Sàng lọc in vitro tác dụng ức chế tyrosinase của một số dược liệuthu hái ở miền nam việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN PHÚ LỘC SÀNG LỌC IN-VITRO TÁC DỤNG ỨC CHẾ TYROSINASE CỦA MỘT SỐ DƯỢC LIỆUTHU HÁI Ở MIỀN NAM VIỆT NAM Chuyên ngành: Dược học cổ truyền Mã số: 60 72 04 06 Luận văn Thạc sĩ Dược học HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Huỳnh Ngọc Thụy Thành phố Hồ Chí Minh–2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2018 Người viết cam đoan Nguyễn Phú Lộc TĨM TẮT Luận văn thạc sĩ – Khóa: 2015 – 2017 Chuyên ngành: Dược liệu – dược cổ truyền – Mã số: 60720406 SÀNG LỌC IN-VITRO TÁC DỤNG ỨC CHẾ TYROSINASE CỦA MỘT SỐ DƯỢC LIỆU THU HÁI Ở MIỀN NAM VIỆT NAM NGUYỄN PHÚ LỘC Thầy hướng dẫn: PGS.TS HUỲNH NGỌC THỤY Mở đầu đặt vấn đề: Nhu cầu tìm kiếm sản phẩm có tác dụng ức chế tyrosinase gần gũi từ tự nhiên hướng phát triển tiềm cho lĩnh vực mỹ phẩm có tác dụng làm sáng da tyrosinase enzym tham gia chuyển hóa L-tyrosin L-DOPA thành melanin Trong bối cảnh Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu tác dụng ức chế tyrosinase điều kiện thử nghiệm in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase chưa thống nhất, nghiên cứu thực nhằm tìm kiếm loại dược liệu nước có tiềm phát triển thuốc làm sáng da tìm hiểu yếu tố ảnh hưởng đến mơ hình thử nghiệm Đối tượng nghiên cứu: số dược liệu thu hái An Giang, Lâm Đồng TP.HCM Phương pháp nghiên cứu: Áp dụng quy trình cố định tyrosinase gel để định tính tác dụng ức chế tyrosinase sắc ký lớp mỏng (SKLM), đồng thời định tính tác dụng chống oxy hóa, mơ hình DPPH Khảo sát điều kiện thử nghiệm in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase đĩa 96 giếng sàng lọc in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase để xác định dược liệu tiềm Khảo sát tác dụng ức chế tyrosinase phân đoạn thu từ cao toàn phần ethanol 96% dược liệu tiềm Xác định IC50 phân đoạn tiềm năng, so sánh với thuốc chuẩn acid kojic Kết bàn luận: Định tính tác dụng ức chế tyrosinase SKLM: Quy trình cố định tyrosinase gel áp dụng điều kiện Việt Nam với thạch Himedia RM-201 tỉ lệ 1,2% Các mẫu cao chiết ethanol từ thân Sa-kê, thân Gắm đen thân Gắm vàng cho vết có tác dụng ức chế tyrosinase bật Khơng có tương quan thành phần có tác dụng ức chế tyrosinase tác dụng chống oxy hóa cao tồn phần Sàng lọc in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase đĩa 96 giếng: Ở mơ hình đo quang đĩa 96 giếng, nồng độ tyrosinase L-tyrosin cho thời điểm đọc đĩa ổn định xác định 37,5 U/ml mM, đọc đĩa sau 20 phút Cao chiết thân Sa-kê chọn dược liệu tiềm với giá trị IC50 đo 5,870 ± 0,573 µg/ml Từ thân Sa-kê thu phân đoạn C4, E4, E5 cho tác dụng ức chế tyrosinase mạnh với IC50 1,7843 ± 0,4403 μg/ml, 1,7298 ± 0,2109 µg/ml, 1,296 ± 0,0850 μg/ml, thấp thuốc chuẩn acid kojic (IC50 = 2,9637 ± 0,0726 µg/ml) Kết luận kiến nghị: Cao chiết ethanol 96% từ thân Sa-kê xác định dược liệu tiềm năng, từ tìm ba phân đoạn ức chế tyrosinase hiệu Kết mở hướng nghiên cứu thành phần hóa học có hoạt tính từ dược liệu Từ khóa: tyrosinase, sàng lọc in-vitro, đĩa 96 giếng, sắc ký lớp mỏng, Artocarpus altilis ABSTRACT Master thesis – Academic course: 2015 – 2017 Speciality: Pharmacohnosy – Traditional pharmacy – Speciality code: 60.720406 IN-VITRO SCREENING FOR TYROSINASE INHIBITORY ACTIVITY OF PLANTS COLLECTED IN SOUTHERN VIETNAM NGUYEN PHU LOC Supervisors: Dr HUYNH NGOC THUY Introduction: Requirement for natural products with tyrosinase inhibitory activity is a promising strategy for development of skin whitening cosmetics as tyrosinase takes part in the biometabolism of L-tyrosine and L-DOPA to melanin Because there were not many reports about tyrosinase inhibitory in Vietnam and test conditions were not unified among references, the purpose of this study was to search for herbal materials which are potential for skin whitening cosmetics and to learn about factors which affect test procedures Materials: Herbal materials collected in An Giang, Lam Dong and Ho Chi Minh city Methods: Qualitative screening on TLC for tyrosinase inhibitory with enzyme immobilisation, together with antioxidant activity on DPPH assay Investigating test conditions for in-vitro screening on 96 well plates and screening for tyrosinase inhibitory activity to find potential materials Investigating anti-tyrosinase activity of fractions from the most potential material, using kojic acid as standard drug Results: Qualitative screening on TLC Tyrosinase immobilisation procedure could be applied in Vietnam with Himedia RM-201 at 1,2 % Ethanol extracts from Ramulus Artocarpi altilis, Caulis Gneti latifolii and Caulis Gneti montani showed impressive active spots No relationship was found between main active components for anti-tyrosinase activity and antioxidant activity in total extracts In-vitro screening for tyrosinase inhibitory activity on 96 well plates Tyrosinase and L-tyrosine concentration which provided stable plate reading time was found to be 37,5 U/ml and mM, respectively, whereas plate reading time was 20 minutes Ethanol 96% extract from Ramulus Artocarpi altilis was chosen to be the most potential material; the IC50 value was 5,870 ± 0,573 µg/ml solid-liquid extraction fractions C4, E4, E5 expressed effective anti-tyrosinase activity with IC50 values about 1,7843 ± 0,4403 μg/ml, 1,7298 ± 0,2109 µg/ml, and 1,296 ± 0,0850 μg/ml, respectively, lower than that of kojic acid (IC50 = 2,9637 ± 0,0726 µg/ml) Conclusion: Ramulus Artocarpi altilis as defined to be the most potential material, from which active fractions was found for effective anti-tyrosinase activity These results suggested further studies for active components of this material Từ khóa: tyrosinase, in-vitro screening, 96 well plates, thin layer chromatography (TLC), Artocarpus altilis MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC KÍ HIỆU iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1.1 Khái niệm .2 1.1.2 Khảo sát tác dụng chống oxy hóa, mơ hình DPPH SKLM 1.1.3 Sàng lọc in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase SKLM 1.1.4 Sàng lọc in-vitro tác dụng ức chế tyrosinase phương pháp đo quang 1.1.5 Những dược liệu sàng lọc có tác dụng ức chế tyrosinase 14 1.1.6 Vấn đề mẫu thử cho tỉ lệ ức chế tyrosinase