Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu lá húng quế ocimum basilicum trên một số loài vi khuẩn gây bệnh đường hô hấp

LÊ LƢƠNG PHƢƠNG NGHI BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH LÊ LƢƠNG PHƢƠNG NGHI QUẢN LÝ VÀ CUNG ỨNG THUỐC NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU LÁ HÚNG QUẾ OCIMUM BASILICUM TRÊN MỘT SỐ LỒI VI KHUẨN GÂY BỆNH ĐƢỜNG HƠ HẤP KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC KHÓA 2013 TPHCM – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH LÊ LƢƠNG PHƢƠNG NGHI NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU LÁ HÚNG QUẾ OCIMUM BASILICUM TRÊN MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN GÂY BỆNH ĐƢỜNG HÔ HẤP Chuyên ngành: Quản lý cung ứng thuốc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC Hƣớng dẫn khoa học: Ths Nguyễn Thanh Tố Nhi TPHCM – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Sinh viên LÊ LƢƠNG PHƢƠNG NGHI LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến tồn Q Thầy Cơ Trường Đại học Nguyễn Tất Thành truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt khoảng thời gian em học Đặc biệt, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Ths Nguyễn Thanh Tố Nhi, người thầy trực tiếp hướng dẫn em suốt q trình làm luận văn, ln giúp đỡ em mặt lý thuyết, lẫn kỹ thực hành dạy truyền đạt cho em kiến thức kinh nghiệm quý báu Em xin cám ơn Bộ mơn Hóa sinh – Độc chất, Bộ mơn Vi sinh - Kí sinh trùng Bộ mơn Dƣợc liệu tạo điều kiện để em hồn thành tốt khóa luận Em xin cám ơn cô Nguyễn Hữu Phƣơng Thảo, Võ Thị Nhàn Bộ mơn Vi sinh - Kí sinh trùng ln nhiệt tình, bảo giúp đỡ, để em học hỏi nhiều kiến thức mới, thu nhiều kinh nghiệm quý giá tạo điều kiện để em hồn thành tốt khóa luận Xin gửi lời cám ơn tới bạn Phạm Ngọc Anh, Nguyễn Thị Ngọc Trâm, Lê Nguyễn Khắc Tùng Cảm ơn người bên cạnh, giúp đỡ, động viên em suốt thời gian qua để em hồn thành tốt khóa luận Cuối xin cám ơn ba mẹ, người thân ln u thương, chăm sóc ln tạo điều kiện để em an tâm học hành thực khóa luận thời gian qua Xin chân thành cảm ơn LÊ LƢƠNG PHƢƠNG NGHI MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC I DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT III DANH MỤC HÌNH IV DANH MỤC BẢNG V ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ HÚNG QUẾ 1.1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Một số nghiên cứu tác dụng khác O.basilicum khả kháng khuẩn 1.1.4 Tình hình nghiên cứu khả kháng vi sinh vật O.basilicum Việt Nam giới 1.1.5 Một số phƣơng pháp chiết tinh dầu 1.2 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN 10 1.2.1 Vi sinh vật gây bệnh tình trạng đề kháng kháng sinh 10 1.2.2 Nguyên nhân gây bệnh đƣờng hô hấp 11 1.3 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT 14 1.3.1 Phƣơng pháp khuếch tán thạch 14 1.3.2 Phƣơng pháp pha loãng 15 CHƢƠNG 2: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 16 2.1.1 Đối tƣợng thử nghiệm 16 2.1.2 Hóa chất 17 2.1.3 Môi trƣờng thử nghiệm 18 2.1.4 Thiết bị dụng cụ 18 i 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.2.1 Phƣơng pháp thu hái xử lý dƣợc liệu 19 2.2.2 Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn 21 2.2.3 Xử lý số liệu thống kê 25 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 HIỆU SUẤT CHIẾT TINH DẦU 26 3.2 HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN 26 3.2.1 Sàng lọc hoạt tính kháng khuẩn 26 3.2.2 Xác định MIC MBC 28 3.3 BÀN LUẬN 33 3.3.1 Hiệu suất chiết tinh dầu 33 3.3.2 Hoạt tính kháng khuẩn 34 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 4.1 KẾT LUẬN 36 4.2 ĐỀ NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1: BẢNG KẾT QUẢ ĐƢỜNG KÍNH VỊNG ỨC CHẾ PHỤ LỤC 2: BẢNG KẾT QUẢ GIÁ TRỊ MIC PHỤ LỤC 3: BẢNG KẾT QUẢ GIÁ TRỊ MIC PHỤ LỤC 4: ĐƢỜNG KÍNH VỊNG ỨC CHẾ VI SINH VẬT PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ MIC ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt BHA BHI CFU DMSO DPPH E coli, EC FTC GAS MBC MHA MHBA MIC MRSA, MR MSSA, MS O.basilicum P.aeruginosa, Pseu S.aureus S pyogenes, Pyo S.pneumoniae, Pneu WHO iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hai loại húng quế Hình 1.2 Cây Húng quế Hình 1.3 Hoa Húng quế Hình 1.4 Cấu trúc hóa học Linalool Hình 1.5 Cấu trúc hóa học Cineole Hình 1.6 Cấu trúc hóa học Estragole Hình 2.1 Húng quế lớn húng quế nhỏ 16 Hình 2.2 Hai loại Húng quế 17 Sơ đồ 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 19 Hình 2.3 Mơ hình chƣng cất lôi 21 Hình 2.4 Bộ chƣng cất tinh dầu 21 Hình 3.1 Kết đƣờng kính vịng ức chế MRSA tinh dầu húng quế nhỏ lớn (LN: nhỏ, LL: Lá lớn) 28 Hình 3.2 Kết đƣờng kính vịng ức chế S.pyogenes tinh dầu húng quế nhỏ lớn (1: lớn, 2: nhỏ) 28 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách vi khuẩn ƣu tiên WHO cho nghiên cứu phát triển kháng sinh [48] 11 Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng 17 Bảng 2.2 Danh sách thiết bị 18 Bảng 2.3 Mức độ kháng vi sinh vật dựa vào đƣờng kính vịng ức chế 23 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết tinh dầu từ hai loại Húng quế 26 Bảng 3.2 Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn hai loại tinh dầu húng quế lớn nhỏ (mm) 27 Bảng 3.3 Kết MIC tinh dầu húng quế nhỏ 30 Bảng 3.4 Kết MIC tinh dầu húng quế lớn 31 Bảng 3.5 Tổng hợp kết MIC hai loại tinh dầu húng quế lớn nhỏ .32 Bảng 3.6 Kết MBC hai loại tinh dầu húng quế lớn nhỏ 33 v Phytochemical Analysis: An International Journal of Plant Chemical and Biochemical Techniques, 13 (2), pp 105-113 27 Kim S J, (2000), "Bacteriologic characteristics and serotypings of Streptococcus pyogenes isolated from throats of school children", Yonsei Med J, 41 (1), pp 56-60 28 Klevens R M, Morrison M A, Nadle J, Petit S, et al, (2007), "Invasive methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in the United States", 29 Kollef M H, Shorr A, Tabak Y P, Gupta V, et al, (2005), "Epidemiology and outcomes of health-care–associated pneumonia: results from a large US database of culture-positive pneumonia", Chest, 128 (6), pp 3854-3862 30 Leber A L, (2016), Clinical microbiology procedures handbook, ASM Press Washington, DC, USA:, pp 31 Marquard R A, Kroth E, Bingel S, Cergel S, et al, (2002), nb u und u lit ts nforderungen usgew hlter rzneipfl nzen II, Buchedition Agrimedia GmbH, pp 2633 32 Mehdizadeh T, Hashemzadeh M, Nazarizadeh A, Neyriz-Naghadehi M, et al, (2016), "Chemical composition and antibacterial properties of Ocimum basilicum, Salvia officinalis and Trachyspermum ammi essential oils alone and in combination with nisin", Research Journal of Pharmacognosy, (4), pp 51-58 33 Moghaddam A M D, Shayegh J, Mikaili P, Sharaf J D, (2011), "Antimicrobial activity of essential oil extract of Ocimum basilicum L leaves on a variety of pathogenic bacteria", Journal of Medicinal Plants Research, (15), pp 34533456 34 O’Brien K, Nohynek H, (2003), "World Health Organization Pneumococcal Vaccine Trials Carriage Working G Report from a WHO working group: standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus Pneumoniae", Pediatr Infect Dis J, 22 (2), pp e1-11 35 Pankaj R, Sunil S, Milind P, (2010), "Anti-inflammatory potential of the seeds of Ocimum basilicum Linn in rats", Asian Journal of Bio Science, (1), pp 1618 36 Patil D D, Mhaske D K, Wadhawa G C, (2011), "Antibacterial and Antioxidant study of Ocimum basilicum Labiatae (sweet basil)", Journal of Advanced Pharmacy Education & Research, pp 104-112 37 Rao V P, Pandey D Extraction of essential oil and its applications, 2007 38 Rubin R J, Harrington C A, Poon A, Dietrich K, et al, (1999), "The economic impact of Staphylococcus aureus infection in New York City hospitals", 39 Sajjadi S E, (2006), "Analysis of the essential oils of two cultivated basil (Ocimum basilicum L.) from Iran", DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, 14 (3), pp 128-130 40 Selvakkumar C, Gayathri B, Vinaykumar K S, Lakshmi B S, et al, (2007), "Potential anti-inflammatory properties of crude alcoholic extract of Ocimum basilicum L in human peripheral blood mononuclear cells", Journal of health science, 53 (4), pp 500-505 41 Shet A, Kaplan E, (2004), "Addressing the burden of group A streptococcal disease in India", The Indian Journal of Pediatrics, 71 (1), pp 41-48 42 Silveira S, Anildo I, Jr A, Gerson I, et al, (2012), "Chemical composition and antimicrobial activity of essential oils from selected herbs cultivated in the South of Brazil against food spoilage and foodborne pathogens", Ciência Rural, 42 (7), pp 1300-1306 43 Singh S, Singh M, Singh A K, Kalra A, et al, (2010), "Enhancing productivity of Indian basil (Ocimum basilicum L.) through harvest management under rainfed conditions of subtropical north Indian plains", Industrial crops and products, 32 (3), pp 601-606 44 Wogiatzi E, Papachatzis A, Kalorizou H, Chouliara A, et al, (2011), "Evaluation of essential oil yield and chemical components of selected basil cultivars", Biotechnology & Biotechnological Equipment, 25 (3), pp 2525-2527 45 CLSI, (2009), Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard—Eighth Edition, pp 46 Menon T, Umamaheswari K, Kumarasamy N, Solomon S, et al, (2001), "Efficacy of fluconazole and itraconazole in the treatment of oral candidiasis in HIV patients", Acta tropica, 80 (2), pp 151-154 47 Muanza D, Kim B, Euler K, Williams L, (1994), "Antibacterial and antifungal activities of nine medicinal plants from Zaire", International Journal of Pharmacognosy, 32 (4), pp 337-345 48 Organization W H, (2017), "Global priority list of antibiotic-resistant bacteria to guide research, discovery, and development of new antibiotics", Geneva: World Health Organization, pp Tài liệu Internet 49 Trƣơng Thị Đẹp (2011), Ocimum basilicum L, http://uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/271, truy cập ngày 30/8/2018 PHỤ LỤC 1: BẢNG KẾT QUẢ ĐƢỜNG KÍNH VỊNG ỨC CHẾ Lần thực Lá nhỏ Lá lớn PL-1 PHỤ LỤC 2: BẢNG KẾT QUẢ GIÁ TRỊ MIC Lần thực Lá nhỏ Lá lớn PL-2 PHỤ LỤC 3: BẢNG KẾT QUẢ GIÁ TRỊ MIC Lần thực Lá nhỏ Lá lớn PL-3 PHỤ LỤC 4: ĐƢỜNG KÍNH VỊNG ỨC CHẾ VI SINH VẬT A B C PL-4 D E F A: E.coli D : P.aeruginosa 1: Lá lớn; LL: Lá lớn PL-4 PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ MIC A B A: Lá lớn B: Lá nhỏ E: Ecoli; R: MRSA; S: MSSA; P: P.aeruginosa PL-5 A B A: Lá lớn Y: S.pyogenes B: Lá nhỏ N: S.pneumoniae PL-5 ... 33 v Khóa luận tốt nghiệp Dƣợc sĩ đại học – Năm học 2013 – 2018 NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU LÁ HÚNG QUẾ OCIMUM BASILICUM TRÊN MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN GÂY BỆNH ĐƢỜNG HÔ HẤP Lê... PHƢƠNG NGHI NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU LÁ HÚNG QUẾ OCIMUM BASILICUM TRÊN MỘT SỐ LỒI VI KHUẨN GÂY BỆNH ĐƢỜNG HƠ HẤP Chuyên ngành: Quản lý cung ứng thuốc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC... hoạt tính kháng khuẩn khác Do đề tài ? ?Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu húng quế Ocimum basilicum số loài vi khuẩn gây bệnh đƣờng hô hấp? ?? đƣợc thực với mục tiêu sau: - Sàng lọc hoạt tính