Phương pháp xác định melamine thực phẩm, thức ăn chăn nuôi sữa sắc ký lỏng cao áp HPLC Tham khảo: Gopalakrishnan Venkatasami, John R Sowa Jr ∗ Department of Chemistry and Biochemistry, Seton Hall University, 400 South Orange Ave., South Orange, NJ 07079, USA NGUYÊN LÝ Quá trình tách thực cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt µm) Pha động (0,1% Trifluoroacetic - TFA / methanol 90:10) bơm với tốc độ dịng 0.3 mL/ phút với bước sóng phát 240 nm Melamine tách 3,7 phút Một đáp ứng tuyến tính (r> 0,999) quan sát thấy mẫu khác từ 1,0-80 µgmL-1 Phương pháp cung cấp khả thu hồi từ 97,2-101,2% khoảng nồng độ từ 5-40 µgmL-1 Các giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) có giá trị 0,1 µgmL-1 0,2 µgmL-1 THÍ NGHIỆM Hóa chất thuốc thử Chất chuẩn: Melamine (99,0%) Dung môi: Methanol Dung môi rửa giải: Trifluoroacetic Methanol Mẫu thử (sữa dạng bột lỏng, thức ăn chăn nuôi, thực phẩm, ) Nước sử dụng cho việc chuẩn bị pha động pha loãng lọc hệ thống Q-pod Millipore Hệ thống sắc ký Đầu dò UV, cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt µm) Thiết lập thơng số cho HPLC Dung môi rửa giải HPLC dung dịch 0,10% (pH 2.4) TFA / methanol (90:10) bơm tốc độ dòng chảy 0,3 mLmin với khối lượng tiêm 20 µL Các bước sóng phát thiết lập 240 nm Hiệu TFA tập trung vào thời gian lưu giữ melamine hình dạng pick đánh giá Tại 0,050% (pH 2,8) 0,10% TFA, thời gian lưu giữ (3.7 phút) hình dạng giống hệt cao điểm sắc nét, nhiên, nồng độ 1,0% (pH 1,4) TFA, thời gian lưu giữ lâu (4,6 phút) pick rộng Pha dung dịch Dung mơi Dung mơi 50% methanol (về thể tích) chuẩn bị cách pha thể tích methanol nước Dung dịch chuẩn Melamine Cân xác 100 mg melamine vào bình định mức 100 mL, hịa tan với Methanol 50% cách rung bể rung siêu âm 30 phút Lên thể tích 100 mL thu dung dịch có nồng độ melamine 1000 µgmL-1 Pha lỗng 5mL melamine (1000 µgmL -1) 50 ml 50% methanol để nồng độ melamine 100 µgmL-1 Pha lỗng tiếp 5mL melamine 100 µgmL-1 50 ml methanol 50% để nồng độ melamine 10 µgmL-1 Chuẩn bị mẫu Cho 10 ml (mẫu dạng lỏng) 1,0 g (mẫu khơ) vào bình định mức 100 ml Mẫu pha với 10 ml dung dịch melamine 1000 µgmL-1, pha loãng với 50 ml dung dịch methanol 50% rung siêu âm 30 phút Sau làm lạnh nhiệt độ phịng, lên thể tích 100 ml dung dịch methanol 50% thu dung dịch hỗn hợp với nồng độ melamine 100 µgmL-1 Cho dung dịch mẫu thu vào ống li tâm ly tâm ( ≥ 3200 rpm) lấy phần dung dịch phía ống (5 ml) chuyển sang bình định mức 50ml, lên thể tích 50 ml dung dịch methanol 50% Mẫu lọc qua lọc 0.45 µm (Acrodisc, 25mm, màng Nylon) Nghiên cứu dịch lọc lọc hấp thụ melamine mức sau: 22% (cho 1ml ban đầu), 10% (2 mL),