(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu sự ảnh hưởng của salicylic acid và aspirin trong tăng trưởng và phát triển lan thạch hộc thiết bì (dendrobium officinale kimura et migo) trong điều kiện in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HCM VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH −− ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ẢNH HƯỞNG CỦA ACID SALICYLIC, ASPIRIN TRONG TĂNG TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CÂY LAN THẠCH HỘC THIẾT BÌ (Dendrobium officinale Kimura et Migo) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Đ Ỗ Đ Ă N G G I Á P Sinh viên: LÊ NGUYỄN HỒNG KIM NGÂN MSSV: 1411100072 TP Hồ Chí Minh, năm 2018 Lớp: 14DSH01 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HCM VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH −− ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ẢNH HƯỞNG CỦA ACID SALICYLIC, ASPIRIN TRONG TĂNG TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CÂY LAN THẠCH HỘC THIẾT BÌ (Dendrobium officinale Kimura et Migo) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên: LÊ NGUYỄN TS Đ Ỗ Đ Ă N G G I Á P HOÀNG KIM NGÂN MSSV: 1411100072 Lớp: 14DSH01 TP Hồ Chí Minh, năm 2018 Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CÁM ƠN iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .v DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH BIỂU ĐỒ vii DANH SÁCH HÌNH viii Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Nội dung thực 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.5 Yêu cầu đề tài 1.6 Kết cấu đề tài .4 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lan thạch hộc thiết bì 2.2 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật 13 2.3 Kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật .22 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 30 3.1 Thời gian địa điểm .30 iii Đồ án tốt nghiệp 3.2 Vật liệu hoá chất 30 3.3 Điều kiện nuôi cấy 31 3.4 Nội dung nghiên cứu 32 3.5 Phương pháp thu tiêu theo dõi 40 3.6 Phương pháp xử lý số liệu 42 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .43 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO .58 PHỤ LỤC iv Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan đồ án tốt nghiệp “Ảnh hưởng Acid Salicylic Aspirin tăng trưởng phát triển lan thạch hộc thiết bì điều kiện in vitro” chuyên đề nghiên cứu em trực tiếp thực hướng dẫn thầy T.S Đỗ Đăng Giáp Tất số liệu, kết trình bày đồ án tốt nghiệp khách quan không chép số liệu cơng trình nghiên cứu trước Em hoàn toàn chịu trách nhiệm trước nhà trường hội đồng cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2018 Sinh viên thực Lê Nguyễn Hoàng Kim Ngân v Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp này, em xin chân thành cảm ơn Trường Đại học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh ban giám hiệu tạo điều kiện thuận lợi cho sinh viên chúng em học tập, sinh hoạt nghiên cứu thêm nhiều điều hay bổ ích Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Viện Khoa học Ứng dụng HUTECH, ngành Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường, trường Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức quý báu, kinh nghiệm quý báu học làm suốt năm học vừa qua Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy T.S Đỗ Đăng Giáp tận tình hướng dẫn giúp đỡ em trình học tập làm đồ án tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè đồng hành giúp đỡ chúng em trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2018 Sinh viên thực Lê Nguyễn Hoàng Kim Ngân vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ASA Acetylsalicylic acid (Aspirin) BA Benzyladenine BAP – benzylaminopurine cs Cộng ĐC Đối chứng IFN – gamma Interferon – gramma g Gram mcg/g Microgram/gram MS Môi trường Murashige – Skoog NAA α - Naphthaleneacetic acid ND Nước dừa NT Nghiệm thức SA Salicylic Acid TLK Trọng lượng khô TLT Trọng lương tươi vii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Bảng thiết bị Bảng 3.2 Bảng dụng cụ Bảng 3.3 Bảng hóa chất Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng SA sử dụng thí nghiệm 1.1 Bảng 3.5 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng SA sử dụng thí nghiệm 1.2 Bảng 3.6 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ASA sử dụng thí nghiệm 2.1 Bảng 3.7 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ASA sử dụng thí nghiệm 2.2 Bảng 4.1 Bảng khảo sát ảnh hưởng SA nồng độ lớn lên lan thạch hộc thiết bì sau tuần quan sát Bảng 4.2 Bảng khảo sát ảnh hưởng ASA nồng độ lớn lên lan thạch hộc thiết bì sau tuần quan sát Bảng 4.3 Bảng khảo sát ảnh hưởng SA nồng độ nhỏ lên lan thạch hộc thiết bì sau tuần quan sát Bảng 4.4 Bảng khảo sát ảnh hưởng ASA nồng độ nhỏ lên lan thạch hộc thiết bì sau tuần quan sát viii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Ảnh hưởng SA (dãy nồng độ lớn) lên chiều cao lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng SA (dãy nồng độ lớn) lên tổng số chồi lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng ASA (dãy nồng độ lớn) lên chiều TLT TLK lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.4 Ảnh hưởng ASA (dãy nồng độ lớn) lên chiều cao lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.5 Ảnh hưởng ASA (dãy nồng độ lớn) lên tổng hàm lượng Chlorophyll lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.6 Ảnh hưởng SA (dãy nồng độ nhỏ) lên tổng số chồi lan thạch hộc thiết bì Biểu đồ 4.7 Ảnh hưởng ASA (dãy nồng độ nhỏ) lên tổng số chồi lan thạch hộc thiết bì ix Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Lan thạch hộc thiết bì Hình 2.2 Thân hoa lan thạch hộc thiết bì Hình 2.3 Lan thạch hộc thiết bì Hình 2.4 Thân khí sinh lan thạch hộc Hình 2.5 Thân lan thạch hộc thiết bì Hình 2.6 Hoa lan thạch hộc thiết bì Hình 2.7 a) Cơng thức cấu tạo; b) Cấu trúc không gian; c) Salicylic acid Hình 2.8 Sơ đồ đường tổng hợp salicylic acid Hình 2.9 Các ảnh hưởng SA lên thực vật Hình 2.10 a) Cơng thức cấu tạo; b) Cấu trúc khơng gian; c) Aspirin Hình 2.11 Dẫn xuất Aspirin từ Salicylic acid Hình 2.12 Quy trình nuôi cấy sinh khối lan gấm kỹ thuật bioreactor a: mẫu cấy ban đầu b, b1: mẫu cấy sau tuần nuôi cấy c, c1: khối lượng sinh khối thu nhận Hình 3.1 Mẫu ni cấy ban đầu Hình 3.2 Mẫu lan thạch hộc sử dụng để tiến hành thí nghiệm SA ASA Hình 3.3 Lan thạch hộc thiết bì sấy khơ Hình 4.1 Sự hình thành phát triển chồi lan Thạch hộc mơi trường MS + SA (nồng độ lớn) Hình 4.2 Sự hình thành phát triển chồi lan Thạch hộc thiết bì mơi trường MS + AS (nồng độ lớn) Hình 4.3 Sự hình thành phát triển chồi lan Thạch hộc môi trường MS + SA (nồng độ nhỏ) Hình 4.4 Sự hình thành phát triển chồi lan Thạch hộc môi trường MS + AS (nồng độ nhỏ) x Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different • t Grouping Mean N T A A A 2.2100 SA2 1.7867 SA1 B B B 0.6033 SA3 0.2533 SA0 Trắc nghiệm phân hạng tổng số chồi mơi trường có SA (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference 0.05 3.25 2.30600 3.3943 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A 16.667 SA2 13.333 SA1 10.667 SA3 0.2533 SA0 B B B • C C C Trắc nghiệm phân hạng chiều cao môi trường có AS (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square iii 0.05 0.276667 Đồ án tốt nghiệp Critical Value of t Least Significant Difference 2.30600 0.9904 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A A A 3.6333 AS1 3.1000 AS2 2.8000 AS3 2.4333 AS0 B B B B B • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng tươi mơi trường có AS (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference 0.05 0.39317 2.30600 1.1806 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A 2.3043 AS1 1.3783 AS2 0.9377 AS3 0.9290 AS0 B B B B B • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng khơ mơi trường có AS (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate iv Đồ án tốt nghiệp Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.001988 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.0839 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A 0.16433 AS1 0.09833 AS2 0.06833 AS3 0.06667 AS0 B B B B B • Trắc nghiệm phân hạng hàm lượng Chlorophyll mơi trường có AS (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.007033 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.1579 Means with the same letter are not significantly different • t Grouping Mean N T A A A 2.31000 AS2 2.28000 AS3 B B B 0.30333 AS1 0.16000 AS0 Trắc nghiệm phân hạng tổng số chồi mơi trường có AS (0 mg/L, mg/L, mg/L, mg/L) The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N v Đồ án tốt nghiệp NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise errorrate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 3.916667 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 3.7263 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A 11.333 AS1 8.000 AS2 7.000 AS3 2.667 AS0 B B B B C vi Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng chiều cao mơi trường có SA (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng tươi mơi trường có SA (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) vii Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng khơ mơi trường có SA (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) viii Đồ án tốt nghiệp ix Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng hàm lượng chlorophyll môi trường có SA (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) • Trắc nghiệm phân hạng tổng số chồi mơi trường có SA (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) x Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng chiều cao mơi trường có AS (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) xi Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng tươi môi trường có AS (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) xii Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng trọng lượng khơ mơi trường có AS (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) xiii Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng hàm lượng chlorophyll mơi trường có AS (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) xiv Đồ án tốt nghiệp • Trắc nghiệm phân hạng tổng số chồi mơi trường có AS (0 mg/L, 1,0 mg/L, 1,2 mg/L, 1,4 mg/L, 1,6 mg/L, 1,8 mg/L, mg/L) xv Đồ án tốt nghiệp xvi Đồ án tốt nghiệp ... quý tăng nhanh tốc độ sinh trưởng lan thạch hộc, đề tài: ? ?Nghiên cứu ảnh hưởng Salicylic acid Aspirin tăng trưởng phát triển lan thạch hộc thiết bì (Dendrobium officinale Kimura et Migo) điều kiện. .. lan thạch hộc thiết bì ix Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Lan thạch hộc thiết bì Hình 2.2 Thân hoa lan thạch hộc thiết bì Hình 2.3 Lan thạch hộc thiết bì Hình 2.4 Thân khí sinh lan thạch. .. ảnh hưởng SA (dãy nồng độ lớn) lên khả sinh trưởng lan thạch hộc (Dendrobium officinale Kimura et Migo) Mục đích: Xác định ảnh hưởng nồng độ SA lên phát triển lan thạch hộc (Dendrobium officinale