Thông tin tài liệu
B Ọ Ƣ Ọ
Ấ Ì NGHIÊN CỨU VỊ Ơ U LE ƢỜ E rs221634 A>T, rs17065417 A>C) CỦA GEN LIN28B TRÊN MẪU U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHI NĨNG CHẢ PHÂN GIẢI CAO s
ủ t e sĩ Bùi Chí Bảo
B Ọ Ƣ
Ọ NGHIÊN CỨU VỊ Ấ Ì Ơ U LE ƢỜ E rs221634 A>T, rs17065417 A>C) CỦA GEN LIN28B TRÊN MẪU U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHI NÓNG CHẢ PHÂN GIẢI CAO s
ủ t ọt t ỨU h STT h BÙI CHÍ BẢO VÕ VĂN T ÀN NIỆM TRƯƠNG IN KIỀU DIỄM h h g h ị nhiệ hiệ Thành viên Thành viên ề i T g - ih T g - ih T g - ih g Y Si h h Y TP Y Si h h Y TP Y Si h h Y TP Ph M Ph M Ph M i L N S M N L NG T ÀN VI N T M GI NG I N U i ii N M VI T TẮT iii DANH M C HÌNH iv DANH MUC BẢNG v BÁO CÁO THỐNG KÊ vi h g I GIỚI THIỆU h g II P ƯƠNG P P Nguồn mẫu Thiết kế th nghiệm L a ch n kiểu gen SNP 4 Thiết kế mồi Phân lập RNA chuyển cDNA từ huyền phù tế bào khối u rắn UNBTK 6 Q-RT PCR biểu mRNA c a LIN28B 7 Phân lập DNA gen từ máu toàn phần h gi ị hl g ị hl ng DNA chiết xuất Trình t Sanger 10 Multiplex PCR 11 Phân tích thống kê 10 h g III K T QUẢ 11 Kết kiểm tra biểu LIN28B UNBTK 11 Kiể h ịnh kết kiểu gen qua giải trình t Sanger 13 g IV THẢO LUẬN – K T LUẬN 16 Biểu th c mRNA LIN28B dòng tế bào NB 16 Biểu mRNA LIN28B mẫu mô NB 17 Phân tích SnaPshot 18 h T i liệ g V K T LUẬN 20 h 21 ii Ắ RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism SNP: Single nucleotide polymorphism NB: Neuroblastoma UNBTK: U nguyên bào thần kinh LIN28B: Lin-28 Homolog B GWAS: Genome-wide association study OR: odds ratios I: fi e ei e ls iii DANH M C HÌNH Hình Biểu MYCN dịng tế bào 11 Hình Biểu mRNA c LIN28B g 36 NB ặ iể l s g g ng C thể, bệ h h C) CỦA GEN LIN28B TRÊN MẪU U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHIỆT Ộ NĨNG CHẢY Ộ PHÂN GIẢI CAO ủ vụ: H tên: BÙI CHÍ BẢO Ng y, h g, ă si h: Nam/ Nữ: Nam H c hàm, h c vị: Tiế sĩ Ch c danh khoa h c: Không Ch c v : Nghiên c u viên iện tho i: Tổ ch c: (+84-28) 3855 8411 Nhà riêng: Không Mobile: 0947753083 Fax: Không E-mail: bcbao@ump.edu.vn g Tên tổ ch g : Y ih c Thành phố Hồ Chí Minh ịa tổ ch c: 217 Hồ g B g, ph ờng 11, quận 5, TP.HCM ị hỉ h i g: vụ(1): ổ c ức c ủ trì Tên tổ ch c ch trì nhiệm v : ih iện tho i: (+84-28) 3855 8411 Y c Thành phố Hồ Chí Minh Fax: (+84-28) 3855 2304 E-mail: daihocyduoc@ump.edu.vn T Kh h ặ T g , ị- i ả lý iếp h l h hiệ ề i vi Website: http://yds.edu.vn/yds2/ ịa chỉ: 217 Hồ g B g, ph ờng 11, quận 5, TP.HCM qua c ủ t ih Y h h phố hí Mi h II TÌNH HÌNH THỰC HI N Thời gian thực hi n nhi m vụ: - Theo H p g ã ý ết: từ h g ă - Th c tế th c hiện: từ h g ă - 2018 ế 2018 ế h g6 ă h g6 ă 2019 2019 c gia h n (nếu có): Khơng Từ h g… ă … ế h g… ă … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí th c hiệ : , g ó: + Kính phí hỗ tr từ ngân sách khoa h c c h g: h : + Kinh phí từ nguồ b) Tình hình cấp s d ng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa h c: Số TT Thực tế đạt Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Th g, ă ) ă (T ) Kinh phí (Tháng, ă ) (T ) (Số đề nghị toán) 2018 ến tháng ă Thời gian Ghi 5 2019 c) Kết s d ng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Thực tế đạt Theo kế hoạch Số Nội dung TT khoản chi Tổng NSKH Nguồn Tổng NSKH khác Trả gl ộng 5 Nguồn khác 5 vii (khoa h c, phổ thông) Nguyên, vật liệu, ă gl ng Thiết bị, máy móc Xây d ng, s a chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng - Lý 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 5 h y ổi (nếu có): Tổ chức ph i hợp thực hi n nhi m vụ: Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt Thuyết minh yếu Ghi chú* - Lý h y ổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực hi n nhi m vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia tham gia chủ yếu đạt Thuyết minh thực Bùi Chí Bảo Bùi Chí Bảo Ch nhiệ Ghi chú* ề tài viii phút Giải trình t chu trình BigDye Terminator v1.1 (Hệ sinh h c ng d ng) bắ ầu với sản phẩm tinh khiế μL, ệm giải trình t BigL 10X 10X BigDye, 0,5 5L Big ye, l i c tối biế í hb gi y ớc vơ trùng mồi p hó Q h h h l h s : h s221634, y iều kiện liên tiếp: b ớc g g phú B ớc tinh chế th hai s d c g ph g ph p ết t a Ethanol c phân tách bằ g iện di mao quản Máy phân tích di truyền ABI Các mẫ 3500XL (Hệ sinh h c ng d g) c trang bị mao quản dài 36 cm polymer POP-7 Phần mềm CLC Main Workbench phiên bả ũ g e es ă ầu từ tổng thể í h 15 μL ới phiên khởi c bắ ộng nóng Takara DNA polymerase (Nhật Bản) Mỗi ống bắ 1,5 μL 10X B ffe , 3,75 s17065417 0,7 μM b ớc biến tính 98 ể phân tích liệu c ch hỉnh mẫu với tham chiếu tr c tuyến 10 Multiplex PCR Phản g M l iplex P R ch g ầu 96oC phút 30 chu kỳ 96oC 10 giây, 50oC 60 S ge Se h ầu với DNA gen ng ỗi dNTP, 0,5 U Taq polymerase, 0,75 eachM mồi ỗi mồi s221634 (I T, I g phú , s ) ó 30 h iều kiện cycler nhiệt bao gồm ỳ tuần t 98oC 10 giây, 60oC 20 giây 75oC 20 giây, tiếp he l b ớc mở rộng cuối 72oC phút Chấ l P Rs phẩ gP R h gi ó gel g 80 g iện di gel Tất sản c x lý theo giao th c c a Thuốc th làm s ch sản phẩm PCR ExoSAP-IT TM (Thermo khoa h c) Việc Hệ thố g ghép se 2% h SN Psh c th c theo g i ý từ tài liệu c a ầu 37o b ể kích ho t enzyme 15 phút ể kh ho t tính enzyme Các phản ng mở rộ g sở ã c bắ ầu cách s d ng Bộ hệ thống ghép kênh SNaPshot (Hệ sinh h c ng d ng) Kiểm sốt tích c c chuẩn bị g ũ g h i ã g h s : Components SNaPshot Multiplex Ready Reaction Positive Negative Control (μL Control (μL 5 Mix SNaPshot Multiplex Control Primer 1 SNaPshot Multiplex Control Template dH5O Total volume 10 10 Mix Cả h i iều khiển th c tế phản ng PCR th hai bao gồ ầu dò mở rộ g th h i 11 Giá trị ể chuẩn bị 12 μL μL SN Psh M l iplex Mix Re μL sản phẩ c cho s d g U S P i h Mix, 2,5 μM ỗi ố g T y hi , hú g i ã gặp phải ó, s kết h p ExoI Phân tích th ng kê g a kiểu gen giá trị lâm sàng UNBTK g cs d nguyên bào thầ i h x y l gis i iều kiệ tính nh y cảm S kết h p yếu tố lâm sàng kiể ge TT hí h x ờng ộ nh y cảm với u ịnh cách tính tỷ lệ chênh lệch (OR) khoảng thời ịnh 95% (CIs), s d ng phân tích hồi cách s d ng xét nghiệ c phân tích g ểs s h h p kiểm soát u nguyên bào thần kinh Mối liên quan giữ SNPs x i c s d ng SPSS (phiên 24) Xét nghiệm Chi bì h ph gi ẫu SNaPshot, P R ò g ầu tiên Về mặt kỹ thuật, lần tinh chế ề nguồn enzyme bị h n chế, tình có vấ S P ã c coi mẫ h i ể phân tích ớc tính i χ2 h ặc th nghiệm xác 10 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ƣơ K T QUẢ Kết kiểm tra biểu hi n LIN28B UNBTK Nă l i dòng tế bào NB bao gồm SK-N-AS, SK-N-SH, NB1, SK-N-DZ, SKN-AS SH-SY5Y ã mối g ộ RN m c tuyển d ới MYCN hồ s g ể quan sát biểu mRNA c a LIN28B he ph g ph p RT- P R c biểu thị tế bào nuôi cấy, ph ể g ph p Li h gi 2- ã c áp d ng chuẩn hóa Gang (Human Dorsal Root Ganglion) Ct Chúng i ã s s biểu m c LIN28B hai dòng tế bào NB, từ dịng tế bào ác tính khác dịng tế bào phơi Hình Biểu hi n MYCN dòng tế bào ể kiểm tra tổng quát biểu th c c a LIN28B mẫu NB Các mẫu cDNA từ 37 bệ h h h gi nhầm lẫn bất cẩn mẫ NB ó hấ l ng, nhiên, có mẫ ó, cộ g, hú g i ã h gi 36 c báo cáo ẫu bao gồm bảng Bảng ƣơ qua b ểu hi n LIN28B với s lâm sàng UNBTK Total LIN28B Expression MYCN Amplification Expression No Amplificati No Expressio on n Amplificati on 11 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Gender Male 22 (61.1%) 15 (41.7%) (19.4%) (8.3%) 19 (52.8%) Female 14 (38.9%) (19.4%) (19.4%) (5.6%) 12 (33.3%) 18 months (36.1%) INRGS S Stage L1 (22.2%) (11.1%) (11.1%) (0.0%) (22.2%) L2 (22.2%) (11.1%) (11.1%) (2.8%) (19.4%) M 14 (38.9%) 10 (27.8%) (11.1%) (11.1%) 10 (27.8%) MS (2.8%) (2.8%) (0.0%) (0.0%) (2.8%) Unidentifi (13.9%) (8.3%) (5.6%) (0.0%) (13.9%) 31 (86.1%) 19 (52.8%) 12 ed MYCN Status Nonamplified (33.3%) Amplified T g hí ghiệ giữ (8.3%) y, hú g ộ biể hiệ LIN28B hiể g hối V lý tr (13.9%) ò g ó, hú g g phầ lớ h ế h i hiệ hối ả bấ l i bệ h h hiệp i NB ó g y ộ 1-4; L1-M) ếb h iề hấ hế LIN28B ộ g s (2012) 14, s i ge LIN28B hiệ g s biể hiệ NB ó g y h h le -7 l The J M le ù g 21 Endpoint RT-P R s ối NB LIN28B l h si h h iế ó h g xảy g ời (gi i i ã ề x ấ giả h yế ằ g ó ế g iệ (5.6%) ặ ầ số hấp ẫ ế i 37 g y b hầ G g Kế ả h hấy 22 l s biể g xấ i h g y ph ẫ (61,1%) hể hiệ 12 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh LIN28B ếb 14 ẫ (38,9%) h G g, hỉ ó ẫ , 17 hị ẫ h ộ ẫ (NB74) biể s ới g ó biể hiệ LIN28B S hị hấp h Mặ biể ới biể h LIN28B h , hi s s h b h g ị (NB30) g giữ 18 ẫ biể g b h (Hình 2) m R N A e x p r e s s io n 0 B 49 G an g N 41 10 38 B B N B N N 52 89 B N 64 B N 65 B N 71 B N 79 B B N N 60 93 B N 35 B B N N 81 97 N B 67 B N 53 B N N B 30 72 B B N B 76 N N 63 10 B N N B 85 92 B N 70 B B N N 88 18 B N 55 B N 75 B N 48 B N 62 B N 91 N B 40 B B N N 83 B N B N N B 74 80 0 MY N M splifi ge i >18 hs Hình Biểu hi n mRNA L 28 tro 36 ô v c c ặc ể lâ s tƣơ ứng Cụ thể, b â C Hình Phân tích GeneMarker cho hai phản ứng mở rộng m i Phản ứ n di mao mạc ƣợc thực hi n Nhà phân tích di truy n 3500 XL (H sinh học ứng dụng) (A) Kiểm sốt tích cực bao g m khuếc ại từ DNA CEPH; (B) Kiểm soát tiêu cực; (C) mẫu C2; (D) mẫu C3; (E) mẫu NB 157 (F) mẫu NB159 Các thu c nhuộm huỳnh quang ƣợc gán cho ddNTP riêng lẻ ƣ sau [ ] Green, [C] Black, [G] Blue [T] Red 15 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ƣơ THẢO LUẬN – K T LUẬN Biểu thức mRNA LIN28B dòng tế bào NB M í h a thí nghiệ yl x ịnh biểu th c c a LIN28B dòng tế bào NB vẽ mối liên hệ với tr ng thái MYCN c a dòng tế bào Ba khái niệm chính: khuế h khuế h i gen, biểu mRNA biểu hiệ p i h ó g y u nguyên bào thầ mộ í h ă g g i l g Kh ế h i MY N ge c công nhận ng c a bệnh nhân NB t i Việt Nam LIN28B, g ộ mRNA chung c a dòng tế b g Ng g g số ộ trung bình m nh c a NB1 c khuế h i MYCN Tuy nhiên, biểu sai c t o NB1, kết cho thấy thỏa thuận với quan iểm LIN28B óí c phân phối hoặ i MY N15 Li ộng ròng dòng tế bào biểu ến biểu mRNA MYCN, SK-N- S sát khơng có biểu MYCN SH-SY5Y cho thấy m protein c (14,1 tpm) (Bả g ób c l i, NB1 SK-N-AS khơng có biểu Về mặt khuếch i MYCN, SK-N- Z khuế h i c coi giao th c chuẩn (SK-N-SH, SK-N-DZ SH-SY5Y) thể m LIN28B h c xem xét S c quan sát thấy lo t ới kết é , ó ũ g Kết cho thấy m ă ó ã i MYCN s biểu m c c ei tế b g h g , giá trị y ó, h c quan ộ biểu mRNA vừa phải g ời) HEK293 tế bào gốc phôi HEPG2 ã h c m ộ biểu LIN28B vừa phải Hai c so sánh với giá trị c a dòng tế bào NB ng ý biểu m nh mẽ c a SK-N-DZ SH-SY5Y Tuy nhiên, thời gian chi phí h n chế, thí nghiệm không c chép biểu hiệ MY N h Kh ph hế bệ h si h g c th nghiệm iều h g li NB q trình ph c t p ịi hỏi thiết kế th nghiệm ph c t p ph g ph p h l i iể p g g hú ý, o gen so sánh mảng (aCGH), Western Blot - tiêu chuẩn cổ c chấp nhận rộ g ãi ể x ei , ến bệnh ác tính g 14,15,18 tóc ngắ le i i s (shRN ) ũ g l ịnh khuế h i gen biểu m c, biểu ữa, làm im lặng gen cách cấu t o RNA c a s i ột cách hiệu ể rút mối quan hệ ờng truyền tín hiệu LIN28B s biệt hóa tế bào thần kinh14,15,19 Có ch ng 16 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh c t o cấp ộ dị h 14 c thể cho thấy LIN28B - let-7 - tín hiệu MYCN ị hl g RN l h g ể h gi hh hỉnh d ết tiếp c kiể ồng thời với theo Trong nghiên c u tiếp theo, nhiều dòng tế bào NB cầ h dòng tế bào khối hú ể ó, c nhìn sâu sắc việc cấm tr c tiếp let-7 ẩy m c protein MYCN LIN28B bằ g ph g ph p i h ẩ h Wes e Blot Biểu hi n mRNA LIN28B mẫu mô NB Mối g biểu LIN28B thuyế , gi i tính, tuổi n tình tr g MY N y T y hi , nghiệ li ế i l ó g góp g hiếu khuế h c coi gi i số b i b ó i ge phân lập RN (phân lập RN h ũ g h g p fi ) dòng tế b h gl ă s h h c ch y h ặt hàng g hí h x gi i n tối ể ề c c kỳ khó ng mẫu vấ N g ă 2013 ) S không quán s ới c ch n cẩn thận nhiều số g l ữ ú g h, ột số mẫu ột mẫ b h h g ể so sánh, nhiên, ớc ngồi từ cơng ty với chấ l g , ó, s g ể Ganglion cho thấy dải tín hiệu m nh gel agarose so với hầu hết mẫu NB Khuyến cáo c thể h bào thần kinh mô thu thập, l quản -80 ẫu cần thiế g ph p h ốc th TRIzol nh y hiệu h c s d ng (một số mô h y g ph p hiết lập ã gặp phải c xem yếu tố ả h h g ến s khác biệt biểu ph ữ , G gli ó g y g ối nhỏ so với h g ă RNeasy Mini Kit, Qiagen) Phần lớn mẫ chúng y, hó c nhận th c tổng h p N i MYCN Ngoài ra, hấy biểu sai lầm c a LIN28B NB có Th hai, chấ l hầu hết mẫu ch 2014 (tuổi th c a mẫ g hí i MYCN Mặc dù có s hỗ tr m nh mẽ từ h ờng xuyên thấp, ph g i cậy h c kết hă i h ờng h p c thể ề T ớc hết, cỡ mẫ tình có vấ g ó ý ghĩ ã hỉ biểu cao c a LIN28B có g n M có khuế h h ế h s g h giới biểu m c protein MYCN NB ó g y i MY N T c xuất g y h ng bất l i không ph thuộc vào khuế h LIN28 g y h b ib c tìm thấy l hl h xé ghiệm s d ng u nguyên ữ cách xác (cắt thành mảnh bảo ớc phân lập RNA), ch y ồng thời h i ge (ge í h ge h 17 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh chiế ) g iều kiện quán Th b , ph nghiệm kỹ thuậ I bố Ph g ph p b geJ b ị hl ị hl g ph p ph g h g ng ImageJ c ph thuộ xúc với ánh sáng, th t tải, ph h ể ị hl g ầy g h 20 h y y c nhân ba Tuy nhiên, lỗi tránh h giá RT-P R ị h l sở hữu vai trò to lớ g ể làm sáng tỏ i òg y ó g y g h s c l a ch n a LIN28B mơ hình ới hó hế iề hị g y h ó g y s h g ể hấp LIN28B g h 9, hiều nỗ l ờng truyền tín hiệu c a LIN28B tiề dấu ấn sinh h c NB Trong nghiên c h g ph p thể, NB oncogenesis, biểu hiệ LIN28B hó l g l ph s biểu c a gen m c tiêu d a công th c Livak tập h p c th c hiệ g ể Ví d , ch y iện di ể giảm biến gây nhiễu phân tích ImageJ, dải Bằng ch ng ã ề xuất m nh mẽ chuộ g ộ g ý, phân tích ImageJ ph thuộc nhiều vào í h ộc lập, khỏi thí nghiệ ể cơng ộ gel, trộn mẫu trộn mẫu với thuốc nhuộm, tiếp gel khơng quán mậ í h c áp d ng thí c khoa h c chấp nhậ gel agarose bị ả h h ởng số yếu tố kỹ thuậ ph í h , hú g i hy ã c ă g thành ng trả nhiều nỗ g iệc kiểm tra LIN28B cho bệnh nhân NB Việt Nam Phân tích SnaPshot Ph g ph p a tiện ích mở rộng mồi c a SNaPshot Multiplex System cho phép sàng l ũ g h x hận tới 10 biến thể nhấ thuậ h gl ng cao th c việc thẩm vấn m nh mẽ nhiều SNP với ộ nh y h g òi hỏi mộ l th mở rộng mồi ố g ể ng nhỏ mẫ hã N ã biết lần ch y Kỹ c khuếch n DNA Một thiết bị iện di mao quản với phần mềm GeneScan 120 LIZ GeneMapper hoặ Ge eM ị h í h h ớc c a mả h i21 Bộ ch a thuốc e cs d g ể xác c dán nhãn hiển thị kết SBE cung cấp lo t ng d ng ch yếu th nghiệm clinal, ví d , nghiên c u YChromosome Consortium22, gen miễn dịch bẩ si h h TLR ( h thể giống Toll) IL (interleukin) 23, phát nhanh virus suy giảm miễn dịch g ời-1 ột biến kháng thuốc24, LOH (Mất gen dị h p t ) gen s a chữa không phù h p MLH1 ML 225, ểs d gl s g h ờng quy Pháp27 So với xét nghiệm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 18 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh truyền thố g h S ge Se e es h ặc Enzyme Digestion, SBE tố h gl ng , g i é ób ib h g ậy hiệu (Sanger Sequences có giá $ 13,6 mẫu so với $ 8.2 phản ng SNaPshot) Hiện t i, t i Việt Nam, SBE mộ ph h h c báo cáo tối hó h h Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn g gi g ph p ới h c SNaPshot 19 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ƣơ y, hú g Trong nghiên c ge LIN28B s221634 K T LUẬN >T i ã ối h h li hó h h ến UNBTK Ph g xé ghiệm cho kiểu g ph p ặc biệt thuận tiệ ể t o chuỗi nucleotide t i vị trí quan tâm c thể mà không cần ph g ph p gõ ph c t p h l i, hip N nghiên c c nucleotide, v.v hữu ích nhỏ bệnh di truyền ph c t p Tuy nhiên, nghiên c u tiến c thiết kế tố cỡ mẫu lớn h h h c khuyế g i hi iế hí h ể xác minh nghiên c u c a chúng tôi, với h ph i hiễm c Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn h , gi i n lâm sàng, v.v 20 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh l ut a ảo A, A & V, S Single Base Primer Extension Assay (SNaPshot) for Rapid Detection of Human Immunodeficiency Virus - Drug Resistance Mutations J Mol Biomark Diagn 7, 2–5 (2016) Applied Biosystems - Life Technologies Corporation Demonstration of SNP Genotyping Using a Single Nucleotide Extension Method and the 3500 Series Genetic Analyzer Co12863 1–6 (2010) Ben, S et al Multiplex SNaPshot-a new simple and efficient CYP2D6 and ADRB1 genotyping method Hum Genomics 10, 11 (2016) Bujalkova, M et al Multiplex SNaPshot genotyping for detecting loss of heterozygosity in the mismatch-repair genes MLH1 and MSH2 in microsatelliteunstable tumors Clin Chem 54, 1844–1854 (2008) Carmel-Gross, I., Bollag, N., Armon, L & Urbach, A LIN28: A Stem Cell Factor with a Key Role in Pediatric Tumor Formation Stem Cells Dev 25, 367–377 (2016) Cimadamore, F., Amador-Arjona, A., Chen, C., Huang, C.-T C.-T & Terskikh, A V SOX2–LIN28/let-7 pathway regulates proliferation and neurogenesis in neural precursors Proc Natl Acad Sci 110, E3017–E3026 (2013) Daniell, H The Lin28/let-7 axis regulates glucose metabolism Natl Inst Heal 76, 211–220 (2012) Dash, P K et al Double negative feedback loop between reprogramming factor LIN28 and microRNA let-7 regulates aldehyde dehydrogenase 1- positive cancer stem cells Quest 31, 3148–3157 (2011) Design, A H M Y Chromosome SNP Analysis Using the Single-Base 297, 10 Di Cristofaro, J., Silvy, M., Chiaroni, J & Bailly, P Single PCR Multiplex SNaPshot Reaction for Detection of Eleven Blood Group Nucleotide Polymorphisms J Mol Diagnostics 12, 453–460 (2010) 11 Diskin, S J et al Common variation at 6q16 within HACE1 and LIN28B influences susceptibility to neuroblastoma Nat Genet 44, 1126–1130 (2012) 12 Esteves, L M., Bulhões, S M., Brilhante, M J & Mota-Vieira, L Three multiplex snapshot assays for SNP genotyping in candidate innate immune genes BMC Res Notes 6, 54 (2013) 13 He, J et al Potentially functional polymorphisms in the LIN28B gene contribute to neuroblastoma susceptibility in Chinese children J Cell Mol Med 20, 1534– 1541 (2016) 14 Kiyonari, S & Kadomatsu, K Neuroblastoma models for insights into tumorigenesis and new therapies Expert Opin Drug Discov 10, 53–62 (2015) 15 Liem H Nguyen Lin28b is sufficient to drive liver cancer and necessary for its maintenance in murine models 76, 211–220 (2012) 16 Matthay, K K et al Neuroblastoma Nat Rev Dis Prim 2, 16078 (2016) 17 Molenaar, J J et al LIN28B induces neuroblastoma and enhances MYCN levels via let-7 suppression Nat Genet 44, 1199–1206 (2012) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 21 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 18 Monclair, T et al The International Neuroblastoma Risk Group (INRG) staging system: An INRG Task Force report J Clin Oncol 27, 298–303 (2009) 19 Powers, J T et al Multiple mechanisms disrupt the let-7 microRNA family in neuroblastoma Nature 535, 246–251 (2016) 20 Schleiermacher, G., Janoueix-Lerosey, I & Delattre, O Recent insights into the biology of neuroblastoma Int J Cancer 135, 2249–2261 (2014) 21 Schmidt, R & Plath, K The roles of the reprogramming factors Oct4, Sox2 and Klf4 in resetting the somatic cell epigenome during induced pluripotent stem cell generation Genome Biol 13, 251 (2012) 22 Schnepp, R W et al A LIN28B-RAN-AURKA Signaling Network Promotes Neuroblastoma Tumorigenesis Cancer Cell 28, 599–609 (2015) 23 Thiele, C J Neuroblastoma Cell Lines Human Cell 1, (1998) 24 Viswanathan, S R et al Lin28 promotes transformation and is associated with advanced human malignancies Nat Genet 41, 843–848 (2009) 25 Yu et al Induced Pluripotent Stem Cell Lines Derived from Human Somatic Cells Sci (New York, NY) 318, 1917–20 (2007) 26 Zhang, W C et al Glycine decarboxylase activity drives non-small cell lung cancer tumor-initiating cells and tumorigenesis Cell 148, 259–272 (2012) 27 Zhou, J., Ng, S B & Chng, W J LIN28/LIN28B: An emerging oncogenic driver in cancer stem cells Int J Biochem Cell Biol 45, 973–978 (2013) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 22 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 23 ... Ọ Ƣ
Ọ NGHIÊN C? ?U VỊ Ấ Ì Ơ U LE ƢỜ E rs221634 A> T, rs17065417 A> C) C? ?A GEN LIN28B TRÊN M? ?U U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHI NĨNG CHẢ PHÂN GIẢI CAO s
ủ t ọt t ? ?U h STT h... QUẢ THỰC HI TÀI NGHIÊN C? ?U KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG tài: NGHIÊN C U VỊ TRÍ ÌN ƠN NU LEOTI E ( s221634 >T, s17065417 A> C) C? ?A GEN LIN28B TRÊN M? ?U U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH... dbSNP Forward Reverse Amplic Conc on size (? ?M) (bp) Sanger rs1706 CTCCATGATA ACCCATTCA Sequencing 5417 A CC ACCGAGAGG AGATACAGG rs2216 CTCAGGTTG ATACACGTC 34 GTTCTCGTTA TC G CCATGACAG SNaPshot rs1706
Ngày đăng: 07/05/2021, 17:13
Xem thêm:
