Mối liên quan của đa hình đơn nucleotide APOE rs429358 và rs7412 tới rối loạn chuyển hóa lipid máu ở trẻ em nam tại một số trường tiểu học Hà Nội

2. Tổng quan tài liệu 2.1. Tổng quan về lipid và rối loạn chuyển hóa lipid2.1.1. Lipid và chuyển hóa lipid trong cơ thể 2.1.1.1. Vai trò của lipidLipid là nguồn năng lượng trực tiếp cho cơ thể, 1g lipid khi bị đốt cháy trong cơ thể sẽ cung cấp 9,3kcal. Với khẩu phần ăn hợp lý, lipid tham gia cung cấp 2530% năng lượng cơ thể. Lipid được oxy hóa để tạo năng lượng tại các tế bào cơ thể dưới dạng acetyl coenzym A. Riêng tại gan, một lượng nhỏ acetyl coenzym A được chuyển thành các thể ketone (acetoacetate, βhydroxybutyrate và acetone). Lipid là nguồn năng lượng dự trữ lớn nhất trong cơ thể dưới dạng TG tại mô mỡ. Mô mỡ chiếm khoảng 1520% khối lượng cơ thể ở người trưởng thành. Ở trạng thái bình thường, khối lượng mỡ thay đổi theo tuổi, giới và chủng tộc. Lipid tham gia cấu trúc cơ thể và một số hoạt chất sinh học quan trọng như: phospholipid tham gia cấu trúc màng tế bào và là tiền chất của prostaglandin và leucotrien; cholesterol cần cho sự tổng hợp acid mật, các hormon steroid thượng thận và sinh dục; mô mỡ đệm dưới da và bọc quanh các phủ tạng.2.1.1.2. Đặc tính của lipidVề tính chất lý học: các lipid đều có tỷ trọng nhẹ hơn nước, không tan trong nước, có khả năng liên kết với protein huyết tương để thành lipoprotein có tỉ trọng khác nhau (từ 0,9 đến 1,2).

Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H MC LC Trang PHN I M U 1 t 1.1 Lý chn ti 1.2 Mc tiờu nghiờn cu .2 1.3 Ni dung nghiờn cu Tng quan ti liu 2.1 Tng quan v lipid v ri lon chuyn húa lipid 2.1.1 Lipid v chuyn húa lipid c th 2.1.1.1 Vai trũ ca lipid .3 2.1.1.2 c tớnh ca lipid 2.1.1.3 Dng tn ti ca lipid c th .4 2.1.1.4 Lipoprotein 2.1.1.5 Chuyn húa lipid c th .7 2.1.2 i cng ri lon chuyn húa lipid mỏu 2.1.2.1 nh ngha .9 2.1.2.2 Phõn loi 2.1.2.3 Nguyờn nhõn .10 2.1.2.4 iu tr 12 2.2 i cng v gen a hỡnh Apolipoprotein E .13 2.2.1 V trớ 14 2.2.3 Cu trỳc chung 14 2.2.4 Gen APOE l mt gen a hỡnh n nucleotide 15 2.2.5 SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE 16 2.2.6 Vai trũ ca APOE chuyn húa lipid 16 2.3 Cỏc nghiờn cu mi liờn quan ca gen APOE SNP rs429358 v rs7412 ti ri lon chuyn húa lipid 18 2.3.1 Mt s nghiờn cu trờn i tng ngi trng thnh 18 2.3.2 Mt s nghiờn cu trờn i tng tr em 19 PHN II I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 21 i tng nghiờn cu 21 Thi gian v a im nghiờn cu 21 2.1 Thi gian nghiờn cu 21 2.2 a im nghiờn cu 21 Vt liu nghiờn cu 21 3.1 Trang thit b 22 3.2 Húa cht .22 Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H Phng phỏp nghiờn cu 23 4.1 Tiờu chun chn oỏn ri lon chuyn húa lipid mỏu 23 4.2 Thit k nghiờn cu 23 S dng nghiờn cu bnh chng (case - control study) tỡm hiu mi liờn h gia gen a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 vi RLCHLM 23 4.3 C mu v quy trỡnh chn mu 23 4.3.1 C mu cho nghiờn cu bnh chng 23 4.3.2 Quy trỡnh chn mu 24 4.4 Cỏc phng phỏp thu thp thụng tin 24 4.4.1 Phng phỏp tớnh tui .24 4.4.2 Phng phỏp o chiu cao ng .25 4.4.3 Phng phỏp xỏc nh cõn nng 25 4.4.4 Phng phỏp tớnh ch s c th 26 4.4.5 Phng phỏp o vũng eo, vũng mụng .26 4.4.6 Phng phỏp phng thu thp thụng tin 26 4.5 Xột nghim sinh húa mỏu 27 4.6 Sai s v khng ch sai s 28 4.7 Cỏc phng phỏp sinh hc phõn t 28 4.7.2 Phng phỏp xỏc nh kiu gen 28 4.8 Phng phỏp in di 31 4.8.1 Phng phỏp in di trờn gel agarose .31 4.8.1 Phng phỏp in di trờn gel polyacryamide .32 4.9 Phng phỏp x lý s liu 34 o c nghiờn cu 35 PHN III KT QU NGHIấN CU 36 Kt qu xỏc nh kiu gen bng phng phỏp RFLP PCR 36 c im i tng nghiờn cu 39 T l kiu gen v alen ca a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 hc sinh nam ti mt s trng tiu hc H Ni 40 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE .44 4.1 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE trờn tng SNP 44 4.2 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE trờn c SNP rs429358 v rs7412 .45 Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 46 5.1 Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE rs 429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni .46 5.1.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu i tng nghiờn cu 46 5.1.2 Phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti cỏc trng tiu hc H Ni 48 5.2 Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE rs7412 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 50 5.2.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE rs7412 i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu 50 5.3 Phõn tớch n bin nh hng kt hp ca hai SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni .51 5.3.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em tiu hc H Ni 51 5.3.2 Phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu hc sinh tiu hc H Ni 53 PHN IV KT LUN V KIN NGH 58 Kt lun 58 Nghiờn cu ca chỳng tụi thu c mt s kt qu nh sau: .58 Kin ngh 58 TI LIU THAM KHO 59 [21] C Garcộs, M Benavente, H Ortega, R Rubio, M A Lasunciún, F Rodrớguez Artalejo, J F Pardo and M De Oya (2002), Influence of Birth Weight on the Apo E Genetic Determinants of Plasma Lipid Levels in Children, Pediatric Research 52, pp 873878 .60 [37] KATAN MB, GRUNDY SM, JONES P, LAW M, MIETTINEN T, PAOLETTI R (2003), EFFICACY AND SAFETY OF PLANT STANOLS AND STEROLS IN THE MANAGEMENT OF BLOOD CHOLESTEROL LEVELS, MAYO CLIN PROC 78 (8), PP 965-78 62 [46] M ERDOGAN , Z EROGLU, C BIRAY , M KARADENIZ , S CETINKALP , B KOSOVA ,C GUNDUZ , N TOPCUOGLU, G OZGEN, C YILMAZ (2009) THE RELATIONSHIP OF THE APOLIPOPROTEIN E GENE POLYMORPHISM TURKISH TYPE Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H DIABETIC PATIENTS WITH AND WITHOUT NEPHROPATHY, J ENDOCRINOL INVEST 219 63 Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H PHN I M U t 1.1 Lý chn ti T nhng nm cui ca th k XX, cỏc bnh ri lon chuyn húa ó tr thnh mt nhng mc tiờu iu tr trng tõm ca y hc [2], ú ri lon chuyn húa lipid mỏu l (RLCHLM) nguyờn nhõn trc tip ca nhiu bnh nguy him nh ỏi thỏo ng, tng huyt ỏp, t qu, tai bin mch mỏu nóo, gan nhim m v c bit l cỏc bnh tim mch iu ỏng lo ngi l t l mc RLCHLM tr em ang ngy mt gia tng, t l thun vi t l tr tha cõn, bộo phỡ c bit l cỏc thnh ph ln Mt nghiờn cu tr em - tui ti mt s trng qun Hon Kim, H Ni cho thy t l tr tha cõn bộo phỡ cú tng triglyceride (TG) mỏu l 30,7%; tng cholesterol tng s (Cholesterol Total, CT) l 15,3%; tng lipoprotein t trng thp - cholesterol (Low Density Lipoprotein - Cholesterol, LDL-C) l 12,6% v gim lipoprotein t trng cao - cholesterol (High Density Lipoprotein -Cholesterol, HDL-C) l 5,3% [12] Nghiờn cu ca Yoshinaga v cs (2005) Nht Bn cho thy t l tr tha cõn - bộo phỡ cú tng TG mỏu l 31% [51] Nguyờn nhõn gõy RLCHLM cú th l nguyờn phỏt (do gen di truyn) hoc th phỏt (do thúi quen n ung, sinh hot v hot ng th lc) Nguyờn nhõn nguyờn phỏt gõy mt hoc nhiu gen t bin lm tng hp quỏ mc hoc o thi ớt TG hay cholesterol hoc tng hp khụng hay o thi quỏ mc HDL Nhng ri lon tiờn phỏt l nguyờn nhõn hng u gõy ri lon lipid mỏu tr em, ú nu c phỏt hin v can thip sm cú th ngn nga c nguy c mc bnh tim mch trng thnh [3] Nhng nghiờn cu gn õy ó cho thy cú ti 95 locus gen c lp cú liờn quan n cỏc ch s lipid mỏu ngi trng thnh [25] Tuy nhiờn, ó cú nhiu nghiờn cu ch rng s nh hng gen n RLCHLM khụng ng nht gia cỏc dõn tc khỏc nhau, tui v gii tớnh khỏc Mt nhng gen c nghiờn cu khỏ nhiu v mi liờn quan vi RLCHLM tr em l gen Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H ApolipoproteinE (APOE) Theo Emmi Tikkanen v cng s, s cú mt ca alen E4 cú kh nng lm tng mc LDL-C, TC v TG huyt tng (P < 0,001), ng thi lm gim lng HDL-C tr t n tui [25] Khi nghiờn cu tr em bộo phỡ B o Nha (2009), Henrique Nascimento v cng s cng ch rng nhng tr mang alen E4 cú giỏ tr TC, LDL-C, apo B cao hn ỏng k, ng thi cú mc TG cao nht v giỏ tr HDL-C, apo AI thp nht [36] Bờn cnh ú, nhiu nghiờn cu ó ch rng cỏc trai thng cú xu hng mc RLCHLM cao hn so vi cỏc gỏi tui t 6- 11 tui [30],[36] cho thy ngoi yu t di truyn, RLCHLM cũn chu nh hng ca mt s yu t khỏc ú cú gii tớnh Mt khỏc, RLCHLM tr em nu khụng c phỏt hin, ngn chn v cha tr sm cú th dn n mc cỏc bnh tim mch v hi chng chuyn húa (HCCH) giai on trng thnh Do ú, vic phỏt hin cỏc gen cú liờn quan ti nguy c mc RLCHLM tr em cú th giỳp cnh bỏo, phũng mc bnh, can thip kp thi, ngn nga s xut hin cỏc bin chng v ci thin nguy c tim mch tng lai Ti Vit Nam, hin ó cú mt s nghiờn cu v gen APOE nhng ch yu l trờn bnh Alzheimer ngi trng thnh [7], [13] nhng cỏc nghiờn cu v nh hng ca gen APOE n RLCHLM trờn i tng tr em cũn hn ch Do vy, cú thờm nhng d liu v gen liờn quan n RLCHLM tr em Vit Nam, chỳng tụi ó tin hnh nghiờn cu: Mi liờn quan ca a hỡnh n nucleotide APOE rs429358 v rs7412 ti ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 1.2 Mc tiờu nghiờn cu - Xỏc nh tn s alen, s phõn b kiu gen ca a hỡnh n nucleotide (Single nucleotde polymorphism, SNP) rs429358 v rs7412 nm trờn gen APOE tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni - Phõn tớch mi liờn quan ca tng SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE vi RLCHLM tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni - Phõn tớch nh hng kt hp ca SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE vi RLCHLM tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 1.3 Ni dung nghiờn cu - S dng phng phỏp a hỡnh chiu di ct gii hn on gen khuch i (Restriction Fragment Length Polymorphism - Polymerase Chain Reaction, RFLP - PCR) xỏc nh kiu gen ca cỏc i tng nghiờn cu, t ú xỏc nh s phõn b alen v kiu gen ca SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE nhúm tr mc RLCHLM (nhúm bnh) v nhúm tr cú cỏc ch s lipid mỏu mc bỡnh thng (nhúm chng) theo tiờu chun chn oỏn ca chng trỡnh giỏo dc quc gia v cholesterol (National Cholesteron Education Program, NCEP) [4] - Nghiờn cu bnh chng xỏc nh mi liờn quan ca SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE cỏc mụ hỡnh di truyn khỏc vi RLCHLM tr - Phõn tớch tng tỏc ca SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE vi RLCHLM tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni Tng quan ti liu 2.1 Tng quan v lipid v ri lon chuyn húa lipid 2.1.1 Lipid v chuyn húa lipid c th 2.1.1.1 Vai trũ ca lipid Lipid l ngun nng lng trc tip cho c th, 1g lipid b t chỏy c th s cung cp 9,3kcal Vi khu phn n hp lý, lipid tham gia cung cp 25-30% nng lng c th Lipid c oxy húa to nng lng ti cỏc t bo c th di dng acetyl coenzym A Riờng ti gan, mt lng nh acetyl coenzym A c chuyn thnh cỏc th ketone (acetoacetate, -hydroxybutyrate v acetone) Lipid l ngun nng lng d tr ln nht c th di dng TG ti mụ m Mụ m chim khong 15-20% lng c th ngi trng thnh trng thỏi bỡnh thng, lng m thay i theo tui, gii v chng tc Lipid tham gia cu trỳc c th v mt s hot cht sinh hc quan trng nh: phospholipid tham gia cu trỳc mng t bo v l tin cht ca prostaglandin v leucotrien; cholesterol cn cho s tng hp acid mt, cỏc hormon steroid thng thn v sinh dc; mụ m m di da v bc quanh cỏc ph tng Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 2.1.1.2 c tớnh ca lipid V tớnh cht lý hc: cỏc lipid u cú t trng nh hn nc, khụng tan nc, cú kh nng liờn kt vi protein huyt tng thnh lipoprotein cú t trng khỏc (t 0,9 n 1,2) V tớnh cht hoỏ hc: Cu to húa hc ca lipd gm nhúm chc l nhúm ru (-OH) cú th thc hin c phn ng ester húa vi cỏc acid bộo v nhúm (-COOH) gn vi mt chui di hydratcarbon vi s nguyờn t carbon chn T ú, lipd c chia lm loi l acid bộo no (khụng cha liờn kt kộp chui hydrocarbon) v acid bộo khụng no (cha liờn kt kộp chui hydrocarbon) 2.1.1.3 Dng tn ti ca lipid c th Da vo cu to húa hc, lipid c th gm nhúm chớnh, bao gm: - Triglyceride: l cỏc este khụng tớch in ca glycerol, cú cụng thc cu to chung nh hỡnh 1.1 R1, R2, R3 l mch cacbon ca cỏc acid bộo tng ng (Hỡnh 1.1) Cỏc acid bộo ny cú th ging hoc khỏc Trong t nhiờn thng gp cỏc loi TG hn hp (cú cha loi acid bộo khỏc phõn t) [4] Hỡnh 1.1 Cu trỳc phõn t triglyceride [3][7] - Phospholipid: l cỏc este ca ru a chc vi cỏc axit bộo v cú gc axit phosphoric cựng vi nhng base N úng vai trũ l nhng nhúm ph b sung Trong thnh phn ca phospholipid thng cú mt gc axit phosphoric, nhiờn mt vi loi inozitphospholipid li cú gc axit phosphoric Cỏc base N ca phospholipid cng rt khỏc nhau, thng gp nht l dn xut ca Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H etanolamin (colin v serin) Da vo nhúm ru a chc ngi ta chia phospholipid lm loi glycerophospholipid, inozitphospholipid, v sphingolipid (Hỡnh 1.2) Hỡnh 1.2 Cu trỳc cỏc dng ca phospholipid (A): Cu trỳc ca glycerophospholipid; (B): Cu trỳc ca inozitphospholipid; (C): Cu trỳc ca sphingolipid [3] [7] - Cholesterol: l cỏc sterol, cú bn cht l dn xut ca cyclopentanoperhydrophenantren gm vũng cnh v vũng cnh, nhúm phõn cc (-OH) C3, phn khụng phõn cc l b khung hydrocarbon cỏc vũng v chui hydrocarbon C17 (Hỡnh 1.3) Cholesterol c tng hp ch yu gan nhng cng cú nhiu mụ thn kinh, mỏu, tinh trựng, lp m di da Hỡnh 1.3 Cu trỳc phõn t cholesterol [4] Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 2.1.1.4 Lipoprotein * Cu trỳc: Lipoprotein l s kt hp ca lipid v protein Trong ú, protein c hiu thnh phn ca lipoprotein c gi l apolipoprotein hay apoprotein (apo) Phn lừi ca lipoprotein l TG cựng vi cholesterol este húa khụng phõn cc, xung quanh c bao bc bi phn v phõn cc, a nc bao gm phospholipid, cholesterol t v cỏc loi apo nht nh (hỡnh 1.4) Hỡnh 1.4 Cu trỳc ca lipoprotein [64][67] Hu ht lipoprotein c to thnh gan, vỡ hu nh ton b m mỏu gan sn xut, tr TG ca chylomicron l hp thu t rut Gan cng chớnh l ni sn xut protein chuyn ch lipid, gi l apo-protein * Phõn loi: Da vo nng TG mỏu, lipoprotein c chia lm cỏc loi khỏc lipoprotein cha nhiu TG cú t trng thp, lipoprotein cha ớt TG s cú t trng cao [10], c th l: - Chylomicron (CM): thnh phn cha khong 84 - 87% l TG, l loi lipoprotein cú kớch thc ln nht (t 0,01 n 0,1 mm), c tng hp rut non, ch yu chuyn m t niờm mc rut n gan [11] - Lipoprotein t trng rt thp (Very low density lipoprotein, VLDL): cha 50 - 60% l TG [11] c tng hp gan, cú vai trũ chuyn TG v cholesterol n mụ xung quanh Trn Th Khỏnh Huyn Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H TI LIU THAM KHO 1.Ti liu ting Vit [1] Nguyn Võn Anh (2014), Mt s yu t nguy c v hiu qu ca viờn ti folate i vi tỡnh trng ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn ngi 30 69 tui ti H Ni, Vin V sinh dch t Trung ng [2] T Vn Bỡnh (2007), Nhng nguyờn lý nn tng ỏi thỏo ng tng glucose mỏu, NXB Y hc H Ni [3] TS T Quang Cng (2010), Ri lon lipid mỏu, Vin Tim Mch Vit Nam [4] Phm Th Trõn Chõu, Trn Th ng (2009), Húa sinh hc, NXB Giỏo dc Vit Nam, tr 82 - 91 [5] ỡnh H (1996), Sinh húa lõm sng, Trng i hc Y dc Thnh ph H Chớ Minh, tr 32 [6] Bch Vng Hi, Li Phỳ Thng (1997), Cỏc chuyờn sinh húa v dch t hc lõm sng NXB Y hc, tr 26 [7] ỡnh H, Phm Th Mai (2010), Hoỏ sinh lõm sng, NXB Y hc H Ni, tr 116- 140 [8] Lờ Th Hp (2003), Phng phỏp ỏnh giỏ tỡnh trng dinh dng (tha cõn bộo phỡ) tr em di 10 tui, Tp y hc d phũng, tr 76 80 [9] Khuyn cỏo ca liờn u ban quc gia v phũng nga, phỏt hin, ỏnh giỏ v iu tr tng huyt ỏp ln th (JNC VII 2003) [10] Nguyn Th Lõm, H Nguyn Thanh (2004), Dinh dng iu tr ri lon m mỏu, NXB Y hc, tr 47 - 81 [11] Phm Th Mai (2001), Ri lon chuyn húa lipoprotein, NXB Thnh ph H Chớ Minh, tr 56 [12] Trng Tuyt Mai, Lờ Th Hp, Nguyn Th Lõm, Ngụ Th Xuõn (2013), Tỡnh trng tha cõn bộo phỡ v ri lon Lipid mỏu tr n tui ti mt s trng qun Hon Kim H Ni, Tp dinh dng v d phũng, (3) [13] V Anh Nh, Nguyn Linh, Kho sỏt kiu gen APOE4 trờn ngi suy gim nhn thc nh, NXB i hc Y Dc, Tp.HCM Trn Th Khỏnh Huyn 59 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [14] Mai Th Trch, Nguyn Thy Khuờ (2007), Ri lon chuyn húa lipid, Ni tit hc i cng, NXB Y hc, tr 457 - 499 [15] Nguyn Vn Tun (2008),Y hc thc chng, NXB Y hc 2.Ti liu ting anh [16] Alberti KG, Zimmet PZ Diagnosis (1998), Diagnosis and classification of diabetes mellitus provisional of WHO consultation Diabet Med 15; pp 539-53 [17] Boer JM, Ehnholm C, Menzel HJ, Havekes LM, Rosseneu M, O'Reilly DS, Tiret L (1997), Interactions between lifestyle-related factors and the APOE polymorphism on plasma lipids and apolipoproteins The EARS Study European, Atherosclerosis Research Study, Arterioscler Thromb Vasc Biol 17(9), pp 1675-1681 [18] Breslow, J L., Zannis, V I., SanGiacomo, T R., Third, J L H C., Tracy, T., Glueck, C J (1982) Studies of familial type III hyperlipoproteinemia using as a genetic marker the APOE phenotype E2/2 J Lipid Res 23, pp 1224-1235 [19] Bullido MJ, Artiga MJ, Recuero M, Sastre I, Garcớa MA, Aldudo J, Lendon C, Han SW, Morris JC, Frank A, Vỏzquez J, Goate A, Valdivieso F (1998), A polymorphism in the regulatory region of APOE associated with risk for Alzheimer's dementia, Nat Genet 18(1), pp 69-71 [20] Chen DQ, Zhao HY, Fang Q, He J, Chai Y (2007), Relationship between blood lipid levels of pregnant women with glucose metabolism disorders and perinatal outcomes, Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi 42 (6); pp 366-369 [21] C Garcộs, M Benavente, H Ortega, R Rubio, M A Lasunciún, F Rodrớguez Artalejo, J F Pardo and M De Oya (2002), Influence of Birth Weight on the Apo E Genetic Determinants of Plasma Lipid Levels in Children, Pediatric Research 52, pp 873878 [22] Dallongeville J, Lussier-Cacan S, Davignon J (1992), Modulation of plasma triglyceride levels by APOE phenotype: a meta-analysis, J Lipid Res 33(4), pp 447-54 [23] de Knijff, P, van den Maagdenberg, A M J M., Frants, R R., Havekes, L M (1994) Genetic heterogeneity of apolipoprotein E and its influence on plasma lipid and lipoprotein levels, Hum Mutat 4: pp 178-194 Trn Th Khỏnh Huyn 60 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [24] D.S Fredrickson, R.S Lees (1965), A System for Phenotyping Hyperlipoproteinemia, Circulation 31: pp 321 - 327 [25] E Tikkanen, T Tuovinen, E Widộn, T Lehtimọki, J Viikari, M Kọhửnen, L Peltonen, O T Raitakari and S Ripatti (2011), Association of Known Loci With Lipid Levels Among Children and Prediction of Dyslipidemia in Adults, Circ Cardiovasc Genet 4, pp 673-680 [26] Eto, M., Watanabe, K., Makino, I (1989) Increased frequencies of apolipoprotein E2 and E4 alleles in patients with ischemic heart disease Clin Genet 36, pp 183-188 [27] Executive summary of the third Report of the nationalcholesterol education program (NCEP) Expert (2001) Expert panel of detection, evaluation and treatment of high bloob cholesterol in Adults Panel on detection, evaluation and treatment of high bloob cholesterol in Adults (Adults treatment panel III), Jama 285, pp 2486-2497 [28] E.Y Chew, M.L Klein, F.L Ferris, et al (1996), Association of elevated serum lipid levels with retinal hard exudate in diabetic retinopathy Early Treatment Diabetic Retinopathy Study (ETDRS) Report 22, Arch Ophthalmol, 114 (9), pp 1079 - 1084 [29] G.N Thomas, S.Y Ho, D Edward, Janus (2005), The US National Cholesterol Education Programme Adult treatment panel III (NECT ATP III) Prevalence of the metabolic syndrome in a Chinese population, Diabetes Research and Clinical Practice 67, pp 251 - 257 [30] G Parlier, G Thomas, G Bereziat, J L Fontaine and J Ph Girardet (1997); Relation of Apolipoprotein E Polymorphism to Lipid Metabolism in Obese Children, Pediatric Research 41, pp 682685 [31] Gregg, R E., Zech, L A., Brewer, H B., Jr (1983) Apolipoprotein E alleles in severe hypertriglyceridaemia, Lancet 321, pp 353 [32]G S Getz1 and C A Reardon (2008) Apoprotein E as a lipid transport and signaling protein in the blood, liver, and artery wall, APOE in blood, liver, artery wall, and other tissues 159 [33] H Nascimento, Licenciatura, L Silva, P Lourenc, R Weinfurterova, PD Elisabeth Castro (2009) Lipid Profile in Portuguese Obese Children and Adolescents Interaction of Apolipoprotein E Polymorphism With Adiponectin Levels, Arch Pediatr Adolesc Med 163(11), pp 1030-6 Trn Th Khỏnh Huyn 61 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [34] Houlden, H., Crook, R., Backhovens, H., Prihar, G., Baker, M., Hutton, M., Rossor, M., Martin, J J., Van Broeckhoven, C., Hardy, J (1998), APOE genotype is a risk factor in nonpresenilin early-onset Alzheimer's disease families, Med Genet 81, pp 117-121 [35] Huang, Y, Liu, X Q, Wyss-Coray, T, Brecht, W J, Sanan, D A., Mahley, R (2001) Apolipoprotein E fragments present in Alzheimer's disease brains induce neurofibrillary tangle-like intracellular inclusions in neurons, Proc Nat Acad Sci 98, pp 8838-8843 [36] J.L Aldons, P Pajukanta (2008), A treasure trove for lipoprotein biology, Nature Genetics 40, pp 129 - 130 [37] Katan MB, Grundy SM, Jones P, Law M, Miettinen T, Paoletti R (2003), Efficacy and safety of plant stanols and sterols in the management of blood cholesterol levels, Mayo Clin Proc 78 (8), pp 965-78 [38] Kashyap, V S., Santamarina-Fojo, S., Brown, D R., Parrott, C L., Applebaum-Bowden, D., Meyn, S., Talley, G., Paigen, B., Maeda, N., Brewer, H B., Jr (1995), Apolipoprotein E deficiency in mice: gene replacement and prevention of atherosclerosis using adenovirus vectors, J Clin Invest 96, pp 1612-1620 [39] K.H Weisgraber, S.C Rall, Jr, T L Innerarity, R W Mahley, T Kuusi, and C Ehnholm (1984), A novel electrophoretic variant of human apolipoprotein E Identification and characterization of apolipoprotein E1, The Journal of clinical investigation (74), pp 1024 [40] Lambert, J.-C., Araria-Goumidi, L., Myllykangas, L., Ellis, C., Wang, J C., Bullido, M J., Harris, J M., Artiga, M J., Hernandez, D., Kwon, J M., Frigard, B., Petersen, R C., and 19 others (2002), Contribution of APOE promoter polymorphisms to Alzheimer's disease risk, Neurology 59, pp 59-66 [41] Lambert J., Brousseau, T., Defosse, V., Evans, A., Arveiler, D., Ruidavets, J.-B., Haas, B., Cambou, J.-P., Luc, G., Ducimetiere, P., Cambien, F., Chartier-Harlin, M.-C., Amouyel, P (2000), Independent association of an APOE gene promoter polymorphism with increased risk of myocardial infarction and decreased APOE plasma concentrations the ECTIM study, Hum Molec Genet 9, pp 57-61 Trn Th Khỏnh Huyn 62 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [42] Larson IA, Ordovas JM, DeLuca C, Barnard JR, Feussner G, Schaefer EJ (2000), Association of apolipoprotein (Apo)E genotype with plasma apo E levels, Atherosclerosis 148(2), pp 327-35 [43] Lu Qi, Young Ae Cho (2008),Gene-environment interaction and obesity, Nutr Rev.66 (12), pp 684-94 [44] Martine S Bernstein, Michael C Costanza, Richard W James, Michael A Morris, Franỗois Cambien, Sộgolốne Raoux, Alfredo Morabia (2002), Physical Activity May Modulate Effects of APOE Genotype on Lipid Profile, Arterioscler Thromb Vasc Biol, pp 134 139 [45] M Emi, L L Wu, M A Robertson, R L Myers, R A Hegele, R R Williams, R White, and J-M Lalouel (1988), Genotyping and sequence analysis of apolipoprotein E isoforms, Genomics (3) 373 [46] M Erdogan , Z Eroglu, C Biray , M Karadeniz , S Cetinkalp , B Kosova ,C Gunduz , N Topcuoglu, G Ozgen, C Yilmaz (2009) The relationship of the apolipoprotein E gene polymorphism Turkish Type diabetic patients with and without nephropathy, J Endocrinol Invest 219 [47] Mui, S., Rebeck, G W., McKenna-Yasek, D., Hyman, B T., Brown, R H., Jr (1995), Apolipoprotein E epsilon-4 allele is not associated with earlier age at onset in amyotrophic lateral sclerosis, Ann Neurol 38, pp 460463 [48] Myoung Hee Han, Sun Jun Kim (2000), Apolipoprotein E Polymorphism and Plasma Lipid Levels in Obese Children, Korean J Pediatr 43(5), pp 679-685 [49] M Yoshinaga, S Tanaka, A Shimaga, K Sameshima, J Nishi, Y Nomura, etal (2005), Metabolic syndrome in overweight and obese Japanese children, Obesres, pp 1135 - 1140 [50] Nghiem Nguyet Thu, Ta Thi Tuyet Mai, Reiko Ohmori, Masatoshi Kuroki, Nguyen Van Chuyen, Nguyen Thi Kim Hung, Masanobu Kawakami, and Kazuo Kondo (2004), Apolipoprotein E Polymorphism in Vietnamese Children and Its Relationship to Plasma Lipid and Lipoprotein Levels, Metabolism Clinical and Experimental 53 (12), pp 1517 1521 Trn Th Khỏnh Huyn 63 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [51] National Cholesterol Education Program (1992), American Academy of Pediatrics National Cholesterol Education Program: Report of the Expert Panel on Blood Cholesterol Levels in Children and Adolescents, Pediatrics, 89 (3 Pt 2), pp 525 - 584 [52] Parlier, G Thomas, G Bereziat, J L Fontain and J Ph Girardet (1997), Relation of Apolipoprotein E Polymorphism to Lipid Metabolism in Obese Children, Pediatric Research 41, pp 682685 [53] P Huebbe, A Nebel, S Siegert, J Moehring, C Boesch-Saadatmandi, E Most, J Pallauf, S Egert, MJ Mỹller, S Schreiber, U Nửthlings, G Rimbach (2011), APOE is associated with higher vitamin D levels in targeted replacement mice and humans, FASEB J (25), pp 3262 [54] Philip A.I Guthrie, George Davey Smith, Jean Golding, Naveed Sattar, Ian N.M Daya (2001), IQ, Educational Attainment, Memory and Plasma Lipids: Associations with Apolipoprotein E Genotype in 5995 Children, Biol Psychiatry 70(2), pp 152158 [55] Poirier, J., Davignon, J., Bouthillier, D., Kogan, S., Bertrand, P., Gauthier, S (1993), Apolipoprotein E polymorphism and Alzheimer's disease, Lancet 342, pp 697-699 [56] Richard L Seip, Robert F Zoeller, Theodore J Angelopoulos,3 James Salonia,1 Cherie Bilbie,Niall M Moyna, Mary P Miles, Paul S Visich, Linda S Pescatello, Paul M Gordon, Gregory J Tsongalis, Linda Bausserman, and Paul D Thompson1 (2011), Interactive effects of APOE haplotype, sex, and exercise on postheparin plasma lipase activities, J Appl Physiol 110, pp 10211028 [57] Roberto Elosua, Jose M Ordovas, L Adrienne Cupples, Caroline S Fox, Joseph F Polak, Philip A Wolf, Ralph A DAgostino, Sr., and Christopher J ODonnell (2004), Association of APOE genotype with carotid atherosclerosis in men and women: the Framingham Heart Study, Journal of Lipid Research 45, pp 1868 1875 [58] Schachter, F., Faure-Delanef, L., Guenot, F., Rouger, H., Froguel, P., Lesueur-Ginot, L., Cohen, D (1994), Genetic associations with human longevity at the APOE and ACE loci, Nature Genet 6, pp 29-32 Trn Th Khỏnh Huyn 64 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [59] S S Eteghad, M Talebi, M Farhoudi (2012) "Association of apolipoprotein E epsilon allele with sporadic late onset Alzheimers disease, A meta-analysis", Neurosciences (Riyadh) (4), pp 321 [60] T.J Cole., M.C Bellizzi, K.M Flegal, W.H Dietz (2000), Establishing a standard definition for child overweight and obesity worldwide: international survey, BMJ 320, pp [61] World Health Organisation, International Association for the Study of Obesity & International Obesity Task Force (2000), The Asia - Pacific Perspective: Redefining obesity and its treatment, Health Communications: Sydney, Circulation, pp 1201 - 1210 [62] Y K Paik, D J Chang, C A Reardon, G E Davies, R W Mahley, J M Taylor (1985), Nucleotide sequence and structure of the human apolipoprotein E gene Proc Natl Acad Sci U S A 82(10), pp: 34453449 [63] Zhang, S H., Reddick, R L., Piedrahita, J A., Maeda, N (1992) Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E Science 258, pp 468-471 [64] http://en.wikipedia.org/wiki/Lipoprotein [65] http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov [66] http://who.int/growthref/who2007_bmi_for_age/en/index [67] http://www.scientificpsychic.com/health [68] http://www.snpedia.com/index.php/ [69] www.nature.com/reviews/ [70] www.genecards.org [71] http://huge.com/home Trn Th Khỏnh Huyn 65 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H LI CM N Trong thi gian hc v hon thin khúa lun, em ó nhn c rt nhiu s ng viờn, giỳp tn tỡnh ca nhiu cỏ nhõn v th Em xin gi li cm n ti ch biờn v nhúm nghiờn cu ca ti Nghiờn cu mi liờn quan ca gen v li sng i vi nguy c mc bnh bộo phỡ tr em tiu hc H Ni - ti cp s khoa hc cụng ngh H Ni, ó to iu kin v tin cho em thc hin nghiờn cu ny Em xin chõn thnh cm n ThS Nguyn Th Hng Hnh ó luụn tn tỡnh hng dn v giỳp em sut quỏ trỡnh nghiờn cu v thc hin ti Em xin trõn trng cm n cỏc thy cụ khoa Sinh hc trng i hc S phm H Ni, c bit l cỏc thy cụ B mụn Sinh lý hc ngi v ng vt ó giỳp , to iu kin cho em c thc hin khúa lun Em xin cm n TS.Trn Quang Bỡnh v cỏc anh ch phũng thớ nghim Di truyn phõn t - Vin v sinh dch t Trung ng ó nhit tỡnh ch bo, giỳp v to mi iu kin cho em sut quỏ trỡnh lm thớ nghim Em xin gi li cm n chõn thnh v sõu sc nht n gia ỡnh v bn bố, nhng ngi thõn ó luụn bờn cnh, ng h, ng viờn chỳng em sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu Dự ó cú nhiu c gng nhng nng lc cũn hn ch nờn khúa lun ln ny ca em cũn nhiu thiu xút Em rt mong c s ch bo, úng gúp ý kin ca cỏc thy cụ khúa lun ca em c hon chnh hn Em xin chõn thnh cm n! Trn Th Khỏnh Huyn 66 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni Trn Th Khỏnh Huyn i hc S phm H 67 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H DANH MC T VIT TT TG Triglyceride CT Cholesterol Total (Cholesterol tng s) CM Chilomicron VLDL Very Low Density Lipoprotein (Lipoprotein mt rt thp LDL Low Density Lipoprotein (Lipoprotein mt thp) IDL Intermidiade Density Lipoprotein (Lipoprotein mt trung bỡnh) HDL High Density Lipoprotein (Lipoprotein mt cao) LDL-C HDL-C Low Density Lipoprotein -Cholesterol (Cholesterol - lipoprotein mt thp) High Density Lipoprotein - Cholesterol (Cholesterol - lipoprotein mt cao) LP Lipoprotein LPL Lipoprotein Lipase LCAT Lecithin Cholesterol Acyltransferase CETP NCEP Cholesteryl Ester Transfer Protein (Enzyme chuyn i cholesterol este) National Cholesterol Education Program BMI Body Mass Index (Ch s c th) NST Nhim sc th APOE Gen Apolipoprotein E apoE Protein apolipoprotein E SNP Single Nucleotide Polymorphism (a hỡnh n nucleotide) PCR Polymease Chain Reaction (Phn ng chui trựng hp) RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (a hỡnh chiu di on ct gii hn) OR Odd Ratio (T sut chờnh) CI Confidence interval (Khong tin cy) EDTA Ethylene diamin tetraacetic acid (cht chng ụng mỏu) WHO World Health Organization (T chc Y t th gii) Trn Th Khỏnh Huyn 68 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H DANH MC HèNH V BNG PHN I M U 1 t 1.1 Lý chn ti 1.2 Mc tiờu nghiờn cu .2 1.3 Ni dung nghiờn cu Tng quan ti liu 2.1 Tng quan v lipid v ri lon chuyn húa lipid 2.1.1 Lipid v chuyn húa lipid c th 2.1.1.1 Vai trũ ca lipid .3 2.1.1.2 c tớnh ca lipid 2.1.1.3 Dng tn ti ca lipid c th .4 Hỡnh 1.1 Cu trỳc phõn t triglyceride [3][7] .4 Hỡnh 1.2 Cu trỳc cỏc dng ca phospholipid (A): Cu trỳc ca glycerophospholipid; (B): Cu trỳc ca inozitphospholipid; (C): Cu trỳc ca sphingolipid [3] [7] Hỡnh 1.3 Cu trỳc phõn t cholesterol [4] 2.1.1.4 Lipoprotein Hỡnh 1.4 Cu trỳc ca lipoprotein [64][67] 2.1.1.5 Chuyn húa lipid c th .7 Hỡnh 1.5 S chuyn húa lipid c th [21] 2.1.2 i cng ri lon chuyn húa lipid mỏu 2.1.2.1 nh ngha .9 2.1.2.2 Phõn loi Bng 1.1 Phõn loi ri lon lipid mỏu theo NCEP [27] 2.1.2.3 Nguyờn nhõn .10 Hỡnh 1.6 nh hng khỏc ca cỏc gen ti ch s HDL-C (trỏi) v LDL-C (phi) cỏc tui khỏc Mu sc v kớ hiu * khỏc biu th giỏ tr P khỏc (*: P < 0,05; **: P < 0,01; ***: P < 0,001) [25] 11 2.1.2.4 iu tr 12 Hỡnh 1.7 S nguyờn tc iu tr ri lon chuyn húa lipid mỏu [66] .13 2.2 i cng v gen a hỡnh Apolipoprotein E .13 Hỡnh 1.8 Cu trỳc protein c tng hp t ng dng APOE2, E3, E4 [67] 14 2.2.1 V trớ 14 Hỡnh 1.9 V trớ ca gen APOE trờn NST19 ngi [65] 14 2.2.3 Cu trỳc chung 14 2.2.4 Gen APOE l mt gen a hỡnh n nucleotide 15 2.2.5 SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE 16 Hỡnh 1.10 S khỏc v trỡnh t amino acid phõn t protein cỏc ng dng ca Apolipoprotein E [64] 16 2.2.6 Vai trũ ca APOE chuyn húa lipid 16 Hỡnh 1.11 Vai trũ ca ApoE vi c th ngi [69] .16 Hỡnh 1.11 S quỏ trỡnh sn xut lipoprotein giu triglyceride [64] .17 Trn Th Khỏnh Huyn 69 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 2.3 Cỏc nghiờn cu mi liờn quan ca gen APOE SNP rs429358 v rs7412 ti ri lon chuyn húa lipid 18 2.3.1 Mt s nghiờn cu trờn i tng ngi trng thnh 18 2.3.2 Mt s nghiờn cu trờn i tng tr em 19 PHN II I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 21 i tng nghiờn cu 21 Thi gian v a im nghiờn cu 21 2.1 Thi gian nghiờn cu 21 2.2 a im nghiờn cu 21 Vt liu nghiờn cu 21 3.1 Trang thit b 22 Bng 2.1 Mt s vt liu v trang thit b s dng nghiờn cu 22 3.2 Húa cht .22 Bng 2.2 Mt s húa cht c s dng nghiờn cu .22 Phng phỏp nghiờn cu 23 4.1 Tiờu chun chn oỏn ri lon chuyn húa lipid mỏu 23 Bng 2.3 ỏnh giỏ cỏc mc ri lon lipid mỏu tr em theo NCEP [51] 23 4.2 Thit k nghiờn cu 23 S dng nghiờn cu bnh chng (case - control study) tỡm hiu mi liờn h gia gen a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 vi RLCHLM 23 4.3 C mu v quy trỡnh chn mu 23 4.3.1 C mu cho nghiờn cu bnh chng 23 4.3.2 Quy trỡnh chn mu 24 Hỡnh 2.1 S ni dung nghiờn cu 24 4.4 Cỏc phng phỏp thu thp thụng tin 24 4.4.1 Phng phỏp tớnh tui .24 4.4.2 Phng phỏp o chiu cao ng .25 4.4.3 Phng phỏp xỏc nh cõn nng 25 Hỡnh 2.2 Dng c o chiu cao ng (A) v cõn cõn nng (B) [66] 26 4.4.4 Phng phỏp tớnh ch s c th 26 4.4.5 Phng phỏp o vũng eo, vũng mụng .26 4.4.6 Phng phỏp phng thu thp thụng tin 26 4.5 Xột nghim sinh húa mỏu 27 4.6 Sai s v khng ch sai s 28 4.7 Cỏc phng phỏp sinh hc phõn t 28 4.7.2 Phng phỏp xỏc nh kiu gen 28 Hỡnh 2.3 V trớ ct ca enzyme HhaI [21] 30 4.8 Phng phỏp in di 31 Trn Th Khỏnh Huyn 70 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 4.8.1 Phng phỏp in di trờn gel agarose .31 Hỡnh 2.4 Mt s bc quỏ trỡnh in di trờn gel agarose 32 4.8.1 Phng phỏp in di trờn gel polyacryamide .32 Hỡnh 2.5 Mt s bc quỏ trỡnh in di trờn gel polyacryamide .33 4.9 Phng phỏp x lý s liu 34 o c nghiờn cu 35 PHN III KT QU NGHIấN CU 36 Kt qu xỏc nh kiu gen bng phng phỏp RFLP PCR 36 Hỡnh 3.1 Kt qu xỏc nh kiu gen ti SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE bng phng phỏp RFLP-PCR 36 c im i tng nghiờn cu 39 Bng 3.1 c im nhõn trc ca i tng nghiờn cu 39 T l kiu gen v alen ca a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 hc sinh nam ti mt s trng tiu hc H Ni 40 Bng 3.2 Phõn b alen v kiu gen ca a hỡnh APOE rs429358 hc sinh nam ti mt s trng tiu hc H Ni 40 Bng 3.3 Phõn b alen v kiu gen ca a hỡnh APOE rs7412 tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 40 Bng 3.4 Phõn b alen v kiu gen ca a hỡnh APOE tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 41 Hỡnh 3.2 So sỏnh tn s kiu gen v tn s alen ca a hỡnh APOE rs429358 nghiờn cu ny vi mt s cng ng [65] 42 Hỡnh 3.4 So sỏnh tn s kiu gen ca a hỡnh APOE rs47412 nghiờn cu ny vi mt s cng ng [65] .43 Hỡnh 3.5 So sỏnh tn s alen T v C ca a hỡnh APOE rs7412 ca nghiờn cu ny vi mt s cng ng [65] 44 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE .44 4.1 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE trờn tng SNP 44 Bng 3.5 Cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE rs429358 44 Bng 3.6 Cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE rs7412 45 4.2 Phõn tớch cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE trờn c SNP rs429358 v rs7412 .45 Bng 3.7 Cỏc bin liờn quan n ri lon chuyn húa lipid mỏu theo kiu gen ca a hỡnh APOE trờn ton mu 45 Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 46 Trn Th Khỏnh Huyn 71 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H 5.1 Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE rs 429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni .46 5.1.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu i tng nghiờn cu 46 Bng 3.8 Cỏc mụ hỡnh phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 vi bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu .47 5.1.2 Phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti cỏc trng tiu hc H Ni 48 Bng 3.9 Cỏc mụ hỡnh phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 vi ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu mụ hỡnh siờu tri 48 5.2 Phõn tớch nh hng ca a hỡnh APOE rs7412 i vi nguy c mc ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni 50 5.2.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE rs7412 i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu 50 Bng 3.10 Cỏc mụ hỡnh phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs7412 vi ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu mụ hỡnh tri 50 5.3 Phõn tớch n bin nh hng kt hp ca hai SNP rs429358 v rs7412 trờn gen APOE i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em nam ti mt s trng tiu hc H Ni .51 5.3.1 Phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu tr em tiu hc H Ni 51 Bng 3.11 Cỏc mụ hỡnh phõn tớch n bin nh hng ca a hỡnh APOE vi bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu i tng nghiờn cu 52 5.3.2 Phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 i vi nguy c mc bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu hc sinh tiu hc H Ni 53 Bng 3.12 Cỏc mụ hỡnh phõn tớch a bin nh hng ca a hỡnh APOE rs429358 v rs7412 vi bnh ri lon chuyn húa lipid mỏu trờn i tng nghiờn cu mụ hỡnh tri 53 PHN IV KT LUN V KIN NGH 58 Kt lun 58 Nghiờn cu ca chỳng tụi thu c mt s kt qu nh sau: .58 Kin ngh 58 TI LIU THAM KHO 59 [21] C Garcộs, M Benavente, H Ortega, R Rubio, M A Lasunciún, F Rodrớguez Artalejo, J F Pardo and M De Oya (2002), Influence of Birth Weight on the Apo E Genetic Determinants of Plasma Lipid Levels in Children, Pediatric Research 52, pp 873878 .60 Trn Th Khỏnh Huyn 72 Khoa Sinh hc Khúa lun tt nghip Ni i hc S phm H [37] KATAN MB, GRUNDY SM, JONES P, LAW M, MIETTINEN T, PAOLETTI R (2003), EFFICACY AND SAFETY OF PLANT STANOLS AND STEROLS IN THE MANAGEMENT OF BLOOD CHOLESTEROL LEVELS, MAYO CLIN PROC 78 (8), PP 965-78 62 [46] M ERDOGAN , Z EROGLU, C BIRAY , M KARADENIZ , S CETINKALP , B KOSOVA ,C GUNDUZ , N TOPCUOGLU, G OZGEN, C YILMAZ (2009) THE RELATIONSHIP OF THE APOLIPOPROTEIN E GENE POLYMORPHISM TURKISH TYPE DIABETIC PATIENTS WITH AND WITHOUT NEPHROPATHY, J ENDOCRINOL INVEST 219 63 Trn Th Khỏnh Huyn 73 Khoa Sinh hc [...]... cứu được chọn ra dựa vào kết quả điều tra sàng lọc trên 7.500 trẻ em 6 - 11 tuổi tại 31 trường tiểu học của Hà Nội trong đề tài cấp sở khoa học công nghệ, Hà Nội: “Nghiên cứu mối liên quan của gen và lối sống đối với nguy cơ mắc bệnh béo phì ở trẻ em tiểu học Hà Nội 397 trẻ em nam tiểu học từ 6 - 11 tuổi tại 30 trường tiểu học nội & ngoại thành ở Hà Nội đã được chọn ra để tiến hành nghiên cứu - Tiêu... SNP tại exon 4 (rs429358 và rs7412) làm phát sinh ba biến thể của APOE, được biết đến là E2, E3, và alen E4, mà lần lượt mã hóa ba đồng dạng protein (ApoE2 , ApoE3 , và ApoE4 ) khác nhau ở trình tự amino acid ở vị trí 112 và 158 tức là cysteine- cysteine ở APOE2 , cysteine- arginine ở APOE3 và arginine- arginine ở APOE4 (Hình 1.9) [42] 2.2.6 Vai trò của APOE trong chuyển hóa lipid ApoE được tổng hợp bởi một. .. acid béo tới các mô mỡ khác bằng cách phân giải lipid ở lipoprotein hoặc nhập bào Do đó, nồng độ apoE ở mô mỡ sẽ suy giảm khi mắc bệnh béo phì và tăng ở những người ăn chay Ảnh hưởng của apoE ở mô mỡ tới cân bằng nội năng lượng trong cơ thể và bệnh xơ vữa động mạch đang được tích cực nghiên cứu 2.3 Các nghiên cứu mối liên quan của gen APOE SNP rs429358 và rs7412 tới rối loạn chuyển hóa lipid Gen APOE được... trong thành mạch máu trở về gan 2.1.1.5 Chuyển hóa lipid trong cơ thể Quá trình chuyển hóa lipid trong cơ thể được chia thành hai con đường, ngoại sinh và nội sinh, phụ thuộc phần lớn vào nguồn gốc của lipid trong cơ thể Trần Thị Khánh Huyền 7 Khoa Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà Hình 1.5 Sự chuyển hóa lipid trong cơ thể [21] * Con đường ngoại sinh Gọi là ngoại sinh vì các lipid, ... 22 Khoa Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà 8 FastDigest® HhaI NEB 4 Phương pháp nghiên cứu 4.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán rối loạn chuyển hóa lipid máu Tiêu chuẩn xác định trẻ RLCHLM theo NCEP cụ thể trong bảng 2.3 Bảng 2.3 Đánh giá các mức độ rối loạn lipid máu ở trẻ em theo NCEP [51] Xét nghiệm Bình thường Vùng trung gian Rối loạn chuyển hóa lipoprotein lúc đói (mg/dL) lipid máu (mg/dL)... Hình 1.8 Cấu trúc protein được tổng hợp từ đồng dạng APOE2 , E3, E4 [67] APOE là gen đa hình đơn nucleotide, trong đó hai đa hình đơn nucleotide (SNP) rs429358 và rs7412 tại exon 4 làm phát sinh ba biến thể, được biết đến là E2, E3, và E4 lần lượt mã hóa ba đồng dạng protein apoE2 , apoE3 , và apoE4 ; trong đó E3 là dạng tự nhiên với tần số cao nhất trong quần thể người 2.2.1 Vị trí APOE nằm trên NST số. .. Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà vữa động mạch sớm, so với nhóm kiểm soát (P < 0,001), trong khi tần số của alen E2 lại liên quan với tăng lipid máu loại III và IV (P < 0,01) [54] (2) Nghiên cứu của Martin và cộng sự kéo dài từ năm 1999 đến năm 2000 trên 1708 đối tượng từ 35 đến 74 tuổi gồm 2 nhóm nam và nữ đã chỉ ra ảnh hưởng của các biến thể APOE tới các chỉ số lipid Trong đó, ở. .. nhất (tại các điểm 3937 và 4075) là vùng xác định các đồng dạng của APOE và các biến thể khác tại vị trí 4036 (Arg 142 Cys) có liên quan đến tăng lipid loại III [31] Các biến thể khác tại vị trí 3106 (Leu 28 Pro) không liên quan tới bất kì quá trình rối loạn lipid nào [23] Các SNP ở khu vực lân cận đầu 5’có thế làm thay đổi biểu hiện gen và liên quan đến bệnh Alzheimer và bệnh tim mạch [44][45][50] Một. .. có 4 chuỗi họ Alu liên kết với gen APOE: một chuỗi Alu ở cuối gen và 2 chuỗi Alu ở intron thứ 2 Kiến thức về cấu trúc của gen sẽ cho phép tiếp cận các đặc trưng phân tử của gen APOE 2.2.4 Gen APOE là một gen đa hình đơn nucleotide NST số 19 có tổng chiều dài 56 044 000 bp, trong đó chứa 25 676 SNP [61] Phân tích các locus của gen APOE đã cho thấy mức độ đa dạng di truyển của APOE một cách toàn diện... hướng làm giảm HDL-C và tăng LDL-C so với người không mang alen E4 [44] (3) Năm 2004, Roberto và cộng sự tiến hành nghiên cứu mối liên quan của đa hình APOE ở người trưởng thành giữa 2 giới nam và nữ Nghiên cứ này được thực hiện 2723 người trong độ tuổi từ 30 đến 62 tuổi, bao gồm: 1315 nam và 1408 nữ Kết quả về ảnh hưởng của kiểu gen được phân tích trên cả 2 giới [57] Trong đó: + Ở nam giới: người mang ... Khánh Huyền Khoa Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà DIABETIC PATIENTS WITH AND WITHOUT NEPHROPATHY”, J ENDOCRINOL INVEST 219 63 Trần Thị Khánh Huyền Khoa Sinh... Trần Thị Khánh Huyền 37 Khoa Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà Hình 3.2 Kết giải trình tự mẫu đại diện cho kiểu gen gen APOE Trần Thị Khánh Huyền 38 Khoa Sinh học Khóa luận... tính khác nhau… Một gen nghiên cứu nhiều mối liên quan với RLCHLM trẻ em gen Trần Thị Khánh Huyền Khoa Sinh học Khóa luận tốt nghiệp Nội Đại học Sư phạm Hà ApolipoproteinE (APOE) Theo Emmi Tikkanen