ĐẠI CƯƠNG VỀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ

ĐẠI CƢƠNG VỀ PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.1 Định nghĩa – Mục đích 19.2 Phân loại 19.3 Một số khái niệm 19.4 Kỹ thuật tách sắc ký 19.5 Peak sắc ký: đặc trƣng 19.6 Độ phân giải cột 19.7 Kỹ thuật thực nghiệm & ứng dụng 19.8 Tối ƣu hóa trình sắc ký CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.1 ĐỊNH NGHĨA-MỤC ĐÍCH • Định tính Tách • Định lƣợng • Tinh chế,… Hỗn hợp Các cấu tử ΦS φm Mẫu (A,B,C) CuuDuongThanCong.com C B A https://fb.com/tailieudientucntt CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.2 PHÂN LOẠI – Dựa vào phương tiện tách – Dựa vào trạng thái φs & φm cân chuyển chất pha – Dựa theo chế trình tách – Dựa kỹ thuật tách sắc ký CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PHÂN LOẠI DỰA VÀO PHƢƠNG TIỆN TÁCH Sắc ký cột Sắc ký giấy Sắc ký mỏng (Sắc ký phẳng) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PHÂN LOẠI DỰA VÀO TT CỦA φs & φm VÀ CB CHUYỂN CHẤT GIỮA CÁC PHA PHÂN LOẠI DỰA VÀO TRẠNG THÁI CỦA PHA ĐỘNG Sắc ký khí GC (Gas Chromatography) φm: khí Sắc ký lỏng LC (Liquid Chromatography ) φm: lỏng Tiến hành cột Tiến hành cột & phẳng CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PHÂN LOẠI DỰA VÀO TT CỦA φs & φm VÀ CB CHUYỂN CHẤT GIỮA CÁC PHA PHÂN LOẠI DỰA VÀO TRẠNG THÁI CỦA PHA TĨNH Sắc ký HẤP PHỤ φs: rắn (chất hấp phụ) Sắc ký PHÂN BỐ φs: lỏng CuuDuongThanCong.com Sắc ký TRAO ĐỔI ION φs: nhựa trao đổi ion Sắc ký RÂY PHÂN TỬ φs: vật liệu rắn độ xốp lớn có lỗ kích thước xác định https://fb.com/tailieudientucntt PL THEO CƠ CHẾ CỦA QT TÁCH (Tƣơng tác chất sắc ký với φs & φm ) Sắc ký hấp phụ CuuDuongThanCong.com Sắc ký phân bố https://fb.com/tailieudientucntt PL THEO CƠ CHẾ CỦA QT TÁCH (Tƣơng tác chất sắc ký với φs & φm ) SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PL THEO CƠ CHẾ CỦA QT TÁCH (Tƣơng tác chất sắc ký với cuûa φs & φm ) SẮC KÝ RÂY PHÂN TỬ (Sắc Ký gel) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: % diện tích đƣợc chuẩn hóa theo hệ số hiệu chỉnh PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG Cấu tử i mẫu thật có diện tích Si Hiệu chỉnh Si theo độ nhạy dectector: Si (hiệu chỉnh) = Si Ki CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: % diện tích đƣợc chuẩn hóa theo hệ số hiệu chỉnh PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG Nếu khối lƣợng cấu tử i cấu tử chuẩn khơng Ki đƣợc tính: K i SR G i ( S i ) chuan G R K Gi,GR–khối lƣợng cấu tử i cấu tử chuẩn; K0–hệ số hiệu chỉnh cấu tử chuẩn % cấu tử i dd chứa ba cấu tử A, B, C: % cấu tử i = CuuDuongThanCong.com S i K i 100 % SAK A SBK B SCK https://fb.com/tailieudientucntt C PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: PP chuẩn ngoại PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG Lập đƣờng chuẩn diện tích peak S theo nồng độ C cấu tử khảo sát Chọn điều kiện thích hợp để quan hệ S C tuyến tính Định lƣợng cấu tử khảo sát đồ thị PP bình phƣơng cực tiểu CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: PP chuẩn ngoại PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG S Sm SC2 SC1 CC1 CuuDuongThanCong.com CC2 Cm C https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: PP chuẩn ngoại PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG Việc bơm mẫu đòi hỏi độ lặp cao thực khó thực lƣợng mẫu đƣa vào máy để tránh cho cột khơng bị q tải Mẫu đƣợc bơm vào máy cịn có khả bị thất thoát bay hơi, nạp mẫu nhiệt độ cao CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại Dựa vào diện tích peak S: PP chuẩn nội PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG CuuDuongThanCong.com Nhằm hiệu chỉnh sai số bơm mẫu không lặp lại: -Thêm vào mẫu chất chuẩn có nồng độ biết trƣớc đƣợc gọi chất nội chuẩn Chất nội chuẩn có tính chất hóa lý gần với cấu tử khảo sát cấu tử có mặt sắc ký đồ https://fb.com/tailieudientucntt PT ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƢỢNG Định lƣợng sắc ký đại PHÂN TÍCH ĐỊNH LƢỢNG Dựa vào diện tích peak S: PP chuẩn nội Nếu chất nội chuẩn thành phần hỗn hợp phân tích thành phần khối lƣợng cấu tử khảo sát đƣợc tính theo cơng thức: % cấu tử i = SiK i SRK R m R 100 m mau mR – khối lƣợng chất nội chuẩn thêm vào mẫu; mmau – khối lƣợng mẫu Độ xác PP không phụ thuộc vào độ lặp lại trình bơm mẫu CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.8 TỐI ƢU HĨA QT SẮC KÝ – Ảnh hƣởng k’ α lên độ phân giải RS cột – Ảnh hƣởng RS đến thời gian lƣu giữ CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HĨA QT SẮC KÝ Tối ƣu hóa tìm điều kiện để đạt đƣợc RS cao thời gian chấp nhận đƣợc, đạt đƣợc thời gian ngắn ứng với RS đạt yêu cầu (các peak tách hoàn toàn khỏi nhau) Muốn đánh giá khả tách cột (hay lớp mỏng) phải xem xét đồng thời hiệu cột, độ chọn lọc, độ tách (xem xét H, α , RS k’) CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HÓA QT SẮC KÝ ẢNH HƢỞNG CỦA k’ VÀ α LÊN RS CỦA CỘT CuuDuongThanCong.com Giả thiết bề rộng W chân peak khác không đáng kể N 2 16 R S ( ) ( k 'B ) k 'B Thời gian phân tích sắc ký đƣợc xác định dựa vào vận tốc cấu tử di chuyển chậm Nếu cấu tử B: (t R ) B 16 R S H u ( ) (k 'B 1) (k 'B ) https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HÓA QT SẮC KÝ Khi tiến hành tối ƣu hóa, phải luôn nhớ α k’ không thay đổi N,H (hoặc L) thay đổi ngược lại Biện pháp thay đổi thông số: Thay đổi α k’: thay đổi nhiệt độ thành phần φM Thay đổi φS đạt mục đích nhƣng bất tiện Thay đổi N cách thay đổi L; thay đổi H cách thay đổi u, kích thƣớc hạt pha tĩnh, độ nhớt pha động (để làm thay đổi DM, DS) bề dày lớp phim lỏng bề mặt pha tĩnh CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HĨA QT SẮC KÝ VÍ DỤ: Dùng cột có L = 30,0 cm tách A B đo đƣợc (TR)A=16,40 (TR)B =17,63 phút; WA=1,11 WB = 1,21phút Hãy xác định: (a) RS cột (b) N trung bình cột; (c) Chiều cao đĩa H ; (d) L đòi hỏi để đạt độ phân giải 1,5; (e) thời gian rửa giải cấu tử B cột dài hơn; (f) chiều cao đĩa lý thuyết để đạt độ phân giải 1,5 cột 30,0 cm với thời gian lƣu Cho biết tM = 1,30 phút CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HÓA QT SẮC KÝ (a) Áp dụng PT (27): (17 , 63 RS 16 , 40 ) phut (1 ,11 , 21 ) phut (b) Áp dụng PT (21) : N 16 ( 16 , 40 ) , 49 10 ,11 N 16 ( 17 , 63 ) , 40 10 , 21 Ntb = 3,44.103 Suy (c) Chiều cao đĩa lý thuyết H: H L N CuuDuongThanCong.com 30 , 44 10 , 72 10 cm https://fb.com/tailieudientucntt , 06 TỐI ƢU HÓA QT SẮC KÝ (d) k’ α không thay đổi tăng N L Do đó, thay N1, N2 vào (30) lập tỷ số : (R (R S )1 N S ) N 2 ↔ , 06 , 44 10 , 50 N Suy : N2 = 6,89.103 Chiều dài cột để độ phân giải tăng lên 1,5: L2 = H x N = 8,72.10 – x 6,89.103 = 60,0 cm CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt TỐI ƢU HÓA QT SẮC KÝ (e) Thay (RS)1, (RS)2 vào (32) lập tỷ số, ta có: (R (t R ) (t R ) (R S )1 S )2 ↔ 17 , 63 (1 , 06 ) (t R ) (1 , 50 ) 2 Suy (tR)2 = 35,3 phút (f) Thay H1, H2 vào PT (32) lập tỷ số , ta có: (t R ) B (t R ) B ( R S )1 (RS )2 x H1 H 2 ↔ CuuDuongThanCong.com H H1 ( R S )1 (RS )2 , 72 10 (1 , 06 ) (1 , 50 ) 2 https://fb.com/tailieudientucntt , 10 cm ... 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.7 KỸ THUẬT THỰC NGHIỆM & ỨNG DỤNG – Thiết bị phân tích sắc ký: *Bộ nạp mẫu *Cột sắc ký *Detector – Phân tích định tính định lƣợng – Tối ƣu hóa q trình sắc. .. https://fb.com/tailieudientucntt CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.3 MỘT SỐ KHÁI NIỆM – Sắc đồ – Sắc phổ – Sắc ký đồ: * Tích phân * Vi phân CuuDuongThanCong.com https://fb.com/tailieudientucntt SẮC ĐỒ Các vùng...CHƢƠNG 19 ĐẠI CƢƠNG VỀ PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ 19.1 Định nghĩa – Mục đích 19.2 Phân loại 19.3 Một số khái niệm 19.4 Kỹ thuật tách sắc ký 19.5 Peak sắc ký: đặc trƣng 19.6 Độ phân giải cột