Luận văn chọn chủng vi khuẩn chế tạo và sử dụng vacxin phòng bệnh viêm phổi do vi khuẩn actinobacillus pleuropneumoniae, pasteurrella multocida và streptococcus suis gây ra

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ---------------------- NGUYỄN THỊ NGỌC BÍCH CHỌN CHỦNG VI KHUẨN CHẾ TẠO VÀ SỬ DỤNG VACXIN PHÒNG BỆNH VIÊM PHỔI DO VI KHUẨN Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida VÀ Streptococcus suis GÂY RA” LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. CÙ HỮU PHÚ PGS.TS. NGUYỄN HỮU NAM HÀ NỘI – 2012 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu tôi ñược tham gia thực hiện tại Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y. Các số liệu, kết quả ñược nêu trong luận văn là chính xác, trung thực và khách quan. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Mọi sự giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Ngọc Bích Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN ðế hoàn thành luận văn này ngoài sự cố gắng của bản thân tôi luôn ñược sự giúp ñỡ của nhà trường, bạn bè ñồng nghiệp. Trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ quý báu của: - PGS. TS. Cù Hữu Phú, người hướng dẫn khoa học trực tiếp ñã giúp ñỡ, hướng dẫn, chỉ bảo tận tình, tạo ñiều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện ñề tài và hoàn thành luận văn này. - PGS. TS. Nguyễn Hữu Nam, các thầy cô trong bộ môn Bệnh lý cùng toàn thể các thầy cô giáo Khoa Thú y; khoa Sau ñại học – Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñó tận tình giúp ñỡ và tạo ñiều kiện cho tôi hoàn thành luận văn này. - Toàn bộ các cô, các anh, các chị trong Bộ môn Vi trùng – Viện Thú y Quốc gia và ñặc biệt là gia ñình, cơ quan nơi tôi công tác ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi nhất giúp ñỡ tôi trong quá trình thực hiện ñề tài. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 10 năm 2011 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Ngọc Bích Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt trong báo cáo vi Danh mục các bảng vii Danh mục các hình ix 1. ðẶT VẤN ðỀ i 1.1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ðỀ TÀI .1 1.2. MỤC ðÍCH CỦA ðỀ TÀI 2 1.3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ðỀ TÀI 2 1.4. ðỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1. VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE VÀ BỆNH VIÊM PHỔI MÀNG PHỔI 3 2.2.VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA VÀ BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG LỢN 10 2.3. VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SUIS VÀ BỆNH DO LIÊN CẦU KHUẨN GÂY RA Ở LỢN .17 2.4. HIỂU BIẾT CHUNG VỀ VACXIN 23 3. NỘI DUNG, ðỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU28 VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1. NỘI DUNG .28 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iv 3.2. ðỐI TƯỢNG .28 3.3. ðỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, ðỊA ðIỂM NGHIÊN CỨU .28 3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .38 4.1. KẾT QUẢ KIỂM TRA MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HÓA CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN PHÂN LẬP ðƯỢC CHỌN CHẾ VACXIN 38 4.1.1. Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh hóa của 10 chủng A.pleuropneumoniae phân lập ñược 38 4.1.2. Kết quả giám ñịnh một số ñặc tính sinh hóa của các chủng P.multocida phân lập ñược 39 4.1.3. Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn Streptococcus suis phân lập ñược .41 4.2. KẾT QUẢ XÁC ðỊNH SEROTYP CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN A.PLEUROPNEUMONIAE, P.MULTOCIDA VÀ S.SUIS PHÂN LẬP ðƯỢC .42 4.2.1. Kết quả ñịnh typ vi khuẩn Actinobacillus, Pasteurella phân lập ñược 42 4.2.2 Kết quả xác ñịnh serotyp của các chủng Streptococcus suis phân lập ñược bằng phương pháp huyết thanh học và PCR .44 4.3. KẾT QUẢ KIỂM TRA ðỘC LỰC CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP ðƯỢC 46 4.3.1. Kết quả kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn P.multocida phân lập ñược 46 4.3.2. Kết quả kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn A.pleuropneumoniae phân lập ñược 47 4.3.3. Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng vi khuẩn Streptococcus suis Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… v phân lập ñược: .48 4.4. KẾT QUẢ CHẾ TẠO VACXIN VIÊM PHỔI LỢN 50 4.4.1. Kết quả kiểm tra ñậm ñộ vi khuẩn của canh trùng dùng chế vacxin thử nghiệm 50 4.4.2. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết của canh trùng chế tạo vacxin51 4.4.3. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin 52 4.4.4. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn và hiệu lực của vacxin trên ñộng vật thí nghiệm 53 4.4.5. Kết quả xác ñịnh hiệu lực của vacxin phòng bệnh viêm phổi trên lợn .55 4.4.6. Kết quả xác ñịnh ñộ dài miễn dịch của vacxin phòng bệnh viêm phổi trên lợn .58 5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ .64 5.1. KẾT LUẬN 64 5.2. ðỀ NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG BÁO CÁO A.pleuropneumoniae Actinobaccillus pleuroneumoniae AGID Agargel Immuno Diffuse BHI Brain Heart Infusion CAMP Chiristie – Atkinson – Munch – Peterson DNA Deoxyribonucleic Acid DNT Dermonecrotic Toxin ELISA Enzyme – linked Immunosorbant assay LD 50 50 percent Lethal Dose LPS Lypopolysaccaride LTA Lipoteibic acid MR Methyl red NAD Nicotinamide Adenine Dinucleotide P.multocida Pasteurella multocida PCR Polymerase Chain Reaction S.aureus Staphylococcus aureus S.suis Streptococcus suis TCN Tiêu chuẩn ngành TSA Tryptic Soy Agar TYE Tryptone Yeast Extract Broth VP Voges – Prokauer THB Todd Herwitt Broth Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Trình tự các cặp mồi dùng ñể xác ñịnh serotype A, B, D của vi khuẩn P.multocida 31 Bảng 3.2 Trình tự các cặp mồi dùng ñể xác ñịnh các serotype 1, 2, 7 và 9 của vi khuẩn Streptococcus suis 32 Bảng 4.1 Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn A.pleuropneumoniae phân lập ñược 39 Bảng 4.2 Kết quả giám ñịnh một số ñặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn P.multocida phân lập ñược 40 Bảng 4.3 Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh hóa của các chủng S.suis phân lập ñược 41 Bảng 4.4 Kết quả xác ñịnh serotype của các chủng vi khuẩn A.pleuropneumoniae và P.multocida phân lập ñược sử dụng chế vacxin 43 Bảng 4.5 Kết quả xác ñịnh serotype của 1 số chủng vi khuẩn S. suis phân lập ñược*45 Bảng 4.6 Kết quả kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn P.multocida phân lập ñược 47 Bảng 4.7 Kết quả kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn A. pleuropneumoniae phân lập ñược 48 Bảng 4.8. Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng vi khuẩn S.suis phân lập ñược trên chuột bạch 49 Bảng 4.9 Kết quả ñếm số lượng vi khuẩn có trong canh trùng chế vacxin thử nghiệm 52 Bảng 4.10 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết của canh trùng chế tạo vacxin 51 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… viii Bảng 4.11 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng 3 lô vacxin chế thử nghiệm 52 Bảng 4.12 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin trên chuột nhắt trắng 53 Bảng 4.13 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trên chuột nhắt trắng 54 Bảng 4.14 Tổng hợp kết quả công cường ñộc cho lợn sau khi tiêm vacxin 56 Bảng 4.15 Kết quả kiểm tra kháng thể trong máu lợn ñược tiêm vacxin sau 1 tháng 59 Bảng 4.16 Kết quả kiểm tra kháng thể trong máu lợn ñược tiêm vacxin sau 2 tháng 60 Bảng 4.17 Kết quả kiểm tra kháng thể trong máu lợn ñược tiêm vacxin sau 3 tháng 61 Bảng 4.18 Kết quả kiểm tra kháng thể trong máu lợn ñược tiêm vacxin sau 4 tháng 62 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Sơ ñồ tóm tắt quy trình chế tạo vacxin viêm phổi lợn 34 Hình 4.1: Kết quả của phản ứng PCR ñịnh type vi khuẩn P.multocida 44