BÁO cáo (dược PHÂN TÍCH) xác định độ nhạy của các catechin trong trà bằng phương pháp HPLC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NUÔI THÚ Y XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY CỦA CATECHINS TRONG TRÀ BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC GVHD LỚP DANH SÁCH NHÓM MỤC LỤC MỞ ĐẦU Sự tiêu thụ trà trở nên tăng lên cách phổ biến Bắc Mỹ trà thức uống khơng cồn tiêu thụ nhiều tồn giới Các nghiên cứu trà (Camellia sinensis – tên khoa học trà) cung cấp số lợi ích cho sức khỏe, giảm cholesterol béo phì, bảo vệ chống lại bệnh tim mạch ung thư Catechin chất chống oxy hóa mạnh tìm thấy trà cho để cung cấp số lợi ích sức khỏe Thành phần catechins trà thương mại tùy thuộc vào loài, mùa, điều kiện làm vườn, quan trọng nhất, mức độ q trình oxy hóa sản xuất process Có bốn loại trà chính: trắng, xanh, long, đen Mặc dù tất loại trà có nguồn gốc từ Camellia sinensis, phương pháp xử lý loại trà khác Ví dụ, trà trắng làm khơ tự nhiên cách phương pháp phơi nắng bay trước xử lý tối thiểu để ngăn chặn q trình oxy hóa Những phương pháp chế biến nhằm bảo vệ hương vị trà giữ nồng độ catechin cao Trà xanh chiếm khoảng 20% tổng sản lượng trà sản xuất Nó chủ yếu phổ biến Nhật Bản phận Trung Quốc, phổ biến gia tăng nơi khác giới có tính phổ biến sẵn có báo cáo lợi ích sức khỏe Q trình sản xuất trà xanh tương tự trà trắng, đó, chứa nồng độ tương đối cao catechins Trà đen đại chiếm khoảng 78% sản lượng trà toàn cầu loại trà phổ biến Hoa Kỳ Châu Âu Nó làm cách oxy hóa hồn tồn thu hoạch vài trước sấy khơ Q trình oxy hóa đem đến cho trà màu tối đồng thời có gấp ba lần hàm lượng caffeine Do biến đổi thành phần catechin trà lợi ích sức khỏe tiềm chúng, quan trọng để thiết lập phương pháp phân tích đơn giản đáng tin cậy cho việc xác định hợp chất sản phẩm trà khác Công trình nghiên cứu mơ tả hiệu quả, nhanh xác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng catechins trà Các catechin có nhiều sản phẩm trà bao gồm catechin, epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), gallocatechin (GC), gallocatechin gallate (GCG) epigallocatechin gallate (EGCG) Phương pháp sử dụng độ phân giải cao silica cột 2.2 μm Acclaim® C18 RSLC bước sóng 280 nm để tách, phát định lượng catechins trà trắng, xanh, đen, hỗn hợp trà trắng trà xanh Ngoài ra, nghiên cứu đánh giá hai nguyên liệu tham khảo tiêu chuẩn (SRMs) cung cấp Viện Tiêu chuẩn Công nghệ Quốc gia (NIST) phần nghiên cứu hợp tác Các nguyên liệu đối chứng (SRM 3255) chiết xuất trà xanh phun khô mẫu (SRM 3256) chứa đất viên trà xanh đồng Phương pháp chứng minh độ nhạy tốt, tạo điều kiện cho việc phát loạt catechin với nồng độ khác dao động từ 2.46 mg/g catechin đến 80.8 mg/g EGCG, có tổng thời gian chạy 20 phút Các báo cáo giới hạn phát (LODs) sử dụng phương pháp dao động từ 0.20 μg/mL EG catechin đến 1.17 μg/mL GC, giới hạn định lượng (LOQs) dao động từ 0.59 μg/mL EC đến 3.56 GC Phương pháp mô tả lý tưởng cho việc phân tích đơn giản, nhạy, xác, nhanh chóng, thơng thường catechins sản phẩm trà khác TỔNG QUAN Giới thiệu chung trà 1.1 Sinh thái học trà Tên khoa học trà: Camellia sinensis (L.) O.Kuntze I Trà xếp phân loại thực vật sau: ngành Hạt kín Angiospermatophyta, lớp Ngọc lan (hai mầm) Magnoliopsida, phân lớp Sổ Dilleniidae, Trà Theales, họ Trà Theaceae, chi Trà Camellia (Thea.) Angiospermatophyta, Dilleniidae, Tràlớp Theales, NgọcHình họ lanTrà (hai mầm) chi Trà Camellia phân (Thea.) lớp Sổ 1.1.Theaceae, Cây trà Magnoliopsida, Cây trà sinh trưởng điều kiện tự nhiên có thân chính, chia làm loại: thân gỗ, thân bụi, thân nhỡ (bán gỗ) Cành trà mầm sinh dưỡng phát triển thành, cành chia nhiều đốt, chiều dài biến đổi nhiều từ – 10cm Đốt trà dài biểu giống trà có suất cao Lá trà mọc cách cành, đốt có lá, hình dạng kích thước thay đổi tùy giống Lá trà có gân rõ, rìa có cưa Búp trà giai đoạn non cành trà, hình thành từ mầm dinh dưỡng, gồm có tơm (phần non đỉnh chưa xòe) non Kích thước búp trà thay đổi tùy giống kỹ thuật canh tác Cây trà sau sinh trưởng – tuổi bắt đầu hoa, mọc từ chồi sinh thực nách Trà lâu năm, có chu kỳ s ống lâu, đạt 60 – 100 năm lâu Tuổi thọ kinh tế t ối đa trà thương mại vào khoảng 50 – 65 năm tùy thuộc điều kiện môi trường phương pháp trồng trọt 1.2 Phân bố trà Trà xanh chiếm khoảng 20% tổng sản lượng trà sản xuất Nó chủ yếu phổ biến Nhật Bản phận Trung Quốc, phổ biến gia tăng nơi khác giới có tính phổ biến sẵn có báo cáo lợi ích sức khỏe Trà đen đại chiếm khoảng 78% sản lượng trà toàn cầu loại trà phổ biến Hoa Kỳ Châu Âu 1.3 Thành phần hóa học trà Trà loại thức uống truyền thống có lịch sử hàng ngàn năm, q trình nghiên cứu trà giới thực từ r ất lâu Hiện thành phần hóa học trà mô tả t ương đối đầy đủ Thành phần chủ y ếu trà mô tả bảng sau: Thành phần % khối lượng chất khô Catechin 25-30 (-)- Epigallocatechin gallate 8-12 (-)- Epicatechin gallate 3-6 (-)- Epigallo catechin 3-6 (-)- Epicatechin 1-3 (+)- Catechin 1-2 (+)- Gallocatechin 3-4 Flavonol flavonol glucoside 3-4 Polyphenolic acid dẫn xuất 3-4 Leucoanthocyanin 2-3 Chlorophyll chất màu khác 0.5-0.6 Khoáng 5-6 Caffeine 3-4 Theobromine 0.2 Theophylline 0.5 Amino acid 4-5 Acid hữu 0.5-0.6 Monosaccharide 4-5 Polysaccharide 14-22 Cellulose hemicellulose 4-7 Pectin 5-6 Lignin 5-6 Protein 14-17 Lipid Các hợp chất dễ bay 3-5 0.01-0.02 Bảng 1.1 Thành phần hóa học trà non 1.3.1 Polyphenol Nhóm hợp chất polyphenol thành phần quan tâm nhiều trà Các hợp chất polyphenol trà khác với hợp chất polyphenol tìm thấy loại khác Các cấu tử chiếm đa số catechin (C, EC, EGCG, EGC, ECG…) Ngồi thành phần polyphenol trà cịn có số chất khác với tỉ l ệ thấp flavonol (quercetin, kaempferol, rutin…), dẫn xuất glucoside myricetin-3-glucoside, kaempferol-3-glucoside, myricetin-3–rhamnoglucoside, quercetin3-rhamnoglucoside, kaempferol-3-rhamnodiglucoside …, leucoanthocyanin, hợp chất polyflavonoid theaflavin (theaflavin-3-gallate, theaflavin-3’-gallate, theaflavin3,3’-digallate ), thearubigin (procyanidine, procyanidine gallate…) Các dạng hợp chất theaflavin, thearubigin chiếm tỉ l ệ thấp búp trà trà non tăng dần tỉ lệ trà già 1.3.2 Caffeine Caffeine (1,3,7-trimethyl xanthine; 1,3,7-trimethyl-1H-purine -2,6 (3H,7H)-dione), dẫn xuất tạo thành từ purine, caffeine chủ y ếu tổng hợp trà, chiếm khoảng từ – 5% lượng chất khô trà, hàm lượng biến đổi trình phát triển trà Điều đáng ý hàm lượng caffeine trà cao hàm lượng caffeine tương ứng hạt cà phê (chiếm khoảng 1,5% trọng lượng khơ) Ngồi caffeine, lá trà cịn có dẫn xuất khác methylxanthine theobromine, theophylline với hàm lượng thấp (