Nghiên cứu phương pháp phân tích nồng độ estriol ở người bằng phương pháp huỳnh quang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI ĐÀM THỊ HÀ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NỒNG ĐỘ ESTRIOL Ở NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP HUỲNH QUANG Chuyên ngành: Hóa học phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Văn Thạo HÀ NỘI, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn kết nghiên cứu cá nhân Các số liệu tài liệu trích dẫn luận văn trung thực Kết nghiên cứu không trùng với công trình công bố trước Tôi chịu trách nhiệm với lời cam đoan Hà Nội, tháng năm 2017 LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành Bộ môn Hóa Phân tích- Khoa Hóa họcTrường Đại học Sư phạm Hà Nội Bằng lòng trân trọng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Tạ Văn Thạo – người giao đề tài, tận tình bảo, hướng dẫn em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin trân trọng cảm ơn Thầy Cô giáo Bộ môn Hoá Phân tích - Trường Đại học Sư phạm Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập Em xin chân thành cảm ơn em sinh viên phòng thí nghiệm tổ môn Hóa phân tích - Trường Đại học Sư phạm Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ hỗ trợ em Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn anh chị, bạn cao học K25 Hóa Phân tích, bạn bè người thân ủng hộ động viên em hoàn thành luận văn Hà Nội, tháng năm 2017 Học viên Đàm Thị Hà MỞ ĐẦU I LÍ DO CHỌN ĐỀ TÀI Estriol (E3), oestriol, gọi 16α-hydroxyestradiol estra-1,3,5 (10) -triene-3,16α, 17β-triol; estrogen steroid tự nhiên ba dạng estrogen thể người Ở phụ nữ không mang thai buồng trứng gần không sản xuất Estriol, nhiên lại tăng cao phụ nữ mang thai Estriol đo máu nước tiểu phụ nữ mang thai sử dụng dấu hiệu sức khỏe thai nhi Các nghiên cứu gần mối liên hệ hàm lượng Estriol dị tật bẩm sinh thai nhi liên quan đến bất thường nhiễm sắc thể (như bệnh Down, Edwards, Patau) Việc sàng lọc dị tật bẩm sinh (DTBS) cho thai nhi trước sinh thông qua định lượng số Estriol tiến hành thường quy nước tiên tiến, cho thấy vai trò quan trọng Estriol người mang thai Trong thập niên gần đây, phân tích hóa sinh trở thành lĩnh vực nghiên cứu bùng nổ, minh chứng rõ báo cáo khoa học liên quan đến lĩnh vực có số lượng lớn Các nghiên cứu tiến vượt bậc việc nâng cao độ nhạy, độ xác, độ đặc hiệu phép phân tích từ cấp độ nguyên tử, phân tử, đại phân tử đến tế bào, cho phép ứng dụng không lĩnh vực y học mà có ứng dụng rộng rãi lĩnh vực khác hóa học, môi trường hay thực phẩm Trong đó, protein chip hướng nghiên cứu mới, có tiềm tương lai, giúp phép phân tích trở nên đơn giản, gọn nhẹ, tiết kiệm mà xác Các Protein chip sẵn sàng trở thành công cụ mạnh mẽ lĩnh vực sinh học quy mô lớn tiềm to lớn chúng nghiên cứu bản, chẩn đoán khám phá dược phẩm Việc chế tạo Protein chip phụ thuộc nhiều vào kỹ thuật cố định phân tử thu lên bề mặt đế (điện cực, màng hay giếng polymer), kỹ thuật định trực tiếp đến độ nhạy, độ bền, độ lặp lại phép phân tích Trong kỹ thuật cố định phổ biến gồm: 1) liên kết hóa học, 2) tương tác sinh học 3) hấp phụ vật lý kỹ thuật thứ có ưu điểm hai phương pháp lại đơn giản Hơn nữa, việc lựa chọn kỹ thuật dò chế tạo Protein chip đóng vai trò quan trọng định đến độ nhạy chip Phương pháp đo phổ huỳnh quang xem phương pháp có độ nhạy độ xác cao, nghiên cứu gần cho phép việc ứng dụng phân tử phát huỳnh quang đánh dấu phân tử thu trở nên dễ dàng thuận lợi nhiều Vì việc áp dụng phổ huỳnh quang phân tích sinh hóa ngày nhóm nghiên cứu quan tâm Với lí lựa chọn đề tài “Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích nồng độ Estriol ngƣời phƣơng pháp huỳnh quang” II MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU Mục đích đề tài bao gồm: 1) Tìm điều kiện tối ưu để cố định kháng thể Estriol lên bề mặt giếng polystyren theo phương pháp hấp phụ vật lý 2) Ứng dụng phân tích uE3 mẫu chuẩn mẫu thật dựa việc đo tín hiệu huỳnh quang kháng thể dò III ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU - Kháng thể Estriol bề mặt giếng polystyrene - Mẫu máu thai phụ thai kỳ hai IV PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Phương pháp thu thập, phân tích số liệu: Tổng quan, phân tích tài liệu khoa học có liên quan đến vấn đề nghiên cứu - Phương pháp thực nghiệm: Phương pháp thu thập mẫu, tách triết mẫu; phương pháp đo phổ huỳnh quang… - Phương pháp quan sát: Được vận dùng thường xuyên suốt trình nghiên cứu đề tài - Phương pháp phân tích tổng hợp đánh giá V NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu phương pháp cố định kháng thể lên bề mặt polystyren giếng - Xây dựng quy trình phân tích nồng độ kháng thể cố định dựa phương pháp huỳnh quang - Ứng dụng phân tích nồng độ Estriol thai phụ CHƢƠNG I TỔNG QUAN I.1 TỔNG QUAN VỀ PROTEIN CHIP I.1.1 Khái niệm vài nét lịch sử Một microarray protein (hoặc protein chip) phương pháp thông lượng cao sử dụng để theo dõi tương tác hoạt động protein, để xác định, định lượng phân tích chức protein nghiên cứu quy mô lớn[19] Ưu điểm chỗ số lượng lớn protein theo dõi song song Chip bao gồm bề mặt hỗ trợ kính trượt, màng nitrocellulose, hạt microtitre, mà mảng protein gắn cố định ràng buộc [17] Các phân tử protein, thường dán nhãn với thuốc nhuộm huỳnh quang, thêm vào mảng Bất kỳ phản ứng đầu dò protein cố định phát tín hiệu huỳnh quang đọc máy quét laze [18] Các phân tử protein cực nhanh, tự động, tiết kiệm, nhạy cảm, tiêu thụ lượng nhỏ mẫu thuốc thử [20] Khái niệm phương pháp mô hình protein chip lần giới thiệu minh hoạ mô hình kháng thể - kháng thể (còn gọi ma trận kháng thể) vào năm 1983 ấn khoa học [3] loạt sáng chế [24] Công nghệ thông lượng cao đằng sau protein chip tương đối dễ phát triển dựa công nghệ phát triển cho mô hình ADN, [7] trở thành vi phân sử dụng rộng rãi I.1.2 Cấu tạo chung protein chip Cấu tạo chung gồm phần bề mặt rắn( chất hay giếng), phần cố định, mẫu đầu dò Đầu dò Mẫu Phần cố định Chất Hình I.1 Cấu tạo Protein chip a Chất (bề mặt rắn hay giếng) Các protein bố trí bề mặt rắn mặt trượt kính hiển vi, màng, hạt vi trùng Chức bề mặt giúp protein cố định bề mặt Nó phải thể tính chất liên kết tối đa, đồng thời trì protein cấu hình ban đầu để trì khả ràng buộc Kính hiển vi slide làm thủy tinh silicon lựa chọn phổ biến chúng tương thích với máy thu thập liệu máy quét laser phát triển cho công nghệ vi hạt ADN Tấm giếng Nitrocellulose sử dụng rộng rãi chất kết dính protein cao ứng dụng protein chip Bề mặt rắn lựa chọn sau phủ lớp phủ phải đáp ứng chức đồng thời việc giữ ổn định protein, ngăn ngừa biến tính protein, định hướng protein theo hướng thích hợp để tiếp cận vị trí liên kết cung cấp môi trường ưa nước, phản ứng liên kết xảy Ngoài ra, bề mặt rắn cần phải tương thích với hệ thống phát khác Các tác nhân cố định bao gồm lớp nhôm vàng, polyme ưa nước, gel polyacrylamide, xử lý amin, aldehyde epoxy Các công nghệ màng mỏng lắng đọng vật lý (PVD) lắng đọng hóa học (CVD) sử dụng để phủ lớp phủ lên bề mặt đỡ Môi trường nước điều cần thiết tất giai đoạn sản xuất mảng hoạt động để ngăn chặn biến đổi protein Do đó, đệm mẫu chứa lượng glycerol cao (để hạ điểm đóng băng) độ ẩm môi trường sản xuất điều chỉnh cẩn thận Microwells có lợi kép cung cấp môi trường nước ngăn ngừa lây nhiễm chéo mẫu Để đạt gắn chặt protein bề mặt chip bền vững, giữ lại hoạt động chức protein, số nhóm nghiên cứu tạo phản ứng cộng hóa trị kính liên kết cộng hóa trị với protein [29, 15, 30] Nói chung, liên kết chéo bifunctional sử dụng để thay đổi bề mặt chip; liên kết chéo có nhóm chức phản ứng với nhóm hydroxyl bề mặt rắn chất khác phản ứng trực tiếp với nhóm amin protein mong muốn (ví dụ: aldehyde, epoxy, NHS-ester nhóm) thay đổi mặt hóa học để đạt độ đặc hiệu tối đa [16, 11] Một bề mặt chip cụ thể dẫn xuất liên kết chéo chức kết hợp liên kết chéo chức khác để cải thiện khả liên kết protein, [22] b Phần cố định Các phần cố định gắn bề mặt rắn kháng thể, kháng nguyên, aptamers (các phối tử gốc nucleic), chất affibodies (các phân tử nhỏ thiết kế để bắt chước kháng thể đơn dòng) protein dài Các phần cố định lựa chọn cẩn thận để gắn lên bề mặt rắn, chúng không bị biến tính trì tính đặc hiệu protein gắn vào chúng Hình 3.1 Cƣờng độ huỳnh quang 10 mẫu dd phức uE3- Biotin nồng độ 0.75 µg/mL Vị trí A10 B1 B2 B3 B4 B5 B6 Cƣờng độ huỳnh quang 9888 10605 9559 9411 9539 10725 9650 41 B7 8947 B8 10526 B9 9169 9801.9 TB Độ lệch chuẩn S = 620 Hệ số biến thiên CV = ± 3.2 % Bảng 3.3 Cƣờng độ huỳnh quang 10 mẫu dd phức uE3- Biotin nồng độ 0.75 µg/mL CUONG DO HUYNH QUANG 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0 10 12 LAN DO Biểu đồ 3.2: Cƣờng độ huỳnh quang 10 mẫu chuẩn uE3 (nồng độ 0.75 ug/mL) 42 III.5 XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƢỢNG (LOQ) Việc xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) cần thiết phép phân tích Ở bước tiến hành đo 10 mẫu dd phức uE3- Biotin 0.75 (µg/mL) , thí nghiệm làm giống mục II.4 Tín hiệu huỳnh quang thu xử lý theo công thức tính độ nhạy (LOD) (LOQ) Hình ảnh hình ảnh thu tín hiệu huỳnh quang thu 10 mẫu dd phức Hình 3.2 Tín hiệu huỳnh quang 10 mẫu Kết cường độ huỳnh quang 10 mẫu thể Bảng 3.5 đây: 43 Bảng 3.4 Giá trị cƣờng độ huỳnh quang 10 mẫu trắng (chuẩn A) Cường độ huỳnh quang Giếng A01 34784 A02 32168 A03 36448 A04 35025 A05 32792 A06 33049 A07 30049 A08 38275 A09 34953 A10 35251 Giá trị trung bình X = 34279 Độ lệch chuẩn S = 2332 Hệ số biến thiên CV = ± 3.4 % LOD = X - 3.s = 27283 LOQ = X - 10.s = 10959 III.6 KHẢO SÁT TƢƠNG TÁC CHÉO GIỮA CÁC STEROIT 44 Việc xem xét tương tác chéo Steroit nhằm mục đích khẳng định: giếng sau cố định kháng thể uE3 có tính đặc hiệu uE3, tức giếng chuyên dụng để đo tín hiệu uE3 Như kết cần đạt kết hoàn toàn không thay đổi tín hiệu so với ta sử dụng chuẩn A ( nồng độ mẫu chuẩn uE3 nmol/ml) Với chuẩn thực lần đo với bước trình bày mục II.4 Và kết thu Hình 3.3 Bảng 3.5: Hình 3.3 Kết cƣờng độ huỳnh quang chuẩn Progesterol, Testoterol 45 Chuẩn Testoterol Giếng A01 KQ 33982 34556 35021 32487 33021 35208 KQTB A02 Progesterol A03 A04 34520 A05 A06 33572 Bảng 3.5 Kết cƣờng độ huỳnh quang chuẩn Progesterol, Testoterol Bảng 3.5 Cho thấy giá trị cường độ huỳnh quang đo chuẩn Progesterol Testoterol cho tín hiệu tương đương làm với chuẩn A (nồng độ uE3 nmol/ml) Như kết luận: Độ đặc hiệu giếng sau cố định kháng thể uE3 tốt III.7 XÂY DỰNG ĐƢỜNG CHUẨN Như vậy, giếng thu sau cố định phức uE3- Biotin có độ đặc hiệu, độ lặp độ nhạy tương đối cao (sử dụng đo huỳnh quang với mẫu chuẩn) Chúng sử dụng loại giếng cố định kháng thể điều kiện tối ưu ( nồng độ phức uE3- Biotin 2.5 µg/mL) để đo huỳnh quang mẫu kháng thể uE3 chuẩn (có nồng độ tăng dần từ 0; 0.58; 1.09; 4.69; 13.2 45.2 nmol/l hay gọi theo thứ tự chuẩn A, B, C, D, E, F) Các bước tiến hành trình bày mục II.4 Tín hiệu huỳnh quang đo mẫu chuẩn thể Hình 3.2, cường độ huỳnh quang phụ thuộc vào cường độ màu tăng dần từ xanh da trời lên màu đỏ: Các giá trị cường độ huỳnh quang tương ứng với mẫu chuẩn vị trí (A1, A2, A3, A4, A5, A6) tổng hợp Bảng 3.7 Bảng 3.6 Kết cƣờng độ huỳnh quang đo đƣợc với mẫu chuẩn uE3 với nồng độ phức uE3- Biotin 2.5 µg/mL 46 Nồng độ mẫu chuẩn 0.58 1.09 4.69 13.2 45.2 Vị trí giếng A1 A2 A3 A4 A5 A6 Giá trị huỳnh quang 35541 30457 37581 20852 10709 5407 4.551 4.484 4.319 4.030 3.733 (ng/mL) Logarit cường độ huỳnh quang 4.575 Theo bảng số , đường chuẩn theo nồng độ 2.5 µg/ml uE3 không ổn định, nên ta phải lựa chọn giá trị nồng độ khác để xây dựng đường chuẩn Ta tiến hành xây dựng đường chuẩn theo nồng độ 0.75 µg/ml Bảng 3.6 Kết cƣờng độ huỳnh quang đo đƣợc với mẫu chuẩn uE3 với nồng độ phức uE3- Biotin 0.75 µg/mL Nồng độ mẫu chuẩn 0.58 1.09 4.69 13.2 45.2 Vị trí giếng A7 A8 A9 A10 A11 A12 Giá trị huỳnh quang 32168 23866 19149 9888 5001 2549 4.507 4.378 3.995 3.699 3.406 (nmol/L) Logarit cường độ huỳnh quang 4.282 47 Hình 3.4: Tín hiệu huỳnh quang mẫu chuẩn ứng với nồng độ kháng thể uE3 0.75 µg/mL Đường chuẩn phân tích uE3 xây dựng sở hồi quy phi tuyến, biểu diễn phụ thuộc logarit nồng độ huỳnh quang theo nồng độ mẫu chuẩn Đường chuẩn uE3 biểu diễn Biểu đồ 3.5: 48 Biểu đồ 3.3 Đƣờng chuẩn mẫu chuẩn uE3 49 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong khuôn khổ đề tài nghiên cứu, số kết luận rút sau: Đã tìm phương pháp cố định kháng thể uE3 lên bề mặt giếng (polystyren) điều kiện tối ưu phương pháp cố định sinh học (cơ chế hấp phụ sinh học) dựa phương pháp đo phổ huỳnh quang Trong đó, việc gắn kháng thể uE3 lên bề mặt giếng thông qua liên kết Biotin Streptavidin hướng mới, đầy hiệu Cải tiến phương pháp cạnh tranh trình gắn uE3 vào kháng thể cố định : thay dùng phương pháp truyền thống Stepwise ( tiến hành theo bước), ta sử dụng phương pháp Onestep nhằm nâng cao hiệu canh tranh Đã khảo sát xác định điều kiện tối ưu để cố định uE3 lên bề mặt polystyrene cho tín hiệu huỳnh quang tốt là: nồng độ kháng thể uE3 cố định 2.5µg/mL Đã kiểm tra đánh giá độ lặp phép phân tích mẫu uE3 chuẩn (nồng độ 4.69 nmol/L) cho giá trị độ lệch chuẩn S = 773 hệ số biến thiên CV = ± 4.0% Đã tiến hành xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) dựa độ lệch chuẩn tín hiệu dung dịch mẫu trắng Kết thu được: LOD = LOQ = Đã khảo sát độ đặc hiệu ( tương tác chéo Steroit) thu giá trị cường độ huỳnh quang tương tự đo với chuẩn A ( nồng độ uE3 nmol/L ), cho thấy kít chế tạo có độ chọn lọc độ đặc hiệu cao 50 Đây hướng mới, đầy hứa hẹn việc xác định nồng độ uE3 thể thai phụ, góp phần chẩn đoán dị tật sàng lọc trước sinh 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đặng Đình Huy - Luận văn Nghiên cứu định lượng độc tố sinh học biển ASP thủy sản sản phẩm thủy sản phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ tandem LC-MS/MS (28) Bussow, K; Cahill, D; Nietfeld, W ; Bancroft, D; Scherzinger, E; Lehrach, H ; Walter, G Nucleic Acids Res., 1998, 26, 5007 ( 15) Chang TW (December 1983) "Binding of cells to matrixes of distinct antibodies coated on solid surface" J Immunol Methods 65 (1–2): 217– 23 doi:10.1016/0022-1759(83)90318-6 PMID 6606681 ( 5) Federica Rusmini, Zhiyuan Zhong, and Jan Feijen (2007), “Protein Immobilization Strategies for Protein Biochips”, Department of Polymer Chemistry and Biomaterials (PBM), Institute for Biomedical Technology (BMTI), Faculty of Science and Technology, University of Twente, Enschede, 7500 AE, The Netherlands ( 22) Ge, H Các axit nucleic Res., 2000, 28, e3 ( 18) Guschin, D; Yershov, G ; Zaslavsky, A ;; Gemmell, A ;; Shick, V; Proudnikov, D; Arenkov, P.; Mirzabekov, A Anal Biochem., 1997, 250, 203 ( 17 ) Hall, DA; Ptacek, J; Snyder, M (December 12, 2012) "Protein Microarray Technology" Mech.AgeingDev 128:1617 doi:10.1016/j.mad.2006.11.021 PMC 1828913  PMID 17126887 ( 7) Hall, DA; Ptacek, J; Snyder, M (2007) "Protein microarray technology" Mech Ageing Dev 128: 161–7 doi:10.1016/j.mad.2006.11.021 PMC 1828913 Freely accessible PMID 17126887 ( 21) Heng Zhum and Michael Snyderm Protein chip technology ( 20) 10.https://www.alpco.com/pdfs/20/20-FE3HU-E01.pdf ( 27) 11.Heysel, S; Vogel, H; Sanger, M; Sigrist, H Protein Sci., 1995, 4.2532 ( 12) 12.Judy Gibbs(2001) “Immobilization Principles – Selecting the Surface”, ELISA Technical Bulletin - No 1, Corning Incorporated, Life Sciences, Kennebunk, Maine ( 25) 13.Joos, T.O.; Schrenk, M.; Hopfl, P.; Kroger, K.; Chowdhury, U.; Stoll, D.; Schorner, D.; Durr, M.; Herick, K.; Rupp, S.; Sohn, K.; Hammerle, H Electrophoresis, 2000, 21, 2641 ( 16) 52 14.Lövgren, T., Leivo, P., Siitari, H., Pettersson, K., (1991) “How to optimize rapid and simple immunoassays”, In: A Vaheri, R.C Tilton, A Bulows (eds), Rapid methods and automation in microbiology and immunology, Springer Verlag, Berlin 84 - 95 ( 26) 15.MacBeath, G ; Schreiber, S.L Khoa học, 2001, 289, 1760 Delehanty, J.B; Ligler, F.S Biotechniques, 2003, 34, 380 ( 9) 16.MacBeath, G ; Koehler, A.N; Schreiber, S.L M Chem S., 1999, 121, 7967 ( 11) 17.Mark Schena (2005) Protein Microarrays Jones & Bartlett Learning pp 47– ISBN 978-0-7637-3127-4 ( 2) 18 Mark Schena (2005) Protein Microarrays Jones & Bartlett Learning pp 322– ISBN 978-0-7637-3127-4 ( 3) 19.Melton, Lisa (2004) "Protein arrays: Proteomics in multiplex" Nature 429 (6987): 101–107 doi:10.1038/429101a ISSN 00280836 ( 1) 20.Mitchell, Peter (2002) "A perspective on protein microarrays" Nature Biotechnology 20 (3): 225–229 doi:10.1038/nbt0302-225 ISSN 10870156 ( 4) 21.Shen, M Y., Li, B R., and Li, Y K (2014) “Silicon nanowire field-effecttransistor based biosensors: from sensitive to ultra-sensitive Biosens Bioelectron”.60, 101–111 doi:10.1016/j.bios.2014.03.057 ( 23) 22.Sheng-Ce Tao, Chien-Sheng Chen and Heng Zhu* Applications of Protein Microarray Technology ( 13) 23.Templin, M.F ; Stoll, D; Schrenk, M; Traub, P.C ; Vohringer, C.F ; Joos, T.O Xu hướng công nghệ sinh học, 2002, 20, 160 ( 14) 24 US 4591570; US 4829010; US 5100777 (6) 25.Verma, N., and Bhardwaj, A (2015) “Biosensor technology for pesticides – a review” Appl Biochem Biotechnol.175, 3093–3119 doi:10.1007/s12010-015-1489-2 ( 30) 26.Védrine, C.; Leclerc, J.-C.; Durrieu, C.; Tran-Minh, C (2003) "Optical whole-cell biosensor using Chlorella vulgaris designed for monitoring herbicides" Biosensors & bioelectronics 18 (4): 457– 63 doi:10.1016/s0956-5663(02)00157-4 ( 31) 53 27.Xianzhang Huang,David C Spink,Erasmus Schneider,Helen Ling,Alex J Rai,Thomas G Rosano,Baorong Chen,and Zhimin (Tim) Cao Measurement of Unconjugated Estriol in Serum by Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry and Assessment of the Accuracy of Chemiluminescent Immunoassays ( 29) 28.Zhan-Hui Wang, Gang Jin(2003), “Covalent immobilization of proteins for the biosensor based on imaging ellipsometry”, Journal of Immunological Methods 285 (2004) 237–243.( 24) 29.Zhu, H; Bilgin, M; Bangham, R; Hall, D; Casamayor, A ;; Bertone, P ; Lan, N ;; Jansen, R; Bidlingmaier, S ; Houfek, T ;Mitchell, T ;; Miller, P.; Dean, R.A ; Gerstein, M; Snyder, M Sci-Ence, 2001, 293, 2101 ( 8, 19) 30.Zhu, H; Klemic, J.F ; Chang, S ; Bertone, P ; Casamayor, A., Klemic, K.G; Smith, D; Gerstein, M; Reed, M.A ; Snyder, M.Nat Genet., 2000, 26, 283 ( 10) 54 PHỤ LỤC Cấu trúc phân tử Testoterol (C19H28O2 ) Cấu trúc phân tử Progesterol (C21H30O2) 55 ... phổ huỳnh quang phân tích sinh hóa ngày nhóm nghiên cứu quan tâm Với lí lựa chọn đề tài Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích nồng độ Estriol ngƣời phƣơng pháp huỳnh quang II MỤC ĐÍCH NGHIÊN... phân tích nồng độ thấp Ngoài độ đặc hiệu phương pháp cao với phương pháp huỳnh quang xạ kích thích xạ dò khác [25] Các nghiên cứu gần tập trung nghiên cứu gắn kháng thể dò với phân tử huỳnh quang. .. trình nghiên cứu đề tài - Phương pháp phân tích tổng hợp đánh giá V NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu phương pháp cố định kháng thể lên bề mặt polystyren giếng - Xây dựng quy trình phân tích nồng độ