Luận văn phân lập giám định virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn, nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý ở lợn mắc bệnh

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðẠO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM * NGUYỄN TRỌNG CƯỜNG PHÂN LẬP GIÁM ðỊNH VIRUS GÂY HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN, NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ Ở LỢN MẮC BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Văn Cảm HÀ NỘI - 2009 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp…………… i Lời cam đoan Tơi xin cam đoan rằng, cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tôi xin cam ñoan, giúp ñỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn làm rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 11 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Trọng Cường Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… ii Lời cám ơn ðể hoàn thành Luận văn ngồi cố gắng thân tơi ln nhận ñược quan tâm giúp ñỡ thầy giáo, giáo bạn bè đồng nghiệp Nhân dịp này, trước tiên xin chân thành cảm ơn giúp ñỡ quý báu Ban lãnh ñạo, cán cơng nhân viên Trung tâm Chẩn đốn Thú y Trung ương dành nhiều thời gian cơng sức giúp đỡ tơi q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Văn Cảm – Giám ñốc Trung tâm Chẩn đốn Thú y Trung ương người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tơi q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cám ơn Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam – Ban ðào tạo Sau ñại học, sở ñào tạo giúp đỡ tơi suốt q trình học tập động viên tơi thực tốt đề tài Xin chân thành cảm ơn Chi cục Thú y tỉnh, chủ hộ chăn nuôi lợn tập thể, cá nhân tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè đồng nghiệp ln giúp đỡ, động viên giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, tháng 11 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Trọng Cường Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii CHƯƠNG I – MỞ ðẦU CHƯƠNG II – TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ðỀ TÀI 2.1 Giới thiệu chung PRRS 2.1.1 Khái quát PRRS 2.1.2 Lịch sử PRRS 2.1.3 Tình hình Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (PRRS) 2.1.3.1 Trên giới 2.3.2.2 Tại Việt Nam 2.1.4 Virus học PRRS 2.1.4.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.4.2 Hình thái cấu trúc PRRSV 12 2.1.4.3 Sức ñề kháng PRRSV 18 2.1.4.4 Vật chủ phương thức truyền lây 18 2.1.4.5 Cơ chế gây bệnh virus 19 2.1.5 Các kiến thức chẩn đốn 21 2.1.5.1 Chẩn đốn qua dấu hiệu lâm sàng 21 2.1.5.2 Chẩn đốn dựa vào bệnh tích 23 2.1.5.3 Phương pháp huyết học 25 2.1.6 Thu thập mẫu bệnh phẩm nghi mắc Hội chứng rối loạn sinh sản 26 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iv hơ hấp để chẩn đốn phịng thí nghiệm 2.1.6.1 Phương pháp lấy mẫu 26 2.1.6.2 Bảo quản vận chuyển 26 2.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước PRRS 27 2.2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 27 2.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 28 CHƯƠNG III – VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 31 NGHIÊN CỨU 3.1 ðịa ñiểm 31 3.2 ðối tượng nghiên cứu 31 3.3 Nội dung nghiên cứu 31 3.3.1 Phân lập, giám ñịnh virus PRRS ổ dịch tự nhiên 31 3.3.2 Nghiên cứu số đặc điểm triệu chứng, bệnh tích lợn mắc PRRS 31 3.4 Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 31 3.4.1 Nguyên liệu, trang thiết bị nghiên cứu 31 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 33 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 42 CHƯƠNG IV – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 Kết phân lập, giám ñịnh virus PRRS từ mẫu bệnh phẩm 43 4.2 Kết giải trình tự gen virus PPRS 48 4.2.1 Kết phân tích trình tự gen NSP2 48 4.2.2 Kết phân tích trình tự gen ORF5 51 4.3 Kết theo dõi biểu lâm sàng 53 4.3.1 Các triệu chứng lâm sàng lợn mắc PRRS 55 4.3.2 Các triệu chứng lâm sàng lợn choai mắc PRRS 56 4.3.3 Các triệu chứng lâm sàng lợn nái mắc PRRS 57 4.4 Bệnh tích đại thể lợn mắc PRRS 59 4.4.1 Bệnh tích đại thể lợn mắc PRRS 60 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… v 4.4.2 Bệnh tích đại thể lợn choai mắc PRRS 62 4.4.3 Bệnh tích đại thể lợn nái mắc PRRS 64 4.5 Nghiên cứu biến ñổi bệnh lý vi thể lợn mắc PRRS 70 4.5.1 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể lợn mắc PRRS 70 4.5.2 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể lợn choai mắc PRRS 73 4.5.3 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể lợn nái mắc PRRS 74 CHƯƠNG V – KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 82 5.1 Kết luận 82 5.2 ðề nghị 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 Tiếng Việt 83 Tiếng Anh 85 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT PRRS: Porcine reproductive and respiratory syndrome Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vi PRRSV: Porcine reproductive and respiratory syndrome virus PCR: Polymerase chain reaction RT-PCR: Real time - polymerase chain reaction IPMA: Immunoperoxidase monolayer assay ELISA: Enzyme linking immuno sorband assay EAV: Equine arteritidis virus LDHV: Lactate dehydrogenase elevating virus SHFV: Simian haemorrhagic fever virus DNA: Deroxyribonucleic acide RNA: Ribonucleic acide ORF: Open reading frame NSP: None structure protein FAO: Food agriculture organization OIE: Office International des Epizooties WTO: World trade organization H.E: Haematoxylin eosin NXB: Nhà xuất cs: Cộng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Lịch sử phát bệnh Trang Bảng 2.2 Một số tên gọi bệnh Bảng 2.3 Sự tương ñồng Nucleotide chủng virus phân Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… 12 vii lập số nước với VR-2332 Bảng 3.1 Chu kì nhiệt phản ứng RRT-PCR 37 Bảng 4.1 Số lượng mẫu xét nghiệm PRRS (2007 – 2009) 44 Bảng 4.2 Số lượng mẫu xét nghiệm PRRS theo ñịa phương (2007 – 2009) Bảng 4.3 Một số ñịa ñiểm ñia lấy mẫu quan sát triệu chứng lâm sàng 45 54 Bảng 4.4 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc PRRS 55 Bảng 4.5 Triệu chứng lâm sàng lợn choai mắc PRRS 57 Bảng 4.6 Triệu chứng lâm sàng lợn nái mắc PRRS 58 Bảng 4.7 Kết tổng hợp mổ khám mẫu bệnh phẩm theo địa phương 59 Bảng 4.8 Bệnh tích ñại thể lợn mắc PRRS 61 Bảng 4.9 Bệnh tích đại thể lợn choai mắc PRRS 63 Bảng 4.10 Bệnh tích đại thể lợn nái mắc PRRS 65 Bảng 4.11 Bệnh tích vi thể số quan tổ chức lợn mắc PRRS Bảng 4.12 Bệnh tích vi thể số quan tổ chức lợn choai mắc PRRS Bảng 4.13 Bệnh tích vi thể số quan tổ chức lợn nái mắc PRRS Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… 71 74 75 viii CHƯƠNG I MỞ ðẦU Việt Nam ñã nhập tổ chức Thương mại Thế giớí (WTO), giao lưu bn bán ngày đẩy mạnh, có trao đổi động vật sản phẩm nguồn gốc từ động vật Trong q trình giao lưu bn bán, việc nhập giống sản phẩm làm thức ăn chăn ni với mục đích nâng cao suất chăn ni khó tránh khỏi nguy làm cho dịch bệnh gia súc có điều kiện xâm nhập Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome - PRRS) gọi bệnh Tai xanh bệnh truyền nhiễm nguy hiểm lợn lứa tuổi, lây lan nhanh Mầm bệnh PRRS ghép với nhiều loại mầm bệnh vi khuẩn virus khác, làm ốm làm chết nhiều lợn nhiễm bệnh, gây tổn thất lớn kinh tế cho người chăn nuôi Bệnh gây virus PRRS (PRRSV), lần ñầu tiên ñược phát Mỹ vào năm 1987 sau Châu Âu Châu Á vào năm 90 Hiện nay, hội chứng ñã trở thành dịch ñịa phương nhiều nước giới, kể nước có ngành chăn ni lợn phát triển Mỹ, Hà Lan, ðan Mạch, Anh, Pháp, ðức… ñã gây tổn thất lớn kinh tế cho người chăn ni Ở Việt Nam, lợn lấy huyết phát kháng thể dương tính với PRRSV lần ñầu tiên vào năm 1997 Sau ñó, kết ñiều tra huyết học số trại lợn giống phía Nam cho thấy có lưu hành PRRSV ñộc lực thấp, ñến trước tháng 3/2007 chưa có ổ dịch báo cáo thức phạm vi nước Theo Cục Thú y (2008) [3], lần ñầu tiên dịch PRRS thể lâm sàng xuất Việt Nam khơng quản lý việc bn bán, vận chuyển lợn ốm, dịch lây lan phát triển mạnh tỉnh khác thuộc ñồng sông Hồng với tổng số lợn mắc bệnh 31.750 Sau tháng, dịch ñược Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… ix khống chế tỉnh phía Bắc, đợt dịch thứ lại bùng nổ vào ngày 25/6/2007 số tỉnh miền Trung, nặng tỉnh Quảng Nam, với tổng số lợn mắc bệnh 33.839 Dịch PRRS tiếp tục diễn lẻ tẻ với qui mô nhỏ suốt tháng cuối năm 2007 Sau đó, cuối tháng 3/2008 dịch PRRS nổ Hà Tĩnh bùng phát dội tỉnh Thanh Hoá, Nghệ An tiếp ñến dịch ñược phát Quảng Nam, Lâm ðồng, Thừa Thiên Huế, Thái Nguyên, Ninh Bình, Nam ðịnh, Thái Bình; đến ngày 19/5/2008 có 60 huyện, thị, 820 xã xuất dịch với tổng số lợn mắc bệnh 268.292 con, số tiêu huỷ 268.378 Hiện nay, virus lưu hành rộng rãi ñàn lợn mắc bệnh ñã khỏi triệu chứng lâm sàng tiếp tục ñược thải, phát tán nhiều ñịa phương Do chăn nuôi nhỏ lẻ, phân tán, không áp dụng biện pháp an toàn sinh học, chưa quản lý tốt việc vận chuyển buôn bán lợn nên nguy dịch tái phát, nổ ñịa phương nào, ñặc biệt thời tiết thay ñổi tạo ñiều kiện thuận lợi cho virus gây hội chứng PRRS mầm bệnh khác phát triển gây bệnh Xuất phát từ ñặc ñiểm dịch tễ học Hội chứng gây rối loạn sinh sản hơ hấp lợn có khác thường triệu chứng lâm sàng so với mơ tả trước năm 2007, chúng tơi đặt vấn ñề nghiên cứu ñề tài: “Phân lập giám ñịnh virus gây hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn, nghiên cứu số ñặc ñiểm bệnh lý lợn mắc bệnh” Với mục tiêu: Xác ñịnh ñược nguyên nhân gây Hội chứng rối loạn sinh sản hơ hấp lợn biến đổi bệnh lý ñặc trưng lợn mắc PRRS Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài: Giúp cán làm công tác thú y, người chăn nuôi hiểu rõ thêm bệnh, nắm bắt ñược ñặc ñiểm bệnh triệu chứng, bệnh tích để chẩn đốn nhanh, bệnh từ đưa Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… x ... nghiên cứu đề tài: ? ?Phân lập giám ñịnh virus gây hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn, nghiên cứu số ñặc ñiểm bệnh lý lợn mắc bệnh? ?? Với mục tiêu: Xác định ngun nhân gây Hội chứng rối loạn sinh. .. Quốc Lợn nái bị bệnh thường vô sinh sảy thai Lợn bị sảy thai bệnh đường hơ hấp Lợn bị rối loạn sinh sản bệnh đường hơ hấp ðến năm 1991 bệnh lây lan nhiều nước giới với triệu chứng hô hấp sinh sản. .. thể lợn choai mắc PRRS 62 4.4.3 Bệnh tích đại thể lợn nái mắc PRRS 64 4.5 Nghiên cứu biến ñổi bệnh lý vi thể lợn mắc PRRS 70 4.5.1 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể lợn mắc PRRS 70 4.5.2 Kết nghiên