Ảnh hưởng của PAN lên sự tăng trọng của chuột khi uống bán trường diễn
4.8. Khả năng bảo vệ chung và kéo dài tuổi thọ của PAN
Theo nhiều báo cáo, dòng tế bào LLC (Lewis Lung Carcinoma) là dòng tế
bào ung thư phổi gây di căn rất mạnh và hiện ñược sử dụng làm tác nhân gây u thực nghiệm trên chuột với hiệu quả cao. Trong các thí nghiệm của chúng tôi, với việc sử dụng tế bào LLC (tỉ lệ 2 x 106 tb/chuột/lần) ñể gây u trên dòng chuột thuần chủng BALB/c thì u sơ cấp xuất hiện sau 10 ngày và hiệu quảñạt tới 95 – 100 % (ð. T. Thảo và cs, 2008)[10].
Hình 4.4. Tế bào LLC nuôi cấy in vitro
Vì thế chúng tôi ñã sử dụng dòng tế bào LLC ñể gây u thực nghiệm trong thí nghiệm kiểm chứng khả năng ức chế sự phát triển ung thư in vivo
của chế phẩm PAN.
ðể ñánh giá khả năng ức chế khối u của PAN trên chuột gây u thực nghiệm, chúng tôi tiến hành theo phương pháp của Abrham(1978) và Iigo (1991):
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 50
• Lô 14: uống PAN liều 100mg/kgP/ngày trước 4 tuần sau ñó tiêm tế
bào LLC ñể gây u và vẫn tiếp tục cho uống PAN thêm 6 tuần nữa.
• Lô 15: uống PAN liều 200mg/kgP/ngày trước 4 tuần sau ñó tiêm tế
bào LLC ñể gây u và vẫn tiếp tục cho uống PAN thêm 6 tuần nữa.
• Lô 16: tiêm tế bào LLC ñể gây u, ñồng thời uống chế phẩm PAN liều 100 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 17: tiêm tế bào LLC ñể gây u, ñồng thời uống chế phẩm PAN 200 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 18: tiêm tế bào LLC ñể gây u, sau khi có u sơ cấp thì cho uống PAN liều 250 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 19: tiêm tế bào LLC ñể gây u ñồng thời cho uống PAN liều 500 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 20: tiêm tế bào LLC ñể gây u ñồng thời cho uống PAN liều 1000 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 21: tiêm tế bào LLC ñể gây u ñồng thời cho uống PAN liều 1500 mg/kgP/ngày liên tục trong 6 tuần nữa.
• Lô 22 (ñối chứng): chỉ tiêm tế bào LLC và cho uống PBS là dung môi ñược sử dụng ñể pha PAN trong suốt thời gian thực hiện thí nghiệm.
• Lô 23 (ñối chứng âm): không tiêm tế bào LLC và chỉ cho uống nước muối sinh lý trong suốt thời gian thực hiện thí nghiệm
Với bố trí thí nghiệm như trên, chúng tôi sẽ kiểm tra ñược khả năng bảo vệ cơ thể của PAN trước khi gây u bằng tế bào ung thư LLC ở các liều lượng khác nhau (lô 14, 15, 16, 17). ðồng thời, sau khi chuột ñã xuất hiện u do bị
tiêm tế bào ung thư LLC, chuột ñược sử dụng PAN như chất chữa trị ở các liều lượng khác nhau (lô 18, 19, 20, 21). Lô số 22 ñược sử dụng như là ñối chứng của thí nghiệm.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 51
lượng và ño kích thước khối u sơ cấp v.v. Dưới ñây là số liệu thống kê về số
chuột bị chết trong quá trình thí nghiệm ở các lô thí nghiệm
Bảng 4.8. Số lượng chuột ñược gây u chết sau khi cho uống PAN là chất bảo vệ Thời gian Lô TN 1 tuần 2 tuần 3 tuần 4 tuần 5 tuần 6 tuần Lô 14 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 15 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 16 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 17 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 18 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 19 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Lô 20 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 1/5 Lô 21 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 1/5 Lô 22 Số chuột chết 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 2/5 Kết quả bảng 4.8 cho thấy:
Trong 5 tuần kể từ khi bắt ñầu thí nghiệm, chuột ở các lô thí nghiệm không bị chết, bảo toàn số lượng là 5 chuột/lô.
Sang tuần thứ 6 thì chuột ở các lô thí nghiệm ñược uống chế phẩm PAN liều 100, 200, 250 và 500 mg/kgP có số chuột bị chết là 2 con (40%) và ngang bằng với lô ñối chứng (bị gây u mà không ñược uống PAN bảo vệ) cho thấy ở các liều thí nghiệm này PAN chưa có khả năng bảo vệ và kéo dài tuổi thọ cho ñộng vật nghiên cứu.
Ở các liều thí nghiệm cao hơn là 1000 và 1500 mg/kgP thì số lượng chuột bị chết so với lô ñối chứng và so với các liều thấp hơn ñã giảm 50% (chỉ có 1 chuột chết). Như vậy, bắt ñầu từ liều 1000 mg/kgP, chế phẩm PAN
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 52
nghiệm. Rất có thểở liều thí nghiệm cao hơn nữa thì hoạt tính này sẽ thể hiện rõ và mạnh hơn nhưng vì PAN thể hiện tính ñộc cấp ở LD50 là 3000 mg/kgP và ñộc bán trường diễn ở liều ≥ 1000 mg/kgP/ngày nên chúng tôi không thể
thử nghiệm ở liều cao ñược. Vì vậy, ñể ñi ñến những nhận ñịnh cuối cùng thì chế phẩm PAN cần ñược nghiên cứu sâu hơn nữa và trên mô hình thí nghiệm với lượng ñộng vật nhiều hơn.
Như vậy, chế phẩm PAN chưa thể hiện khả năng bảo vệ và kéo dài tuổi thọ cho ñộng vật bị u ở liều thấp (≤ 500 mg/kgP/ngày), nhưng ở liều ≥ 1000 mg/kgP/ngày thì chế phẩm PAN ñã giúp bảo vệ và kéo dài tuổi thọ, làm giảm 50% tỉ lệ tử vong cho ñộng vật thí nghiệm so với ñối chứng.