Đánh giá biểu hiện gen wt1 trên bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy trước và sau điều trị tấn công tại bệnh viện truyền máu huyết học thành phố hồ chí minh

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - PHAN THỊ THU LÝ ĐÁNH GIÁ BIỂU HIỆN GEN WT1 TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DỊNG TỦY TRƢỚC VÀ SAU ĐIỀU TRỊ TẤN CƠNG TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHAN THỊ THU LÝ ĐÁNH GIÁ BIỂU HIỆN GEN WT1 TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DÒNG TỦY TRƢỚC VÀ SAU ĐIỀU TRỊ TẤN CÔNG TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Ngành: Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS.BS PHAN THỊ XINH TS.BS NGUYỄN ĐÌNH TUYẾN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình nghiên cứu khác Tác giả luận văn PHAN THỊ THU LÝ LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình thực hồn thành luận văn nhận đƣợc nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ tận tình từ thầy cơ, gia đình, bạn bè Nhân đây, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS Phan Thị Xinh-Trƣởng khoa Di truyền học-Phân tử, Bệnh viện Truyền Máu-Huyết Học thành phố Hồ Chí Minh, giảng viên Bộ mơn Huyết học, khoa Y, Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh; TS.BS Nguyễn Đình Tuyến giám đốc bệnh viện sản Nhi Quảng Ngãi thầy, cô trực tiếp hƣớng dẫn, bảo tận tình, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu toàn thể cán Đại học Y Dƣợc Thành phố Hồ Chí Minh, đặc biệt PGS.TS.Vũ Quang Huy-Trƣởng Bộ môn Xét nghiệm, Khoa Điều dƣỡng-Kỹ thuật y học, Đại học Y Dƣợc Thành phố Hồ Chí Minh, tạo điều kiện để tơi lĩnh hội kiến thức quý giá ngành kỹ thuật xét nghiệm y học suốt thời gian học tập, nghiên cứu trƣờng Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ln động viên, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2019 Học viên PHAN THỊ THU LÝ MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC THUẬT NGỮ VIỆT - ANH iii DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ v ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TI U NGHI N CỨU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh bạch cầu cấp dòng tủy 1.2 Bất thƣờng gen WT1 (Wilms tumor) BCCDT 12 1.3 Vai trò gen ABL phản ứng định lƣợng gen WT1 15 1.4 Các kỹ thuật theo dõi BTLTT 16 1.5 Tình hình nhiên cứu giới Việt Nam 21 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHI N CỨU 24 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 24 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.3 Phƣơng pháp thu thập số liệu 35 2.4 Biến số nghiên cứu 36 2.5 Phƣơng pháp phân tích liệu: 36 2.6 Đạo đức nghiên cứu 36 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 38 3.1 Quy trình phản ứng RQ-PCR 38 3.2 Kết đánh giá biểu gen WT1 bênh nhân 45 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 55 4.1 Quy trình phản ứng RQ-PCR 55 4.2 Đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân 58 KẾT LUẬN 65 KIẾN NGHỊ 66 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt BCCDT Bạch cầu cấp dòng tủy BCCDL Bạch cầu cấp dòng lympho BTLTT Bệnh tồn lƣu tối thiểu BVTMHH Bệnh viện Truyền máu Huyết học DAMD Dấu ấn miễn dịch NST Nhiễm sắc thể TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh ALL Acute Lymphoblastic Leukemia AML Acute Myeloid Leukemia AML1-ETO Acute Myeloid Leukemia gene-Eight Twenty One CBF Core binding factor CBFB-MYH11 Core-binding factor, beta subunit-Myosin heavy chain 11 cDNA Complementary DNA CEBPA CCAAT/enhancer binding protein-α Ct Threshold cycle DNA Deoxyribonucleic acid dNTP Deoxynucelside triphosphate DTT Dithiothreitol FAB French-American-British FISH Fluorescence in situ hybridization FLT3 Fms-related tyrosine kinase HTL Human T leukemia virus ITD Internal tandem duplication JM juxtamembrane LAP Leukemia-associated phenotype MLL Mixed Lineage Leukemia MRD Minimal residual disease NPM1 Nucleophosmin PCR Polymerase Chain Reaction PML-RARA Promyelocytic Leukemia-Retinoic Acid Receptor RQ-PCR Real time quantitative-Polymerase Chain Reaction RTK Receptor tyrosine kinase RT-PCR Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction TCR T-cell receptor TKD Tyrosine kinase domain WHO World health organization WT1 Wilms tumor .i DANH MỤC THUẬT NGỮ VIỆT - ANH Tiếng Việt Tiếng Anh Bạch cầu cấp dòng lympho Acute Lymphoblastic Leukemia Bạch cầu cấp dòng tủy Acute Myeloid Leukemia Yếu tố gắn lõi Core binding factor DNA bổ sung Complementary DNA Chu kỳ ngƣỡng Threshold cycle Pháp-Mỹ-Anh French-American-British Lai chỗ gắn huỳnh quang Fluorescence in situ hybridization Bệnh tồn lƣu tối thiểu Minimal residual disease PCR định lƣợng Real time quantitative-Polymerase Chain Reaction PCR phiên mã ngƣợc Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction Thụ thể tế bào T T-cell receptor Tổ chức Y tế giới World health organization DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Thành phần tham gia phản ứng PCR tạo dòng 28 Bảng 2 Thành phần tham gia phản ứng ligation 30 Bảng Các đoạn mồi probe dùng nghiên cứu 32 Bảng 4.Thành phần phản ứng Real-time PCR 33 Bảng Các biến số nghiên cứu đƣợc thu thập trƣớc sau điều trị 36 Bảng Kết đo mật độ quang mẫu DNA plasmid 40 Bảng Tạo dãy nồng độ pha loãng 42 Bảng 3 Phƣơng trình đƣờng chuẩn 45 Bảng Bản ABL phản ánh chất lƣợng mẫu nghiên cứu 46 Bảng Kết định lƣợng gen WT1 ABL trƣớc sau điều trị công 47 Bảng Biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT 49 Bảng Kết biểu mức gen WT1 bệnh BCCDT lúc chẩn đoán theo bất thƣờng gen 50 Bảng Kết hai trƣờng hợp không biểu gen WT1 mức 52 Bảng Biểu gen WT1 trƣớc sau điều trị công theo bất thƣờng gen thƣờng gặp 53 Bảng 10 Kết đáp ứng sinh học phân tử trƣờng hợp thuộc nhóm khác 54 ... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHAN THỊ THU LÝ ĐÁNH GIÁ BIỂU HIỆN GEN WT1 TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DÒNG TỦY TRƢỚC VÀ SAU ĐIỀU TRỊ TẤN CÔNG TẠI... sát biểu gen WT1 theo dõi bệnh tồn lƣu tối thiểu dựa vào biểu gen bệnh bạch cầu cấp dịng tủy Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ? ?Đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy trƣớc sau. .. Di truyền học- Phân tử, Bệnh viện Truyền Máu- Huyết Học thành phố Hồ Chí Minh, giảng viên Bộ mơn Huyết học, khoa Y, Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh; TS.BS Nguyễn Đình Tuyến giám đốc bệnh viện