đến tháng 04

Nguồn nước sử dụng: là nguồn nước ngầm, các giếng khoan có độ sâu từ 35

đến 75 m

2.1.3.2 Cơ cấu đàn bò

Là một doanh nghiêp chăn nuôi và kinh doanh buôn bán con giống bò sữa, sữa tươi và một số sản phẩm chế biến từ sữa, công ty luôn bám sát tình hình thị trường và có kế hoạch chu chuyển đàn bò hợp lý trong từng giai đoạn Cơ cấu đàn bò tại công ty tính đến thời điểm ngày 25/04/07 được trình bày qua Bảng 2.1

Bảng 2.1 Bảng cơ cấu đàn bò công ty (con) Loại đàn Đầu

Thức ăn thô: Thức ăn chủ yếu là cỏ đƣợc cho ăn tự do Giống cỏ chủ yếu là

cỏ sả lá lớn, cỏ sả lá nhỏ, cỏ stylosanthes để cải thiện chất lƣợng thức ăn thô xanh cho đàn bò nhất là vào mùa khô Mùa nắng thiếu cỏ xanh nên phải cho ăn bổ sung

thêm rơm khô cho ăn dưới dạng ủ urea trong thời gian một tháng Bên cạnh đó còn có cỏ ủ chua được dự trữ thường xuyên để bổ sung vào khẩu phần

Thức ăn tinh: Chủ yếu là cám hỗn hợp và hèm bia

Thức ăn bổ sung: Chiếm một lượng nhỏ nhưng lại hết sức quan trọng và

không thể thiếu trong khẩu phần như: mật, muối, urea Riêng đá liếm cho bò sử dụng thường xuyên

2.1.4.2 Cách thức cho ăn

Tất cả các loại thức ăn thô xanh như: Cỏ băm nhỏ, cỏ ủ chua, rơm được đưa vào máng ăn cho bò ăn tự do Mỗi ngày cho ăn 5 lần vào các thời điểm: 8 giờ sáng, 11 giờ trưa, 2 giờ chiều, 4 giờ chiều và 8 giờ tối Cám hỗn hợp và hèm bia cho ăn vào mỗi buổi sáng, riêng đàn vắt sữa được cho ăn cám hỗn hợp và hèm bia vào thời điểm vắt sữa vào lúc 3 giờ sáng và 3 giờ chiều mỗi ngày Mùa nắng sử dụng thêm mật, muối, urea pha loãng

Định mức thức ăn: Số lượng thức ăn được tính riêng cho từng đàn loại,

nhóm giống Đàn vắt sữa có năng suất sữa trên 6 kg/ngày được cho ăn thức ăn tinh theo năng suất sữa cứ 0,3 kg cám hỗn hợp cho 1 kg sữa và 8 - 10 kg hèm bia/con/ngày

Định mức thức ăn cụ thể cho từng đàn loại được trình bày ở Bảng 2.2

Bảng 2.2 Bảng định mức thức ăn cho đàn bò năm 2007 (kg/con/ngày) Đàn loại Cám Mật Muối Urea Cỏ Rơm Hèm

bia Sữa bê

Bê 9 – 12 tháng 1 1,2 0,03 0,03 25 7 3 Tơ lỡ (>12 tháng) 1 1,5 0,04 0,06 35 9 4 Bò cạn sữa có chửa 2 2 0,06 0,08 45 10 3 Bò cạn sữa chưa chửa 1 1 0,04 0,03 45 10 3

– Bê đực thịt uống sữa trong 4 tháng

– Mật, muối, urea, rơm bổ sung trong 4 tháng nắng – 4 kg hèm quy đổi tương đương 1 kg cám hỗn hợp

2.1.4.3 Vệ sinh

Đàn bò được tắm 02 lần mỗi ngày, kết hợp với dọn phân rửa chuồng Phân gom được đưa về nhà chứa phân ủ ít nhất 1 tháng trước khi đưa ra bón cho đồng cỏ Nước thải được cho xuống hệ thống rãnh nước và hầm lắng để xử lý vi sinh

2.1.4.4 Công tác thú y

Công tác thú y được công ty đặc biệt quan tâm thực hiện theo đúng quy trình kỹ thuật Chuồng trại được sát trùng định kỳ hàng tháng, quy trình tiêm phòng được thực hiện nghiêm ngặt Trong đó, công tác tiêm phòng bệnh lở mồm long móng và tụ huyết trùng được tiêm 02 lần/năm vào thời điểm giao mùa tháng 04 đến tháng 05

và tháng 10 đến tháng 11, tiêm phòng vaccine và sổ giun định kỳ được thực hiện 01 lần/năm, cùng với kiểm tra brucellosis 01 lần/năm

2.1.4.5 Khai thác và tiêu thụ sữa

Sữa được vắt 2 lần trong ngày (sáng từ 3 – 5 giờ, chiều từ 3 – 5 giờ) Sau khi chuẩn bị dụng cụ vắt sữa, bò được tắm rửa, vệ sinh chuồng, sát trùng bầu vú bằng dung dịch sát trùng iodaman

Phương pháp vắt: Sữa được vắt bằng máy Điều này hạn chế được sự vấy nhiễm vi sinh vật trong sữa, giảm công lao động và giảm thời gian vắt sữa Sữa vắt xong được cho vào can nhựa sạch, vận chuyển ra điểm thu mua sữa của công ty trong thời gian không quá 2 giờ kể từ khi vắt để kiểm tra chất lượng và bảo quản lạnh ở 40C Các tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng được thực hiện theo đúng quy định của công ty sữa Lothamilk

2.2 Vài nét về tình hình chăn nuôi của các nông hộ 2.2.1 Nguồn gốc đàn bò

Các hộ chăn nuôi bò sữa được bắt đầu từ năm 1991 đến năm 1993 thì phong trào chăn nuôi phát triển rất mạnh Trong số bò được nuôi thì có trên 95% đàn bò của các hộ gia đình đều có nguồn gốc từ đàn bò giống của công ty

2.2.2 Đặc điểm đồng cỏ

Diện tích trồng cỏ của các nông hộ cũng chỉ đáp ứng cho đàn bò vắt sữa khoảng 70% nhu cầu chất xơ vào mùa khô

2.2.3 Đặc điểm chuồng trại

Hệ thống chuồng trại của các nông hộ được xây dựng theo kiểu bán kiên cố, kết cấu nền xi măng, khung sắt, kiểu chuồng một mái, mái lợp bằng tole, có sân chơi, không có quạt và hệ thống phun sương, mật độ chăn nuôi vào khoảng 8 – 10 m2/con

2.2.4 Phương thức chăn nuôi 2.2.4.1 Thức ăn

Thức ăn thô: Thức ăn thô xanh chủ yếu là cỏ sả lá lớn và cỏ sả lá nhỏ Thức ăn thô khô như rơm khô và cỏ khô, phải bổ sung vào mùa khô do lượng thức ăn thô xanh thiếu hụt

Thức ăn tinh: Bao gồm nhiều loại cám hỗn hợp được mua từ các công ty sản xuất thức ăn gia súc như: ViNa, Proconco, Lái Thiêu, Thanh Bình…

Thức ăn bổ sung: Việc sử dụng thức ăn bổ sung khá phổ biến nhưng có sự khác nhau giữa các nông hộ, có hộ sử dụng hèm bia, rỉ mật đường, muối, có hộ thì sử dụng rỉ mật đường, urê và bã đậu nành bổ sung cho bò vắt sữa vào mùa nắng

2.2.4.2 Cách cho ăn

Đàn bò được cho ăn 4 – 5 lần trong ngày Thức ăn tinh cũng được tính theo năng suất sữa và cũng được cho ăn trong lúc vắt sữa Bình quân mỗi ngày bò của các hộ dân được ăn 40 – 50 kg cỏ xanh/con/ngày, vào mùa nắng cỏ thiếu, bò được thay thế lượng cỏ thiếu bằng 3 – 5 kg rơm và rỉ mật, urê được tính theo lượng vừa phải 0,4 – 0,6 kg/con/ngày Cám hỗn hợp cho ăn theo năng suất sữa, khoảng 0,4 – 0,5 kg cám cho một kg sữa

2.2.4.3 Vệ sinh – phòng bệnh

Vệ sinh: Đàn bò được tắm 4 lần trong ngày, 2 lần được tắm trước lúc vắt sữa và kết hợp vệ sinh chuồng trại, phân được đưa vào hố chứa cùng với nước xả thải rồi dùng để tưới cho đồng cỏ, còn một lần bò được tắm mát vào buổi trưa và lúc 8 giờ tối do không có hệ thống phun sương và quạt gió

Phòng bệnh: Công tác phòng ngừa dịch bệnh do cán bộ kỹ thuật của công ty đảm nhận hoàn toàn và theo đúng quy định của công ty Chuồng trại được sát trùng theo định kỳ hàng tháng Bò được tiêm phòng bệnh truyền nhiễm, tẩy ký sinh trùng đường ruột, ký sinh trùng đường máu và ngoại ký sinh Quy trình tiêm phòng được thực hiện nghiêm ngặt theo đúng Pháp lệnh Thú y

Vaccin tụ huyết trùng và vaccin lở mồm long móng được tiêm 2 lần 1 năm vào thời điểm giao mùa (tháng 4 – 5 và tháng 10 – 11) Kiểm tra brucellosis 1 năm 1 lần

2.2.4.4 Quá trình khai thác và tiêu thụ sản phẩm

Thời gian vắt sữa tùy thuộc vào từng hộ, nhưng thường từ 4 giờ sáng đến 5 giờ sáng và chiều thì 15 giờ 30 đến 17 giờ, hình thức vắt sữa bằng máy và một số hộ vắt bằng tay, sữa sau khi được vắt xong được đóng vào can nhựa và chở đến trạm thu mua của công ty tiêu thụ với thời gian quy định là 2 giờ sau khi vắt sữa

2.3 Sơ lược giống bò sữa Holstein Friesian (HF)

Bò Holstein Friesian hay còn gọi là bò lang trắng đen Hà Lan là giống bò sữa nổi tiếng nhất thế giới, được tạo ra ở Hà Lan từ thế kỉ XIV và không ngừng được cải thiện về phẩm chất, năng suất Mãi đến thế kỉ XV, bò lang trắng đen Hà Lan mới được bán ra khỏi nước và từ đó có mặt ở khắp thế giới

Sắc lông: có hai loại hình chính là màu lông lang trắng đen hoặc đen hoàn toàn có sáu vùng trắng ở giữa trán, chóp đuôi và 4 chân, một số ít có màu lông đỏ trắng Tính tình ôn hòa, dễ quản lý, khả năng gặm cỏ tốt, thích nghi rộng rãi với nhiều điều kiện khí hậu khác nhau Khi trưởng thành bò đực có trọng lượng 750 – 1.100 kg, bò cái 500 – 800 kg, bê sơ sinh có trọng lượng 35 – 45 kg

Bò cái HF có ngoại hình, thể chất đặc trưng của giống bò sữa cao sản: thân hình tam giác, phần sau sâu hơn phần trước, thân bò hẹp dần về phía trước giống như cái nêm, trước nhỏ, sau to Đầu dài, trán phẳng, u yếm không phát triển, bốn chân thẳng dài, cự ly chân rộng, bầu vú phát triển, tĩnh mạch vú nổi rõ, da mỏng đàn hồi tốt Sản lượng sữa bình quân 5.000 – 6.000 kg/chu kỳ vắt sữa 305 ngày Tỷ lệ mỡ sữa 3,2 – 3,6% Nếu được nuôi dưỡng tốt, sản lượng sữa có thể đạt 6.000 – 8.000 kg/chu kỳ, con cao nhất có thể đạt trên 8.000 kg/chu kỳ

Bò Holstein Friesian nuôi tốt 16 tháng có thể phối giống lần đầu, tuổi động dục là 12 – 16 tháng

Từ năm 1970 – 1978, Việt Nam đã nhập từ Cu Ba 1.130 con bò Holstein Friesian nuôi tại trung tâm giống bò sữa Sao Đỏ, Mộc Châu và nông trường giống

bò sữa Đức Trọng, Lâm Đồng Sản lượng sữa bò Holstein Friesian nuôi ở Sao Đỏ (Mộc Châu): trung bình 4.000 – 5.000 kg/chu kỳ vắt sữa 300 ngày, tỷ lệ béo 3,6%

Ưu thế của bò Holstein Friesian không chỉ ở khả năng cho sữa cao mà còn có khả năng cải tạo giống khác theo hướng sữa và cải tạo tầm vóc cho các bò địa phương nhỏ hơn Để có giống bò sữa nuôi rộng rãi ở nhiều vùng khác nhau của đất nước, trong nhiều năm qua các nhà khoa học đã tiến hành nghiên cứu lai tạo giống bò sữa Việt Nam bằng con đường lai giữa bò Holstein Friesian với bò Vàng Việt Nam đã có máu bò Zebu (Bò Lai Sind)

2.4 Chu kỳ động dục

Một chu kỳ động dục của bò sữa thông thường là 21 ngày và chia làm 4 giai đoạn (Henshow, 1990)

Giai đoạn tiền động dục

Vào ngày thứ 16 – 18, khi hàm lượng progesterone giảm dần do tác động của PGF2 , hàm lượng FSH tăng dần và kích thích các nang noãn phát triển Lúc bấy giờ, hàm lượng estrogen được sản xuất tăng dần cùng với sự trưởng thành của các nang noãn gây biểu hiện động dục ở bò cái và kích thích sự phân tiết LH, FSH tại tuyến yên thông qua việc gia tăng phóng thích GnRH từ vùng dưới đồi xuống tuyến yên Quá trình này xảy ra đến khi nào hàm lượng LH và FSH đạt đỉnh cao và đủ để gây ra “sóng rụng trứng” trên nang noãn “chín”

Estrogen làm thay đổi hoạt động sinh lý ở bò bao gồm làm gia tăng lượng máu tới tử cung, làm thành âm đạo dầy lên, tăng sự phát triển tế bào và nhung bào ở vòi trứng, làm cho các tế bào ở cổ tử cung, âm đạo và các tuyến ở tử cung tiết dịch nhầy Vào cuối giai đoạn này, con cái thường thể hiện thích gần con đực

Giai đoạn động dục

Giai đoạn này, estrogen ảnh hưởng lên hệ thống thần kinh trung ương gây phản xạ đứng yên, con cái chấp nhận cho con đực giao phối Estrogen ảnh hưởng toàn bộ đường sinh dục con cái và gây ra những biến đổi như tụ huyết ở thành tử cung, co thắt vòi trứng, giãn nở cổ tử cung, tăng tiết chất nhày trong suốt, âm hộ sưng và sung huyết LH tăng gây tăng tiết dịch nang và lúc này áp suất dịch nang

đạt đỉnh cao FSH tăng làm tăng tiết estrogen tạo phản xạ chịu đực LH tác động làm buồng trứng chín muồi, kết hợp với FSH phá vỡ bao noãn gây ra hiện tượng thải trứng Sự rụng rứng xảy ra khi LH và FSH đạt tỷ lệ LH / FSH là 3/1 Nếu tỷ lệ LH / FSH trên 3/1, sẽ có hiện tượng động dục không rõ gọi là động dục thầm lặng nhưng vẫn có rụng trứng Nếu tỷ lệ LH / FSH dưới 3/1, bò cái có biểu hiện động dục nhưng không rụng trứng gọi là động dục giả Sự rụng trứng xảy ra vào khoảng 12 giờ sau khi kết thúc động dục

Hình 2.1 Sự thay đổi hàm lượng các kích thích tố trong máu ở chu kỳ động dục bình thường của bò (Nguồn: Mugerwa, 1989)

Giai đoạn sau động dục

Sau khi rụng, trứng di chuyển đến sừng tử cung Tế bào trứng được hứng bởi vòi trứng trong quá trình rụng trứng GnRH kích thích thùy trước tuyến yên tiết ra LH, dưới tác động của LH, thể vàng được hình thành và phân tiết progesterone Progesterone tác động lên tuyến yên gây ức chế sự phân tiết FSH và LH, dẫn đến không có những nang noãn mới phát triển Ngoài ra, sự ức chế phân tiết FSH của tuyến yên còn có sự tham gia của inhibin - một loại kích thích tố dạng glucoprotein

Ngày của chu kỳ động dục

do tế bào hạt trong xoang bao noãn tiết ra (Bard và ctv, 1991; dẫn liệu của Hoàng Kim Giao và ctv, 1997) Về lâm sàng, sự tiết chất nhày giảm, tử cung trở nên mềm, dẻo và giãn nở Thành tử cung trở nên dày hơn để chuẩn bị cho sự mang thai Cổ tử cung bắt đầu đóng lại Giai đoạn này kéo dài khoảng 3 – 4 ngày

Giai đoạn nghỉ ngơi

Giai đoạn này kéo dài từ ngày thứ 5 đến ngày thứ 16 – 18 của chu kỳ động dục Thể vàng thành thục và tiết progesterone ảnh hưởng đến đường sinh dục Trong suốt giai đoạn này, sự tuần hoàn của progesterone với hàm lượng cao đã ngăn cản sự phát triển của các nang noãn Progesterone ức chế sự sản xuất và phân tiết LH và FSH tại tuyến yên bằng cách ngăn cản sự phóng thích các GnRH từ vùng dưới đồi xuống tuyến yên Đây là cơ chế phản hồi “âm tính” của progesterone Trong đường sinh dục, nội mạc tử cung dày lên, chất nhầy âm đạo trở nên ít và dính, cơ tử cung giãn nở

Nếu trứng không được thụ tinh, thể vàng chỉ tồn tại trong vòng 10 – 12 ngày (Henshow, 1990) hoặc dài nhất là 15 – 17 ngày (Hoàng Kim Giao và ctv, 1997) Hàm lượng progesterone cao do thể vàng tiết ra sẽ gây ra sự phân tiết PGF2 từ thành tử cung vào ngày thứ 16 của chu kỳ PGF2 sẽ gây phân hủy thể vàng thông qua việc co mạch làm giảm lưu lượng máu đến nuôi thể vàng (Navy và Cook, 1978) Thể vàng thoái hóa dẫn tới giảm lượng progesterone được phân tiết, giải phóng ức chế ở vùng dưới đồi và tuyến yên, dẫn đến sự tiết FRF và FSH, kích thích sự phát triển của các nang noãn mới Điều đó có nghĩa là bắt đầu sự chuyển tiếp từ pha hoàng thể sang pha nang noãn và bắt đầu một chu kỳ động dục mới Đôi khi, PGF2 không được tiết ra bình thường như trường hợp bò cái viêm tử cung, thể vàng không bị thoái hóa, progesterone vẩn tiếp tục ức chế vùng dưới đồi và tuyến yên không tiết ra FSH và LH, khiến các nang noãn không phát triển, bò sẽ không có chu kỳ động dục mới Lúc này, bò cái sẽ chậm động dục do hoàng thể tồn lưu

Nếu trứng được thụ tinh, cơ thể của thú sẽ có những thay đổi về mặt hình thái và nội tiết để bước vào thời kỳ mang thai và sinh đẻ

Hình 2.2 Cơ chế tiêu hoàng thể của PGF2 trong chu kỳ động dục

2.5 Hiện tượng chậm sinh và chậm động dục sau khi sinh 2.5.1 Bệnh ấu trĩ (hay còn gọi là chứng thiểu năng sinh dục)

Bò cái khi đến tuổi thành thục nhưng ngoại hình của chúng như một con bê, bộ phận sinh dục chưa phát triển hoàn toàn không sinh sản được và cũng do tuyến yên phát triển không bình thường hoặc do cơ năng tuyến giáp trạng bị rối loạn nên các hormone ảnh hưởng đến việc thúc đẩy sự phát triển của cơ quan sinh dục cái Bệnh ấu trĩ gây bò cái đến tuổi thành thục về tính trạng mà không động dục, hoặc đã phối giống nhiều lần mà vẫn không đậu thai Khi kiểm tra, bằng cách khám qua trực tràng thấy bộ phận sinh dục phát triển không đầy đủ như: sừng tử cung nhỏ, buồng trứng không phát triển hoặc âm hộ và âm đạo bé không thể phối giống được Nguyên nhân chủ yếu do nuôi dưỡng kém hoặc rối loạn nội tiết tố, khi kiểm tra phát

PGF2 Vòng tuần hoàn địa phương

Tử cung

Buồng trứng

Làm co mạch máu ngoại vi đến nuôi thể vàng

Hoàng thể thoái hóa

Progesterone 

Hình thành chu kỳ động dục mới PGF2

hiện thú đã mắc bệnh này cần nên loại thải không sử dụng làm giống (Vương Ngọc Long, 2001)

2.5.2 Hiện tượng Free – Matin

Bò cái đến tuổi thành thục về tính nhưng không động dục, âm hộ nhỏ, âm đạo rất hẹp và ngắn, không có cổ tử cung, nếu có chỉ có một lỗ nhỏ không thể phối giống được và bầu vú không phát triển được, không có tuyến vú chỉ có tuyến mỡ không có lỗ tiết sữa, khi ta kiểm tra qua trực tràng không thấy cổ tử cung, hai sừng tử cung nếu có cũng nhỏ, hiện tượng thấy ở bò sinh đôi, một đực một cái (bò cái thì 91 đến 94% không có khả năng sinh sản còn bò đực thì vẫn phát triển bình thường) Đây là nguyên nhân khi bò cái mang thai có thể có một số mạch máu màng nhung mao của thai dính lại với nhau Tuyến sinh dục của thai được phát triển sớm, kích thích tố của tuyến sinh dục thông qua màng thai, bào thai cái gây ra hai tác dụng ở cơ quan sinh dục cái là làm ức chế cơ quan sinh dục cái không cho phát triển làm cho các tuyến sinh dục cái bị đực hóa Bò bị hiện tượng này đào thải ngay không chọn làm giống (Nguyễn Hữu Ninh và Bạch Đăng Phong, 1994)

2.5.3 Buồng trứng teo và giảm cơ năng

Do bò sinh đẻ nhiều lần, già yếu cùng với việc chăm sóc, nuôi dưỡng không tốt Khi giao phối cận huyết cũng xảy ra hiện tượng giảm cơ năng và teo buồng trứng (Nguyễn Hữu Ninh và Bạch Đăng Phong, 1994)

Khi khám qua trực tràng biểu hiện cho thấy buồng trứng không thay đổi, không khám được nang noãn hoặc hoàng thể Có những trường hợp chỉ có một bên buồng trứng, buồng trứng teo lại bằng hạt đậu Nếu kiểm tra nhiều lần thấy buồng trứng không thay đổi thì kết luận đó là buồng trứng đã bị teo, trường hợp này, bò thường biểu hiện động dục không rõ hoặc có động dục nhưng không rụng trứng, chu kỳ động dục kéo dài

Biện pháp điều trị chủ yếu dựa vào việc cải thiện chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng, bổ sung thêm chất bột đường, chất béo, vitamin, khoáng, thả bò cái chung với bò đực để kích thích phục hồi khả năng sinh dục Nếu bò sinh sản mà bị viêm, teo buồng trứng thì nên loại thải (Nguyễn Ngọc Khánh, 2004)

2.5.4 U nang buồng trứng

Nguyên nhân là do chăm sóc nuôi dưỡng kém, thức ăn không tốt, rối loạn nội tiết tố, hoặc bò bị mắc bệnh truyền nhiễm Bò biểu hiện động dục mãnh liệt, kéo dài không theo chu kỳ nhất định

Khối u buồng trứng là bệnh thường gặp trong sản khoa khi chẩn đoán, rất khó phân biệt giữa u nang noãn và u nang hoàng thể

U nang noãn là những nang chín không bị vỡ vào những ngày qui định của chu kỳ lên giống nên không thành lập hoàng thể, nhưng chúng tiếp tục lớn dần thành khối u mỏng, cấu trúc khối u mềm Khi bị u nang, nang noãn tiết rất nhiều folliculin nên con vật biểu hiện mãnh liệt không theo chu kỳ nhất định Một số trường hợp tế bào thượng bì nang noãn bị thoái hóa không hình thành được folliculin nên con đực không động dục, trên buồng trứng hình thành một hoặc một số u nang trong chứa dịch, kiểm tra qua trực tràng phát hiện u nang nổi lên trên bề mặt buồng trứng

U hoàng thể: thường lớn hơn u nang noãn, có thể xuất hiện một hoặc cả hai bên buồng trứng, khối u rắn chất thành khối u dày hơi nhám, bên trong chứa chất hoàng thể sánh đặc Biểu hiện của bò không động dục hoặc động dục yếu không theo chu kỳ, một số bò vẫn không động dục nhưng khi phối giống đúng chu kỳ thì không đậu thai (Cao Thanh Phú, 2003)

2.5.5 Thoái hóa buồng trứng

Khi tổ chức tế bào buồng trứng bị thoái hóa, teo lại, các tổ chức tăng sinh thay thế Nguyên nhân buồng trứng bị viêm không phát hiện và không điều trị kịp thời; đồng thời, cũng có thể nuôi dưỡng chăm sóc kém, chẩn đoán qua trực tràng sẽ thấy một phần hoặc toàn bộ buồng trứng bị chai cứng, mặt buồng trứng không còn trơn chu mà lồi lõm, thể tích teo nhỏ

Biện pháp điều trị chủ yếu là cải thiện chế độ nuôi dưỡng chăm sóc, sử dụng kích thích tố sinh dục và bổ sung các vitamin A, D, E giúp cho việc phục hồi cơ năng của buồng trứng, nên loại thải

2.6 Vai trò progesterone trong sinh sản 2.6.1 Nguồn gốc progesterone

Progesterone do hoàng thể từ buồng trứng tiết ra Các tế bào trong nang sau khi rụng trứng vẫn còn dính trong buồng trứng và giữ vai trò rất quan trọng trong quá trình sinh sản, chúng phát triển to ra, và tăng tiết progesterone

Hoàng thể tổng hợp progesterone từ cholesterol, khi qua gan sẽ bị thoái hóa và biến thành pregnandiol và thải qua nước tiểu

Ngoài hoàng thể thì vỏ thượng thận cũng sản xuất một ít progesterone và nhau thai tiết ra ở 5 tháng cuối thời kỳ mang thai (Nguyễn Minh Thanh, 2005)

2.6.2 Bản chất, khối lượng phân tử, cấu trúc phân tử

Progesterone là một hormone steroid với 21 carbone Progesterone còn tổng hợp và phân tiết từ nhau thai trong suốt giai đoạn thú cái có mang

Tác dụng sinh học với cường độ mạnh giúp cho thú cái hoàn thành bản năng làm mẹ

Progesterone có công thức phân tử là C12H30O2 Khối lượng phân tử là 314,45

Progesterone được phân tách từ hoàng thể heo nái có cấu trúc phân tử gồm: hai dạng tinh thể là dạng bền vững và không bền vững

Progesterone ở dưới dạng những tinh thể không màu hay bội kết tinh màu trắng không mùi

Nóng chảy ở 1270C – 1290C

Thực tế không tan trong nước, tan trong cồn, tan trong ete, dễ tan trong chloroform, ít tan trong dầu

Phản ứng màu Zimmernam cho màu đỏ

Phản ứng tạo bis dinitrophenylhyrazon-progesterone

Đun nóng progesterone và dinitro-2,4-phenylhydrazin trong cồn với sự có mặt của HCl thì có sự xuất hiện kết tủa đỏ nâu của bis dinitrophenylhyrazon-progesterone, chất nóng chảy ở 2700C – 2800C (Nguyễn Minh Thanh, 2005)

2.6.3 Vận chuyển và chuyển hóa progesterone và tác dụng của progesterone

Vận chuyển và chuyển hóa: Khi được vận chuyển trong máu dưới dạng gắn chủ yếu với albumin huyết tương và các globulin gắn đặc hiệu với progesterone, vài phút sau khi được bài tiết tất cả progesterone được thoái hóa thành các steroid khác không còn tác dụng của progesterone Gan rất quan trọng trong quá trình chuyển hóa này Progesterone có sản phẩm cuối cùng là pregnandiol được bài xuất theo nước tiểu; vì vậy, có thể đánh giá mức độ tạo thành progesterone trong cơ thể thông qua mức bài xuất progesterone qua đường tiểu

Sự tác dụng của progesterone lên tử cung: Kích thích sự bài tiết của niêm mạc tử cung ở trạng thái sẵn sàng đón trứng đã thụ tinh và làm tổ Kích thích tế bào tuyến niêm mạc tử cung bài tiết một lớp dịch quánh dày và tác dụng lên vòi Fallope, progesterone kích thích tế bào niêm mạc, vòi Fallope bài tiết dịch chứa chất dinh dưỡng để nuôi dưỡng trứng đã thụ tinh, thực hiện quá trình phân chia trong khi di chuyển vào buồng tử cung

Tác dụng lên tuyến vú: Làm phát triển tuyến thùy kích thích tế bào tuyến vú tăng sinh và trở nên có khả năng bài tiết

Tác dụng lên cân bằng điện giải: Steroid khác progesterone với nồng độ cao có thể tăng sự tái hấp thu với Na+, Cl- và nước ở ống lượn xa

Thực tế cho thấy, progesterone thường gây bài xuất ion Na+ và nước; vì, progesterone có khả năng cạnh tranh với aldosterone để gắn vào thụ thể sẽ làm tăng tái hấp thu ion và nước, tác dụng này của progesterone lại yếu hơn nhiều so với aldosterone; cho nên, cơ thể mất nước và muối thì không được tái hấp thu, sự tăng ion Na+ được bài xuất nên lại được tăng tiết aldosterone từ tuyến vỏ thượng thận, hiện tượng này thường gặp ở thời kỳ có thai

Ảnh hưởng thân nhiệt: Nhiệt độ của cơ thể tăng từ 0,3 – 0,50C do sự tác động của progesterone, nhưng cơ chế làm tăng nhiệt độ của progesterone thì chưa rõ Có ý kiến cho rằng progesterone tác dụng lên trung tâm điều nhiệt ở vùng dưới đồi

Điều hòa bài tiết: Progesterone chịu ảnh hưởng điều khiển trực tiếp của hormone LH, do tuyến yên bài tiết Nếu nồng độ LH tăng trong máu, hoàng thể sẽ

được nuôi dưỡng và bài tiết nhiều progesterone Ngược lại, nếu mà tuyến yên bài tiết ít LH, hoàng thể sẽ bị thoái hóa và progesterone sẽ được bài tiết ít

Tóm lại, progesterone có tác dụng đặc biệt quan trọng nó làm cho quá trình có thai xảy ra bình thường và có các tác dụng như sau:

Phát triển tế bào nội mạc tử cung, những tế bào này đóng vai trò quan trọng trong việc nuôi dưỡng bào thai ở thời kỳ đầu

Progesterone giảm co bóp tử cung khi có thai, do đó ngăn cản sẩy thai

Progesterone làm tăng bài tiết dịch và niêm mạc tử cung để cung cấp dinh dưỡng cho phôi

Progesterone ảnh hưởng đến quá trình phân chia của trứng đã thụ tinh Progesterone có tác dụng làm phát triển thùy và bọc tuyến vú

Với những tác động trên, gọi progesterone là hormone an thai… Vì lý do nào đó nồng độ progesterone giảm đi, và sự phát triển bào thai sẽ bị ảnh hưởng

Cơ quan sinh dục chuẩn bị là tổ hợp tử nuôi dưỡng bào thai, progesterone làm cho tử cung yên tĩnh; đồng thời, giúp cho lớp niêm mạc tử cung phát triển và làm cho các tuyến ống thẳng phân nhánh, xoắn lại để chuẩn bị tiết sữa sau này

Khi hàm lượng progesterone tăng cao trong máu ngoại biên chúng tỏ có sự hiện diện của hoàng thể trong buồng trứng

Hiện nay, kiểm soát sinh sản ở thú cái progesterone là chỉ tiêu cần kiểm tra, chủ yếu là tính ổn định về nồng độ phản ánh ở giai đoạn của chu kỳ động dục và sự ổn định của bào thai (Nguyễn Minh Thanh, 2005)

2.6.4 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường, mang thai 2.6.4.1 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường

Hàm lượng progesterone thấp nhất vào ngày động dục với mức nhỏ hơn 1 ng/ml Sau đó tăng dần lên từ ngày thứ 3 của chu kỳ Hàm lượng progesterone đạt đỉnh cao từ ngày 9 đến ngày 18 của chu kỳ động dục với mức lớn hơn 3 ng/ml Đỉnh cao của hàm lượng progesterone không cố định vào một ngày nào trong khoảng thời gian từ ngày thứ 9 đến ngày thứ 18 của chu kỳ động dục Từ ngày thứ

19 của chu kỳ thì hàm lượng progesterone giảm xuống rất nhanh và đạt mức thấp nhất vào ngày thứ 20 đến ngày thứ 21 của chu kỳ với mức nhỏ hơn 1 ng/ml

Từ việc xác lập động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường đã cho chúng ta rất nhiều ứng dụng trong thực tiễn, đặc biệt là việc xác lập động thái progesterone trong các trường hợp khác nhau của rối loạn sinh sản do nội tiết, từ đĩ biết được tình trạng hoạt động của buồng trứng

Hình 2.3 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường ở bị

(Chung Anh Dũng, 2002)

2.6.4.2 Động thái progesterone lúc mang thai

Số liệu thống kê cho thấy cĩ khoảng 27,4% số bị cái khơng thụ thai sau khi gieo tinh nhân tạo, nhưng vẫn khơng phát hiện được triệu chứng động dục trở lại cho đến ngày 60 khám thai qua trực tràng sau khi gieo tinh nhân tạo Như vậy, nếu chỉ với biện pháp khám thai qua trực tràng như hiện nay thì số bị này đã cĩ khoảng cách tăng đáng kể giữa 2 lứa đẻ, ít nhất là tăng 2 tháng Trong khi đĩ, các nghiên cứu cũng chứng minh rằng việc khám thai qua trực tràng tốt nhất cũng nên thực hiện sớm nhất vào ngày thứ 60 sau khi gieo tinh nhân tạo Nếu thực hiện kỹ thuật này sớm hơn, trong giai đoạn 40 ngày sau khi gieo tinh nhân tạo sẽ làm tăng đáng

GIAI ĐỌAN NGHỈ NGƠI

(Estrus phase)

GIAI ĐOẠN

SAU ĐỘNG

(Post estrus phase)

(Estrus phase)

GIAI ĐOẠN

SAU ĐỘNG

(Post estrus phase)

kể tỷ lệ sẩy thai từ 10% đến 11% Đo hàm lƣợng progesterone trong máu hoặc sữa vào ngày thứ 21 đến ngày thứ 24 sau khi gieo tinh để cĩ thể xác định tình trạng cĩ hay khơng cĩ thai ở bị cái Cơ sở của việc ứng dụng hàm lƣợng progesterone vào ngày thứ 21 sau khi gieo tinh để xác định sớm sự mang thai của bị cái

Hình 2.4 Động thái progesterone giúp chẩn đốn sớm cĩ thai

Chẩn đóancó thai dựavào hàm

… … … …

Không cóthai

… … … …

Không cóthai

đạt tới độ chính xác 95 – 100% Do vậy, progesterone vốn được coi là công cụ để chẩn đoán có thai sớm nên được sử dụng cho mục đích chẩn đoán không có thai và từ đó có thể xác định được tình trạng có thai hay không có thai của gia súc Việc sớm xác định không có thai này sẽ tránh được sự bỏ lỡ cơ hội phối giống tiếp theo (Chung Anh Dũng, 2002)

2.6.5.2 Xác nhận động dục

Bò cái thường không có dấu hiệu động dục rõ ràng dẫn đến việc quyết định phối giống sai Vào thời điểm phối tinh có tới 15 – 20% bò sữa không động dục Ở một số trang trại, tỷ lệ phát hiện động dục sai có thể cao tới 50% hoặc hơn Progesterone trong sữa có thể dùng để xác định động dục ở bò Nếu mẫu sữa kiểm tra cho thấy hàm lượng progesterone cao thì có thể bò không động dục và cần được theo dõi cẩn thận cũng như kiểm tra lại các mẫu lấy vào thời điểm muộn hơn Có thể tiến hành đơn giản bằng cách giữ lại mẫu sữa vào thời điểm bò được đưa ra để phối tinh cho đến khoảng 2 tuần hoặc một tháng sau Nếu nhiều hơn 10% số bò được phối tinh vào thời điểm có hàm lượng progesterone cao thì có thể chứng minh được là việc phát hiện động dục không chính xác

Các stress với môi trường có tác động rất lớn đến hiệu quả sinh sản Đặc biệt, stress nhiệt là nguyên nhân dẫn đến việc giảm nghiêm trọng tỷ lệ có thai, tăng tỷ lệ chết phôi sớm, giảm độ dài và cường độ của các biểu hiện động dục và làm giảm thể trọng bé sinh ra Ngày nay người ta đã sử dụng progesterone trong sữa để trợ giúp cho các chương trình phối giống trong điều kiện gia súc bị stress do môi trường (Chung Anh Dũng, 2002)

2.7 Nguyên lý kỹ thuật ELISA (Progesterone – Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)

Phản ứng ELISA thường kết hợp kháng nguyên – kháng thể không thể phát hiện bằng mắt thường, kỹ thuật ELISA đã lợi dụng đặc tính hấp thụ tự nhiên của protein lên polyethylen đã gắn kháng nguyên hoặc kháng thể lên giá rồi cho kháng nguyên hoặc kháng thể tương ứng có đánh dấu enzyme và tạo phản ứng

Bỏ chất đánh dấu không kết hợp, cho thêm vào hỗn hợp chất hiện màu Cũng nhờ hoạt tính xúc tác của enzyme giải phóng oxy nguyên tử [O] từ H2O từ oxy hóa hiện màu làm thay đổi màu của hỗn dịch Như vậy, kỹ thuật ELISA gồm có 3 thành phần tham gia phản ứng (kháng nguyên, kháng thể và chất hiện diện màu) đồng thời thực hiện có 2 bước:

Trong phản ứng miễn dịch: là sự kết hợp kháng nguyên - kháng thể

Trong phản ứng hóa học:nhờ hoạt tính của enzyme để giải phóng [O] vì chính [O] này oxi hoá chất chỉ thị màu Chất chỉ thị thay đổi màu có nghĩa là chứng minh sự có mặt của enzyme và chứng minh sự kết hợp giữa kháng nguyên với kháng thể Có 2 loại kỹ thuật ELISA chính: kỹ thuật ELISA trực tiếp và kỹ thật ELISA gián tiếp

– Kỹ thuật ELISA trực tiếp: khi kháng nguyên được gắn vào đáy giếng phản ứng sau đó phủ lên kháng thể đặc hiệu gắn enzyme, ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp Khi rửa để loại bỏ kháng thể gắn enzyme không kết hợp với kháng nguyên và cho vào giếng chất hiện màu Đọc kết quả bằng phổ kế sau 10 phút

Kết quả có 2 trường hợp xảy ra:

Kháng nguyên đặc hiệu với kháng thể thì sẽ có sự kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể gắn enzyme không bị rửa trôi Enzyme sẽ giải phóng [O] từ H2O2 để oxy hóa chất hiện màu, kết quả làm thay đổi màu hỗn dịch trong giếng

Kháng nguyên không đặc hiệu với kháng thể thì không xảy ra sự kết hợp kháng nguyên với kháng thể, enzyme bị rửa trôi, kết quả là hỗn dịch trong giếng phản ứng không thay đổi màu

– Kỹ thật ELISA gián tiếp: Theo nguyên tắc kỹ thuật ELISA trực tiếp và gián tiếp không khác nhau, nhưng kỹ thuật gián tiếp có thêm một bước phản ứng

Conjugate trong kỹ thuật trực tiếp là kháng thể đặc hiệu gắn với enzyme, trong khi đó, conjugate của phản ứng gián tiếp là kháng thể khác với enzyme và đọc kết quả xảy ra 2 trường hợp:

Nếu như kháng nguyên đặc hiệu với kháng thể, sẽ có sự kết hợp kháng nguyên – kháng thể và sự kết hợp giữa conjugate với phức hợp kháng nguyên kháng thể, trong giếng hỗn dịch có enzyme để giải phóng [O] từ H2O2, oxy hoá chất hiện màu làm thay đổi màu hỗn dịch (phản ứng dương tính)

Khi kháng nguyên không đặc hiệu với kháng thể thì không có sự kết hợp kháng nguyên – kháng thể bị rửa trôi, đồng thời, conjugate không kết hợp với kháng nguyên cũng bị rửa trôi, hỗn dịch không có sự kết hợp với kháng nguyên với kháng thể, kháng thể bị rửa trôi và conjugate không kết hợp với kháng nguyên cũng bị rửa trôi, hỗn dịch sẽ không có enzyme để giải phóng enzyme [O] từ H2O2, chất hiện màu không bị oxy hoá, hỗn dịch không thay đổi màu (phản ứng âm tính) (Ngô Phương Nghị, 2003)