Nghiên cứu khả năng phòng và chữa trị ung thư của hoạt chất paenol tách chiết từ cây xích thược việt nam trên chuột được gây u thực nghiệm

luận văn, thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, khóa luận, đề tài

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ---------------***------------- ðẶNG THỊ HOÈ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÒNG VÀ CHỮA TRỊ UNG THƯ CỦA HOẠT CHẤT PAENOL TÁCH CHIẾT TỪ CÂY XÍCH THƯỢC VIỆT NAM TRÊN CHUỘT ðƯỢC GÂY U THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: 1. PGS-TS. Phạm Ngọc Thạch 2. TS. ðỗ Thị Thảo HÀ NỘI 2010 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của tôi, những số liệu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực và kết quả nghiên cứu chưa từng ñược sử dụng. Mọi thông tin trích dẫn trong báo cáo này ñã ñược ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2010 TÁC GIẢ ðặng Thị Hoè Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành ñề tài này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi còn nhận ñược rất nhiều sự quan tâm giúp ñỡ của các thầy cô giáo, gia ñình, bạn bè và ñồng nghiệp. Trước hết tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS. Phạm Ngọc Thạch trưởng bộ môn Nội chẩn dược và ñộc chất, Khoa Thú y, trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội và TS. ðỗ Thị Thảo Tổ trưởng Tổ Thử nghiệm sinh học, Viện Công nghệ sinh học, viện Khoa học và công nghệ Việt Nam, người ñã tận tình hướng dẫn giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài. Xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trong Viện ñào tạo sau ñại học, Ban chủ nhiệm Khoa Thú y, Bộ môn Nội chẩn dược và ñộc chất Khoa Thú y, Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện trong suốt thời gian học tập cũng như trong thời gian thực hiện ñề tài. Xin chân thành cảm ơn ban lãnh ñạo, các anh chị tổ thử nghiệm sinh học, viện công nghệ sinh học Viện khoa học và Công nghệ Việt Nam ñã giúp ñỡ tôi trong quá trình nghiên cứu, thực hiện thí nghiệm, thu thập số liệu tại cơ sở. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 04 tháng 12 năm 2010 Tác giả ðặng Thị Hoè Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iii MỤC LỤC Lời cam ñoan Error! Bookmark not defined. Lời cảm ơn Error! Bookmark not defined. Mục lục Error! Bookmark not defined. Danh mục viết tắt trong ñề tài Error! Bookmark not defined. Danh mục bảng Error! Bookmark not defined. Danh mục hình Error! Bookmark not defined. 1. MỞ ðẦU 1 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2. Mục ñích nghiên cứu 3 1.3. Ý nghĩa của ñề tài 3 2. TỔNG QUAN CÁC VẤN ðỀ NGHIÊN CỨU 4 2.1. Khái quát về bệnh ung thư 4 2.2. Cây Xích thược và dược tính chống ung thư 16 3. ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1. ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu 26 3.2. Nội dung nghiên cứu 27 3.3. Phương pháp nghiên cứu 27 3.4. Xử lý số liệu 32 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 4.1. Kết quả tạo mô hình u thực nghiệm trên chuột thí nghiệm bằng tế bào LLC 34 4.2. Mức ñộ tăng trọng và tỉ lệ sống sót của chuột thí nghiệm gây u bằng tế bào LLC 35 4.3. Kết quả tạo khối u trên chuột bằng dòng tế bào LLC 38 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iv 4.4. Kết quả xác ñịnh liều ñộc cấp LD 50 của hoạt chất paeonol chiết tách từ cây Xích thược 41 4.5. Mức ñộ tăng trọng của chuột thí nghiệm khi cho uống bán trường diễn của hoạt chất paeonol 43 4.6. Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu sinh lý, sinh hoá máu và hoạt ñộ một số enzyme cơ bản của chuột khi cho uống bán trường diễn của hoạt chất paeonol 45 4.7. Kết quả mổ trực quan nội tạng chuột thí nghiệm khi cho uống bán trường diễn chế phẩm PAN 48 4.8. Khả năng bảo vệ chung và kéo dài tuổi thọ của PAN 49 4.9. Khả năng duy trì và tăng trọng lượng cho ñộng vật bị u của PAN 52 4.10. Khả năng ức chế khối u phát triển và chống di căn 55 4.11. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của PAN ñến các chỉ tiêu huyết học và chức năng gan và thận của chuột bị gây u thông qua một số chỉ tiêu huyết học 57 4.12. Ảnh hưởng của chế phẩm PAN trên mô bệnh học của gan, thận, lách chuột gây u thực nghiệm 60 4.13. Kết quả tiêu bản thu ñược từ khối u chuột thí nghiệm 64 5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 67 5.1. Kết luận 67 5.2 ðề nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . v DANH MỤC VIẾT TẮT TRONG ðỀ TÀI - ALT: Alanine aminotransferase (SGPT) - AST: Aspartate aminotransferase (SGOT) - CDDP: Cisplatin - cs: Cộng sự - DDSL: Dung dịch sinh lý - DMEM: Dullbecco Modified Eagle Medium - DMSO: Dimethyl Sulphoixide - DOX: Doxorubicin - EDTA: Ethylene diamine tetraacetic acid - Eca-109: Human Esophageal Epithelial Cancer Cell Line - FBS: Fetal Bovince Serum - 5-FU: 5-fluorouracil - HepA: Hepar - HPLC: High Performance Liquid Chromatography - LD: Lethal Dose - LLC: Lewis lung carcinoma - NCI: National Cancer Institute - Nxb: Nhà xuất bản - PAN: Hoạt chất paenol - PBS: Phosphate Butfered saline - SEG-1: Human oesphageal adenocarcinoma cell line - TN: Thí nghiệm - WHO: World Health Organization Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1: Thời ñiểm chuột xuất hiện khối u sau khi tiêm tế bào LLC 35 4.2: Mức ñộ tăng trọng của chuột thí nghiệm (gram) và tỉ lệ chuột sống/chết ở từng lô thí nghiệm 1, 2, 3, 4, 5 (n=10 chuột) 36 4. 3: Kết quả tạo khối u trên chuột bằng tế bào LLC 38 4.4: ðộc tính cấp của PAN trên chuột thực nghiệm 42 4.5: Ảnh hưởng của PAN lên sự tăng trọng của chuột khi cho uống bán trường diễn 44 4.6: Ảnh hưởng của chế phẩm PAN lên các chỉ tiêu sinh lý và sinh hoá máu chuột 46 4.7: Kết quả mổ trực quan nội tạng chuột thí nghiệm ñược uống chế phẩm PAN khi cho uống bán trường diễn 48 4.8: Số lượng chuột ñược gây u chết sau khi cho uống PAN là chất bảo vệ 51 4.9: Kết quả theo dõi mức tăng trọng lượng của chuột tại các lô thí nghiệm 53 4.10: Kết quả theo dõi và ño thể tích khối u của chuột tại các lô thí nghiệm 55 4.11: Ảnh hưởng của PAN lên chỉ tiêu huyết học và một số enzyme chức năng gan và thận chuột tiêm LLC 59 4.12: Ảnh hưởng của PAN trên mô bệnh học của gan, thận, lách, phổi chuột thí nghiệm 61 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2. 1. Ảnh cây Xích thược (Paeonia veitchii Lynch.) 17 2. 2. ðề xuất cơ chế chuyển hóa của paeonol trong cơ thể chuột 19 2. 3a. Khả năng ức chế sự tăng sinh và gây chết tế bào theo chương trình của paeonol ñối với dòng tế bào ung thư thực quản 21 2. 3b. Khả năng gây chết tế bào theo chương trình của paeonol ñối với dòng tế bào ung thư thực quản SEG-1, Eca-109 22 2. 4a. Tác dụng của cisplatin và tác dụng của cisplatin và paeonol ñến dòng SEG-1 23 2. 4b. Tác dụng của cisplatin và tác dụng của cisplatin và paeonol ñến dòng Eca-109 23 2. 5a. Hệ số tương tác của cisplatin và paeonol ñến dòng SEG-1 23 2. 5b. hệ số tương tác của cisplatin và paeonol ñến dòng Eca-109 23 2. 6. Sự kết hợp của paeonol và cisplantin gia tăng khả năng gây chết dòng SEG-1 và Eca-109 theo chương trình 24 3.1: Hình ảnh buồng ñếm Neubauer 32 4. 1. Mức ñộ tăng trọng của chuột ñược gây u bằng tế bào LLC 37 4. 2a. Khối u sần ở khu vực hậu môn chuột bị tiêm LLC sau 30 ngày thí nghiệm – lô1 40 4. 2b. Khối u cứng ở nách trái chuột bị tiêm LLC sau 30 ngày thí nghiệm – lô 3 40 4. 3. Ảnh hưởng của PAN lên sự tămg trọng của chuột thí nghiệm khi cho uống bán trường diễn 44 4. 4. Tế bào LLC nuôi cấy in vitro 49 4. 5. Khả năng tăng trọng lượng cho vật bị u của PAN tại các lô thí nghiệm 54 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . viii 4. 6. Thể tích khối u của chuột ñược uống PAN ở các lô thí nghiệm tại các tuần ño 56 4. 7. Ảnh hưởng của PAN lên một số enzyme chức năng gan chuột ñược tiêm LLC 59 4. 8a. Lách bất bình thường (LðC) 62 4. 8b. U di căn xuất hiện ở tuyến vú 62 4. 8c. U xuất hiện ở phổi 63 4. 8d. U di căn xuất hiện ở thận 63 4. 9a. Cơ ñùi chuột bình thường 64 4. 9b. Cơ ñùi chuột bị u với tế bào ung thư ñang phân chia bất thường 64 4. 10a. Ảnh tiêu bản mô phổi chuột thí nghiệm bị ung thư 65 4. 10b. Ảnh tiêu bản mô phổi bình thường 65 4. 11a. Ảnh tiêu bản mô vú ung thư 66 4. 11b. Ảnh tiêu bản mô vú bình thường 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . 1 1. MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài Ngày nay, bệnh dịch xảy ra rất nhiều cả trong nhân y và thú y. Ngoài những bệnh ñặc thù của thú y như bệnh Dịch tả lợn, bệnh Tai xanh, bệnh Lở mồm long móng, bệnh Newcastle gia cầm, … còn có các bệnh có căn nguyên từ ñộng vật nhưng lại lây lan và gây nguy hiểm trực tiếp ñến con người như bệnh cúm gia cầm (H 5 N 1 ), bệnh cúm lợn (H 1 N 1 ), bệnh dại, … ðể ñiều trị và tiêu diệt bệnh dịch thì ñòi hỏi sự kết hợp chặt chẽ giữa nhân y và thú y. ðặc biệt trong các phòng thí nghiệm ñể tìm ra nguyên nhân, triệu chứng và cách ñiều trị các bệnh nan y của con người như bệnh ung thư không thể thiếu các con vật trong thú y ñể thí nghiệm như chuột, thỏ, chim, … Ung thư hiện ñang là một căn bệnh nan y và gây tỉ lệ tử vong cao cho người bệnh. Theo thống kê của Tổ chức y tế thế giới (WHO) thì có khoảng 7,9 triệu người chết (chiếm 13% tổng số người chết) vào năm 2007 vì bệnh ung thư. Những bệnh ung thư phổ biến và dẫn ñến tỉ lệ tử vong cao hàng năm là ung thư phổi, gan và ung thư vú. Theo dự ñoán, trên thế giới tỉ lệ tử vong do căn bệnh này sẽ tiếp tục tăng cao có thể lên tới con số 9 triệu người chết vào năm 2015 và 11,4 triệu người chết vào năm 2030. Tại Việt Nam, căn bệnh ung thư ñang hoành hành ở khắp mọi miền ñất nước và ngày càng tăng cao, với ước tính mỗi năm có 150.000 ca mắc mới và 75.000 người tử vong, gấp 7 lần số người chết do tai nạn giao thông (http:// www.ungthu.net.vn). Việc tìm ra phương cách chế ngự và chữa trị ung thư thực sự là một thử thách ñược ñặt ra cho các nhà khoa học trên thế giới. Việc chữa trị ung thư thực sự gặp rất nhiều khó khăn mặc dù hiện nay ñã sử dụng nhiều liệu pháp chữa trị như liệu pháp gen, liệu pháp miễn dịch, hoá trị, xạ trị, phẫu thuật hoặc kết hợp các liệu pháp này. Các nhà khoa học . phòng và chữa trị ung thư của hoạt chất Paeonol tách chiết từ cây Xích thư c Việt Nam trên chuột ñược gây u thực nghiệm . 1.2. Mục ñích nghiên c u Chúng tôi. 1. Gây u thực nghiệm trên chuột bằng tế bào LLC ñể tạo mô hình cho nghiên c u khả năng phòng chữa ung thư của hoạt chất Paeonol 2. Nghiên c u khả năng phòng