Thiết lập qui trình phân lập tế bào và nhuộm huỳnh quang từ bệnh phẩm u nguyên bào thần kinh đệm

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI (TỒN VĂN) ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG THIẾT LẬP QUI TRÌNH PHÂN LẬP TẾ BÀO VÀ NHUỘM HUỲNH QUANG TỪ BỆNH PHẨM U NGUYÊN BÀO THẦN KINH ĐỆM Mã số: Chủ nhiệm đề tài: Tiến sĩ Huỳnh Thanh Tuấn BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI (TỒN VĂN) ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG THIẾT LẬP QUI TRÌNH PHÂN LẬP TẾ BÀO VÀ NHUỘM HUỲNH QUANG TỪ BỆNH PHẨM U NGUYÊN BÀO THẦN KINH ĐỆM Mã số: Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, tháng 06 năm 2019 DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU Chức danh STT Họ tên trình thực Đơn vị công tác nhiệm vụ Trung tâm Y Sinh học Phân TS Huỳnh Thanh Tuấn Chủ nhiệm đề tài tử - Đại học Y Dược TP.HCM MỤC LỤC DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC HÌNH iii BÁO CÁO THỐNG KÊ iv MỞ ĐẦU Chương I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU Chương II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu địa điểm 1.1 Đối tượng vật liệu 1.2 Hóa chất Phương pháp thí nghiệm 2.1 Thu mô từ bệnh nhân 2.2 Nuôi cấy tế bào 2.3 Nhuộm miễn dịch 2.4 Phân tích liệu Chương III KẾT QUẢ Phân lập nuôi cấy sơ cấp Nuôi cấy thứ cấp Nhuộm miễn dịch huỳnh quang Chương IV Chương V THẢO LUẬN KẾT LUẬN 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO 11 i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT UNBTKĐ : U nguyên bào thần kinh đệm MDHH : Miễn dịch huỳnh quang EGFR: Epidermal Growth Factor Receptor PTEN: Phosphatase and Tensin homolog IDH1 : Isocitrate dehydrogenase ii DANH MỤC HÌNH Hình 1: Kết ni cấy sơ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u Tế bào quan sát sau ngày, ngày, ngày, ngày, 14 ngày, 21 ngày Bar = 50 µM Hình 2: Kết ni cấy thứ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49(X20) Tế bào đươc quan sát sau ngày, ngày, 10 ngày, bar = 50 µM Hình 3: Kết nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho marker Neurofilaments Astrocyte ngày thứ 10 (40X) Hình 4: Kết nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho marker Neurofilaments Astrocyte iii CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc ., ngày tháng năm 200 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: THIẾT LẬP QUI TRÌNH PHÂN LẬP TẾ BÀO VÀ NHUỘM HUỲNH QUANG TỪ BỆNH PHẨM U NGUYÊN BÀO THẦN KINH ĐỆM Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Huỳnh Thanh Tuấn Ngày, tháng, năm sinh: 1978 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Tiến sĩ Chức danh khoa học: Không Chức vụ: Giảng viên Điện thoại: Tổ chức: (+84-28) 3855 8411 Nhà riêng: Không Mobile: 0938489640 Fax: Không E-mail: drtuan@ump.edu.vn Tên tổ chức công tác: Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Địa tổ chức: 217 Hồng Bàng, phường 11, quận 5, TP.HCM Địa nhà riêng: Tổ chức chủ trì nhiệm vụ(1): Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Điện thoại: (+84-28) 3855 8411 Fax: (+84-28) 3855 2304 E-mail: daihocyduoc@ump.edu.vn Website: http://yds.edu.vn/yds2/ Tên Khoa Trung tâm, đơn vị - nơi quản lý trực tiếp cá nhân làm chủ nhiệm đề tài iv Địa chỉ: 217 Hồng Bàng, phường 11, quận 5, TP.HCM Tên quan chủ quản đề tài: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 - Được gia hạn (nếu có): Khơng Từ tháng… năm… đến tháng… năm… Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học nhà trường: tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Thực tế đạt Theo kế hoạch Ghi Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Số đề nghị (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) toán) 5 năm 2018 đến tháng năm 2019 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Thực tế đạt Theo kế hoạch Số Nội dung TT khoản chi Tổng NSKH Nguồn Tổng NSKH khác Trả công lao động (khoa học, phổ 5 v Nguồn khác 5 thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 5 - Lý thay đổi (nếu có): Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt Thuyết minh yếu Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia tham gia chủ yếu đạt Thuyết minh thực Huỳnh Thanh Huỳnh Thanh Chủ nhiệm đề Tuấn Tuấn tài - Lý thay đổi ( có): vi Ghi chú* Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham số đoàn, số lượng người tham gia ) gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, địa điểm ) Ghi chú* kinh phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục .của đề cương, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Thời gian Số TT Các nội dung, công việc (Bắt đầu, kết thúc Người, chủ yếu - tháng … năm) quan (Các mốc đánh giá chủ yếu) Theo kế Thực tế đạt hoạch vii thực Thu mô bướu 6-9 /2016 6-9 /2017 Phân lập tế bào 9-12 /2016 9-12 /2017 Nhuộm miễn dịch huỳnh quang 1-4 /2017 1-4 /2018 Viết báo cáo tiến hành 4-6 /2017 4-6 /2018 nghiệm thu đề tài - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng Theo kế Thực tế hoạch đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Yêu cầu khoa học Số TT Tên sản phẩm cần đạt Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: viii Ghi Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học Số lượng, nơi cần đạt công bố Theo Thực tế (Tạp chí, nhà kế hoạch đạt xuất bản) - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số Cấp đào tạo, Chuyên TT ngành đào tạo Thạc sỹ Số lượng Theo kế hoạch Ghi Thực tế đạt (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu cơng nghiệp: Số Tên sản phẩm TT đăng ký Kết Ghi Theo Thực tế (Thời gian kết kế hoạch đạt thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số Tên kết TT ứng dụng Thời gian ix Địa điểm Kết (Ghi rõ tên, địa sơ nơi ứng dụng) 2 Đánh giá hiệu đề tài mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ cơng nghệ so với khu vực giới…) b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra đề tài: Số Nội dung TT I Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Lần … II Báo cáo giám định kỳ Lần … Chủ nhiệm đề tài Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký) (Họ tên, chữ ký đóng dấu) x MỞ ĐẦU U nguyên bào thần kinh đệm (UNBTKĐ) u nguyên phát thường gặp hệ thần kinh trung ương, chiếm 12-15% loại u nội sọ 50-60% u tế bào thần kinh đệm Mỗi năm có khoảng 50.000 trường hợp chẩn đốn mới, khoảng 60% nam giới Độ tuổi trung bình bệnh nhân chẩn đoán u nguyên bào thần kinh đệm 64 Hiện với tiến phẫu thuật, xạ trị hóa trị liệu đặc biệt liệu pháp điều trị đích, U nguyên bào thần kinh đệm u có tiên lượng xấu u hệ thần kinh trung ương Tỉ lệ sống sau năm năm 13,7% 4,7% Ở Việt Nam, chưa số liệu dịch tễ học u não cộng đồng, nhiên tỉ lệ bào ác tính thực hành lâm sàng cao Theo nghiên cứu tác giả Trần Minh Thông, thời gian 7,5 năm (1/2000-7/2007) bệnh viện Chợ Rẫy có 1187 ca u bào chẩn đốn phẫu thuật, u bào độ ác cao (u bào thoái sản, u nguyên bào thần kinh đệm) chiếm 56% Hiện nghiên cứu u nguyên bào thần kinh đệm Việt Nam chưa phổ biến phần việc chuẩn hóa q trình phân lập tế bào bướu từ mẫu mơ bệnh nhân Vì nghiên cứu chúng tơi thiết lập qui trình phân lập nhuộm miễn dịch huỳnh quang tế bào bướu môi trường nuôi cấy để tạo tiền đề cho nghiên cứu u nguyên bào thần kinh đệm sau Chương I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU U nguyên bào thần kinh đệm khối u não ác tính nguyên phát phổ biến nhất, bao gồm 16% tất khối u thần kinh trung ương hệ thần kinh trung ương (13) Tỷ lệ mắc trung bình điều chỉnh theo tuổi 3,2 100.000 dân (7,8) Mặc dù UNBTKĐ xảy não, chúng xuất thân não, tiểu não tủy sống Sáu mươi mốt phần trăm tất u thần kinh đệm nguyên phát xảy bốn thùy não: trán (25%), thái dương (20%), thùy đỉnh (13%) chẩm (3%) theo Hiệp hội điều dưỡng thần kinh học Mỹ năm 2014 Ban đầu, UNBTKĐ cho bắt nguồn từ tế bào thần kinh đệm; nhiên, chứng cho thấy chúng phát sinh từ nhiều loại tế bào có đặc tính giống tế bào gốc thần kinh Các tế bào nhiều giai đoạn biệt hóa từ tế bào gốc đến tế bào thần kinh đến tế bào thần kinh đệm, với thay đổi kiểu hình xác định, phần lớn, thay đổi phân tử đường truyền tín hiệu thay khác biệt loại nguồn gốc tế bào(10) Theo kết từ dự án Atlas Genome Atlas (9), 600 gen giải trình tự từ 200 mẫu khối u người, cho thấy hồ sơ di truyền phức tạp UNBTKĐ thiết lập ba lõi Con đường truyền tín hiệu thường kích hoạt p53, đường truyền tín hiệu tyrosine kinase / Ras / phosphoinositide 3-kinase Phần lớn UNBTKĐ nguyên phát thứ phát có thay đổi đường này, dẫn đến tăng sinh tế bào khơng kiểm sốt tăng cường sống tế bào, đồng thời cho phép tế bào khối u thoát khỏi trạm kiểm soát chu kỳ tế bào, lão hóa apoptosis (4) Sự thay đổi di truyền điển hình cho UNBTKĐ nguyên phát biểu yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGFR), đột biến gen tương đồng phosphate tenin (PTEN) nhiễm sắc thể 10q Trong UNBTKĐ thứ cấp, đột biến isocitrate dehydrogenase (IDH1), đột biến p53 nhiễm sắc thể 19q thường thấy (1,14,15) Ngoài ra, bốn phân nhóm UNBTKĐ xác định, loại có mơ hình tiến triển bệnh kết sống khác Để phân tích chi tiết lộ trình phân nhóm tín hiệu UNBTKĐ, độc giả tham khảo cơng trình ngun cứu Brennan cộng sự, 2013; Verhaak cộng sự, 2010; Wang cộng sự, 2015 Với quy trình trị liệu cắt bỏ khồi u kết hợp với điều trị đa phương thức, khoảng 70% bệnh nhân UNBTKĐ có tiến triển bệnh vịng năm chẩn đốn(12), với 5% bệnh nhân sống sót sau năm năm sau chẩn đốn(7) Cắt bỏ khối u lựa chọn cho số bệnh nhân, phẫu thuật cắt bỏ làm giảm bớt hiệu ứng triệu chứng hàng loạt, chẳng hạn co giật, nói thiếu hụt vận động, thường thấy tái phát Phẫu thuật lặp lại yêu cầu để xác nhận chẩn đoán tái phát khối u so với giả mạc hoại tử phóng xạ cung cấp mô để xét nghiệm phân tử để xác định tác nhân mục tiêu tiềm (3) Ý kiến thay đổi liệu phẫu thuật lặp lại có tăng cường hệ điều hành hay không Một số chứng tồn mức độ cắt bỏ lớn tái phát có liên quan đến khả sống sót cải thiện (2,5); nhiên, nghiên cứu khác khơng tìm thấy lợi ích tuyệt đối mặt sinh tồn (3), tính thấm phù mạch, cải thiện oxy hóa giảm hoại tử phóng xạ dùng RT (6) Tuy nhiên, gây kiện có khả đe dọa đến tính mạng, xuất huyết, đông máu thủng ruột (11) Chương II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu địa điểm Nghiên cứu thực Trung tâm Sinh học phân tử Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh 1.1 Đối tượng vật liệu Dòng tế bào ung thư vú MCF-7 MDA-MB-231 quà tặng từ đối tác nước ngồi phịng thí nghiệm 1.2 Hóa chất Các kháng thể sử dụng cho miễn dịch huỳnh quang: Neurofilaments ( độ pha lỗng 1/100, Cơng nghệ sinh học Santa Cruz), Astrocyte (độ pha lỗng 1: 100, Cơng nghệ sinh học Santa Cruz), kháng thể thứ cấp IgG Alexa (độ pha loãng 1: 2000, Invitrogen) Phương pháp thí nghiệm 2.1 Thu mơ từ bệnh nhân Mẫu mơ thu từ khối u bệnh nhân phương pháp phẫu thuật trữ môi trường vận chuyển đưa phịng thí nghiệm 2.2 Ni cấy tế bào Phân lập nuôi cấy tế bào: Trong nghiên cứu tế bào UNBTK sinh thiết từ khối mô nuôi môi trường DMEM bổ sung 10% huyết thai bò (FBS), 1% penicillin streptomycin Mẫu khối u nghiền biện pháp học (bầm nhuyễn dao mổ) hóa học (ủ dung dịch Trypsin/EDTA 0.5% 20 phút, 37oC) giúp tách mảng tế thành bào đơn cuối lọc qua màng lọc 40 µm để loại bỏ mảng tế bào lớn Ly tâm dịch huyền phù tế bào 1200 rpm phút, loại bỏ dịch thu sinh khối tế bào Huyền phù tế bào môi trường nuôi cấy bổ sung 10% huyết thai bò (FBS), 1% penicillin streptomycin nuôi ở 370C, 5% CO2 Sau tế bào mọc ổn định tiến hành cấy chuyền tiến hành thí nghiệp tế bào P3 2.3 Nhuộm miễn dịch Các tế bào cấy slide tám buồng (3 x 104 tế bào / giếng) Sau xử lý, slide rửa với 1x PBS, cố định 4% formaldehyd phút, đtăng tinh thấm màng tế bào 0,01% Triton X-100 37oC 30 phút bị khóa huyết 5% PBS phòng nhiệt độ Các tế bào ủ với Neurofilaments (1: 100) nhiệt độ phòng rửa lần với 1x PBS Sau chúng ủ với Astrocyte (1: 100) 4oC qua đêm Các slide rửa lần PBS nhuộm với kháng thể phát huỳnh quang nhiệt độ phòng Nhân tế bào nhuộm với DAPI 2.4 Phân tích liệu Tất liệu trình bày dạng trung bình ± độ lệch chuẩn giá trị trung bình (SE) ba lần lặp lại Các tính tốn thống kê thực ANOVA hai chiều phần mềm vẽ biểu đồ liệu GraphPad Prism Holm-testídák sử dụng để phân tích khác biệt nhóm Chương III KẾT QUẢ Phân lập nuôi cấy sơ cấp Khoảng 2.8x108 tế bào thu nhận ngày Ở ngày thứ sau phân lập có nhiều tế bào chết xác tế bào môi trường Sau nhiều lần thay mơi trường đến ngày thứ tế bào bám vá phát triển tốt, mơi trường khơng cịn mảnh vụn mơ Theo dõi tiếp tục đến ngày 14 tế bào khỏe cấy chuyền (Hình 1) Hình 1: Kết nuôi cấy sơ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u Tế bào quan sát sau ngày, ngày, ngày, ngày, 14 ngày, 21 ngày Bar = 50 µM Ni cấy thứ cấp Sau cấy chuyền tế bào phát triển tốt, sau 10 ngày cấy chuyền tế bào có hình dạng tế bào thần kinh đệm bao phủ 60% bề mặt nuôi cấy, tiến hành nhuộm miễn dịch huỳnh quang (Hình 2) D5 D3 D10 Hình 2: Kết ni cấy thứ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49(X20) Tế bào đươc quan sát sau ngày, ngày, 10 ngày, bar = 50 µM Nhuộm miễn dịch huỳnh quang Sau cấy chuyền tế bào phát triển ổn định đến ngày thứ 10 tế bào tiến hành nhuộm miễn dịch huỳnh quang với marker cho tế bào thần kinh đệm Neurofilaments Astrocyte để xác nhận khả phân lập thành công tế bào thần kinh đệm Kết nhuộm cho thấy tế bào điều biểu cao marker cho tế bào thần kinh đệm DAPI Neurofilaments Astrocyte Merge Hình 3: Kết nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho marker Neurofilaments Astrocyte ngày thứ 10 (40X) Tế bào tiếp tục trùy cấy chuyền tới ngày thứ 20 để kiểm tra khả sống sót tế bào thần kinh đệm Kết nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho thấy biểu cao protein Neurofilaments Astrocyte, chứng tỏ tế bào thần kinh đệm phát triển tốt DAPI Neurofilaments Astrocyte Merge Hình 4: Kết nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho marker Neurofilaments Astrocyte Chương IV THẢO LUẬN Thuật ngữ U nguyên bào thần kinh đệm giới thiệu Cushing vào nửa sau kỷ XIX, ca phẫu thuật bệnh nhân bị loại khối u tiến hành Vienna vào năm 1904 UNBTKĐ khối u nguyên phát não, bao gồm nhóm khối u khơng đồng mặt di truyền kiểu hình 90% trường hợp đa dạng glioblastoma phát triển de novo (glioblastoma nguyên phát) từ tế bào thần kinh đệm bình thường phương pháp khối u đa nhân 10% u thần kinh đệm lại trường hợp u thần kinh thứ phát, phát triển thông qua tiến triển từ khối u thấp (u tế bào hình khuếch tán anaplastic), khoảng năm5 năm Bệnh u thần kinh đệm thứ phát chẩn đoán chủ yếu người có độ tuổi trung bình 39 tuổi, phát triển chậm tiên lượng tốt Mặc dù sở di truyền, đường phân tử làm sở cho phát triển u thần kinh đệm thứ phát thứ phát khác nhau, hai loại cho thấy khơng có khác biệt hình thái Nghiên cứu UNBTKĐ cịn bị hạn chế thiếu mơ hình nghiên cứu xác Trong nghiên cứu nhóm tiến hành phân lập tế bào UNBTKĐ từ khối u bệnh nhân nắm phát triển mơ hình nghiên cứu xác cho loại ung thư Tế bào phân lập từ khối u mang đặc điểm bất là: có đặc tính chung UNBTKĐ mang vài đặc tính chuyên biệt đặc trưng cho bệnh nhân Phát triễn mơ hình tế bào phân lập từ khối u giúp tạo tiền đề cho mơ hình y học cá thể, từ giúp ta9ng cao hiệu điều trị kéo dài thời gian sống cho bệnh nhân Với phương pháp quan sát hình thái bên ngồi nhuộm miễn dịch huỳnh quang để xác nhận tồn phát triển tế bào thần kinh đệm phân lập từ khối u chứng tỏ thành công bước đầu đề tài Tuy nhiên cần tiến hành thêm nghiên cứu để xác nhận cách xác tồn tế bào thần kinh đệm phân lập từ khối u bệnh nhân, từ cố thêm tính xác đề tài Tuy nhiên nhiên giới hạn đề tài khơng thời gian để tiến hành thêm thí nghiệm khác Các nghiên cứu kế thừa tiếp sẽ cần thiết giúp hoàn thiện khả hướng tới y học cá thể tương lai Chương V KẾT LUẬN Căn nguyên UNBTKĐ với chế di nghiên cứu chuyên sâu Sự tiến chẩn đoán X quang tạo điều kiện thuận lợi cho phát triển chế độ điều trị thích hợp theo dõi, điều ảnh hưởng trực tiếp đến chất lượng sống bệnh nhân Do vị trí khối u lây lan nhanh chóng nó, cần phải tăng cường cơng việc nghiên cứu dành cho sinh học khối u Với kết nghiên cứu thành công phân lập tế bào thần kinh đệm tử khối u giúp ích nhiều cho nghiên cứu sâu đột biến, đường tính hiệu, chế đáp ứng thuốc loại ung thư từ hỗ trợ nhiều cho việc điều trị tiên lượng UNBTKĐ 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO Alifieris C, Trafalis DT (2015) Glioblastoma multiforme: Pathogenesis and treatment Therapeutics, 152:63–82 Bloch O, Han SJ, Cha S, Sun MZ, Aghi MK, McDermott MW, Parsa AT(2012) Impact of extent of resection for recurrent glioblastoma on overall survival Journal of Neurosurgery, 117:1032–1038 Brandes AA, Bartolotti M, Francheschi E (2013) Second surgery for recurrent glioblastoma: Advantages and pitfalls Expert Review of Anticancer Therapy, 13:583–587 Chen J, McKay RM, Parada LF (2012) Malignant glioma: Lesions from genomics, mouse models, and stem cells Cell, 149:36–47 McGirt MJ, Chaichana KL, Gathinji M, Attenello FJ, Than K, Olivi A, QuiñonesHinojosa AR (2009) Independent association of extent of resection with survival in patients with malignant brain astrocytoma Journal of Neurosurgery, 110:156– 162 Niyazi M, Harter PN, Hattingen E, Rottler M, von Baumgarten L, Proescholdt M, Mittelbronn M (2016) Bevacizumab and radiotherapy for the treatment of glioblastoma: Brothers in arms or unholy alliance? Oncotarget, 7:2313–2328 Ostrom QT, Bauchet L, Davis FG, Deltour I, Fischer JL, Langer CE, BarnholtzSloan JS (2014) The epidemiology of glioma in adults: A “state of the science” review Neuro-Oncology, 16:896–913 Ostrom QT, Gittleman H, Fulop J, Liu M, Blanda R, Kromer C, Barnholtz-Sloan JS (2015) CBTRUS statistical report: Primary brain and central nervous system tumors diagnosed in the United States in 2008–2012 Neuro-Oncology, 17(Suppl 4):iv1–v62 Parsons DW, Jones S, Zhang X, Lin JC, Leary RJ, Angenendt P, Kinzler KW (2008) An integrated genomic analysis of human glioblastoma multiforme Science, 321:1807–1812 10 Phillips HS, Kharbanda S, Chen R, Forrest WF, Soriano RH, Wu TD, Aldape K (2006) Molecular subclasses of high-grade glioma predict prognosis, delineate a pattern of disease progression, and resemble stages in neurogenesis Cancer Cell, 9:157–173 11 Salacz ME, Watson KR, Schomas DA (2011) Glioblastoma: Part I Current state of affairs Missouri Medicine, 108:187–194 12 Stupp R, Hegi ME, Mason WP, van den Bent MJ, Taphoorn MJ, Janzer RC, Mirimanoff RO (2009) Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTCNCIC trial Lancet Oncology, 10:459–466 13 Thakkar JP, Dolecek TA, Horbinski C, Ostrom QT, Lightner DD, Barnholtz-Sloan JS, Villano JL (2014) Epidemiologic and molecular prognostic review of glioblastoma Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention, 23:1985–1996 11 14 Wilson TA, Karajannis MA, Harter DH (2014) Glioblastoma multiforme: State of the art and future therapeutics Surgical Neurology International, 5:64–62 15 Young RM, Jamshidi A, Davis G, Sherman JH (2015) Current trends in the surgical management and treatment of adult glioblastoma Annals of Translational Medicine, 3:121 12 ... HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: THIẾT LẬP QUI TRÌNH PHÂN LẬP TẾ BÀO VÀ NHUỘM HUỲNH QUANG TỪ BỆNH PHẨM U NGUYÊN BÀO THẦN KINH ĐỆM Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Huỳnh Thanh Tuấn Ngày, tháng, năm... biến phần việc chuẩn hóa q trình phân lập tế bào bư? ?u từ m? ?u mơ bệnh nhân Vì nghiên c? ?u chúng tơi thiết lập qui trình phân lập nhuộm miễn dịch huỳnh quang tế bào bư? ?u môi trường nuôi cấy để tạo... TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI (TỒN VĂN) ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG THIẾT LẬP QUI TRÌNH PHÂN LẬP TẾ BÀO VÀ NHUỘM HUỲNH QUANG TỪ BỆNH PHẨM U NGUYÊN BÀO THẦN