NGHIÊN cứu mối LIÊN QUAN GIỮA GEN APOE và rối LOẠN CHUYỂN hóa LIPID máu ở TRẺ EM TIỂU học tại một số TỈNH MIỀN bắc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI BÙI THỊ THANH DUYÊN NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA GEN APOE VÀ RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA LIPID MÁU Ở TRẺ EM TIỂU HỌC TẠI MỘT SỐ TỈNH MIỀN BẮC Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm Mã số : 60 42 01 14 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS DƯƠNG THỊ ANH ĐÀO HÀ NỘI, 2015 PHẦN MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Rối loạn chuyển hóa lipid máu (RLCHLM) tình trạng thay đổi gi ới hạn cho phép m ột hay nhiều số lipid máu tăng cholesterol, tăng triglyceride (TG) ho ặc t ăng c ả hai; t ăng giảm hay nhiều lipoprotein xảy yếu tố di truy ền k ết h ợp y ếu t ố môi tr ường [20, 21] RLCHLM có mối liên quan với bệnh mãn tính nguy hiểm đái tháo đường, t ăng huyết áp, bệnh mạch vành, béo phì, xơ vữa động mạch, đột quỵ dẫn tới tử vong [21, 22] Hiện nay, tình trạng RLCHLM ngày gia tăng, gây nhi ều lo ng ại cho xã h ội Một nghiên cứu ngẫu nhiên 2400 phụ nữ miền Tây nước Áo cho th có đ ến 64,7% ph ụ n ữ có cholesterol tổng số (TC) máu cao [85] Nghiên cứu RLCHLM người từ 25 đến 74 tuổi Hà Nội năm 2008 cho thấy, tỷ lệ rối loạn m ột thành phần lipid máu 59,8%; t ỷ l ệ t ăng cholesterol đơn chiếm 47,2%; tỷ lệ tăng TG 38,4%; t ỷ lệ tăng ph ối h ợp cholesterol TG 25,9% [9] Đặc biệt, tỷ lệ mắc RLCHLM trẻ em ngày tăng cao t ỷ l ệ thu ận với tỷ lệ trẻ mắc bệnh béo phì [25] Ở trẻ thừa cân, béo phì – 12 tuổi nội thành Hà Nội n ăm 2003, có 66,7% tăng TG máu, 10,5% tăng cholesterol toàn phần 5,7% t ăng LDL-C [1] Một nghiên cứu năm 2009 học sinh – 10 tuổi Hà Nội cho thấy có 52,2% trẻ – 10 tuổi bị RLCHLM, 57,6% trẻ – tuổi có nguy mắc hội chứng chuyển hóa 84,6% trẻ 10 tu ổi b ị mắc hội chứng chuyển hóa [7] Nguyên nhân dẫn đến RLCHLM tương tác yếu tố nguy c t môi tr ường (chế độ ăn uống nhiều chất béo bão hòa, vận động, béo phì, đái tháo đ ường…) y ếu t ố di truyền làm ảnh hưởng tới số lipid máu Ở trẻ em, y ếu t ố di truy ền đ ược coi nguyên nhân chủ yếu gây RLCHLM Nghiên cứu cặp sinh đôi trứng gia đình cho thấy nồng độ HDL-C huyết 40 – 60% yếu tố di truyền định [28] Có nhiều nghiên cứu mối liên quan gen RLCHLM tiến hành gi ới, cho th RLCHLM liên quan đến hoạt động nhiều gen APOE, GALNT2, LDLR, APOA5, APOA4, APOC3, APOA, CETP Trong đó, gen APOE có mối liên quan rõ ràng RLCHLM [26, 48, 62, 81] Gen APOE đóng vai trò trung tâm trình chuyển hóa lipid đ ồng th ời tham gia vào phân ph ối chất béo mô, tế bào thể [43] Bên cạnh đó, vùng địa lý khác đặc ểm di truy ền ch ủng t ộc, y ếu t ố dinh dưỡng, hoạt động thể lực, kinh tế, xã hội khác Vì v ậy, ảnh h ưởng c gen đ ối v ới b ệnh tật dân tộc khác khác [59] Việc phát sớm gen nhạy cảm, có tác động xấu tới chuyển hóa lipid máu giúp cho việc phòng ng ăn ng ừa s ự xu ất hi ện bi ến ch ứng Ở tr ẻ em, điều giúp cải thiện nguy tim mạch tương lai Trên giới, có nhiều nghiên cứu mối liên quan gi ữa gen APOE RLCHLM chủ yếu thực đối tượng người Châu Âu người da tr ắng [27, 42, 63, 69] Các nghiên cứu người Châu Á [66, 70] Tại Việt Nam, có số nghiên cứu gen APOE chủ yếu bệnh Alzheimer người trưởng thành [12, 19] Các công trình nghiên cứu mối liên quan gen APOE RLCHLM trẻ em Việt Nam hạn chế Đã có nghiên cứu Nghiêm Nguyệt Thu cộng [70] thực hi ện nhóm nh ỏ gồm 348 bé gái – tuổi thành phố Hồ Chí Minh, ch ưa đ ủ đ ể mang tính đ ại di ện cho tr ẻ em Vi ệt Nam Xuất phát từ lý để giải đáp vấn đề: Có hay không mối liên quan gen APOE RLCHLM trẻ em Việt Nam; mối liên quan có độc lập với BMI hay không, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu mối liên quan gen APOE rối loạn chuyển hóa lipid máu trẻ em tiểu học số tỉnh miền Bắc” Lịch sử nghiên cứu Gen APOE sản xuất chủ yếu gan đại thực bào mô ngo ại vi; b ởi tế bào hình hình đệm hệ thần kinh trung ương [60] APOE loại gen đa chức năng, đóng vai trò quan trọng tham gia trình ều hòa mi ễn dịch trình trao đ ổi ch ất đ ặc bi ệt trình chuyển hóa lipid Vì vậy, gen APOE từ lâu nghiên cứu nhiều giới xác định liên quan trực tiếp đến hàng loạt b ệnh người rối lo ạn chuy ển hóa lipid máu [42, 48, 51, 69, 70], bệnh Alzheimer [12, 19, 33, 44], xơ vữa động mạch [62], đái tháo đ ường type II [31], béo phì [78], khiếm khuyết chức nhận thức [38], HIV [30], tai biến mạch máu não [64]… Gen APOE cho đóng vai trò trung tâm trình chuy ển hóa lipid máu Trong ều kiện đời sống người không ngừng cải thiện nâng cao, tình tr ạng RLCHLM c ũng ngày tăng lên Chính vậy, mối liên quan gi ữa gen APOE RLCHLM ngày quan tâm sâu nghiên cứu Tính đến tháng 9/2015, c s li ệu HuGE tra c ứu ngày 25/09/2015 [89] có 3692 báo công bố nghiên cứu gen APOE, có 120 liên quan đến bệnh tim mạch, 90 liên quan đến bệnh mạch vành, 57 liên quan đ ến t ăng lipid máu, 43 liên quan đến tăng cholesterol, 33 liên quan tăng TG máu 31 liên quan đ ến RLCHLM Các nghiên c ứu gen APOE bắt đầu xuất từ năm 80 kỷ XX Tổng hợp nghiên cứu cho thấy, ảnh hưởng c gen APOE đến RLCHLM không đồng độ tuổi, quần thể người giới tính khác Các nghiên c ứu ch ủ y ếu đ ược thực đối tượng người Châu người da trắng Nghiên cứu v ề m ối liên quan gi ữa APOE RLCHLM trẻ em hạn chế, đặc biệt công trình nghiên cứu nước Mục tiêu nghiên cứu - Xác định tần số alen, phân bố kiểu gen đa hình đ ơn nucleotide (Single nucleotide polymorphism, SNP) rs429358 rs7412 nằm gen APOE đối tượng nghiên cứu - Phân tích mối liên quan SNP rs429358 rs7412 gen APOE với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu đối tượng nghiên cứu - Phân tích ảnh hưởng kết hợp SNP rs429358 rs7412 gen APOE với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu đối tượng nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: 450 trẻ em tiểu học từ – 11 tu ổi Hà Nội, H ải D ương Thái Nguyên - Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 10/2013 – tháng 8/2015 - Địa điểm nghiên cứu: Điều tra tiến hành số trường tiểu học địa bàn Hà Nội, Hải Dương, Thái Nguyên Phân tích di truyền phân t đ ược ti ến hành t ại Vi ện v ệ sinh d ịch t ễ Trung Ương Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu mối liên quan SNP rs429358, SNP rs7412 gen APOE kết hợp hai SNP với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu b ằng phân tích đ ơn bi ến, đa bi ến trẻ em tiểu học Hà Nội, Hải Dương, Thái Nguyên Đóng góp đề tài - Cung cấp số liệu tần số kiểu gen alen APOE quần thể ảnh hưởng RLCHLM trẻ em số tỉnh miền Bắc - Phương pháp xác định kiểu gen đảm bảo số liệu tin cậy phù hợp v ới điều kiện Vi ệt Nam Đây nghiên cứu xác đ ịnh ki ểu gen APOE gel polyacrylamide Việt Nam - Các kết đề tài sở cho nghiên cứu v ề m r ộng b ộ gen ng ười Vi ệt Nam; sở cho tiên đoán bệnh, giúp phòng chống b ệnh t ật, nâng cao s ức kh ỏe cho ng ười Vi ệt Nam; đồng thời tài liệu tham khảo giảng dạy nghiên cứu cho lĩnh vực y sinh Phương pháp nghiên cứu - Điều tra, nghiên cứu thực tiễn mô hình nghiên cứu bệnh chứng - Các phương pháp thu thập thông tin: Phương pháp tính tu ổi, ph ương pháp đo chi ều cao đứng, phương pháp đo cân nặng xác định số BMI, phương pháp đo vòng bụng vòng mông - Phương pháp xét nghiệm sinh hóa máu - Phương pháp tách ADN từ máu toàn phần - Phương pháp xác định kiểu gen - Phương pháp điện di - Phương pháp giải trình tự gen PHẦN NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan lipid máu RLCHLM 1.1 Lipid máu lipoprotein 1.1.1 Khái niệm thành phần lipid máu 1.1.2 Cấu trúc loại lipoprotein 1.1.3 Chuyển hóa lipid máu lipoprotein 1.2 Rối loạn chuyển hóa lipid máu 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Nguyên nhân * Nguyên nhân nguyên phát Nguyên nhân nguyên phát dẫn đến RLCHLM yếu tố di truyền Các rối loạn nguyên phát nguyên nhân chủ yếu gây RLCHLM tr ẻ em, không ph ải nguyên nhân gây tỷ lệ lớn mắc RLCHLM người trưởng thành * Nguyên nhân thứ phát 1.2.4 Hậu 1.3 Sự tương tác gen yếu tố nguy RLCHLM Đại cương gen APOE 2.1 Vị trí 2.2 Cấu trúc 2.3 Gen APOE gen đa hình đơn nucleotide 2.4 SNP rs429358 rs7412 gen APOE 2.5 Vai trò gen APOE chuyển hóa lipid - Vai trò APOE trình sản xuất lipoprotein giàu TG - Vai trò APOE cân HDL nội mô - Vai trò APOE nội cân lipoprotein huyết tương - Vai trò APOE nội cân chất béo não - Vai trò APOE nội cân chất béo mô mỡ Một số nghiên cứu mối liên quan gen APOE SNP rs429358 rs7412 tới RLCHLM trẻ em CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Trẻ em tiểu học – 11 tuổi chọn lựa dựa vào k ết qu ả ều tra sàng lọc 7.500 trẻ em 31 trường ti ểu học c Hà Nội 2400 tr ẻ ti ểu h ọc c H ải Dương Thái Nguyên từ đề tài “Nghiên cứu mối liên quan gen TMEM18 APOE tới b ệnh béo phì rối loạn chuyển hóa lipid máu trẻ em tiểu học” Bộ Giáo dục & Đào tạo Hà Nội Tiêu chuẩn loại trừ: trẻ mắc bệnh cấp tính bệnh mãn tính lao, nhiễm HIV/AIDS điều trị rối loạn lipid máu kéo dài Các đối tượng không thu thập đủ thông tin cần thiết mẫu máu bị loại trừ khỏi nghiên cứu Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 10/2013 – tháng 8/2015 Địa điểm nghiên cứu: - Điều tra tiến hành số trường tiểu học địa bàn Hà Nội, H ải D ương, Thái Nguyên - Xét nghiệm sinh hóa thực Bệnh viện Medlatec, B ệnh vi ện Đa khoa t ỉnh H ải Dương, Bệnh viện Đại học Y Thái Nguyên - Phân tích di truyền phân tử hoàn thiện nghiên c ứu Viện v ệ sinh d ịch t ễ Trung Ương; Bộ môn Sinh lý người động vật – Khoa Sinh, Đại học Sư phạm Hà Nội Vật liệu nghiên cứu 3.1 Hóa chất 3.2 Trang thiết bị Phương pháp nghiên cứu 4.1 Thiết kế nghiên cứu - Nghiên cứu bệnh chứng 4.2 Cỡ mẫu quy trình chọn mẫu 4.3 Các phương pháp thu thập thông tin - Phương pháp tính tuổi - Phương pháp đo chiều cao đứng - Phương pháp đo cân nặng - Phương pháp tính số khối thể (BMI – Body Mass Index) - Phương pháp đo vòng bụng vòng mông 4.4 Phương pháp xét nghiệm sinh hóa máu Xét nghiệm TG, TC, LDL-C, HDL-C Bệnh viện Medlatec, Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương, Bệnh viện Đại học Y Thái Nguyên thực phương pháp chuẩn 4.5 Phương pháp tách ADN từ máu toàn phần ADN tổng số tách từ tế bào bạch cầu sử dụng Kit Wizard® Genomic ADN Purification (Promega Corporation, USA) 4.6 Phương pháp xác định kiểu gen Tất mẫu nghiên cứu xác định kiểu gen phương pháp PCR –RFLP (Polymerase Chain Reaction – Fragment Length Polymorphism) 4.7 Phương pháp điện di 4.7.1.Phương pháp điện di gel agarose Tất mẫu sản phẩm PCR điện di gel agarose 2,5%, nhu ộm v ới RedSafe, sử dụng ΦX174DNA/HaeIII Markers, dung dịch đệm TBE 0,5X th ời gian thích hợp 100V 4.7.2 Phương pháp điện di gel polyacrylamide Các mẫu sản phẩm ủ enzyme điện di gel polyacryamide 12,5%, nhu ộm v ới RedSafe, sử dụng ΦX174DNA/HaeIII Markers, dung dịch đệm TBE 1X th ời gian thích hợp 100V 4.8 Phương pháp giải trình tự gen Sản phẩm PCR tinh chế Trình tự ADN phân tích cách s d ụng b ộ kit hóa học BigDye® Terminator v3.1 từ Axil Scientific Pte Ltd., Singapore Kết qu ả giải trình tự so sánh với kết phân tích kiểu gen ph ương pháp RFLP Độ phù h ợp gi ữa hai phương pháp 100% Xử lý số liệu Đạo đức nghiên cứu CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Để hiểu rõ đối tượng nghiên cứu, phân tích m ột số đ ặc ểm v ề gi ới tính, tuổi, số nhân trắc số lipid máu hai nhóm b ệnh nhóm ch ứng K ết qu ả phân tích đ ược thể bảng 3.1 Kết phân tích cho thấy, nghiên cứu có s ự đồng nh ất v ề gi ới tu ổi hai nhóm nghiên cứu (P > 0,05) Các số chiều cao, cân nặng, BMI, chu vi vòng bụng, chu vi vòng mông WHR nhóm bệnh có xu hướng cao đáng kể so với nhóm chứng So sánh số lipid máu nh ận thấy rằng, nhóm bệnh có nồng độ TG, cholesterol LDL-C cao h ơn nhóm ch ứng; n ồng đ ộ HDL-C th ấp h ơn nhóm chứng Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 Bảng 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Nhóm bệnh Nhóm chứng (n = 150) 60 7,95 ± 1,24 (n = 300) 60 7,73 ± 1,29 1,000 0,086a 127,53 ± 8,98 124,81 ± 9,06 0,003a Cân nặng (kg) 30,05 (23,20 – 36,98) 26,15 (21,10 – 33,75) 0,001b BMI (kg/m2) 20,60 (15,65 – 23,11) 16,16 (14,74 – 20,59) < 0,001b Chu vi vòng eo (cm) 65,45 (54,45 – 71,98) 54,50 (51,00 – 64,58) < 0,001b Chu vi vòng hông (cm) 73,00 (65,00 – 78,85) 65,30 (60,50 – 73,00) < 0,001b Tỷ lệ eo/hông (WHR) 0,88 ± 0,07 0,86 ± 0,06 0,001a Các số máu TG (mmol/L) 1,30 (1,14 – 1,60) 0,70 (0,58 – 0,89) < 0,001b Cholesterol (mmol/L) 4,24 (4,10 – 4,39) 3,82 (3,76 – 3,88) < 0,001c HDL-C (mmol/L) 1,25 ± 0,33 1,41 ± 0,26 < 0,001a LDL-C (mmol/L) 2,60 (2,10 – 3,25) 2,20 (1,89 – 2,62) < 0,001b Đặc điểm Giới tính nam (%) Tuổi (năm) P Các số nhân trắc Chiều cao (cm) a Các biến tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn giá trị trung bình độ l ệch chuẩn, P nhận từ kiểm định Student’s t test b Các biến không tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn trung v ị 25 th – 75th percentile, P nhận từ kiểm định Mann – Withney U test c Các biến tuân theo phân phối chuẩn sau đổi biến dạng Log10 biểu di ễn Mean 95% CI, P nhận từ kiểm định Student’s t test Kết xác định kiểu gen phương pháp PCR – RFLP Chúng tiến hành xác định kiểu gen APOE phương pháp PCR – RFLP, kết thể qua hình 3.1 Hình 3.1 Kết xác định kiểu gen APOE phương pháp PCR – RFLP A Kết điện di mẫu sản phẩm PCR 244bp (giếng – 7) gel agarose tr ước ủ với enzyme, giếng chứng âm (Master mix), giếng marker ΦX174 DNA/BsuRI (HaeIII) B Kết điện di mẫu sản phẩm PCR sau ủ với enzyme gel polyacrylamide 12% (150V, 20mA, 10W 90 phút); giếng – 3, – m ẫu nghiên c ứu, gi ếng marker ΦX174 DNA/BsuRI (HaeIII) Kết kiểu gen kết hợp phân đo ạn ADN sau ủ v ới enzyme HhaI Từ kết điện di nhận định kiểu gen đồng h ợp d ị h ợp (hình 3.1-B) t alen ε2, ε3, ε4 bao gồm: - ε2/ε2: 91bp, 83bp, 38bp, 18bp 16bp - ε3/ε3: 91bp, 48bp, 38bp, 35bp, 18bp 16bp - ε4/ε4: 72bp, 48bp, 38bp, 35bp, 19bp, 18bp 16bp - ε2/ε3: 91bp, 83bp, 48bp, 38bp, 35bp, 18bp, 16bp - ε2/ε4: 91bp, 83bp, 72bp, 48bp, 38bp, 35bp, 19bp, 18bp 16bp - ε3/ε4: 91bp, 72bp, 48bp, 38bp, 35bp, 19bp, 18bp 16bp Trong đó, đoạn 19bp, 18bp 16bp chạy khỏi điện di kích thước nhỏ mẫu đại diện cho kiểu gen ki ểm ch ứng b ằng ph ương pháp gi ải trình t ự gen 100% kết giải trình tự trùng kh ớp v ới k ết qu ả xác đ ịnh ki ểu gen b ằng ph ương pháp PCR – RFLP Tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE 3.1 Tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE SNP rs429358 rs7412 Tất đối tượng nghiên cứu xác định kiểu gen bằng phương pháp PCR – RFLP Kết tỷ lệ kiểu gen alen nhóm bệnh nhóm chứng SNP trình bày bảng 3.2, 3.3 Bảng 3.2 Phân bố kiểu gen alen đa hình APOE rs429358 Kiểu gen T/T T/C C/C Kiểu alen T C Kết kiểm định quy luật Nhóm bệnh Nhóm chứng Tổng (n = 150) (n = 300) (n = 450) 126 (84,0%) 22 (14,7%) (1,3%) 251 (83,7%) 48 (16,0%) (0,3%) 377 (83,7%) 70 (15,6%) (0,7%) 274 (91,3%) 26 (8,7%) 550 (91,7%) 50 (8,3%) 824 (91,6%) 76 (8,4%) P = 0,368 P = 0,413 P = 0,899 Hardy-Weinberg Qua bảng 3.2 cho thấy, tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE rs429358 tuân theo quy luật Hardy-Weinberg nhóm bệnh, nhóm chứng toàn mẫu với giá trị P > 0,05 Kiểu gen T/T phổ biến với tỷ lệ lớn, tương ứng 84,0%, 83,7% 83,7%; kiểu gen C/C chi ếm t ỷ lệ nhỏ 1,3%, 0,3% 0,7% tương ứng nhóm bệnh, nhóm ch ứng toàn m ẫu Alen T chiếm đa số mẫu nghiên cứu với tỷ lệ 91,0% nhóm toàn mẫu V ới P = 0,446, kết không cho thấy khác biệt t ỷ lệ kiểu gen alen gi ữa nhóm b ệnh nhóm chứng Bảng 3.3 thể phân bố kiểu gen alen đa hình APOE rs7412 Kết cho thấy tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE rs7412 tuân theo quy luật Hardy-Weinberg đối tượng thuộc nhóm chứng với P > 0,05 không theo quy luật nhóm bệnh toàn mẫu với P < 0,05 Bảng 3.3 Phân bố kiểu gen alen đa hình APOE rs7412 Nhóm bệnh (n = 150) Kiểu gen 10 Nhóm chứng (n = 300) Tổng (n = 450) C/C T/C T/T Kiểu alen 122 (81,4%) 23 (15,3%) (3,3%) 256 (85,3%) 41 (13,7 (%) (1,0%) 378 (84,0%) 64 (14,2%) (1,8%) C 267 (89,0%) 553 (92,2%) 820 (91,1%) T 33 (11,0%) 47 (7,8%) 80 (8,9%) Kết kiểm định quy luật P = 0,008 P = 0,354 P = 0,010 Hardy-Weinberg Tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE rs7412 đối tượng nghiên cứu có khác biệt với đa hình APOE rs429358 Ở đa hình này, kiểu gen chiếm đa số C/C với t ỷ l ệ 81,4%, 85,3%, 84,0%; kiểu gen T/T lại chiếm số với 3,3%, 1,0%, 1,8% nhóm b ệnh, nhóm chứng toàn mẫu Alen C chiếm ưu alen T So sánh t ỷ l ệ ki ểu gen alen gi ữa hai nhóm nghiên cứu, nhận thấy khác biệt với P = 0,178 3.2 Tỷ lệ kiểu gen alen đa hình APOE kết hợp hai SNP rs429358 rs7412 Chúng tiến hành phân tích phân b ố ki ểu gen alen c đa hình APOE hai SNP qua bảng 3.4 Bảng 3.4 Phân bố kiểu gen alen đa hình APOE Kiểu gen ε2/ε2 ε2/ε3 ε2/ε4 ε3/ε3 ε3/ε4 ε4/ε4 Kiểu alen ε2 ε3 ε4 Kết cho thấy, kiểu Nhóm bệnh (n = 150) Nhóm chứng (n = 300) Tổng (n = 450) (3,3%) 20 (13,3%) (2,0%) 101 (67,4%) 19 (12,7%) (1,3%) (1,0%) 37 (12,3%) (1,3%) 211 (70,4%) 44 (14,7%) (0,3%) (1,8%) 57 (12,7%) (1,5%) 312 (69,3%) 63 (14,0%) (0,7%) 33 (11,0%) 47 (7,8%) 80 (8,9%) 241 (80,3%) 503 (83,9%) 744 (82,7%) 26 (8,7%) 50 (8,3%) 76 (8,4%) gen ε3/ε3 phổ biến quần thể nghiên cứu với tỷ lệ 67,4%, 70,4% 69,3%; kiểu gen ε4/ε4 gặp với tỷ lệ 1,3%, 0,3% 0,7% nhóm bệnh, nhóm chứng toàn mẫu Nhìn vào phân bố alen, nhận thấy rằng, alen ε2 ε4 có tỷ lệ gần tương đương tỷ lệ chúng thấp hẳn so với alen ε3 Không có khác biệt tỷ lệ kiểu gen alen hai nhóm nghiên cứu với P = 0,376 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE 11 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE SNP 4.1 Chúng tiến hành phân tích nồng độ số lipid máu bao g ồm TG, cholesterol, HDL-C LDL-C kiểu gen khác SNP rs429358 rs7412, k ết qu ả th ể hi ện b ảng 3.5 3.6 Bảng 3.5 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE rs429358 Đặc điểm TG (mmol/L) Cholesterol HDL-C (mmol/L) (mmol/L) LDL-C (mmol/L) T/T 0,83 (0,63 – 1,17) 3,90 (3,50 – 4,38) 1,38 ± 0,30 2,24 (1,89 – 2,70) T/C 0,86 (0,68 – 1,07) 4,03 (3,69 – 4,60) 1,28 ± 0,26 2,59 (2,10 – 3,00) C/C 1,37 (1,09 – 1,50) 4,10 (3,80 – 4,55) 1,16 ± 0,18 3,17 (2,49 – 3,44) 0,281b P a 0,052b 0,023a 0,002b Các biến tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn, P nhận từ kiểm định One – Way ANOVA test b Các biến không tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn trung v ị 25 th – 75th percentile, P nhận từ kiểm định Kruskall-Wallis test Phân tích bảng 3.5 nhận thấy khác biệt có ý ngh ĩa th ống kê (v ới P < 0,05) nồng độ số HDL-C LDL-C kiểu gen Cụ thể, đối tượng có kiểu gen T/T, T/C C/C có nồng độ HDL-C theo xu h ướng gi ảm dần; đó, n ồng đ ộ LDL-C l ại có xu hướng tăng dần Kết cho thấy, nồng độ HDL-C thấp LDL-C cao kiểu gen C/C Kết phân tích theo kiểu gen đa hình APOE rs7412 toàn mẫu (bảng 3.6) rằng, có khác biệt có ý nghĩa thống kê ( P < 0,05) kiểu gen nồng độ ba số TG, cholesterol LDL-C Cụ thể, nồng độ TG tăng dần đ ối t ượng mang ki ểu gen C/C, T/C T/T; nồng độ cholesterol tăng dần theo kiểu gen T/C, T/T C/C; nồng độ LDL-C tăng dần theo ki ểu gen T/T, T/C C/C Bảng 3.6 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE rs7412 Đặc điểm C/C T/C TG (mmol/L) Cholesterol HDL-C LDL-C (mmol/L) 0,81 (0,63 – 1,13) (mmol/L) 4,00 (3,53 – 4,46) (mmol/L) 1,36 ± 0,29 2,34 (2,00 – 2,97) 0,91 (0,68 – 1,24) 3,74 (3,30 – 4,03) 1,37 ± 0,28 2,00 (1,83 – 2,55) 12 T/T P 1,32 (0,73 – 1,60) 1,36 ± 0,40 1,90 (1,51 – 2,32) a 0,980 0,031 0,003 < 0,001b a Các biến tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn giá trị trung bình ± độ lệch b 3,80 (3,20 – 3,95) b chuẩn, P nhận từ kiểm định One – Way ANOVA test b Các biến không tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn trung v ị 25 th – 75th percentile, P nhận từ kiểm định Kruskall – Wallis test 4.2 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen c đa hình APOE k ết h ợp c ả hai SNP rs429358 rs7412 Bảng 3.7 thể kết phân tích mối liên quan kiểu gen c đa hình APOE kết hợp hai SNP rs429358 rs 7412 với nồng độ số lipid máu đối tượng nghiên cứu Đặc điểm TG (mmol/L) Cholesterol (mmol/L) HDL-C (mmol/L) LDL-C (mmol/L) ε3/ε3 0,81 (0,60 – 1,14) 3,94 (3,50 – 4,40) 1,38 ± 0,30 2,30 (1,95 – 2,72) ε2/ε3 0,90 (0,68 – 1,21) 3,70 (3,30 – 4,02) 1,37 ± 0,28 2,00 (1,82 – 2,46) ε3/ε4 0,82 (0,68 – 1,03) 4,10 (3,65 – 4,60) 1,27 ± 0,24 2,61 (2,10 – 3,01) ε2/ε2 1,32 (0,73 – 1,60) 3,80 (3,20 – 3,95) 1,36 ± 0,40 1,90 (1,51 – 2,32) ε2/ε4 1,06 (0,84 – 2,29) 3,90 (3,74 – 4,28) 1,36 ± 0,36 2,32 (1,92 – 2,71) ε4/ε4 1,37 (1,09 – 1,50) 4,10 (3,80 – 4,55) 1,16 ± 0,18 3,17 (2,49 – 3,44) b P b a 0,058 0,005 0,147 Bảng 3.7 Nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE a < 0,001b Các biến tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn, P nhận từ kiểm định One – Way ANOVA test b Các biến không tuân theo phân phối chuẩn biểu diễn trung vị 25 th – 75th percentile, P nhận từ kiểm định Kruskall – Wallis test Qua phân tích nhận thấy rằng, kiểu gen có chênh l ệch v ề n ồng đ ộ ch ỉ s ố lipid máu Kiểu gen ε4/ε4 có số TG, cholesterol LDL-C cao số HDL-C thấp so với kiểu gen lại Tuy nhiên, có cholesterol LDL-C có khác bi ệt có ý ngh ĩa thống kê với P < 0,05 Chỉ số cholesterol tăng dần theo kiểu gen ε2/ε3, ε2/ε2, ε2/ε4, ε3/ε3, ε3/ε4 ε4/ε4 Chỉ số LDL-C tăng dần theo kiểu gen ε2/ε2, ε2/ε3, ε3/ε3, ε2/ε4, ε3/ε4 ε4/ε4 Nhóm gen ε3/ε4 ε4/ε4 có nồng độ cholesterol LDL-C cao nhất, tương đồng với nghiên cứu khác [40, 70] Mối liên quan đa hình APOE với RLCHLM trẻ em tiểu học 5.1 Mối liên quan đa hình APOE rs429358 với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu 5.1.1 Mối liên quan đa hình APOE rs429358 với RLCHLM Chúng tiến hành phân tích mối liên quan gi ữa ki ểu gen đa hình APOE rs429358 với nguy mắc RLCHLM, kết thể bảng 3.8 với mô hình giả định sau: 13 Mô hình đồng trội: Kiểu gen C/C T/C coi có ảnh hưởng RLCHLM phân tích riêng so sánh với kiểu gen T/T làm tham chiếu Mô hình trội: Trong mô hình này, nhóm trẻ mang alen C (gồm kiểu gen T/C C/C giả định có ảnh hưởng làm tăng nguy RLCHLM so sánh với nhóm trẻ không mang alen T (kiểu gen T/T) Mô hình lặn: Trong mô hình trẻ có kiểu gen đồng hợp tử C/C coi có nguy RLCHLM, kiểu gen khác T/C T/T ảnh hưởng RLCHLM gộp chung vào nhóm Mô hình siêu trội: Trong mô hình kiểu gen T/C coi có ảnh hưởng đ ối v ới RLCHLM kiểu gen T/T C/C ảnh hưởng gộp chung vào nhóm Mô hình cộng hợp: Trong mô hình này, alen C giả định có ảnh hưởng RLCHLM mức độ ảnh hưởng tăng theo số lượng alen C có kiểu gen (kiểu gen C/C có ảnh hưởng mạnh kiểu gen T/C) Kết phân tích phân tích đơn biến ảnh hưởng đa hình APOE rs429358 cho thấy, không mô hình giả định có ảnh hưởng có ý ngh ĩa thống kê v ới RLCHLM ( P > 0,05) Giá trị AIC (Akaike information criterion) BIC (Bayesian information criterion) giúp ch ọn l ựa mô hình có tiềm liên quan với RLCHLM AIC, BIC nh ỏ, mối liên quan ti ềm n ăng cao Tuy nhiên, sau điều chỉnh yếu tố gây nhi ễu gồm tu ổi, gi ới tính, vùng BMI, v ới P > 0,05, chưa tìm mối liên quan gi ữa SNP rs429358 mô hình gi ả đ ịnh với RLCHLM Bảng 3.8 Các mô hình phân tích mối liên quan đa hình APOE rs429358 với RLCHLM Kiểu P P* Mô hình OR (95% CI) OR*(95% CI) AIC gen T/T 1,00 1,00 0,91 0,88 Đồng T/C 0,745 0,672 (0,53 – 1,58) (0,50 – 1,57) 577,4 trội 3,98 4,80 C/C 0,261 0,221 (0,36 – 44,36) (0,39 – 59,19) T/T 1,00 1,00 Trội 576,9 T/C 0,98 1,05 0,928 0,867 C/C (0,57 – 1,66) (0,60 – 1,84) T/T 1,00 1,00 T/C Lặn 575,5 4,04 0,20 C/C 0,256 0,215 (0,36 – 44,92) (0,02 – 2,52) Siêu trội T/T 576,7 1,00 1,00 C/C T/C 0,90 0,713 1,15 0,640 14 BIC 589,7 585,1 583,7 584,9 (0,52 – 1,56) (0,65 – 2,04) Cộng hợp với 1,04 1,03 0,865 0,906 alen C (0,64 – 1,72) (0,61 – 1,74) Giá trị P thu từ phân tích hồi quy đa biến logistic regression 576,8 585,1 OR*, P* giá trị điều chỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI 5.1.2 Mối liên quan đa hình APOE rs429358 với rối loạn thành phần lipid máu Bảng 3.9 thể kết phân tích mối liên quan c đa hình APOE rs429358 với rối loạn LDL-C đối tượng nghiên cứu mô hình gi ả định K ết qu ả, tìm th m ối liên quan hầu hết mô hình Ở mô hình đồng trội, kiểu gen T/C làm tăng nguy rối lo ạn LDL-C lên 2,43 l ần (95% CI: 1,02 – 5,80) phân tích đơn biến tăng 2,62 lần (95% CI: 1,08 – 6,36) sau điều chỉnh yếu tố gây nhiễu với P P* 0,045 0,033 Trong kiểu gen C/C mối liên quan có ý nghĩa với rối loạn LDL-C Ở mô hình trội, kiểu gen có chứa alen C làm tăng nguy c rối lo ạn LDL-C lên 2,65 l ần (95% CI: 1,15 – 6,12) 2,83 lần (95% CI: 1,20 – 6,64) trước sau điều chỉnh với P = 0,022 P* = 0,017 Mô hình lặn mối liên quan có ý nghĩa với rối loạn LDL-C Trong mô hình siêu trội, tìm thấy mối liên quan gi ữa ki ểu gen T/C v ới s ự t ăng LDL-C ngưỡng sau điều chỉnh yếu tố gây nhi ễu V ới P* = 0,041, kiểu gen xác định làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,51 lần (95% CI: 1,04 – 6,04) Xét mô hình cộng hợp, với giá trị P = 0,012 P* = 0,011, alen C làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,61 lần (95% CI: 1,24 – 5,50) 2,67 lần (95% CI: 1,25 – 5,67) trước sau điều chỉnh Trong mô hình có mối liên quan v ới rối lo ạn LDL-C, nh ận th r ằng, mô hình cộng hợp có giá trị AIC, BIC nhỏ mức dao động 95% CI th ấp nh ất Do đó, mô hình c ộng hợp mô hình phù hợp mối liên quan đa hình APOE rs429358 với rối loạn LDL-C Bảng 3.9 Các mô hình phân tích mối liên quan đa hình APOE rs429358 với rối loạn LDLC 15 Mô hình Đồng trội Kiểu gen OR (95% CI) T/T 1,00 2,43 (1,02 – 5,80) 9,42 (0,82 – 108,57) 1,00 2,65 (1,15 – 6,12) T/C C/C T/T T/C C/C T/T T/C Trội Lặn Siêu trội OR*(95% CI) P 0,045 0,072 0,022 1,00 2,62 (1,08 – 6,36) 7,64 (0,64 – 90,92) 1,00 2,83 (1,20 – 6,64) 1,00 1,00 C/C 7,78 (0,68 – 88,51) 6,21 (0,53 – 72,87) T/T C/C 1,00 0,098 P* 0,033 AIC BIC 210,1 222,5 209,1 217,3 211,7 219,9 210,5 218,7 208,2 216,5 0,108 0,017 0,146 1,00 2,32 2,51 T/C 0,056 0,041 (0,98 – 5,51) (1,04 – 6,04) Cộng hợp với 2,61 2,67 0,012 0,011 alen C (1,24 – 5,50) (1,25 – 5,67) Giá trị P thu từ phân tích hồi quy đa biến logistic regression OR*, P* giá trị điều chỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI Các phân tích ảnh hưởng đa hình APOE rs429358 với rối loạn TG, cholesterol HDLC không cho kết có ý nghĩa thống kê ( P > 0,05) Kết phân tích tham khảo bảng 6, 7, 10 (phụ lục) 5.2 Mối liên quan đa hình APOE rs7412 với RLCHLM rối lo ạn thành ph ần c lipid máu 5.2.1 Mối liên quan đa hình APOE rs7412 với RLCHLM Bảng 3.10 thể kết phân tích mối liên quan gi ữa ki ểu gen c đa hình APOE rs7412 với RLCHLM với mô hình giả định sau: Mô hình đồng trội: Kiểu gen T/T T/C coi có ảnh hưởng RLCHLM phân tích riêng so sánh với kiểu gen C/C làm tham chiếu Mô hình trội: Trong mô hình này, nhóm trẻ mang alen T (gồm kiểu gen T/C T/T giả định có ảnh hưởng làm tăng nguy RLCHLM so sánh với nhóm trẻ không mang alen T (kiểu gen C/C) Mô hình lặn: Trong mô hình trẻ có kiểu gen đồng hợp tử T/T coi có nguy RLCHLM, kiểu gen khác T/C C/C ảnh hưởng RLCHLM gộp chung vào nhóm 16 Mô hình siêu trội: Trong mô hình kiểu gen T/C coi có ảnh hưởng đối v ới RLCHLM kiểu gen T/T C/C ảnh hưởng gộp chung vào nhóm Mô hình cộng hợp: Trong mô hình này, alen T giả định có ảnh hưởng RLCHLM mức độ ảnh hưởng tăng theo số lượng alen T có kiểu gen (kiểu gen T/T có ảnh hưởng mạnh kiểu gen T/C) Kết phân thích đơn biến ảnh hưởng gen đa hình APOE rs7412 nguy mắc bệnh RLCHLM cho thấy liên quan SNP với RLCHLM đối tượng nghiên cứu tất mô hình giả định Sau phân tích đa biến loại bỏ yếu tố gây nhi ễu nh tu ổi, gi ới tính, vùng BMI, không tìm thấy mối liên quan có ý nghĩa thống kê ( P > 0,05) đa hình APOE rs7412 với RLCHLM Bảng 3.10 Các mô hình phân tích mối liên quan đa hình APOE rs7412 với RLCHLM Mô hình Đồng Kiểu gen OR (95% CI) C/C 1,00 1,18 T/C trội T/T Trội C/C (0,82 – 14,87) 1,00 T/C 1,34 T/T (0,79 – 2,25) T/C Lặn C/C T/T C/C Siêu trội (0,68 – 2,05) 3,50 T/T T/C OR*(95% CI) P 0,564 0,090 0,276 1,00 1,19 (0,66 – 2,14) 3,79 (0,85 – 16,96) 1,00 1,37 (0,79 – 2,37) 1,00 1,00 3,41 3,70 (0,81 – 14,48) 0,096 (0,83 – 16,53) 1,00 1,00 1,14 1,16 (0,66 – 1,99) 0,633 17 (0,65 – 2,07) P* 0,558 AIC BIC 575,6 588,0 575,7 583,9 574,0 582,2 576,6 584,9 0,081 0,261 0,086 0,624 Cộng hợp với 1,40 1,43 0,140 alen T (0,90 – 2,18) (0,90 – 2,28) Giá trị P thu từ phân tích hồi quy đa biến logistic regression 0,129 574,7 582,9 OR*, P* giá trị điều chỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI 5.2.2 Mối liên quan đa hình APOE rs7412 với rối loạn thành phần lipid máu Bảng 3.11 thể kết phân tích mối liên quan đa hình APOE rs7412 với rối loạn TG đối tượng nghiên cứu mô hình giả định Chúng tìm th m ối liên quan mô hình đồng trội, mô hình lặn mô hình cộng hợp Bảng 3.11 Các mô hình phân tích mối liên quan đa hình APOE rs7412 TG 18 với rối loạn Mô hình Đồng trội Kiểu gen C/C T/C T/T Trội C/C T/C T/T C/C Lặn T/C T/T C/C Siêu trội T/T T/C OR (95% CI) P 1,00 1,25 0,458 (0,69 – 2,27) 5,33 0,024 (1,25 – 22,76) 1,00 1,50 0,146 (0,87 – 2,60) OR*(95% CI) 1,00 1,24 (0,66 – 2,33) 6,36 (1,39 – 29,22) 1,00 1,53 (0,85 – 2,73) 1,00 1,00 5,15 6,18 0,026 (1,21 – 21,92) (1,35 – 28,28) 1,00 1,00 1,20 1,19 0,549 (0,66 – 2,17) 1,60 (0,63 – 2,22) 1,65 0,047 (1,01 – 2,53) (1,01 – 2,68) Giá trị P thu từ phân tích hồi quy đa biến logistic regression Cộng hợp với alen T P* 0,504 AIC BIC 507,6 519,9 509,2 517,4 506,1 514,3 510,8 519,1 507,4 515,6 0,017 0,153 0,019 0,595 0,045 OR*, P* giá trị điều chỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI Trong mô hình đồng trội, có kiểu gen T/T có m ối liên quan v ới r ối lo ạn TG, làm t ăng nguy rối loạn TG lên 5,33 lần (95% CI: 1,25 – 22,76) phân tích đơn biến tăng 6,36 lần (95% CI: 1,39 – 29,22) phân tích đa biến Mối liên quan có ý ngh ĩa v ới giá tr ị P = 0,024 P* = 0,017 Xét mô hình lặn, P = 0,026 P* = 0,019 cho thấy mối liên quan có ý nghĩa kiểu gen T/T rối loạn TG Cụ thể, kiểu gen làm tăng nguy rối loạn lên 5,15 lần (95% CI: 1,21 – 21,92) 6,18 lần (95% CI: 1,35 – 28,28) trước sau điều chỉnh Ở mô hình cộng hợp, với alen T giả định có liên quan tới RLCHLM Kết cho thấy, với alen T kiểu gen, nguy rối loạn TG bị tăng lên 1,60 lần (95% CI: 1,01 – 2,53) 1,65 lần (95% CI: 1,01 – 2,68) trước sau điều chỉnh Sự ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê với P = 0,047 P* = 0,045 19 Trong mô hình này, mô hình cộng hợp chọn mô hình phù hợp với giá trị AIC, BIC nhỏ mức dao động 95% CI thấp Chúng không tìm thấy mối liên quan có ý nghĩa mô hình trội siêu trội Khi phân tích ảnh hưởng đa hình APOE rs7412 với rối loạn cholesterol, LDL-C HDL-C không cho kết có ý nghĩa thống kê ( P > 0,05) Kết phân tích tham khảo bảng 8, 9, 11 (phụ lục) 5.3 Mối liên quan kết hợp hai SNP rs429358 rs7412 v ới RLCHLM r ối lo ạn thành phần lipid máu Để tìm hiểu thêm mối liên quan hai SNP rs429358 rs7412 c gen APOE với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu, ti ến hành phân tích ảnh h ưởng c kết hợp kiểu gen haplotype Kết số liên quan phân tích v ới s ự r ối loạn LDL-C máu đối tượng nghiên cứu, thể bảng 3.12 Khi phân tích kết hợp theo kiểu gen, kết qu ả cho th có m ối liên quan có ý ngh ĩa ( P = 0,040; P* = 0,034) cá thể mang alen ε4 với tăng LDL-C máu Cụ thể, alen ε4 làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,55 (95% CI: 1,04 – 6,24) lần phân tích đ ơn bi ến t ăng 2,68 l ần (95% CI: 1,08 – 6,65) phân tích đa biến Điều cho th alen ε4 alen nguy RLCHLM Có thể giải thích apo E4 có lực cao v ới th ụ th ể b ề m ặt LDL VLDL đ ồng thời làm tăng hấp thu chất béo vào máu, dẫn đến làm tăng lượng LDL-C [70] Hai SNP rs429358 rs7412 gen APOE nghiên cứu có vị trí gần NST, chúng cách 46 acid amin, chúng có liên k ết ch ặt ch ẽ v ới v ới D’ = 0,9913 ( P = 0,0048) Các tổ hợp haplotype tạo thành hai SNP bao g ồm T-C, T-T C-C v ới t ần số tương ứng 0,8267, 0,0889 0,0844 Khi tiến hành tìm hi ểu v ề m ối liên quan gi ữa haplotype với RLCHLM, phát rằng, haplotype C-C xu ất v ới tần số thấp có liên quan tới rối loạn LDL-C máu S ự xu ất hi ện c haplotype làm t ăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,58 lần (95% CI: 1,22 – 5,47; P = 0,014) phân tích đơn biến tăng 2,64 lần (95% CI: 1,23 – 5,65; P = 0,013) sau điều chỉnh số yếu tố gây nhiễu Bảng 3.12 Mối liên quan kết hợp hai SNP rs429358 rs7412 với rối loạn LDL-C OR (95% CI) Kết hợp theo kiểu gen ε3/ε3 ε2 carrier 1,00 0,90 (ε2/ε2, ε2/ε3) ε4 carrier (0,25 – 3,17) 2,55 (ε3/ε4, ε4/ε4) (1,04 – 6,24) 20 P 0,864 0,040 OR*(95% CI) 1,00 0,90 (0,25 – 3,22) 2,68 (1,08 – 6,65) P* 0,875 0,034 3,08 ε2/ε4 (0,35 – 27,17) rs429358 T rs7412 C T T C C Kết hợp theo haplotype 1,00 0,89 (0,32 – 2,43) 2,58 (1,22 – 5,47) C T OR*, P* giá trị điều chỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI 0,310 0,820 0,014 - 4,00 (0,43 – 37,33) 1,00 0,91 (0,33 – 2,49) 2,64 (1,23 – 5,65) - 0,223 0,850 0,013 - Các phân tích với RLCHLM thành phần lipid máu khác (TG, cholesterol HDL-C) không tìm thấy liên quan có ý nghĩa thống kê nên không đ ược trình bày lu ận v ăn, có th ể tham khảo bảng 12, 13, 14, 15 (phụ lục) Như vậy, nghiên cứu tìm m ột s ố m ối liên quan nh ất đ ịnh gi ữa đa hình APOE rs429358 rs7412 với RLCHLM tr ẻ em K ết qu ả nghiên c ứu ch ỉ r ằng: SNP rs429358 có liên quan với rối lo ạn LDL-C; SNP rs7412 có liên quan v ới r ối lo ạn TG; alen ε4 haplotype C-C có liên quan t ới rối lo ạn LDL-C tr ẻ em ti ểu h ọc m ột s ố t ỉnh mi ền B ắc Vi ệt Nam Các mối liên quan đ ều có ý ngh ĩa c ả phân tích đ ơn bi ến phân tích đa bi ến (đi ều ch ỉnh theo tuổi, giới, vùng BMI) Đi ều cho th ấy, APOE có liên quan độc lập với RLCHLM, không phụ thuộc vào BMI Trong trình thực đề tài tham khảo nhi ều công trình khác th ế gi ới, nhận thấy nghiên cứu có số điểm mạnh so với nghiên c ứu khác Bên c ạnh vi ệc phân tích mối liên quan đa hình APOE với RLCHLPM, phân tích mối liên quan v ới s ự rối loạn thành phần lipid máu Để tìm hi ểu đ ược sâu h ơn v ề m ối liên quan này, nghiên cứu thực hai SNP rs429358 rs7412 gen APOE Kết phân tích SNP kết hợp hai SNP giúp tìm mối liên quan có ý ngh ĩa v ới RLCHLM trẻ em tiểu học Đặc biệt mối liên quan RLCHLM haplotype, ều mà nhi ều nghiên c ứu giới chưa phân tích Tuy nhiên, quy mô luận văn thạc sỹ, nghiên c ứu v ẫn nhi ều h ạn ch ế C ỡ mẫu nghiên cứu nhỏ chưa loại trừ ảnh hưởng đ ặc ểm giai đo ạn s sinh, thói quen ăn uống hay hoạt động thể lực mối liên quan đa hình APOE rs429358 rs7412 tới RLCHLM trẻ em tiểu học Đối tượng tham gia nghiên c ứu ch ưa đ ược xét nghi ệm nồng độ hormone liên quan đến chuyển hóa lipid máu xét nghi ệm r ất t ốn khó th ực Tuy nhiên, hạn chế chấp nhận hormone có ảnh h ưởng t ới RLCHLM Ngoài ra, mô hình hình tiên lượng RLCHLM tốt cho tr ẻ em ti ểu h ọc m ột s ố t ỉnh mi ền B ắc v ẫn 21 chưa xây dựng Vì vậy, tương lai cần tiếp tục có nghiên c ứu m r ộng sâu PHẦN III KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Tần số kiểu gen alen APOE 450 đối tượng nghiên cứu là: ε2/ε2 (1,8%), ε2/ε3 (12,7%), ε2/ε4 (1,5%), ε3/ε3 (69,3%), ε3/ε4 (14,0%), ε4/ε4 (0,7%) ε2 (8,9%), ε3 (82,7%), ε4 (8,4%) - Tần số kiểu gen alen SNP rs429358 tuân theo quy luật Hardy-Weinberg nhóm bệnh, nhóm chứng toàn mẫu Trong đó, tần số kiểu gen alen SNP rs7412 có nhóm chứng tuân theo quy luật Đặc điểm nồng độ số lipid máu theo kiểu gen đa hình APOE: - Kiểu gen C/C đa hình SNP rs429358 có nồng độ LDL-C cao nh ất HDL-C th ấp với P < 0,05 - Kiểu gen C/C đa hình SNP rs7412 có nồng độ LDL-C cholesterol cao nh ất; ki ểu gen T/T có nồng độ TG cao với P < 0,05 - Với đa hình APOE hai SNP rs429358 rs7412, kiểu gen ε4/ε4 có nồng độ TG, cholesterol, LDL-C cao nồng độ HDL-C thấp (P < 0,05) Phân tích đơn biến đa biến mối liên quan c đa hình APOE với RLCHLM rối loạn thành phần lipid máu cho thấy: - SNP rs429358 có liên quan tới rối loạn LDL-C: Theo mô hình c ộng h ợp, m ỗi alen C s ẽ làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,61 lần (P = 0,012) 2,67 lần (P = 0,011) trước sau điều chỉnh - SNP rs7412 có liên quan tới rối loạn TG: Theo m ô hình cộng hợp, với alen T kiểu gen, nguy rối loạn TG bị tăng lên 1,60 lần (P = 0,047) 1,65 lần (P = 0,045) trước sau điều chỉnh - Alen ε4 làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,55 lần ( P = 0,040) phân tích đơn biến 2,68 lần (P = 0,034) phân tích đa biến - Haplotype C-C làm tăng nguy rối loạn LDL-C lên 2,58 lần ( P = 0,014) phân tích đơn biến 2,64 lần (P = 0,013) phân tích đa biến Kiến nghị Từ kết nghiên cứu, đưa số kiến nghị sau: 22 - Cần tiến hành nghiên cứu sâu tìm hiểu s ự tương tác đa hình APOE SNP rs429538 rs7412 với SNP khác gen APOE với SNP gen khác - Cần thực nghiên cứu mở rộng với cỡ mẫu lớn nhi ều độ tu ổi khác nhau, xác định ảnh hưởng tương tác nhiều SNP RLCHLM - Cần thực nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng yếu tố môi trường kết hợp với kiểu gen đến RLCHLM, từ xây dựng mô hình tiên lượng sớm bệnh RLCHLM 23 [...]... gen ε3/ε4 và ε4/ε4 có nồng độ cholesterol và LDL-C cao nhất, tương đồng với các nghiên cứu khác [40, 70] 5 Mối liên quan của đa hình APOE với RLCHLM ở trẻ em tiểu học 5.1 Mối liên quan của đa hình APOE rs429358 với RLCHLM và rối loạn các thành phần của lipid máu 5.1.1 Mối liên quan của đa hình APOE rs429358 với RLCHLM Chúng tôi tiến hành phân tích mối liên quan gi ữa ki ểu gen của đa hình APOE rs429358... khảo ở bảng 8, 9, 11 (phụ lục) 5.3 Mối liên quan của sự kết hợp hai SNP rs429358 và rs7412 v ới RLCHLM và r ối lo ạn các thành phần của lipid máu Để tìm hiểu thêm về mối liên quan giữa hai SNP rs429358 và rs7412 c ủa gen APOE với RLCHLM và sự rối loạn ở từng thành phần lipid máu, chúng tôi ti ến hành phân tích ảnh h ưởng c ủa sự kết hợp các kiểu gen và haplotype Kết quả đã chỉ ra một số liên quan khi... vùng và BMI 5.2.2 Mối liên quan của đa hình APOE rs7412 với rối loạn các thành phần của lipid máu Bảng 3.11 thể hiện kết quả phân tích mối liên quan giữa đa hình APOE rs7412 với rối loạn TG trên đối tượng nghiên cứu trong các mô hình giả định Chúng tôi đã tìm th ấy m ối liên quan trong mô hình đồng trội, mô hình lặn và mô hình cộng hợp Bảng 3.11 Các mô hình phân tích mối liên quan của đa hình APOE. .. rối loạn của từng thành phần lipid máu Để tìm hi ểu đ ược sâu h ơn v ề các m ối liên quan này, nghiên cứu được thực hiện trên cả hai SNP rs429358 và rs7412 của gen APOE Kết quả phân tích ở từng SNP và cả sự kết hợp của hai SNP đã giúp tìm ra được những mối liên quan có ý ngh ĩa v ới RLCHLM ở trẻ em tiểu học Đặc biệt là mối liên quan giữa RLCHLM và haplotype, đi ều mà nhi ều nghiên c ứu trên thế giới vẫn... biến và đa biến mối liên quan c ủa đa hình APOE với RLCHLM và rối loạn từng thành phần lipid máu cho thấy: - SNP rs429358 có liên quan tới rối loạn LDL-C: Theo mô hình c ộng h ợp, m ỗi alen C s ẽ làm tăng nguy cơ rối loạn LDL-C lên 2,61 lần (P = 0,012) và 2,67 lần (P = 0,011) trước và sau khi điều chỉnh - SNP rs7412 có liên quan tới rối loạn TG: Theo m ô hình cộng hợp, với mỗi alen T trong kiểu gen, ... gen và alen giữa hai nhóm nghiên cứu với P = 0,376 4 Nồng độ các chỉ số lipid máu theo kiểu gen của đa hình APOE 11 Nồng độ các chỉ số lipid máu theo kiểu gen của đa hình APOE tại từng SNP 4.1 Chúng tôi tiến hành phân tích nồng độ các chỉ số lipid máu bao g ồm TG, cholesterol, HDL-C và LDL-C trong các kiểu gen khác nhau của từng SNP rs429358 và rs7412, k ết qu ả th ể hi ện ở b ảng 3.5 và 3.6 Bảng 3.5... mô một luận văn thạc sỹ, nghiên c ứu này v ẫn còn nhi ều h ạn ch ế C ỡ mẫu của nghiên cứu vẫn còn nhỏ và chưa loại trừ được ảnh hưởng của các đ ặc đi ểm giai đo ạn s ơ sinh, thói quen ăn uống hay hoạt động thể lực đối với mối liên quan của đa hình APOE rs429358 và rs7412 tới RLCHLM ở trẻ em tiểu học Đối tượng tham gia nghiên c ứu ch ưa đ ược xét nghi ệm nồng độ các hormone liên quan đến chuyển hóa lipid. .. tuổi, giới, vùng và BMI 5.1.2 Mối liên quan của đa hình APOE rs429358 với rối loạn các thành phần của lipid máu Bảng 3.9 thể hiện kết quả phân tích mối liên quan c ủa đa hình APOE rs429358 với rối loạn LDL-C trên đối tượng nghiên cứu trong các mô hình gi ả định K ết qu ả, chúng tôi đã tìm th ấy m ối liên quan trong hầu hết các mô hình Ở mô hình đồng trội, kiểu gen T/C làm tăng nguy cơ rối lo ạn LDL-C... ối liên quan nh ất đ ịnh gi ữa đa hình APOE rs429358 và rs7412 với RLCHLM ở tr ẻ em K ết qu ả nghiên c ứu ch ỉ ra r ằng: SNP rs429358 có liên quan với rối lo ạn LDL-C; SNP rs7412 có liên quan v ới r ối lo ạn TG; alen ε4 và haplotype C-C có liên quan t ới rối lo ạn LDL-C ở tr ẻ em ti ểu h ọc m ột s ố t ỉnh mi ền B ắc Vi ệt Nam Các mối liên quan này đ ều có ý ngh ĩa c ả khi phân tích đ ơn bi ến và phân... vùng và BMI Các phân tích ảnh hưởng của đa hình APOE rs429358 với rối loạn TG, cholesterol và HDLC đều không cho kết quả có ý nghĩa thống kê ( P > 0,05) Kết quả phân tích có thể tham khảo ở bảng 6, 7, 10 (phụ lục) 5.2 Mối liên quan của đa hình APOE rs7412 với RLCHLM và rối lo ạn các thành ph ần c ủa lipid máu 5.2.1 Mối liên quan của đa hình APOE rs7412 với RLCHLM Bảng 3.10 thể hiện kết quả phân tích mối