ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHẤT KÍCH THÍCH TĂNG TRƯỞNG HỌ BETAAGONIST(CLENBUTEROL, SALBUTAMOL) TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN NUÔI HEO BẰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ QUẢN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 2/ 2009 SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM DỊCH VỤ PHÂN TÍCH VÀ THÍ NGHIỆM BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHẤT KÍCH THÍCH TĂNG TRƯỞNG HỌ BETA-AGONIST (CLENBUTEROL, SALBUTAMOL) TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN NUÔI HEO BẰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ GC/MSn CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: THS CHU VÂN HẢI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 01/2009 SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM DỊCH VỤ PHÂN TÍCH VÀ THÍ NGHIỆM BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHẤT KÍCH THÍCH TĂNG TRƯỞNG HỌ BETA-AGONIST (CLENBUTEROL, SALBUTAMOL) TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN NI HEO BẰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ GC/MSn CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: THS CHU VÂN HẢI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 01/2009 TĨM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Clenbuterol (CLEN), Salbutamol (SAL) hợp chất thuộc nhóm beta-agonist sử dụng bất hợp pháp thức ăn gia súc để kích thích tăng trưởng, giảm hàm lượng béo tăng hàm lượng thịt Tại Việt Nam, CLEN SAL phân tích chủ yếu phương pháp sàng lọc Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Phương pháp GC/MS hay LC/MS chưa có phương pháp chuẩn khâu chuẩn bị mẫu Tại Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm Thành phố Hồ Chí Minh (TTDVPTTN) nghiên cứu phương pháp phân tích CLEN, SAL GC/MS sử dụng để phân tích CLEN, SAL thức ăn gia súc, thịt heo gan heo, thực phẩm chế biến sẵn thành phố Hồ Chí Minh tỉnh lận cận Mẫu ly trích dung dịch đệm CH3COONH4, enzym β_Glucuronidase sau làm cột SCX (Alltech SPE 500mg/6ml), rửa giải 6ml MeOH:NH3 (95:5) Sau dẫn xuất với MSTFA + NH4I + DTE (1000:4:2) 600C 15 phút CLEN, SAL phân tích GC/MS (ESI (+) SIM) với m/z 227, 300, 335, 336 337 cho CLEN, 207, 294, 350, 369 370 cho SAL Hiệu suất thu hồi phương pháp 65%-88% Giới hạn phát phương pháp cho CLEN 0,16 ppb cho thức ăn gia súc, 0,05ppb cho thịt heo, 0,05ppb cho gan heo; cho SAL 0,11ppb cho thức ăn gia súc, 0,07ppb cho thịt heo, 0,07ppb cho gan heo Phương pháp Elisa sử dụng để phân tích mẫu thức ăn cho heo, thịt heo, gan heo xác nhận lại GC/MS cho kết âm tính dương tính, có so sánh kết với LC/MS mẫu dương tính SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Clenbuterol (CLEN), Salbutamol (SAL) may be illegally used as feed additive for growth promotion with concomitant reduction of fat tissues in meat-producing livestock In Viet Nam, CLEN, SAL are being mainly detected by the screening ELISA method Use of GC/MS (Gas chromatographic-mass spectrometric method) or LC/MS (Liquid chromatographic-mass spectrometric method) is somewhat limited due to lack of appropriate sample preparation Center of analytical services and experimentation (CASE) has devised a quite efficient GC/MS method for CLEN, SAL analysis which are being used to control feedstuff, pork meat, liver, processed food in Ho Chi Minh City and other provinces Sample preparation involves extraction of CLEN, SAL by a CH3COONH4, enzyme β_Glucuronidase followed by a clean up step with SCX (Alltech SPE 500mg/6ml) column and elution with 6ml MeOH:NH3 (95:5) The residue is derivatized with MSTFA + NH4I + DTE (1000:4:2) at 600C for 15 minutes The selected ions monitoring mode is performed at m/z 227, 300, 335, 336 and 337 for CLEN, and 207, 294, 350, 369 and 370 for SAL Recoveries of CLEN, SAL 65% 88% The limits of detection were about 0.16ppb_feedstuff, 0.05ppb_pork meat, 0.05ppb_ liver for CLEN; 0.11ppb_feedstuff, 0.07 ppb_ pork meat, 0.07ppb_ liver for SAL The technique include Elisa that is used as screening methods and GC/MS as confirmatory methods and is compared with LC/MS for positive samples MỤC LỤC Trang Tóm tắt đề tài tiếng Việt Tóm tắt đề tài tiếng Anh Mục lục Danh sách hình CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU Tên đề tài Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì Thời gian thực Kinh phí duyệt Kinh phí cấp Mở đầu 1.1.Tình hình cấm sử dụng chất kích thích tăng trưởng giới Việt Nam 1.2 Tình hình nghiên cứu phân tích CLEN, SAL ngồi nước 1.3 Mục tiêu cuả đề tài 1.4 Đối tượng nghiên cứu 1.5 Nội dung thực đề tài 1.6 Phương pháp nghiên cứu 1.7 Nơi thu thập mẫu 10 1.8 Thời gian thu thập mẫu 10 1.9 Nơi phân tích 10 1.10 Sản phẩm cuả đề tài 10 1.11 Ý nghiã thực tiễn 10 CHƯƠNG II: TỔNG QUAN 12 2.1 Tổng quan CLEN SAL 12 2.2 Tổng quan phương pháp phân tích CLEN, SAL thức ăn 16 nuôi heo, thịt heo, gan heo GC/MS đăng báo 2.3 Sơ lược kỹ thuật sắc ký khí 18 2.4 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ 27 CHƯƠNG III: NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHLEN, SAL TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN NUÔI HEO BẰNG KỸ THUẬT GC/MS 39 3.1 Thiết bị- Hoá chất 39 3.2 Pha dung dịch 41 3.3 Khảo sát tối ưu phản ứng dẫn xuất sylyl hoá CLEN, SAL nội 41 chuẩn 17- Methyltestosteron chuẩn GC/MS CHƯƠNG IV: KHẢO SÁT PHÂN TÍCH TRÊN MẪU THẬT 58 4.1 Xử lý mẫu 58 4.2 Xác định LOD máy 65 4.3 Đường chuẩn 66 4.4 Xác định MLOD, MLOQ, hiệu suất thu hồi, độ chụm mẫu 68 thức ăn gia súc 4.5 Xác định MLOD, MLOQ, hiệu suất thu hồi, độ chụm mẫu 71 thịt heo 4.6 Xác định MLOD, MLOQ, hiệu suất thu hồi, độ chụm mẫu 73 gan heo 4.7 Tính tốn độ khơng đảm bảo cuả mẫu 76 CHƯƠNG V: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 78 5.1 Tiêu chí lựa chọn điạ điểm thu thập mẫu 79 5.2 Thu thập mẫu thức ăn, mẫu thịt heo, gan heo, thực phẩm chế biến sẵn 79 5.3 Kết thảo luận_ Kết phân tích CLEN, SAL Elisa 83 5.4 Kết phân tích CLEN, SAL GC/MS 86 5.5 Kiểm soát chất lượng kết thử nghiệm 89 5.6 Kết phân tích CLEN, SAL thực phẩm chế biến sẵn 92 CHƯƠNG VI: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 94 SẢN PHẨM CỦA ĐỀ TÀI: Qui trình phân tích Clenbuterol, Salbutamol thịt heo, gan heo, thức ăn cho heo PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH SÁCH CÁC HÌNH TÊN HÌNH ẢNH SỐ TRANG 2.1 Sơ đồ máy sắc ký khí 18 2.2 Mặt cắt cột sắc ký mao quản phóng to 19 2.3 Mức độ phân cực loại cột sắc ký khí Alltech 20 2.4 Cấu trúc cột sắc ký 21 2.5 Thời gian lưu cấu tử phân tích 22 2.6 Sơ đồ loại sắc ký khí ghép khối phổ 27 2.7 Sự phân mảnh với thay đổi lượng bắn phá 30 2.8 Sơ đồ trình hoạt động máy sắc ký khí ghép khối phổ 30 2.9 Sơ đồ GC/MS loại bẫy ion 34 2.10 Sơ đồ Ion trap electrode 34 3.1 Kết hiệu chỉnh máy (tuning) 43 3.2 Sắc ký đồ DFBZ 10 ng/ml chế độ full MS ( EI ) 44 3.3 Khối phổ dẫn xuất di-TMS-CLEN di-TMS-IS 47 3.4 Phản ứng tạo dẫn xuất silyl hoá CLEN IS 48 3.5 Cơ chế phân mảnh di-TMS-CLEN full MS 49 3.6 Cơ chế phân mảnh di-TMS-(17-methyltestosterone) full MS 50 CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU Tên đề tài: Nghiên cứu phương pháp phân tích chất kích thích tăng trưởng họ betaagonist (Clenbuterol, Salbutamol) thịt heo, gan heo, thức ăn ni heo phương pháp phân tích sắc ký khí ghép khối phổ GC/MS Chủ nhiệm đề tài: Ths.Chu Vân Hải Cơ quan chủ trì: Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm TPHCM Thời gian thực : 12/2005-12/2008 Kinh phí duyệt : 210.000.000 VNĐ Mở đầu : Clenbuterol (CLEN) Salbutamol (SAL) chất bị Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn (PTNT) cấm sử dụng từ năm 2002 Mặc dù bị cấm chất lút sử dụng thức ăn chăn nuôi Sự tồn dư chất gây rối lọan chức tim phổi tim đập nhanh, run cơ, đau đầu, buồn nôn…mà chất lại bị phân giải nhiệt độ cao Hiện chưa có tài liệu khoa học nói chất Clenbuterol Salbutamol dư lượng chúng sản phẩm chăn nuôi gây ung thư cho người Tuy ảnh hưởng dư lượng chất coi độc trung bình nhà khoa học khẳng định tất ảnh hưởng xấu chất người chấp nhận Thời gian qua, số quan báo chí Đài truyền hình Việt Nam đăng tải việc sử dụng hócmơn kích thích sinh trưởng thức ăn chăn ni việc quản lý nhà nước lĩnh vực Bộ Nơng nghiệp PTNT có thơng báo ý kiến đạo ngày 09/06/2006 số 2646/TB-BNN-VP việc kiểm tra chất lượng Clenbuterol thức ăn chăn nuôi phạm vi tòan quốc Đồng thời, ngày 25/08/2006 Bộ trưởng Nông nghiệp PTNT ban hành thị việc tăng cường công tác quản lý, nâng cao chất lượng nông lâm sản, vật tư nông nghiệp đảm bảo vệ sinh, an tòan nơng sản, thực phẩm Theo đó, Bộ trưởng đạo đơn vị trực thuộc thường xuyên kiểm tra chất lượng sản phẩn chăn nuôi, giống thức ăn chăn nuôi Bộ trưởng Nông nghiệp PTNT định ngày 09 tháng 01 năm 2007 số 65/QĐ-BNN-CN MLOD MẪU THỨC ĂN NL: 5.70E3 RT : 8.48 100 90 85 90 85 90 85 80 75 65 60 55 50 45 40 8.70 8.16 65 60 55 50 8.70 8.35 8.6 8.84 25 8.8 8.2 8.4 8.6 8.8 8.0 8.5 T ime (min) lodta1 #37 RT : 8.48 AV: SB: 8.24-8.40 NL: 4.43E3 F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 368.9 100 lodta4 #37 RT: 8.48 AV: SB: 27 7.67-8.18 , 8.84-9.03 NL: 5.03E3 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 368.9 100 90 90 80 80 80 70 70 70 50 40 206.9 Relative Abundance 90 60 60 50 40 206.9 30 294.0 9.0 T ime (min) lodta2 #37 RT : 8.48 AV: SB: 8.24-8.37 NL: 5.27E3 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 368.9 100 Relative Abundance Relative Abundance 8.16 30 T ime (m in) 30 8.67 35 20 8.4 8.59 40 8.56 8.18 7.88 55 45 20 8.2 60 50 25 8.86 25 65 40 30 8.37 70 45 35 8.59 35 75 70 Relative Abundance Relative Abundance 70 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] M S lodta4 95 80 75 NL: 7.43E3 RT: 8.48 100 m /z= 368.5-369.5 F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] M S lodta2 95 80 Relative Abundance NL: 6.58E3 RT : 8.48 100 m /z= 368.5-369.5 F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS l odta1 95 30 RT : 7.79 - 9.43 RT : 8.04 - 8.82 RT : 8.08 - 8.89 206.9 60 50 40 30 294.0 20 350.0 10 20 350.0 10 207.6 293.4 220 240 260 280 300 m /z 320 340 360 293.9 350.0 10 20 220 240 260 280 300 m /z 320 340 360 207.7 220 240 260 280 300 m/z 320 340 360 40 20 60 40 20 293.9 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 250 Relative Abundance 80 60 40 20 g12 #36 RT : 8.46 AV: SB: 16 8.24-8.40 , 8.72-8.94 NL: F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT : 18.50 - 19.50 80 60 40 20 294.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 250 Relative Abundance 349.9 80 60 40 20 80 60 40 293.9 100 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 250 100 80 60 40 20 8.2 8.4 8.6 T ime (min) 350 8.8 9.0 60 40 250 300 m /z 356.0 60 40 20 350 400 m /z NL: 3.72E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g12 g12 #589 RT : 18.99 AV: NL: 2.68E4 F: + c SIM m s [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 80 356.1 60 40 20 19.0 19.5 350 T ime (m in) 80 8.0 18.5 RT : 18.50 - 19.50 294.0 g11 #589 RT : 18.99 AV: NL: 3.01E4 F: + c SIM m s [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 80 19.5 20 g14 #36 RT : 8.46 AV: SB: 20 8.05-8.30 , 8.75-9.00 NL: F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g11 40 Relative Abundance RT : 8.49 8.485 RT : 19.00 19.004 60 m /z RT : 8.00 - 9.00 NL: 3.44E4 19.0 80 Relative Abundance T ime (min) 300 400 349.9 8.0 350 T ime (m in) RT : 18.50 - 19.50 20 20 m /z 20 g13 #36 RT : 8.46 AV: SB: 13 8.27-8.40 , 8.72-8.89 NL: F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 40 19.5 40 18.5 350 RT : 19.00 19.003 60 Relative Abundance RT : 8.49 8.485 356.0 60 19.0 80 m /z RT : 8.00 - 9.00 100 100 Relative Abundance T ime (min) 300 g11 #589 RT : 18.99 AV: NL: 3.01E4 F: + c SIM m s [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 80 T ime (m in) Relative Abundance RT : 8.49 8.485 8.0 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g11 40 m /z RT : 8.00 - 9.00 100 300 60 Relative Abundance T ime (min) Relative Abundance 349.9 80 NL: 3.44E4 Relative Abundance 60 80 100 RT : 19.00 19.003 Relative Abundance 80 RT : 18.50 - 19.50 Relative Abundance Relative Abundance 100 g11 #43 RT : 8.64 AV: SB: 20 8.05-8.30 , 8.75-9.00 NL: F: + c SIM m s [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.8 100 349.9 350 100 RT : 19.00 19.002 80 60 NL: 4.72E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g14 40 20 18.5 g14 #589 RT : 18.99 AV: NL: 4.19E4 F: + c SIM m s [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 445.9 100 301.0 80 60 T ime (m in) 19.5 356.1 40 20 19.0 400 m /z Relative Abundance RT : 8.48 8.485 Relative Abundance RT : 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU GAN HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 18.4 ng/ml) 301.7 350 400 m /z MẪU GAN HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 9.2 ng/ml) 20 8.0 80 60 40 20 294.0 8.5 9.0 250 80 60 40 RT: 8.19 8.186 8.0 g22 #36 RT: 8.46 AV: SB: 17 8.13-8.32 , 8.70-8.92 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 Relative Abundance 100 80 60 NL: 1.22E5 TIC F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g23 40 RT: 8.19 8.186 8.0 80 60 40 9.0 250 60 40 20 TIC F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ICIS g24 RT: 8.19 8.186 8.0 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 293.9 349.9 8.5 Time (min) 9.0 250 300 m/z 350 100 80 60 40 301.0 355.9 20 19.5 350 400 m/z NL: 6.35E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g23 g23 #588 RT: 18.97 AV: SB: 28 18.73-18.94 , 19.17-19.39 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 80 60 301.0 356.0 40 20 19.0 RT: 19.00 18.998 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 3.88E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g24 40 20 18.5 400 g22 #588 RT: 18.97 AV: SB: 28 18.72-18.93 , 19.17-19.38 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) g24 #36 RT: 8.46 AV: SB: 17 8.13-8.32 , 8.70-8.92 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g22 20 Relative Abundance Relative Abundance 80 NL: 1.16E5 NL: 3.35E4 40 18.5 350 RT: 18.99 18.991 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 8.486 300 350 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 100 349.9 100 8.5 20 Time (min) RT: 18.50 - 19.50 293.9 356.0 40 m/z 20 g23 #36 RT: 8.46 AV: SB: 17 8.13-8.32 , 8.70-8.92 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 301.0 60 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.001 60 Relative Abundance RT: 8.51 80 19.0 80 m/z RT: 8.00 - 9.00 20 349.9 100 Relative Abundance Time (min) 300 g21 #588 RT: 18.98 AV: SB: 28 18.73-18.94 , 19.17-19.39 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) 8.5 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g21 40 Relative Abundance Relative Abundance NL: 7.46E4 TIC F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g22 100 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 80 Relative Abundance Time (min) 20 349.9 100 NL: 4.22E4 Relative Abundance 40 369.0 100 RT: 18.99 18.994 Relative Abundance 60 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance 80 TIC F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ICIS g21 g21 #36 RT: 8.46 AV: SB: 17 8.13-8.32 , 8.70-8.92 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 g24 #589 RT: 18.98 AV: SB: 28 18.73-18.95 , 19.18-19.39 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Relative Abundance Relative Abundance 100 NL: 1.29E5 Relative Abundance RT: 8.49 8.485 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 80 60 301.0 356.0 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z MẪU GAN HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 1.84 ng/ml) 20 60 40 293.9 8.5 9.0 250 80 60 40 20 g32 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 Relative Abundance 100 80 60 NL: 6.15E3 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g33 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 349.9 9.0 250 Time (min) 80 60 40 20 350 80 60 40 349.9 8.5 Time (min) 9.0 250 300 m/z m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g32 RT: 19.00 19.001 60 80 356.0 60 40 20 350 350 NL: 5.24E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g33 20 g33 #588 RT: 18.97 AV: NL: 8.25E3 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 445.9 100 80 60 301.0 356.0 40 20 19.0 RT: 19.00 19.001 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 7.08E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g34 40 20 18.5 400 m/z 40 100 400 g32 #589 RT: 18.98 AV: NL: 3.39E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 19.5 RT: 18.50 - 19.50 368.9 293.9 NL: 4.43E4 Time (min) 100 20 350 19.0 80 18.5 g34 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 Relative Abundance Relative Abundance NL: 5.85E3 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g34 100 8.0 100 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.51 300 20 Time (min) 8.5 40 m/z 20 g33 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.8 100 20 356.0 60 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.000 60 Relative Abundance RT: 8.49 80 19.0 80 m/z RT: 8.00 - 9.00 8.0 349.9 100 Relative Abundance Time (min) 300 g31 #589 RT: 18.98 AV: NL: 3.29E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Time (min) 8.5 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS g31 40 Relative Abundance Relative Abundance NL: 5.05E3 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g32 100 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 Relative Abundance 8.0 80 20 100 NL: 3.62E4 Relative Abundance 40 368.8 RT: 19.00 19.001 Relative Abundance 60 100 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance 80 g31 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 g34 #589 RT: 18.98 AV: NL: 5.21E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS g31 100 Relative Abundance NL: 4.78E3 Relative Abundance RT: 8.49 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 80 60 356.0 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 20 8.0 8.27 80 60 40 20 293.9 8.5 9.0 250 80 60 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 80 60 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 293.9 9.0 250 80 60 40 20 8.19 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 349.9 300 m/z 350 8.5 Time (min) 9.0 250 350 100 80 301.0 60 356.1 40 20 19.5 350 400 m/z NL: 2.48E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th13 th13 #589 RT: 18.98 AV: NL: 1.46E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 80 301.0 60 356.0 40 20 19.0 RT: 19.00 19.001 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 3.28E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th14 40 20 18.5 400 th12 #589 RT: 18.99 AV: NL: 2.52E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) th14 #41 RT: 8.59 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th12 20 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th14 100 Relative Abundance NL: 2.68E4 NL: 2.72E4 40 18.5 350 RT: 19.00 19.001 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 20 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.8 100 8.5 356.0 40 Time (min) th13 #41 RT: 8.59 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 60 m/z 20 Relative Abundance Relative Abundance 100 NL: 3.11E4 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th13 301.0 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.004 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 80 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 th11 #589 RT: 18.99 AV: NL: 2.88E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) th12 #40 RT: 8.56 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 8.35 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th11 20 18.5 350 NL: 3.22E4 40 Relative Abundance Relative Abundance NL: 1.70E5 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th12 100 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.48 300 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 RT: 19.00 19.003 Relative Abundance 60 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance 80 th11 #40 RT: 8.56 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th11 100 Relative Abundance NL: 1.98E5 th14 #590 RT: 19.00 AV: NL: 3.28E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Relative Abundance RT: 8.48 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỊT HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 18.4 ng/ml) 80 356.0 60 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 20 8.0 8.78 8.19 8.5 60 40 293.9 20 9.0 250 60 40 20 8.0 th22 #41 RT: 8.59 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT: 18.50 - 19.50 8.19 80 60 40 20 293.9 9.0 250 80 60 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 80 60 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 349.9 300 m/z 350 8.5 Time (min) 9.0 250 350 400 th22 #589 RT: 18.99 AV: NL: 4.20E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 445.9 100 301.0 80 60 356.0 40 20 19.5 350 400 m/z NL: 2.67E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th23 th23 #589 RT: 18.99 AV: NL: 2.67E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 80 60 301.0 356.1 40 20 19.0 19.5 350 400 Time (min) th24 #42 RT: 8.62 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th22 20 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th24 100 Relative Abundance NL: 1.38E5 NL: 4.20E4 40 18.5 350 RT: 18.99 18.989 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.51 300 20 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 356.0 40 Time (min) th23 #41 RT: 8.59 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 8.19 301.0 m/z 20 Relative Abundance Relative Abundance 100 NL: 1.15E5 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th23 60 19.5 40 18.5 350 RT: 18.99 18.991 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.48 300 80 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 th21 #588 RT: 18.98 AV: NL: 1.65E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) Relative Abundance Relative Abundance NL: 4.06E4 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th22 80 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th21 40 m/z RT: 8.00 - 9.00 100 300 60 Relative Abundance Time (min) RT: 8.49 349.9 80 NL: 5.42E4 Relative Abundance 60 80 100 RT: 18.99 18.992 Relative Abundance Relative Abundance 80 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th21 100 th21 #41 RT: 8.59 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 100 RT: 19.00 19.000 80 60 m/z NL: 3.85E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th24 40 20 18.5 th24 #590 RT: 19.00 AV: NL: 3.85E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Relative Abundance NL: 3.90E4 RT: 8.51 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỊT HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 9.2 ng/ml) 80 60 356.0 40 20 356.7 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 8.68 20 8.19 8.0 60 40 20 293.9 8.5 9.0 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th32 Relative Abundance 100 80 60 40 8.19 8.79 th32 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 294.0 9.0 250 Relative Abundance 100 80 60 40 8.59 8.79 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 9.0 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th34 Relative Abundance 100 80 60 40 8.30 8.76 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 349.9 300 m/z 350 8.5 Time (min) 9.0 250 100 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th32 80 301.0 60 356.0 40 20 19.5 350 400 m/z NL: 4.05E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th33 th33 #589 RT: 18.98 AV: NL: 3.30E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 80 356.1 60 40 20 19.0 RT: 19.00 19.001 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 4.01E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th34 40 20 18.5 400 th32 #589 RT: 18.98 AV: NL: 4.61E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 445.9 100 Time (min) th34 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 NL: 4.63E4 20 Relative Abundance NL: 5.65E3 RT: 8.49 350 m/z 40 18.5 350 RT: 19.00 19.001 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 20 300 20 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 356.1 40 Time (min) th33 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 60 20 Relative Abundance NL: 8.35E3 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th33 RT: 8.49 80 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.000 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 8.21 300 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 RT: 19.23 19.229 th31 #589 RT: 18.98 AV: NL: 6.07E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 445.9 100 301.0 Time (min) Relative Abundance NL: 1.06E4 RT: 8.49 20 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS th31 40 m/z RT: 8.00 - 9.00 8.0 300 60 Relative Abundance Time (min) 20 349.9 80 NL: 7.53E4 Relative Abundance 60 80 100 RT: 19.00 19.000 Relative Abundance Relative Abundance 80 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS th31 100 th31 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 th34 #589 RT: 18.98 AV: NL: 2.69E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Relative Abundance NL: 1.03E4 RT: 8.51 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỊT HEO + CHUẨN SALBUTAMOL ( 1.84 ng/ml) 80 60 301.0 356.0 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 20 8.0 8.67 8.16 80 60 206.9 40 20 294.0 8.5 9.0 250 80 60 40 20 8.0 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 9.0 294.0 207.6 250 80 60 40 20 8.0 40 293.9 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta14 80 60 40 20 8.0 8.32 8.59 8.5 Time (min) 349.9 80 60 40 9.0 250 300 m/z 350 349.9 350 100 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta12 80 356.1 60 40 20 19.5 350 400 m/z NL: 2.06E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta13 ta13 #589 RT: 18.99 AV: NL: 2.06E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 80 301.0 60 356.1 40 20 19.0 RT: 18.99 18.991 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 2.02E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta14 40 20 18.5 400 ta12 #590 RT: 19.00 AV: NL: 2.20E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Time (min) RT: 18.50 - 19.50 294.0 NL: 2.20E4 20 ta14 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 20 m/z 40 18.5 350 RT: 18.99 18.991 60 Relative Abundance Relative Abundance NL: 1.08E5 356.0 40 19.0 80 m/z RT: 8.00 - 9.00 100 100 Relative Abundance Time (min) 300 60 Time (min) 60 9.0 RT: 8.48 18.5 350 80 301.0 20 RT: 18.50 - 19.50 20 80 19.5 40 ta13 #37 RT: 8.48 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 8.16 8.5 349.9 RT: 19.00 18.998 60 Relative Abundance Relative Abundance 100 NL: 1.15E5 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta13 19.0 80 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.48 100 Relative Abundance Time (min) 300 RT: 19.20 19.201 ta11 #590 RT: 18.99 AV: NL: 3.41E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) ta12 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 369.0 100 8.16 8.5 20 Relative Abundance Relative Abundance NL: 1.21E5 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta12 100 40 RT: 18.76 18.758 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.48 60 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta11 80 Relative Abundance Time (min) 300 100 349.9 NL: 3.54E4 RT: 19.00 19.003 Relative Abundance 60 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance 80 ta11 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 369.0 100 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta11 100 Relative Abundance NL: 1.74E5 ta14 #589 RT: 18.99 AV: NL: 2.02E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Relative Abundance RT: 8.48 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỨC ĂN GIA SÚC + CHUẨN SALBUTAMOL ( 18.4 ng/ml) 80 60 301.0 356.0 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 8.62 20 8.0 8.30 60 40 20 293.9 8.5 9.0 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta22 Relative Abundance 80 60 40 8.57 20 ta22 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 369.0 100 RT: 18.50 - 19.50 8.24 80 60 40 20 293.9 9.0 250 Relative Abundance 100 80 60 40 20 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta24 Relative Abundance 100 80 60 40 8.76 20 8.19 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 294.0 349.9 8.5 Time (min) 9.0 250 300 m/z 350 100 80 60 356.1 40 20 19.5 350 400 m/z NL: 3.78E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta23 ta23 #589 RT: 18.99 AV: NL: 3.78E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 301.0 100 80 60 356.0 40 20 19.0 RT: 19.00 19.001 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 3.07E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta24 40 20 18.5 400 ta22 #590 RT: 19.00 AV: NL: 2.40E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Time (min) ta24 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta22 20 Relative Abundance NL: 3.15E4 NL: 2.40E4 40 18.5 350 RT: 18.99 18.993 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 350 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 20 Time (min) ta23 #36 RT: 8.46 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 8.21 356.1 40 m/z 20 Relative Abundance NL: 5.84E4 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta23 301.0 60 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.000 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 80 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 100 8.5 ta21 #589 RT: 18.98 AV: NL: 1.98E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) Relative Abundance NL: 3.52E4 100 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta21 40 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 60 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 80 NL: 3.20E4 Relative Abundance 60 80 100 RT: 19.00 19.001 Relative Abundance Relative Abundance 80 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta21 100 ta21 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 ta24 #590 RT: 19.00 AV: NL: 3.07E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Relative Abundance NL: 3.18E4 RT: 8.49 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỨC ĂN GIA SÚC + CHUẨN SALBUTAMOL ( 9.2 ng/ml) 80 60 356.1 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z 40 20 8.0 8.70 8.35 60 40 20 294.0 8.5 9.0 250 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta32 Relative Abundance 80 60 40 20 8.68 8.19 ta32 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 20 293.9 9.0 250 80 60 40 8.62 8.19 8.0 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 206.9 293.9 9.0 250 80 60 40 8.0 8.21 8.59 RT: 18.50 - 19.50 80 60 40 293.9 349.9 8.5 Time (min) 9.0 250 300 m/z 350 100 80 356.1 60 40 20 19.5 301.7 350 400 m/z NL: 2.64E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta33 ta33 #590 RT: 19.00 AV: NL: 2.64E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 80 60 356.1 40 20 19.0 RT: 19.00 18.997 80 60 19.5 350 400 m/z NL: 2.56E4 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta34 40 20 18.5 400 ta32 #590 RT: 19.00 AV: NL: 3.61E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 301.0 100 Time (min) ta34 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta32 20 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta34 100 Relative Abundance NL: 3.75E3 NL: 3.61E4 40 18.5 350 RT: 19.00 18.999 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 350 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 20 349.9 100 8.5 20 Time (min) ta33 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 20 356.0 40 m/z 20 Relative Abundance Relative Abundance 100 NL: 4.13E3 m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta33 301.0 60 19.5 40 18.5 350 RT: 19.00 19.001 60 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 80 19.0 80 Relative Abundance Time (min) 20 350.0 100 8.5 ta31 #589 RT: 18.98 AV: NL: 3.14E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 Time (min) Relative Abundance NL: 6.00E3 100 20 18.5 350 m/z= 445.5-446.5 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] MS ICIS ta31 40 m/z RT: 8.00 - 9.00 RT: 8.49 300 60 Relative Abundance Time (min) 8.0 349.9 80 NL: 4.28E4 Relative Abundance 60 80 100 RT: 19.00 19.001 Relative Abundance Relative Abundance 80 RT: 18.50 - 19.50 Relative Abundance m/z= 368.5-369.5 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] MS ta31 100 ta31 #37 RT: 8.49 AV: SB: 21 8.10-8.32 , 8.59-8.89 NL: F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-35 368.9 100 ta34 #590 RT: 19.00 AV: NL: 2.56E4 F: + c SIM ms [ 300.50-301.50, 355.50-356.50, 445.50-446.50] 446.0 100 301.0 Relative Abundance NL: 6.20E3 RT: 8.49 Relative Abundance RT: 8.00 - 9.00 Relative Abundance MẪU THỨC ĂN GIA SÚC + CHUẨN SALBUTAMOL ( 3.68 ng/ml) 80 60 356.1 40 20 19.0 Time (min) 19.5 350 400 m/z c:\xcalibur\data\beta agonist\6-11-07\m6 11/9/2007 6:27:15 PM Mẫu M6_ Thức ăn cho heo phát thấy SAL 12ppb GC/MS RT: 7.80 - 9.49 NL: 1.70E4 RT: 8.51 AA: 81118 SN: 271 100 m/z= 368.50-369.50 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] + m/z= 368.50-369.50 MS ICIS m6 90 70 60 50 40 30 368.94 100 90 80 Relative Abundance 80 Relative Abundance m6 #38 RT: 8.51 AV: SB: 22 8.10-8.38 , 8.65-8.92 NL: 8.24E3 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] 70 60 50 30 20 20 10 10 206.91 40 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 220 240 260 280 Time (min) NL: 1.84E4 RT: 8.54 AA: 137710 SN: 218 100 340 360 70 60 50 40 30 368.94 100 90 80 Relative Abundance 80 Relative Abundance 320 m6+std #39 RT: 8.54 AV: SB: 22 8.10-8.38 , 8.65-8.92 NL: 8.65E3 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] m/z= 368.50-369.50 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] + m/z= 368.50-369.50 MS ICIS m6+std 90 206.90 70 60 50 40 30 20 20 10 10 7.8 300 m/z RT: 7.80 - 9.49 294.03 349.97 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 220 240 260 280 Time (min) NL: 2.26E4 m/z= 368.50-369.50 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] + m/z= 368.50-369.50 MS s0,92c0,88 RT: 8.48 MA: 57391 SN: 49 100 300 320 340 s0,92c0,88 #36 RT: 8.45 AV: SB: 22 8.10-8.37 , 8.64-8.91 NL: 2.99E3 F: + c SIM ms [ 206.50-207.50, 293.50-294.50, 349.50-350.50, 368.50-369.50, 369.50-370.50] 80 70 60 50 368.83 100 90 80 Relative Abundance 90 70 60 50 40 206.93 30 294.01 20 349.97 10 40 8.2 8.3 8.4 8.5 Time (min) 360 m/z RT: 8.16 - 8.81 Relative Abundance 349.98 294.02 8.6 8.7 8.8 207.71 220 240 260 280 300 m/z 320 340 360 260 8.14 8.45 9.01 9.26 9.45 10.44 10.75 50 10 240 260 8.02 100 9.07 7.52 8.20 50 10.07 8.45 10.38 9.51 9 Time (min) 50 8.05 8.18 8.91 9.40 9.53 10.21 7.63 Time (min) 50 Time (min) 8.82 9.00 9.50 9.81 9.94 10.81 100 8.46 10 260 280 m/z 300 335.86 280 m/z 300 260 280 m/z 300 320 8.03 100 260 9.27 8.71 7.71 10.89 335.89 299.98 260 8.89 9.82 9.95 Time (min) 50 Time (min) 300 320 10 335.92 50 299.94 10.45 260 280 m/z 300 320 335.90 100 299.88 50 10 RT: 9.15 100 280 100 240 7.90 8.45 320 50 10 9.08 50 300 m/z 10.02 Time (min) 280 100 240 7.59 334.81 50 240 7.90 320 299.98 100 10.39 50 50 260 10 7.71 320 299.94 240 100 335.88 m/z 9.27 9.58 320 299.94 240 50 7.90 300 50 10 7.71 280 100 Time (min) 299.96 100 10 RT: 9.15 100 50 335.84 240 260 m/z 8.45 320 10 10.51 8.36 Relative Abundance 9.89 10.26 10.64 100 Relative Abundance 9.27 Relative Abundance Relative Abundance 8.83 300 100 50 240 8.01 m/z Relative Abundance Relative Abundance 8.34 280 299.92 Time (min) 260 50 10 7.46 335.79 240 50 100 320 50 10 7.71 7.90 300 299.99 100 Time (min) 100 m/z Relative Abundance Relative Abundance Time (min) 280 Relative Abundance 335.83 Relative Abundance 8 335.83 100 Time (min) 299.97 100 10.89 320 Relative Abundance 50 Relative Abundance Relative Abundance 7.71 300 m/z Time (min) 100 280 10.64 Relative Abundance 240 9.64 Relative Abundance 9.21 8.83 Relative Abundance 10.75 10 8.34 8.46 7.96 Relative Abundance 10.07 7.65 50 Relative Abundance 9.07 9.44 Relative Abundance 8.14 8.39 50 9.08 100 240 Relative Abundance 50 335.77 299.97 100 Relative Abundance 7.71 Relative Abundance 100 12/16/2008 4:44:07 AM 20 Mẫu thực phẩm chế biến sẵn_CLEN Relative Abundance Relative Abundance e:\beta agonic\12-2008\15-12\1367a 260 280 m/z 300 320 334.81 299.98 100 50 240 260 280 m/z 300 320 240 260 8.27 7.89 10.81 9.07 8.58 9.32 9.88 Relative Abundance Relative Abundance 50 10.07 8.02 260 Relative Abundance Relative Abundance 10.08 10.39 100 50 Time (min) 9.08 10.07 10.57 9.89 10.57 260 10.82 Relative Abundance Relative Abundance Time (min) 300 300 100 7.89 10 280 m/z 10.07 10.81 100 260 9.71 9.95 100 10.76 9.08 9.39 9.95 10.38 300 320 260 Time (min) 280 m/z 300 320 335.82 100 50 300.03 240 260 280 300 320 335.80 100 299.92 50 240 260 280 300 320 m/z 50 335.88 300.01 10 RT: 9.15 100 320 m/z 7.71 8.14 8.39 300 50 10 50 280 100 240 50 7.90 8.21 8.83 9.15 335.84 50 10 7.72 320 m/z 8.27 Time (min) 300 299.97 240 9.51 334.81 260 10.76 10 9.07 280 100 Time (min) 50 240 10.51 8.57 50 320 299.98 100 260 Time (min) 50 280 9.08 299.91 260 240 320 335.84 240 m/z 9.64 10.13 m/z 50 280 100 10 RT: 9.15 8.89 300.02 Time (min) 100 8.33 50 320 335.91 50 300.02 10 7.96 m/z 9.08 9.20 300 100 240 Relative Abundance Relative Abundance 8.27 8.39 280 m/z 10.88 50 Time (min) 260 10.20 7.83 300.04 10 7.71 7.84 50 100 320 50 Time (min) 100 300 335.79 240 7.77 9.39 335.85 100 10 7.65 8.40 m/z Relative Abundance Relative Abundance 8.40 280 9.08 9.45 335.83 100 Time (min) 240 7.77 9.08 9.39 50 10 7.65 50 320 299.91 100 Time (min) 100 300 m/z Time (min) 100 280 8.21 8.45 Relative Abundance 10 50 Relative Abundance Relative Abundance 299.96 Relative Abundance 50 Relative Abundance 10.70 7.77 Relative Abundance 9.70 9.89 Relative Abundance 9.08 Relative Abundance 8.27 8.59 Relative Abundance 50 100 Relative Abundance 7.90 335.90 100 Relative Abundance 7.71 Relative Abundance 100 12/16/2008 1:05:55 AM 20 Mẫu thực phẩm chế biến sẵn_CLEN Relative Abundance Relative Abundance e:\beta agonic\12-2008\15-12\1377a 10 334.81 299.98 100 50 240 260 280 m/z 300 320 250 8.42 9.04 10.60 9.35 9.60 50 293.95 10 250 8.98 10.41 Relative Abundance 10.10 9.54 Time (min) 8.80 10.36 9.36 293.93 9.36 7.74 8.05 9.54 10.10 10.60 8.80 10 293.96 250 Relative Abundance Relative Abundance 300 50 7.19 8.80 9.05 10 7.87 8.06 8.68 9.36 10.11 10.61 350.07 368.79 100 7.56 7.99 8.36 8.61 9.80 294.03 10.36 9.17 350.00 350 368.89 293.97 Relative Abundance 250 350 10.73 10.48 368.88 50 250 300 350 m/z 50 Time (min) 300 350.02 100 10 RT: 8.37 AA: 1211458 SN: 534 350 50 Time (min) 100 349.99 m/z 300 m/z 100 10 10.04 350 350 368.93 250 7.31 50 368.92 50 10 300 349.96 100 Time (min) 300 9.80 50 50 m/z 293.99 m/z 8.43 100 369.01 250 50 250 Time (min) 350 100 10 9.55 7.68 350 100 294.03 9.91 8.31 8.43 100 m/z 50 Time (min) 350.01 50 11 RT: 8.37 AA: 1211458 SN: 534 100 Time (min) 100 300 10.40 m/z 9.04 50 8.97 9.10 350 368.85 250 Relative Abundance Relative Abundance 8.36 349.95 368.84 10 10.16 8.66 50 300 350.05 368.95 m/z Time (min) 50 294.05 294.12 250 7.86 7.37 100 Time (min) 100 300 m/z 50 10 8.41 100 350 50 250 9.80 50 7.68 8.06 349.97 368.95 100 10 8.43 100 Relative Abundance 50 Relative Abundance Relative Abundance 8.36 7.92 m/z 8.23 7.37 300 10.67 100 Time (min) 100 Time (min) 100 Relative Abundance 7.80 7.37 9.74 8.93 350 Relative Abundance 50 Relative Abundance Relative Abundance 8.23 9.55 m/z Time (min) 100 300 8.43 Relative Abundance 10 7.87 7.19 Relative Abundance 350.02 368.83 Relative Abundance 293.86 50 Relative Abundance 50 Relative Abundance 8.67 8.79 Relative Abundance 10.41 9.60 8.24 100 Relative Abundance 10.10 8.42 7.92 Relative Abundance 7.80 100 Relative Abundance 8.23 100 50 12/16/2008 4:44:07 AM 20 mẫu thực phẩm chế biến sẵn_SAL Relative Abundance Relative Abundance e:\beta agonic\12-2008\15-12\1367a 10 369.00 100 50 293.99 349.99 250 300 m/z 350 9.60 7.37 10.60 10.41 50 10.16 9.04 7.86 293.96 250 10.11 10.60 9.05 Relative Abundance Relative Abundance 9.55 7.56 293.93 250 9.98 7.87 100 50 Time (min) 9.23 9.98 10.66 100 Time (min) 10 50 Time (min) 349.91 368.86 100 7.37 10 349.96 300 m/z 350 300 m/z 350.05 368.92 10.60 10.16 350.00 350 7.19 8.87 9.30 10.67 9.99 Time (min) 8.36 100 294.65 9.54 10.10 8.80 100 Time (min) 50 Time (min) 50 294.05 10.60 10 300 m/z 349.94 350 368.87 100 50 294.67 Relative Abundance 10 RT: 8.37 AA: 1211458 SN: 534 350 368.91 250 9.36 7.74 8.05 300 350.06 368.87 100 10 9.04 50 350 m/z 9.55 9.86 7.75 350.01 368.88 50 250 8.31 50 300 100 10 8.43 100 50 300 m/z 10.41 369.01 250 250 8.98 8.67 350 100 294.03 294.02 m/z 8.42 50 250 50 Time (min) 294.04 293.91 10.41 8.23 7.62 350 100 10 9.60 50 300 m/z 9.04 9.54 10.10 100 349.93 250 350 368.90 11 RT: 8.37 AA: 1211458 SN: 534 300 294.02 Time (min) 50 250 10.85 9.42 8.74 8.42 8.73 7.86 100 10 8.43 7.56 Relative Abundance 10.60 Relative Abundance Relative Abundance 9.55 Relative Abundance 9.36 10.11 Relative Abundance Relative Abundance 7.56 9.05 7.25 m/z 8.36 7.80 50 350 50 10 50 349.89 368.85 100 Time (min) 100 300 50 10 8.24 100 m/z 8.43 7.87 368.90 100 Time (min) 50 10 50 100 Time (min) 100 350 Relative Abundance 8.24 Relative Abundance Relative Abundance 8.36 100 300 m/z Time (min) 10.60 9.60 Relative Abundance 250 9.11 9.42 Relative Abundance 10 7.62 7.86 Relative Abundance 349.83 Relative Abundance 293.94 10.16 50 Relative Abundance 9.80 10.30 9.55 368.90 Relative Abundance 8.93 50 Relative Abundance 7.37 9.67 8.42 100 250 Relative Abundance 7.87 Relative Abundance 7.19 100 Relative Abundance 8.43 100 50 12/16/2008 1:05:55 AM 20 mẫu thực phẩm chế biến sẵn_SAL Relative Abundance Relative Abundance e:\beta agonic\12-2008\15-12\1377a 300 m/z 350.65 350 369.00 100 50 293.99 349.99 300 m/z 350 250 ... xuất phương pháp phân tích CLEN, SAL thòt heo, thức ăn nuôi heo, gan heo phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ - Báo cáo đánh giá trạng tồn dư CLEN, SAL thòt heo, thức ăn nuoâi heo, gan heo, thực... heo, gan heo GC/MS đăng báo 2.3 Sơ lược kỹ thuật sắc ký khí 18 2.4 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ 27 CHƯƠNG III: NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHLEN, SAL TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN. .. VỤ PHÂN TÍCH VÀ THÍ NGHIỆM BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHẤT KÍCH THÍCH TĂNG TRƯỞNG HỌ BETA-AGONIST (CLENBUTEROL, SALBUTAMOL) TRONG THỊT HEO, GAN HEO, THỨC ĂN NUÔI HEO