Nghiên cứu chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitrit trong lá bứa khô và tạo muối canxi hydroxycitrat

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA  HỒNG CHÂU THANH THẢO Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT HYDROXYCITRIC TRONG LÁ BỨA KHƠ VÀ TẠO MUỐI CANXI HYDROXYCITRAT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƯ PHẠM Đà Nẵng – 2013 Lời cảm ơn Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo GS.TS Đào Hùng Cường tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo giảng dạy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa, trường đại học Sư phạm; cán Trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩn đo lường chất lượng II, thành phố Đà Nẵng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình tất bạn bè động viên, giúp đỡ em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp mình! Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày 28 tháng 05 năm 2012 Sinh viên Hoàng Châu Thanh Thảo MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Theo hội nghị quốc tế lần thứ 10 bệnh béo phì tổ chức Sydney (Úc), chuyên viên nhận định béo phì đại dịch không nước phát triển mà nước phát triển Theo tổ chức giới WTO, bên cạnh 800 triệu người thiếu ăn, có triệu người trưởng thành thừa cân số có 300 triệu người phải sống vấn nạn béo phì.WHO khẳng định bệnh béo phì xuất nước Châu Phi Tại nước phát triển béo phì tồn song song với thiếu dinh dưỡng, gặp nhiều thành phố nông thôn Ở Việt Nam tỷ lệ thừa cân béo phì khoảng 4% Hà Nội (1995) Thành phố Hồ Chí Minh (2000); 10,7% lứa tuổi 15-49 21,9% lứa tuổi 40-49.Tỷ lệ béo phì trẻ học sinh tiểu học Hà Nội 4,2% (1996) 12,2% Thành phố Hồ Chí Minh (1997) Tại Thái Lan, vòng hai năm, tỉ lệ béo phì trẻ 5-12 tuổi tăng từ 12,2% lên 15,6% Tại Trung Quốc, tình trạng thừa cân béo phì lên đến 20% dân số số thành phố.Trong đó, tỉ lệ số vùng thị Samoa cịn vượt 75%.Tại Mỹ, 30% người trưởng thành bị béo phì (60 triệu người).Tại châu Âu, Anh đứng đầu bảng với 23% người béo phì.Tình trạng tăng trẻ em.Trên giới có 22 triệu trẻ từ năm tuổi trở xuống bị thừa cân Người bị béo phì ngồi thân hình phì nộn, nặng nề, khó coi, cịn có nguy mắc nhiều bệnh sỏi mậtcác bệnh mãn tính khó trị rối loạn lipit máu, tiểu đường mức độ 2, bệnh lý tim mạch, cao huyết áp, tai biến mạch máu não số dạng bệnh ung thư Hiện tại, 2.000 nhà nghiên cứu thuộc nhiều nước giới tham dự hội nghị hàng năm vấn đề liên quan đến béo phì Boston, Mỹ.Trong bốn ngày (20 đến 24-10), hội nghị công bố 250/800 cơng trình nghiên cứu chữa trị phịng bệnh béo phì, có nghiên cứu ca phẫu thuật điều trị béo phì phương pháp tiên tiến Các cơng trình nhà nghiên cứu đến từ châu Á, đặc biệt Hàn Quốc, tạo ý hội nghị Qua đó, hội nghị tổng kết ba phương pháp để giảm cân nhanh chóng là: chế độ dinh dưỡng, phẫu thuật sử dụng thực phẩm chức Phương pháp dinh dưỡng địi hỏi kiên nhẫn thực tiếc người béo phì khó thực họ người thèm ăn; phương pháp giải phẫu giảm khối lượng nhanh kèm với biến chứng sau thời gian ngắn bắo phì lại hoàn trở Do sử dụng thực phẩm chức lựa chọn phổ biến hiệu Một thực phẩm chức sử dụng rộng rãi thị trường muối HCA HCA chiết từ bứa có tác dụng kiềm hãm q trình chuyển hóa lượng đường dư thừa thể thành mỡ Không giúp giảm cân, HCA giảm loại mỡ xấu cho sức khỏe tryglycerid, LDL cholesterol, cholesterol toàn phần tăng HDL cholesterol loại mỡ có tác dụng bảo vệ thành mạch Ngoài ra, HCA làm gia tăng nồng độ serotonin, chất dẫn truyền thần kinh yếu có vai trị kiểm sốt thèm ăn cảm xúc HCA kiềm hãm cảm giác thèm ăn, đồng thời cải thiện tâm lí phiền muộn người dư cân, béo phì giúp họ giảm lượng phần HCA dạng tự có hoạt tính sinh học khơng bền, dễ chuyển hóa thành dạng lacton, bền hoạt động Vì cần phải tạo HCA tồn dạng dẫn xuất, bền có hoạt tính sinh học Theo kết nghiên cứu giới muối HCA kim loại kiềm kiềm thổ có tác dụng giảm cân Một số muối canxi HCA (canxi hydroxycitrat) Muối canxi HCA có hoạt tính sinh học HCA, ngồi cịn bổ sung lượng canxi, loại khống chất quan trọng cho thể Muối canxi hydroxycitrat có hoạt tính sinh học HCA Canxi loại khoáng chất quan trọng cần thiết cho phát triển vững xương Canxi giữ vai trò chất truyền dẫn thơng tin tham gia vào hầu hết hoạt động thể tế bào Lượng canxi trái đất nhiều người hấp thụ qua đường ăn uống Những người béo phì hấp thụ nhiều chất béo chất đạm dẫn đến axit béo kết hợp với canxi có thức ăn cung cấp ngày làm cho lượng canxi thất thoát nhiều Mặt khác, muối canxi HCA thường hấp thụ từ đường tiêu hóa chúng hịa tan nước Do ứng dụng hạn chế sử dụng loại nước uống, kem, kẹo, thực phẩm…Như vậy, ngồi hiệu giảm cân muối Canxi hydroxycitrat giúp bổ sung lượng canxi cần thiết cho phát triển thể Ở Mỹ, Hydrotrim sản phẩm độc quyền điều chế từ muối Canxi HCA có hiệu cao việc điều trị giảm cân người tiêu dùng ưa chuộng Ở Việt Nam, bứa loại dễ trồng, phát triển tốt, cho suất cao có hầu hết địa bàn Miền Trung, Tây Nguyên, Nam Bộ Dân ta dùng bứa làm ăn, trị số bệnh ngồi da Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu tạo muối HCA từ dịch chiết vỏ bứa nghiên cứu chiết tách tạo muối HCA từ bứa cịn quan tâm Qua nghiên cứu, nhận thấy ưu điểm nghiên liệu bứa bao gồm: thu hoạch quanh năm với số lượng lớn, xử lí, bảo quản dễ dàng, có thời gian ngắn tính từ trồng đến thu hoạch so với vỏ bứa Đó lí chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô tạo muối canxi hydroxycitrat” Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô - Nghiên cứu dung mơi thời gian chiết thích hợp để chiết tách lấy axit HCA từ bứa phương pháp chưng ninh - Đóng góp thêm thông tin, tư liệu khoa học muối HCA, tạo sở khoa học ban đầu cho nghiên cứu sâu ứng dụng muối HCA Đối tượng phạm vi nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu: - Lá bứa thu hái xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang, TP Đà Nẵng * Phạm vi nghiên cứu: - Phần bứa - Chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô tạo muối canxi hydroxycitrat Phương pháp nghiên cứu - Nghiên cứu lý thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tổng quan tài liệu đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hoá học, ứng dụng số loài thực vật thuộc họ bứa Clusiaceae - Phương pháp lấy mẫu: Mẫu tươi, sau sấy khơ đến độ ẩm thích hợp Dung mơi nước, axeton, methanol, ethanol - Phương pháp thực nghiệm: Sử dụng chiết chưng ninh nhiệt độ thường nhiệt độ cao để chiết tách HCA Phân tích trọng lượng để xác định thành phần hợp chất hố học Phân tích công cụ để định danh, xác định hàm lượng, độ tinh khiết axit Chuyển hóa HCA thành muối Phân tích cơng cụ để xác định hàm lượng, độ tinh khiết muối canxi hydroxycitrat mẫu muối tạo thành Xác định độ ẩm muối tạo thành, độ hòa tan dung môi khác nhiệt độ khác Cấu trúc luận văn Luận văn gồm ………….trang, có ……bảng … hình Phần mở đầu…… trang, kết luận kiến nghị ……… trang, tài liệu tham khảo…… trang Nội dung luận văn chia làm 03 chương: Chương 1: Tổng quan, … trang Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu, …… trang Chương 3: Kết thảo luận, ……… 18 trang CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 CÂY BỨA 1.1.1 Bộ Chè [2] Bộ chè Theales Bộ mầm thuộc phân lớp sổ Dilleniiae Lá đơn có kép, hoa thường cánh phân, nhiều nhị, đài xếp xoắn ốc sát Là lớn, bao gồm chủ yếu thân gỗ có quan hệ gần gũi với sổ sớm ra từ Bộ mầm thuộc phân lớp sổ Dilleniiae Lá đơn có kép; hoa thường cánh phân; nhiều nhị; đài xếp xoắn ốc sát [2] Bộ chè gồm 19 họ, nước ta có họ có họ quan trọng họ Chè họ Măng cụt, phân biệt với chủ yếu sau: - Cây khơng có nhựa mủ, mọc cách thường thuộc Họ Chè - Cây có nhựa mủ màu vàng, mọc đối thường thuộc Họ Măng cụt 1.1.1.1 Họ Chè (Theaceae) Cây gỗ hay bụi, mọc cách, đơn ngun khơng có kèm, thường có tế bào phân nhánh Hoa lưỡng tính, thường mọc đơn độc Đài gồm đài không nhau, tồn Tràng gồm 5-9 cánh rời Nhị nhiều Nhụy 3-5 noãn hợp thành bầu trên, số ô tương ứng với số nỗn, có hay nhiều nỗn, đính nỗn trụ Quả có hay nhiều hạt, khơng có nội nhũ, phơi lớn Họ chè có 29 giống khoảng 550 loài, phân bố chủ yếu nước nhiệt đới cận nhiệt đới hai bán cầu, đặc biệt Đông Đông Nam Á Ở Việt Nam có 11 giống với 100 lồi - Hải đường (Camellia amplexicaulis (Pit.) Coh-Swart.) : Cây bụi Hoa mọc 2-3 gần ngọn, khơng có hương thơm Cánh hoa trịn, đỏ, dính gốc, nhị nhiều, màu vàng, trồng làm cảnh Hoa nở vào dịp tết, thường chưng ngày tết hoa đẹp lâu tàn - Chè (Camellia sinensis (L.) O.Ktze) : Còn gọi trà, chè xanh Hoa mọc đơn độc nách Gốc có 3-4 bắc dễ rụng Đài cánh khơng Tràng có 5-6 cánh, nhị nhiều xếp làm 4-5 dãy Ra hoa từ tháng 9, 10 đến tháng năm sau Hiện nước ta chè loại đặc sản trồng nhiều nông trường Chè tiếng ta chè Phú Thọ, Hà Giang, Thái nguyên 1.1.1.2 Họ Măng cụt (Clusiaceae) Họ măng cụt Guttiferae gọi họ bứa Clusiaceae thuộc Chè Cây gỗ có mủ vàng, cành nhỏ mọc thành nhiều tầng Lá đơn mọc đối, kèm Phiến dày, mép nguyên gân bên nhiều nhỏ khơng rõ Hoa thường đơn tính hoa tạp tính tức hoa đực hoa lưỡng tính gốc, bầu Quả thịt hay hạch thường có đài tồn gốc Như Măng cụt Garcinia mangostana; dọc G multiflora; bứa G oblongifolia; Tai chua G cowa; mù u (hồ đồng) Calophyllum inophyllum [2], [7] Họ măng cụt gồm 14 giống 350 loài phân bố giới hạn nước nhiệt đới ẩm Ở Việt Nam có giống, 41 lồi [7] 1.1.2 Bứa [1], [7] -Tên tiếng Anh: Garcinia cambogia, Brindle berry, Brindall berry, gamboge fruit , thuộc họ măng cụt-Clusiaceae -Tên khoa học: Garcinia oblongifolia Champ ex Benth - Các loài tương cận: -Măng cụt (tím) (Garcinia mangostana ) -Măng cụt rừng (Garcinia indica ) -Bứa Châu Phi (Garcinia livingstonei) -Bứa Mã Lai (Garcinia atroviridis) -Bứa chanh (Garcinia cambogia) -Khoảng 50 loài mọc hoang khác Phân loại khoa học Lớp (Class) Ngọc Lan (Magnoliopsida) Bộ (Order) Chè (Theales) Họ (Family) Măng cụt (Clusiaceae) Phân họ (Subfamily) Măng cụt (Clusioideae) Chi (Genus) Bứa (Garcinia) Loài (Species) Garcinia oblongifolia Họ Măng cụt hay Họ Bứa (Clusiaceae) có số lượng lồi biến động khác từ 50-300 loài (species) tùy theo quan điểm phân loại Họ gỗ sống lâu năm với thường xanh có nhiều lồi ngon Măng cụt (Garcinia mangostana), Măng cụt rừng (Garcinia indica) có nhiều lồi có vị chua dùng làm rau gia vị Bứa (Garcinia oblongifolia) Đa số lồi hoang dại cịn lại có vị chát, đắng khơng ăn có độc Mô tả: Kết luận: Chọn chế độ khuấy trộn 2( trộn than dịch, khuấy trộn 20 phút, để yên 40 phút) tối ưu 3.5 CHIẾT TÁCH AXIT HỮU CƠ 3.5.1 Chuẩn bị mẫu Lá bứa sau rửa sạch, hong khô, loại bỏ phần bị hư nát Lá bứa phơi khô tự nhiên với nhiệt độ trời 31 oC -34oC đến khơ hồn tồn, xay thành bột mịn sử dụng để chiết tách axit hữu 3.5.2.Chiết tách axit hữu Cân khoảng 20 gam mẫu khô cho vào túi vải với 200ml nước cất Thực chưng ninh nồi áp suất nhiệt độ 1270C thời gian 145 phút Tiến hành lọc vải lọc muslin thu dịch chiết, phần xác thực chiết lặp lần để thu hồi tồn lượng axit có mẫu Phần xác sau chiết lặp lần khơng cịn vị chua, thử giấy đo pH cho pH trung tính Dịch chiết có màu nâu đỏ Trộn dịch nổi, đặc đến thể tích 100ml Trộn lẫn dịch lần chiết với 200ml etanol 960, 15 phút để kết tủa hết pectin Ly tâm khoảng 10–15 phút máy ly tâm 4000 vòng/phút hay lọc, tách phần dịch kết tủa riêng Phần kết tủa rửa lần với 20ml etanol ly tâm lọc để thu hồi hết axit.Trộn lẫn dịch lọc rửa, cô đặc đến 30ml Cho vào 3,6g than hoạt tính ngâm nước ấm 60 phút, sau lọc chân khơng dùng phễu Buchne Than hoạt tính rửa lại lần, lần với 10ml nước để thu hồi hết axit Dịch chiết sau xử lý than hoạt tính bị màu hoàn toàn lưu giữ 0C tủ lạnh đến sử dụng để chuẩn độ, kiểm tra sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 3.5.3 Đánh giá cảm quan mẫu chiết Mẫu thu sau trình chiết làm hỗn hợp dạng lỏng, có màu suốt vàng có vị chua đặc trưng pha lẫn vị chát Thử dịch chiết giấy đo pH cho kết dung dịch có pH = 4,5-6 Do ta kết luận mẫu dịch chiết có chứa axit.Theo kết đánh giá cảm quan mẫu bứa khô thực chiết lặp lần cho thấy khơng cịn vị chua Để kiểm tra mẫu sau chiết lần có cịn axit hay khơng ta thực chiết lần kiểm tra giấy đo pH cho mơi trường trung tính (6–7) Mẫu dịch chiết lặp lần lưu giữ tủ lạnh nhiệt độ 40C sử dụng để chuẩn độ, kiểm tra sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 3.6 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THÔNG SỐ VẬT LÝ VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÓ TRONG DỊCH CHIẾT 3.6.1 Xác định tổng lượng axit bứa phương pháp chưng ninh nồi áp suất Bảng 12 Kết xác định tổng lượng axit bứa STT P (g) 20,084 20,134 20,095 Vcđ (ml) 30 30 30 V (ml) 5 n (ml) Tổng lượng axit Tổng lượng axit (g/100g) trung bình (g/100g) 19,5 4.022 19.6 4.043 19.6 4043 19.6 4.033 19.7 4.053 19.6 4.033 19.4 3.999 19.5 4.020 19.6 4.040 4.032 Nhận xét: Tổng lượng axit chuẩn độ mẫu bứa khô chiết với dung môi nước 4.032% So sánh với kết loài nghiên cứu Garcina India (5.88-6.99%) , Garcina Cowa (4.457%) , kết chiết nước bứa tươi cho kết trung bình 3.6.2 Xác định CN axit tổng dịch chiết Bảng 13 CN axit tổng dịch chiết Mẫu V dịch chuẩn độ V NaOH 0.1 N (ml) (ml) 1.2 1.3 1.2 12.5 12.3 12.3 1.4 1.5 1.2 12.5 12.3 12,3 Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết Dịch chiết CN axit tổng 0.42 0.15 0.37 0.24 3.6.3 Xác định tỉ trọng Khối lượng riêng vật thể đặc tính mật độ vật chất đó, đại lượng đo thương số khối lượng m vật làm chất (nguyên chất) thể tích V vật ρ = m/V ( g/ cm3) Cách tiến hành: -Dùng bình đo tỉ khối (picnometer) tích 100 ml Cân bình đo tỉ khối rỗng mb (g), bình chứa dịch chiết mc (g), nhiệt độ phòng Bảng 3.14 Tỉ trọng dịch chiết Mẫu mb (g) mc (g) m = mc-mb (g) ρ (g/cm3 ) Dịch chiết 56.584 158.507 101.923 1.019 Dịch chiết 56.586 152.377 95.791 0.958 Dịch chiết 56.582 158.663 102.081 1.021 Dịch chiết 56.587 148.472 91.885 0.919 Trong đó: - Dịch chiết 1: dịch chiết thu sau chưng ninh - Dịch chiết 2: dịch chiết thu sau loại pectin - Dịch chiết 3: dịch chiết thu sau cô đặc - Dịch chiết 4: dịch chiết thu sau tẩy màu 3.6.4 Kết xây dựng đường chuẩn Đường chuẩn xác C = 0,0997A – 4,55 định cách thay đổi R2 = 0,999551 nồng độ 03 mẫu chuẩn với nồng độ 15.48; 30,96; 154.8 ppm Hình 3.5 Đường chuẩn axit HCA Phương trình đường chuẩn là: C = 0.0997A – 4.55 với A diện tích pic HCA, C nồng độ HCA hệ số tương quan R = 0.999551 (hình 3.5) 3.6.5 Kết xác định axit hữu bứa Thành phần axit hữu xác định phương pháp sắc ký lỏng cao áp tính cơng thức sau: Cơng thức tính HCA: Cm (ppm) = (0.0997 * Am – 4,55) * Vcđ * Kpl / m Cm (%) = Cm (ppm) / 10000 Trong đó: Cm (ppm): Nồng độ tính ppm Cm (%) : Nồng độ phần trăm Am : Diện tích pic sắc kí Vcđ : Thể tích mẫu đặc (ml) Kpl : Hệ số pha loãng m : Trọng lượng mẫu thử (g) Bảng 3.15 Kết xác định axit hữu bứa HPLC STT mẫu m (g) 10.016 Am Vcđ Kpl HCA (%) 463.72 100 250 10.404 9.649 455.14 100 250 10.578 10.095 469.65 100 250 10.469 HCA 5.333 5.307 Time (min) Hình 3.6 Sắc kí đồ mẫu axit HCA chuẩn Time (min) 5,307 Hình 3.7 Sắc kí đồ mẫu bứa khô chiết nước Nhận xét: Axit chủ yếu tìm thấy bứa HPLC HCA thể sắc kí đồ hình 3.7 Xác định pic HCA dựa vào pic axit HCA chuẩn xuất thời gian lưu 5.333 phút (hình 3.6) Thời gian lưu HCA tìm thấy mẫu 5.307 phút 3.7 TỔNG HỢP MUỐI CANXI CỦA HCA 3.7.1 Quy trình Dịch chiết HCA thu phương pháp chưng ninh 20g bứa khô nồi áp suất sau tẩy màu than hoạt tính lọc bỏ kết tủa pectin, lấy 10 ml dịch chiết trung hòa axit cách cho thêm dung dịch Ca(OH) (Lấy 0.156g Ca(OH)2 hòa vào 100 ml nước cất Khuấy nhiệt độ phòng giờ, sau gia nhiệt 700C khuấy tiếp Khi thêm Ca(OH)2 vào, lúc đầu xuất kết tủa trắng, sau xuất ngày dày đặc tạo thành bùn (hình 3.8), pH hỗn hợp bùn thích hợp từ 6.5–7.8 Dùng dung dịch NaOH 10% chỉnh độ pH đến môi trường trung tính Hỗn hợp bùn lọc rửa với nước cất để loại bỏ tất muối bám vào Lắng dung dịch, lọc kết tủa rửa cồn 960 nhiều lần, sau ngâm cồn tuyệt đối qua đêm để làm sạch, thu dạng bột khô màu nâu xám (hình 3.9) muối HCCa Sấy khơ sản phẩm nhiệt độ 1000C vòng 48 Cạo phần bột khơ dính giấy lọc cho vào cốc thủy tinh sấy khơ biết xác khối lượng Tiến hành cân khối lượng để tính tốn hiệu suất q trình chuyển hóa Tinh chế muối: Muối canxi điều chế dạng thơ có độ tinh khiết trung bình (90.237%) Nó cần tinh chế để xác định cấu trúc sử dụng làm thực phẩm chức Cách tiến hành: Rửa lọc nhiều lần sản phẩm muối canxi điều chế dạng rắn hỗn hợp cồn nước với tỉ lệ 6/4 Hình 3.8 Muối HCCa tạo thành Hình 3.9 Muối HCCa sấy khơ Phương trình tạo muối sau: 3.7.2 Hiệu suất q trình chuyển hóa Bảng 3.16 Kết xác định hiệu suất trung bình trình tổng hợp muối canxi hydroxycitrat STT Mẫu (g) 100.018 100.132 100.098 Tổng Tổng lượng muối lý thuyết muối thực tế axit (g) (g) 4.055 lượng Tổng lượng Hiệu suất (%) Tổng lượng Hiệu muối TB (g) (g) 3.644 suất TB (%) 2.904 79.69 3.015 82.74 3.204 87.93 3.071 84.28 Khi tổng hợp muối canxi hydroxycitrat từ HCA chiết tách cách chưng ninh 100 g bứa khô, tổng lượng muối trung bình thu 3.071 (H = 84.28%) 3.7.3 Kiểm tra sản phẩm muối HCCa HPLC Để kiểm tra sản phẩm muối tạo thành ta tiến hành kiểm tra sản phẩm muối HCCa tạo thành phổ HPLC so sánh với phổ HPLC HCCa chuẩn Kết kiểm tra phổ HPLC thể hình 3.10 hình 3.11 đây: 3,80 3,91 2,89 2,36 Hình 3.10 Sắc kí đồ muối HCCa chuẩn Hình 3.11 Sắc kí đồ muối HCCa tạo thành Nhận xét: Kết chụp phổ HPLC muối HCCa tạo thành xuất pic có thời gian lưu 3.91 phút (hình 3.11) gần với thời gian lưu HCCa chuẩn (hình 3.10) 3.802 phút Theo kết chạy phổ HPLC muối HCCa tạo thành ta thu 03 pic với thời gian lưu khác nhau, pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu HCCa chuẩn cao có diện tích lớn chiếm 93.589% Kết diện tích pic thể bảng 3.17 Bảng 3.17 Kết diện tích pic phổ HPLC sản phẩm muối HCCa TT Thời gian lưu 2,36 6016 5,464 2,89 1042 0,947 3,91 103051 93,589 110109 100,000 Tổng cộng Diện tích pic % diện tích pic Tên HCCa Hàm lượng muối HCCa sản phẩm chuyển hoá 93,589%, ứng với thời gian lưu 3,91 phút 3.7.4 Kiểm tra sản phẩm muối HCCa phổ hồng ngoại (IR) Để kiểm tra sản phẩm muối HCCa tạo thành ta chụp phổ hồng ngoại IR 3396,17 3400,11 1599,04 1589,96 Hình 3.12 Phổ IR HCCa chuẩn Hình 3.13 Phổ IR HCCa tạo thành so với phổ hồng ngoại HCCa chuẩn Nhận xét: Kết chụp phổ hồng ngoại (IR) muối canxi hydroxycitrat tạo thành (hình 3.13) so sánh với phổ muối canxi hydroxycitrat chuẩn (hình 3.12) xuất píc có bước sóng 3396 cm-1, 3400,11 cm-1 ứng với phổ dao động nhóm –OH píc có bước sóng 1589,96 cm-1, 1599,04 cm-1 ứng với nhóm C=O (–COO)2Ca Về hình dáng, phổ hồng ngoại (IR) muối HCCa tạo thành HCCa chuẩn tương tự 3.7.5 Xác định hàm lượng Canxi sản phẩm muối HCCa 3.7.5.1 Xác định hàm lượng Canxi muối HCCa AAS Tiến hành xác định hàm lượng Canxi có sản phẩm muối HCCa tạo thành phương pháp quang phổ hấp phụ nguyên tử (AAS) Kết xác định hàm lượng Canxi muối HCCa tạo thành thể bảng 3.18 đây: Bảng 18 Kết xác định hàm lượng Canxi muối HCCa AAS Kim loại Phương pháp thử (AAS) Kết (mg/L) Hàm lượng cho phép (mg/L) Canxi TCVN 6660 - 2000 1292,58 – Nhận xét: Hàm lượng Canxi sản phẩm HCCa thành phần kim loại chính, kết Canxi xác định phương pháp AAS 1292,58 mg/L Như sử dụng sản phẩm HCCa tạo thành để làm thực phẩm dược phẩm mà không ảnh hưởng đến sức khoẻ người theo định số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y Tế ngày 04/04/1998 việc ban hành Danh mục Tiêu chuẩn vệ sinh lương thực, thực phẩm 3.7.5.2 Xác định hàm lượng Canxi muối HCCa phương pháp chuẩn độ Chất chuẩn: EDTA 0.02N Chỉ thị: murexit (trộn với NaCl 0.1%), NaOH 12N Tiến hành: Cân xác 0.12 g muối tinh thu cho vào bình định mức 50 ml, thêm 2ml dung dịch HNO3 đặc Thêm nước cất lần đến vạch trắng bình định mức Lấy 10 ml dung dịch mẫu phân tích + murexit+ 3ml NaOH cho vào bình tam giác, dung dịch có màu hồng Chuẩn độ EDTA 0.02N đến dung dịch bình chuyển sang màu tím hoa cà Hình 3.12 Dung dịch chuyển sang màu tím hoa cà Đọc kết buret: VEDTA= 13,2ml VEDTA 0,02 = CN = 13,2 0,02 10 = 0,0264(N) 10 Cứ lít dung dịch có 0,0264(N) Ca2+ 50 ml 50 0,0264 = 1,32.10-3 (N) 1000 Trong 50ml dung dịch, số gam Ca2+= 1,32.10-4 40: 2= 0,0264(g) 0,0264 100 %Ca= = 22% 0,12 10 40.3.100 Theo lí thuyết: %Ca= = 22,64% 530 Vậy: giá trị Ca2+ thu gần tương đương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1/ Đã tạo muối HCA với hiệu suất tạo muối HCCa 84.28% 2/ Các phân tích sắc kí HPLC phổ IR cho thấy công thức cấu tạo HCA muối tương ứng với sắc kí đồ phổ HPLC IR chuẩn 3/ Đã tạo muối kép Ca hydroxycitrat Các phân tích sắc kí HPLC, AAS, sắc kí ion phổ cộng hưởng từ hạt nhân cho thấy công thức cấu tạo muối kép tương ứng với tài liệu tham khảo Kiến nghị 1/ HCA có tính chống béo phì hiệu cung cấp chủ yếu dạng muối Vì vậy, nên tiếp tục nghiên cứu theo hướng điều chế ứng dụng muối HCA dạng muối kép để tăng hiệu sản xuất dược liệu hay thực phẩm chức với mục đích giảm cân 2/ Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách HCA từ bứa theo quy mô công nghiệp để sản xuất thực phẩm giảm cân chứa HCA Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1 Võ Văn Chi (1999), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội [2] Trần Văn Cừ, Nguyễn Thu Hiền, Trần Bá Hoành, Trần Mạnh Kỳ, Đặng Văn Sử, Lê Dĩnh Thái, Nguyễn Văn Thân, Phạm Ngọc Thịnh (2003), Từ điển bách khoa sinh học, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội 3 Đào Hùng Cường (2007), Cơ sở hóa học hữu cơ, Nhà xuất Đà Nẵng 4 Nguyễn Tinh Dung (2000), Hóa học phân tích, Phần III - Các phương pháp phân tích định lượng hóa học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội 5 Nguyễn Minh Hiền, Khóa luận tốt nghiệp cử nhân sư phạm năm 2008 6 Phan Thị Huyền, Khóa luận tốt nghiệp cử nhân sư phạm năm 2011 7 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội 8 Trần Quốc Sơn, Đặng Văn Liếu (2008), Giáo trình sở Hóa học hữu cơ, Tập 1, Nhà xuất Đại học Sư phạm 9 TCVN 5042 – 1994 Nước giải khát: Yêu cầu vệ sinh – Phương pháp thử 10 Tiêu chuẩn Việt Nam 4336 – 86 11 Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học Khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng, Đà Nẵng 2010 [12] Đặng Quang Vinh, Luận văn thạc sĩ với đề tài “Nghiên cứu chiết tách xác định axit hydroxycitric lá, vỏ bứa” [13] Bùi Xuân Vững, Giáo trình phân tích cơng cụ Tiếng Anh 14 Benny Antony (2003), "Studies on Hydroxycitric acid in Garcinia", Research center of Mahatma Gandhi University, Kerala, India ... tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô tạo muối canxi hydroxycitrat? ?? Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô - Nghiên cứu dung mơi... nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu: - Lá bứa thu hái xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang, TP Đà Nẵng * Phạm vi nghiên cứu: - Phần bứa - Chiết tách, xác định hàm lượng axit hydroxycitric bứa khô tạo muối. .. dung môi nước Xác định cấu Xác định tổng lượng axit Dịch chiết HCA trúc bẳng phổ IR Định lượng axit (HPLC) Tổng hợp Canxi hydroxycitrat Tinh chế Xác định hàm Canxi hydroxycitrat lượng Canxi tinh