Phân lập và giám định phân tử virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn

VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Cỏc phủ tạng ủược nghiền trong cối chày sứ vụ trựng, pha thành huyễn dịch 1:10 với nước sinh lý (hoặc PBS pH 7,2) có kháng sinh (Penicillin 2000UI/ml, Streptomycin 2mg/ml). Các mẫu bệnh phẩm nên chiết tách bằng kít, khi sử dụng nên theo hướng dẫn của nhà sản xuất (có thể sử dụng bộ kít Qiagen Rneasy Extraction cat #74104 50 prep hoặc. Những bệnh phẩm này cần được xác chẩn bằng phương pháp phân lập virus trước khi cĩ kết luận chẩn đốn cuối cùng.

Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… xli - ðối chứng dương tớnh RNA ủó sao mó ủược pha loóng ở hàm lượng sử dụng cho giỏ trị Ct. Bất kỳ thời ủiểm nào Ct của ủối chứng dương tớnh hoặc ủường cong tăng trưởng khỏc thấp hơn 14, giỏ trị trừ nền cú thể bị sai lệch. Mẫu ủối chứng dương tớnh phải cú giỏ trị Ct như ủó biết (±. 2 Ct) và mẫu ủối chứng õm tớnh phải cú Ct = 0 thỡ kết quả RRT-PCR mới ủược cụng nhận. - Kết hợp cựng cỏc dấu hiệu triệu chứng lõm sàng và bệnh tớch ủại thể một số ca bệnh ủi mổ khỏm tại thực ủịa, cỏc bỏo cỏo tỡnh hỡnh gửi kốm mẫu bệnh phẩm. Dựa vào phương pháp mổ khám lợn và phương pháp xét nghiệm vi thể theo Tài liệu tiêu chuẩn ngành – Cục Thú y, 2006. *) Phương pháp mổ khám lợn Chuẩn bị mổ khám.

- Nếu con vật cũn sống phải dựng cỏc biện phỏp làm chết trỏnh gõy biến ủổi lớn về mức ủộ quan sỏt bệnh tớch (dựng ủiện, chọc tiết, thuốc gõy mờ..). Kiểm tra bên ngoài: Thể trạng, da, lông, các khối u, các lỗ tự nhiên, các khớp, ngoại ký sinh trùng và các tổn thương khác. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… xlii ðặt lợn nằm trên bàn mổ dùng dao cắt các cơ trong nách tới khớp xương bả vai, cắt các cơ trong bẹn tới khớp hông ở cả hai bên chân.

Dùng dao rạch lớp da và cơ từ cằm kéo dài tới cửa vào lồng ngực, cắt tiếp lớp sụn xương ức ở hai bờn lật xương ức, kộo dài tới cơ hai bờn thành bụng ủể bộc lộ toàn bộ cỏc tổ chức vùng cổ, xoang ngực, xoang bụng. Cắt tỏch lưỡi, thực quản, khớ quản, phổi, cuối cựng cắt ủứt thực quản, mạch quản giáp với cơ hoành (trước khi cắt thực quản dùng dây buộc chặt phía dưới tránh thức ăn trào ra từ phía dạ dày). Kiểm tra hạch amidan, rạch thanh quản, khí quản, phế quản, phế nang phổi kiểm tra bờn trong về màu sắc và ủộ ủàn hồi.

Lấy gan, mật, lỏ lỏch ra ủể kiểm tra về màu sắc, kớch thước, ủộ cứng mềm, ký sinh trùng và các tổn thương khác. Kiểm tra toàn bộ cơ quan sinh dục (buồng trứng, ống dẫn trứng, dạ con ở con cái, dịch hoàn, ống dẫn tinh ở con ủực) cả bờn ngoài và bờn trong. Tỏch vỏ thận, kiểm tra bờn ngoài và bổ ủụi kiểm tra bờn trong thận, ống dẫn niệu, búng ủỏi kiểm tra về màu sắc kớch thước, chất chứa bờn trong. Kiểm tra hệ thống hạch lõm ba trong cơ thể về màu sắc, kớch thước và ủộ ủàn hồi. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… xliii Rạch kiểm tra bên trong hệ thống tiêu hoá theo thứ tự từ dạ dày tới hậu môn loại bỏ chất chứa quan sỏt bề mặt niờm mạc ủặc biệt chỳ ý tới vựng van hồi manh tràng về cỏc chất chứa, dịch, màu sắc, ủiểm hoại tử, xuất huyết. Cắt kiểm tra dịch khớp, mặt khớp, màu sắc các khớp xương, chẻ dọc kiểm tra tuỷ xương bên trong. Cắt ủầu lợn ở ủốt sống Atlas, lột da, dựng ủục hoặc cưa cắt từ lỗ chẩm sang hai bờn ủến cạnh trước xương trỏn, lật xương hộp sọ, bộc lộ nóo. Dựng kộo cong vụ trựng tỏch màng nóo, cắt ủứt cỏc dõy thần kinh lấy nóo. Tuyến yờn cũng ủược kiểm tra. Dựng cưa cắt ngang xương mũi ủể kiểm tra xoang và cỏc ống cuộn. Dùng dụng cụ vô trùng lấy mẫu cho xét nghiệm trong phòng thí nghiệm. Ghi báo cáo mổ khám và phiếu gửi bệnh phẩm. Xử lý hấp tiờu ủộc xỏc hoặc thiờu ủốt, chụn lấp xử lý vụi bột. - Cỏc mẫu ủồng thời cũng ủược cố ủịnh trong formalin 10% ủể làm xột nghiệm bệnh tớch vi thể. *) Phương pháp làm tiêu bản xét nghiệm bệnh tích vi thể. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… xliv Chọn lỏt cắt tiờu bản phẳng thả vào nồi chưng cất nhiệt ủộ nước 30 - 350C; Dựng lam kớnh chọn lỏt cắt gión phẳng, khụng nhăn nheo vớt, dựng nghiờng, ủể vào tủ ấm 370C cho khô.