3. NỘI DUNG, đỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU28 VÀ PHƯƠNG PHÁP
3.3. đỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, đỊA đIỂM NGHIÊN CỨU
3.3.1. đối tượng nghiên cứu
Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida và
Streptococcus suis 3.3.2. Mẫu bệnh phẩm
Máu của lợn trước và sau khi tiêm vacxin ựược chế từ 3 loại vi khuẩn
Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida và Streptococcus suis ựể xác ựịnh hiệu giá kháng thể có trong máu lợn.
3.3.3. động vật thắ nghiệm
- Chuột nhắt trắng khỏe mạnh (18-20g/con).
- Lợn sau cai sữa 35 ngày tuổi khỏe mạnh, chưa ựược tiêm vacxin phòng bệnh viêm phổi.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 29
3.3.4. Các loại hóa chất, môi trường
Các loại môi trường do hãng Oxoid (Anh), Merck (Pháp) sản xuất gồm: - Môi trường thông thường: nước thịt, thạch thường, thạch máu, thạch MacConkey, thạch Chocolate, THB (Todd Herwin Broth), nước thịt gan yếm khắ,...
- Các loại môi trường, hóa chất dùng ựể giám ựịnh, xác ựịnh các ựặc tắnh sinh hóa của vi khuẩn: môi trường ựường các loại, dung dịch KovacỖs, dung dịch H2O2 3%, giấy thử Oxydase, nước muối 6,5%, ...
- Các loại hóa chất và sinh phẩm cho phản ứng PCR (Primer, Taq polymerase, dNTPs, Tris-HCl, (NH4)2SO4, MgCl2, Tween20, Tris, EDTA, DNA ladder)
- Các dụng cụ và máy móc phòng thắ nghiệm: + Máy PCR, máy ựiện di
+ Máy chụp Gel (Gel Doc System 2000)
3.3.5. Giống vi khuẩn
* Chủng vi khuẩn ựược sử dụng ựể chế vacxin: 03 vi khuẩn phân lập ựược từ lợn mắc bệnh ở các ựịa phương sau khi xác ựịnh ựặc tắnh, các yếu tố gây bệnh, ựộc lực cao và kháng nguyên tắnh ổn ựịnh ựã ựược chọn ựể chế tạo vacxin gồm có:
- Actinobacillus pleuropneumoniae 03 chủng thuộc typ 2 và 5a và 5b - Pasteurella multocida 02 chủng thuộc typ A và D
- Streptococcus suis 01 chủng thuộc typ 2
* Chủng vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida và Streptococcus suis chuẩn do Nhật Bản và Autralia cung cấp.
3.3.6. địa ựiểm nghiên cứu
đề tài ựược tiến hành tại:
- Bộ môn Vi trùng Viện Thú y, 86 đường Trường Chinh, Quận đống đa, Hà Nội
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 30