Nghiên cứu thu nhận enzyme invertase từ bã nấm men bia

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH Tp.HCM, ngày………tháng………năm 200 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRẦN THẨM MINH HOÀNG Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 26 – 10 – 1979 Nơi sinh: Tp.HCM Chuyên ngành: KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM I TÊN ĐỀ TÀI: “Nghiên cứu thu nhận enzyme invertase từ bã nấm men bia” II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận enzyme invertase - Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia, có kết hợp phương pháp khác để phá vỡ màng tế bào nhằm mục đích thu nhận enzyme invertase - Khảo sát trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia để thu nhận enzyme invertase III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 12 – 2004 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 07 – 07 – 2005 V HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS LÊ VĂN VIỆT MẪN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM NGÀNH BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH Nội dung đề cương luận văn thạc só Hội đồng chuyên ngành thông qua Ngày………tháng………năm PHÒNG ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC KHOA QUẢN LÝ NGÀNH -1- CÔNG TRÌNH ĐƯC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc só bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày…………… tháng…………… năm…………… -2- LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy Lê Văn Việt Mẫn tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn cô Hoàng Kim Anh thầy cô môn Công Nghệ Thực Phẩm giúp đỡ em hoàn thành tốt luận văn Con cảm ơn gia đình, mẹ ba anh chị động viên mặt tinh thần, giúp đỡ mặt vật chất suốt thời gian làm luận văn Cám ơn bạn, em thảo luận trợ giúp trình làm luận văn Tp.HCM, tháng 07/2004 TRẦN THẨM MINH HOÀNG - 11 - TÓM TẮT LUẬN VĂN: NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYME INVERTASE TỪ BÃ NẤM MEN BIA Nấm men bia thuộc loài S.cerevisiae, có hoạt tính invertase (EC 3.2.1.26) Enzyme thường tập trung chủ yếu lớp không gian chu chất tế bào nấm men Trong công nghệ thực phẩm sản xuất nước giải khát, kẹo… chế phẩm invertase thường sử dụng để thủy phân đường sucrose tạo sản phẩm đường nghịch đảo So với đường sucrose, đường nghịch đảo có ưu điểm: độ cao hơn, dịch đường bị tượng tái kết tinh đường Nghiên cứu khảo sát việc thu nhận chế phẩm invertase từ bã nấm men bia - Các thông số tối ưu trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận enzyme invertase là: tỉ lệ sinh khối nấm men/dung môi (dung dịch đệm acetate): 1/6 (w/w); nhiệt độ tự phân: 45oC; pH ban đầu mẫu tự phân 5.5 thời gian tự phân: 50 Hoạt tính tổng hoạt tính riêng invertase thu dịch tự phân 120.9 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men 0.7 đơn vị hoạt tính/mg protein - Sử dụng chế phẩm $ - glucanase phương pháp lạnh đông – rã đông để hỗ trợ cho trình tự phân giúp cho việc phá vỡ màng tế bào giải phóng invertase từ lớp không gian chu chất bên tế bào dễ dàng Khi đó, hoạt tính invertase thu dịch tự phân cao - Các thông số tối ưu trình tự phân bã nấm men bia thu nhận enzyme invertase, trường hợp có bổ sung chế phẩm $ - glucanase để hỗ trợ phá vỡ màng tế bào sau: hàm lượng chế phẩm $ - glucanase bổ sung: 3% (so với chất khô nấm men); nhiệt độ tự phân: 45oC; pH ban đầu mẫu tự phân 6.5 Hoạt tính invertase thu dịch tự phân điều kiện 157.3 đơn vị hoạt -3- tính/g chất khô nấm men - tăng lên 30% so với trường hợp không bổ sung chế phẩm $ - glucanase - Để hoạt hóa invertase bã nấm men bia, sử dụng sucrose chất cảm ứng bổ sung sucrose nhiều lần vào mẫu bã nấm men bia Nồng độ sucrose cho lần bổ sung 2.0% (so với khối lượng huyền phù nấm men ban đầu), thời gian hai lần bổ sung liên tiếp: giờ, nhiệt độ hoạt hóa: 30oC; pH ban đầu mẫu hoạt hóa 6.0, tổng thời gian hoạt hóa (tương ứng với lần bổ sung sucrose tổng lượng sucrose cần bổ sung 16% so với khối lượng huyền phù nấm men ban đầu) Hoạt tính tổng invertase thu dịch tự phân 255.2 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men – tăng 104% so với trường hợp bã nấm men bia không qua hoạt hóa Hoạt tính riêng chế phẩm 1.45 đơn vị hoạt tính/mg protein ABSTRACT: STUDY OF INVERTASE PRODUCTION FROM BREWER YEAST BIOMASS Brewer yeast - S.cerevisiae contains invertase activity In yeast cell, invertase (EC 3.2.1.26) mainly locates in periplasm space In food technology such as beverage and candy processing, commercial invertase has been used for invert syrup production Invert sugar has some advandtages in comparison with sucrose: higher sweeteness, higher stability to crystallization This study focussed on invertase production from brewer yeast biomass - The optimal parameters of brewer yeast autolysis for invertase extraction are as follows: ratio of yeast and solven (acetate buffer): 1/6 (w/w); autolytic temperature: 45oC, initial pH: 5.5 and autolytic time: 50 hours The invertase -4- activity and specific activity in the autolysate were 120.9 units/gram of yeast dry matter and 0.7 units/mg protein, respectively - Application of commercial $ - glucanase or freezing and defreezing method accelerated yeast autolysis Therefore, the damage of cell wall and invertase liberation from the periplasm space to the exoenvironment were improved This augmented the invertase activity in the obtained autolysate - For invertase extraction, the optimal parameters of brewer yeast autolysis with commercial $ - glucanase addition are as follows: $ - glucanase content: 3% of yeast dry matter; autolytic temperature: 45oC; initial pH: 6.5 In these conditions, invertase activity in the autolysate was 157.3 units/gram of yeast dry matter This value increased 30% in comparison with the control sample without $ glucanase addition - For invertase activation in brewer yeast biomass, sucrose was used as an inductive substrate and sucrose addition was realized by fed batch method The optimal technological parameters for enzyme activation are as follows: sucrose concentration for each addition time: 2.0% of yeast suspension weight; time between successive times of addition: 1h; activation temperature: 30oC; initial pH: 6.0; total activation time: hours – equivalent to times of sucrose addition Total sucrose content was 16% of yeast suspension weight The invertase activity in the obtained autolysate was 255.2 units/gram of yeast dry matter This value increased 104% in comparison with that of sample without enzyme activation The specific activity of the obtained crude invertase was 1.45 units/mg protein -5- MUÏC LUÏC Danh mục bảng i Danh mục hình ii PHẦN 1: MỞ ĐẦU Lời mở đầu PHẦN 2: TỔNG QUAN 2.1 Nguồn thu nhận enzyme invertase 2.1.1 Thu nhận enzyme invertase từ vi sinh vật 2.1.1 Thu nhaän enzyme invertase từ thực vật bậc cao 2.2 Naám men 2.2.1 Hình thái cấu tạo tế bào nấm men 2.2.1.1 Hình thái nấm men 2.2.1.2 Cấu tạo tế bào nấm men a Thaønh tế bào b Lớp không gian chu chất c Màng tế bào chất d Tế bào chất 10 e Nhân tế bào 10 f Khoâng baøo 11 g Volutin 11 h Ty theå 11 i Ribosome 12 2.2.2 Thành phần hóa học tế bào nấm men 13 2.2.2.1 Protein 13 2.2.2.2 Lipid 13 -7- 2.2.2.3 Carbohydrate 14 2.2.2.4 Vitamin 14 2.2.2.5 Khoaùng 15 2.3 Qui trình thu nhận enzyme invertase 16 2.3.1 Rửa nấm men ly tâm thu sinh khối nấm men 17 2.3.2 Hoạt hóa enzyme invertase 17 2.3.3 Phá vỡ màng tế bào 18 2.3.3.1 Quá trình tự phân nấm men 18 2.3.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tự phân 21 2.3.4 Tinh saïch enzyme invertase 22 2.4 Enzyme invertase 23 2.4.1 Enzyme invertase 23 2.4.2 Ứng dụng enzyme invertase 25 2.4.2.1 Sản xuất syrup đường nghịch đảo 25 2.4.2.2 Sản xuất mứt kẹo 26 PHẦN 3: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 3.1 Nguyên liệu 28 3.1.1 Baõ naám men bia 28 3.1.2 Đường 28 3.1.3 Chế phẩm enzyme $ - glucanase 28 3.2 Phương pháp phân tích 29 3.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 29 3.2.2 Phương pháp phân tích 31 3.2.2.1 Xác định sinh khối nấm men phương pháp sấy khô đến khối lượng không đổi 31 3.2.2.2 Xaùc định đường khử phương pháp DNS 31 -8- 3.2.2.3 Xác định protein phương pháp quang phổ so màu Lowry 33 3.2.2.4 Xác định hoạt tính invertase 34 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 37 4.1 Khaûo sát trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận chế phẩm invertase 38 4.1.1 Xác định tỉ lệ sinh khối nấm men dung môi 38 4.1.2 Xác định nhiệt độ tự phân 39 4.1.3 Xác định pH ban đầu mẫu nấm men tự phân 40 4.1.4 Xác định thời gian tự phân 41 4.1.5 Tối ưu hóa điều kiện tự phân 42 4.2 Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận invertase, có kết hợp phương pháp khác để hỗ trợ 47 4.2.1 Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia, có bổ sung chế phaåm enzyme $ - glucanase 47 4.2.1.1 Xác định hàm lượng chế phẩm $ - glucanase boå sung 47 4.2.1.2 Xác định pH ban đầu mẫu bã nấm men tự phân, trường hợp có bổ sung chế phẩm enzyme $ - glucanase 49 4.2.1.3 Xaùc định nhiệt độ tự phân, trường hợp có bổ sung chế phẩm enzyme $ - glucanase 51 4.2.2 Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia, có sử dụng phương pháp gia nhiệt 52 4.2.3 Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia, có sử dụng phương pháp lạnh đông – rã đông 54 4.3 Nghiên cứu trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia 56 4.3.1 Phương pháp bổ sung sucrose lần 56 4.3.1.1 Xác định nồng độ chất sucrose bổ sung 56 -9- 4.3.1.2 Xác định pH hoạt hóa 58 4.3.1.3 Xác định nhiệt độ hoạt hóa 60 4.3.1.4 Xác định thời gian hoạt hóa 61 4.3.2 Phương pháp bổ sung sucrose nhiều lần 62 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 Kết luận 67 Một số kiến nghị 69 PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 PHAÀN 7: PHUÏ LUÏC 75 - 10 - dịch tự phân tăng Tuy nhiên, so với mẫu đối chứng B hoạt hóa phương pháp bổ sung sucrose lần, hoạt tính invertase thu trường hợp thấp tương đương Có lẽ, hàm lượng chất sucrose cho lần bổ sung (0.75%) thấp; trình sinh tổng hợp hoạt hóa invertase bã nấm men bia diễn chưa thật mạnh mẽ Khi tăng lượng sucrose cho lần bổ sung lên 1.0%, hoạt tính invertase thu dịch tự phân tăng dần theo thời gian hoạt hóa Sau hoạt hóa, hoạt tính invertase thu trường hợp tăng 10% so với mẫu đối chứng B hoạt hóa phương pháp bổ sung sucrose lần Nếu hàm lượng sucrose bổ sung tăng đến 2.0%, hoạt tính invertase thu tăng dần theo thời gian hoạt hóa đạt giá trị cực đại 255.2 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men sau lần bổ sung sucrose – tức sau (tương ứng với tổng lượng sucrose bổ sung 16%) Giá trị tăng 51% so với mẫu đối chứng B hoạt hóa phương pháp bổ sung sucrose lần Nếu ta tiếp tục tăng thêm số lần bổ sung sucrose vào mẫu bã nấm men bia hoạt tính invertase thu giảm xuống Có thể, lượng sucrose bổ sung vào mẫu nhiều làm tăng cao hàm lượng sản phẩm thủy phân mẫu hoạt hóa, từ dẫn đến tượng ức chế dị hóa trình sinh tổng hợp enzyme invertase, làm giảm hoạt tính invertase thu dịch tự phân Khi ta tăng nồng độ sucrose cho lần bổ sung lên cao – 3.0%, hoạt tính invertase tăng nhanh đầu trình hoạt hóa đạt giá trị cực đại thời gian hoạt hóa Khi hoạt tính invertase thu tăng 34% so với mẫu đối chứng B hoạt hóa phương pháp bổ sung sucrose lần Nếu tiếp tục bổ thêm sucrose trường hợp này, hoạt tính invertase thu giảm mạnh Có lẽ việc tiếp tục bổ sung chất sucrose làm tăng nhanh hàm lượng sản phẩm thủy phân glucose fructose mẫu, - 78 - dẫn đến tượng ức chế dị hóa trình sinh tổng hợp enzyme invertase tế bào nấm men Như vậy, theo kết khảo sát hình 4.15, trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia phương pháp bổ sung sucrose nhiều lần cho kết tốt phương pháp bổ sung sucrose lần Các thông số kỹ thuật tối ưu trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia sau: nồng độ sucrose cho lần bổ sung: 2.0%, thời gian hoạt hóa: giờ, khoảng thời gian lần bổ sung liên tiếp Hoạt tính tổng hoạt tính riêng chế phẩm invertase thu 255.2 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men 1.45 đơn vị hoạt tính/mg protein Quá trình hoạt hóa làm tăng 104% số đơn vị hoạt tính enzyme invertase thu dịch tự phân so với mẫu đối chứng không qua hoạt hóa - 79 - - 80 - KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu phần 4, đưa số kết luận sau cho trình thu nhận chế phẩm invertase từ bã nấm men bia: Quá trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận chế phẩm invertase: • Các thông số tối ưu trình tự phân bã nấm men bia thu nhận chế phẩm: → Tỉ lệ nấm men/dung môi: 1/6 (w/w) → Nhiệt độ tự phân: 45oC → pH ban đầu trình tự phân: 5.5 → Thời gian tự phân: 50 → Hoạt tính hoạt tính riêng chế phẩm invertase tiến hành tự phân bã nấm men điều kiện là: 120.9 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men 0.7 đơn vị hoạt tính/mg protein Sử dụng phương pháp khác để thúc đẩy trình tự phân bã nấm men bia thu nhận enzyme invertase: Sử dụng chế phẩm enzyme $ - glucanase: • Các thông số thích hợp cho trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận chế phẩm invertase có bổ sung chế phẩm $ - glucanase sau: → Lượng chế phẩm sử dụng: 3% (so với khối lượng chất khô nấm men) → pH tự phân có bổ sung chế phẩm $ - glucanase: 6.5 → Nhiệt độ tự phân: 45oC → Hoạt tính invertase thu 157.3 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men – tăng 30% so với mẫu đối chứng không bổ sung chế phẩm $ - glucanase - 81 - Sử dụng phương pháp lạnh đông – rã đông: Khi sử dụng phương pháp lạnh đông rã đông bã nấm men bia trước tiến hành tự phân hoạt tính invertase thu dịch tự phân tăng so với mẫu đối chứng không qua trình lạnh đông – rã đông Càng tăng số lần lạnh đông – rã đông, hoạt tính invertase thu dịch tự phân tăng theo Quá trình hoạt hóa bã nấm men thu nhận chế phẩm invertase: • Quá trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia cần thiết công nghệ sản xuất chế phẩm invertase Phương pháp bổ sung chất sucrose nhiều lần vào mẫu bã nấm men cho kết tốt • Các thông số tối ưu cho trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia sau: → Hàm lượng sucrose bổ sung cho lần 2% so với khối lượng huyền phù nấm men ban đầu → Thời gian hoạt hóa: tương ứng với lần bổ sung sucrose vào mẫu hoạt hóa nấm men, tổng lượng sucrose cần bổ sung 16% so với khối lượng huyền phù ban đầu → Nhiệt độ hoạt hóa: 30oC → pH ban đầu mẫu hoạt hóa: 6.5 → Tổng hoạt tính hoạt tính riêng chế phẩm invertase thu là: 225.75 đơn vị hoạt tính/g chất khô nấm men 1.45 đơn vị hoạt tính/mg protein Quá trình hoạt hóa làm tăng 104% số đơn vị hoạt tính enzyme invertase thu dịch tự phân so với mẫu đối chứng không qua hoạt hóa - 82 - MỘT SỐ KIẾN NGHỊ Khảo sát trình tự phân bã nấm men bia thu nhận invertase sử dụng • phương pháp khác để hỗ trợ phá vỡ màng tế bào như: sử dụng dung môi, phương pháp nghiền bi, đồng hoá áp suất cao… Đánh giá so sánh hiệu thu nhận invertase phương pháp kết hợp Nghiên cứu trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận invertase, sử • dụng chế phẩm enzyme khác như: mannase, protease Khảo sát việc kết hợp sử dụng nhiều chế phẩm enzyme khác Khảo sát ảnh hưởng định tính định lượng hợp chất vi lượng • (khoáng) đến trình hoạt hóa invertase bã nấm men bia Khảo sát mối quan hệ đồng thời yếu tố nồng độ sucrose bổ sung, • khoảng thời gian hai lần bổ sung liên tiếp sucrose, thời gian hoạt hóa đến hoạt tính chế phẩm invertase thu trình hoạt hóa invertase bã nấm men phương pháp bổ sung nhiều lần Sau xác định chế độ tối ưu để hoạt hóa invertase bã nấm • men bia, kiểm tra lại thông số trình tự phân như: tỉ lệ sinh khối nấm men/dung môi, nhiệt độ, pH ban đầu thời gian tự phân bã nấm men So sánh đánh giá kết so với thông số tìm phần tự phân bã nấm men không qua hoạt hóa Nghiên cứu tinh dịch chứa enzyme invertase thu sau trình • tự phân để thu nhận chế phẩm có độ tinh cao Khảo sát đặc tính chế phẩm invertase thu từ bã nấm men bia, đưa • giá trị nhiệt độ pH tối thích chế phẩm Khảo sát trình bảo quản chế phẩm invertase thu từ bã nấm men • bia - 83 - • Bước đầu ứng dụng chế phẩm invertase thu từ bã nấm men bia để sản xuất dịch syrup qui mô pilot - 84 - - 85 - TÀI LIỆU THAM KHẢO Kiều Hữu Ảnh, Giáo trình vi sinh vật học công nghiệp, NXB KH&KT, Hà Nội, 1999 Nguyễn Cảnh, Qui hoạch thực nghiệm, Trường ĐHBK Tp.HCM, 1993 Nguyễn Trọng Cẩn, Công nghệ enzyme, NXB Nông nghiệp, 1998 Nguyễn Hữu Chấn, Enzyme xúx tác sinh học, NXB Y học, Hà Nội, 1982 1996 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2002 Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ vi sinh vật (Tập 1), Trường ĐH Bách Khoa, TPHCM, 1996 Lê Ngọc Tú, Hoá sinh công ngiệp, NXB KH& KT, 2000 Anna Halász et.al, Use of yeast biomass in food product, CRC Press, 1991 A.R.Teal BSc MSc, Enzymes and their roles in biotechnology, Department of biological Sciences, North East Surrey College of technology, 2000 10 Alan Wiseman, Handbook of enzyme biotechnoloy, Ellis Horwood, U.K 11 U.C.Filho, C.E.Hori & E.J.Ribeiro, Influence of reaction products in the inversion of sucrose by invertase, Unit – Av.Rafael Marino Neto, 600, 384002 – 310, Uberlandia – MG, Brazil, 1999 12 Hebe P.Rojo, Marta A.Vattuone & Antonio R Sampietro, Invertase from Schizophyllum commune, Caùtedra Fitoquimica, Instituto de Estudios Vegetales, Facultad de Bioquimica, Quimica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumaùn, Ayacucho 461, 4000 – San Miguel de Tucuman, Argentina, 1994 13 Hector L.Ramirez, Belkis Chico, Reynaldo Villalonga Santana, Invertase stabilization by chemical modification - 86 - of sugar chains with Carboxymethylcellulose, Enzyme technology group, Center for Biotechnological Studies, University of Matanzas, Autopista a Varadero Km 1/2 , Matanzas, Cuba, 2002 14 Kiran Shafiq, Sikander Ali, Ikram_ul_Haq, Effect of different mineral nutrients on invertase production by Saccharomyces GCB – K5, Biotechnology Research Laboratoris, Department of Botany, Government College, Lahore, Pakistan, 2002 15 Kiran Shafiq, Sikander Ali, Ikram_ul_Haq, Time course study for Yeast invertase production by submerged fermentation, Biotechnology Research Laboratoris, Department of Botany, Government College, Lahore, Pakistan, 2003 16 Leissy Goùmez & Reynaldo Villalonga, Stabilization of invertase by modification of sugar chains with chitosan, Enzyme technology group, Center for Biotechnological Studies, University of Matanzas, Autopista a Varadero Km 1/2 , Matanzas, Cuba, 1999 17 S.M.M Mahbubur Rahman, Palash Kumar Sen, M.Fida Hasan, Purification and characterization of invertase enzyme from sugarcane, Biotechnology & Genetic Engineering Discipline, Life Science School, Khulna University, Khulna - 9208, Bangladesh, 2004 18 Maria Bernadete de Merieros & Patricia Maria Barroso de Carvalho, Invertase production is related to the nitrogen source in Hansenula anomala, Department of Biotechnology, Faenquil – PO Box 116, Cep 12 600 000, Lorenha – SP, Brazil, 1999 19 Maria Ines Isla & others, Purification and properties of soluble acid invertase from Oryza Sativa, Argentina, 1994 - 87 - 20 J.M.Nelson & B.G.Wilkes, Similarity of kinetics of invertase action in vivo and in vitro, Department of chemistry, Columbia University, New York, 1932 21 Leissy Goùmez & Reynaldo Villalonga, Functional stabilization of invertase by covalent modification with pectin, Enzyme technology group, Center for Biotechnological Studies, University of Matanzas, Autopista a Varadero Km 1/2, Matanzas, Cuba, 2000 22 Yuji Oda & Kenzo Tononura, Purification & characterization of invertase from Torulaspora pretoriensis YK – 1, Department of Food Science & Technology, Fukuyama University, Fukuyama, Hiroshima, Japan, 1993 23 http://www.Isbu.ac.uk/biology/enztech/sucrose.html 24 http://www.southernmatter.com/sugarcane/essays_invertase.htm 25 http://greenwoodhealth.net/np/invertase.htm 26 http://www.pfionline.com/features/additives/add2/add2.html 27 http://biochemie.web.med.unimuenchen.de/Yeast_Biology/02_Cellfunction.htm - 88 - - 89 - Caùc công thức tính toán cho phương án cấu trúc có tâm cấp hai: Số thí nghiệm phương án cấu trúc có tâm, k yếu tố: K < 5: N = 2k + 2k + n0 K ≥ 5: N = 2k-1 + 2k + n0 Số thí nghiệm tâm phương án: n0 = => cánh tay đòn α = Khi đó: X 'j = X 2j − + 2α = X 2j − ( j = 1: k ) Caùc hệ số phương trình hồi qui: N bj = ∑X i =1 N ∑x i =1 ∑ (X N Y ji i ; b ji = ji i =1 j ∑ (X X l )i Yi N i =1 N ; X l )i b jj = j ∑X i =1 ' ji Yi ∑ (X ) N i =1 ' ji (l ≠ j ) Các phương sai sbj2 hệ số bj : sb2j = sth2 N ∑ X 2ji ; sb2jl = i =1 sth2 ∑ (X N i =1 j X l )i ; sb2 = ji ( n × ∑ Yoi − Yo n − i =1 ) Với n: số thí nghiệm làm thêm taâm - 90 - ; ∑ (X ) N i =1 Trong đó: sth2 = sth2 Yo = n × ∑ Yoi n i =1 ' ji Tính ý nghóa hệ số kiểm tra theo tiêu chuẩn Student: tj = bj ; sb j t jl = b jl sb jl ; t jj = b jj sb jj Tra bảng tìm (f) (tài liệu tham khảo [2] – trang154) Với mức ý nghóa p = 0.05; số bậc tự tái hiện: f = n – Nếu tj < tp(f) hệ số bj bị loại khỏi phương trình hồi qui Phương trình hồi qui : Y = bo + b1X1 + b2X2 + … + b12X1X2 + … + b11X112 +… bo = bo’ – b11X112 – b22X222 - … Kiểm tra tương thích phương trình hồi qui với thực nghiệm: F= stt2 sth2 với: stt2 = ( N × ∑ Yi − Yi N − i =1 ) Tra bảng tìm F1-p(f1, f2) (tài liệu tham khảo [2] – trang154) Trong đó: f1 = N – f2 = n –1, với hệ số có ý nghóa phương trình hồi qui Nếu F < F1-p(f1, f2): phương trình tương thích với thực nghiệm - 91 - TÓM TẮT LÝ LỊCH I LÝ LỊCH SƠ LƯC Họ tên: Trần Thẩm Minh Hoàng Phái: Nữ Ngày, tháng năm sinh: 26/10/1979 Tại: Tp.HCM Nguyên quán: Bạc Liêu – Minh Hải Địa thường trú: 250A Lý Chính Thắng, phường 9, quận 3, Tp.HCM Dân tộc: Kinh Tôn giáo: Không II QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO TRUNG HỌC: Chế độ học: Chính qui Thời gian học: Từ năm 1994 đến 1997 Nơi học (trường, thành phố): Trường PTTH Marie Curie, Tp.HCM ĐẠI HỌC: Chế độ học: Chính quy Thời gian học: Từ 1997 đến 2002 Nơi học (trường, thành phố): Đại Học Bách Khoa thành phố Hồ Chí Minh Ngành học: Công nghệ thực phẩm Ngày nơi bảo vệ đồ án, luận án tốt nghiệp, thi tốt nghiệp: năm 2002, Đại học Bách Khoa Tp HCM Người hướng dẫn: TS Lê Văn Việt Mẫn TRÊN ĐẠI HỌC: Cao học từ 2003 đến 2005 (trường, viện, nước): Trường ĐH Bách Khoa Tp.HCM Tên luận án: Nghiên cứu thu nhận enzyme invertase từ bã nấm men bia Ngày nơi bảo vệ: 09/2005 Người hướng dẫn: TS Lê Văn Việt Mẫn -6- ... phẩm enzyme invertase Hình 2.3: Sơ đồ qui trình công nghệ thu nhận chế phẩm invertase từ bã nấm men bia - 30 - 2.3.1 Rửa nấm men ly tâm thu sinh khối nấm men Bã nấm men bia sau thu nhận từ nhà... tinh đường Nghiên cứu khảo sát việc thu nhận chế phẩm invertase từ bã nấm men bia - Các thông số tối ưu trình tự phân bã nấm men bia để thu nhận enzyme invertase là: tỉ lệ sinh khối nấm men/ dung... NGUỒN THU NHẬN ENZYME INVERTASE [12, 13, 14, 16, 17, 18, 20, 21, 22] Nguồn thu nhận enzyme invertase chủ yếu từ vi sinh vật thực vật bậc cao 2.1.1 Thu nhận enzyme invertase từ vi sinh vật Invertase