Thăm dò khả năng phòng và chữa trị ung thư của hoạt chất scutebarbalactone VN tách chiết từ cây bán chi liên trên chuột gây u thực nghiệm

1 MỞ ĐẦU Tìm kiếm hợp chất tự nhiên phòng ngừa chữa trị bệnh, đặc biệt bệnh ung thư, hướng nghiên cứu thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học nước Ung thư bệnh nan y, gánh nặng bệnh tật toàn cầu gây tỉ lệ tử vong cao Theo báo cáo Hiệp hội Quốc tế chống ung thư (UICC) cho thấy bệnh ung thư nguyên nhân gây tử vong cho gần triệu người năm 2004 chiếm 12,5% tổng số người chết bệnh tật Con số người mắc bệnh ung thư tăng nhanh đạt tới số 16 triệu người vào năm 2020 dự đoán Tổ chức y tế giới WHO [1] Do vậy, nhu cầu sử dụng thuốc để phong ngừa chữa trị bệnh nan y đặc biệt bệnh ung thư tất yếu cần thiết, qua góp phần vào việc chăm sóc bảo vệ sức khoẻ cộng đồng quốc gia giới Hiên nay, hướng tìm kiếm thuốc phịng chữa trị ung thư có hiệu lực nhà khoa học quan tâm hướng tập trung vào hợp chất thiên nhiên có nguồn ngốc từ thực vật Theo đánh giá Tổ chức y tế giới, 80% dân số giới tin dùng loại thảo dược cho việc chăm sóc sức khoẻ ban đầu khoảng 60% tác nhân hoá trị liệu khác dùng điều trị ung thư có nguồn gốc từ hợp chất tự nhiên [64], [65], [66] Đối với Việt Nam nước nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa với khoảng 3|4 diên tích nướclà rừng núi trung điệp thảm thực vật phong phú đa dạng điều kiên thuận lợi để hướng nghiên cứu phát triển thành thuốc phòng chữa trị ung thư từ thực vật hồn tồn Theo hướng nghiên cứu Viên nghiên cứu ung thư quốc gia Hoa kỳ (National cancer Institute - NCI) hợp tác với nhiều quốc gia Bangladesh, Viêt Nam, Brazinl, Costa Rica, Lao, mêxicơ, v.v.để nghiên cứu tìm kiếm hoạt chất từ thực vật có khả phịng chống chữa trị ung thư [40], [71], [72] Đến nay, số hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên chích thức sử dụng cho bệnh nhân ung thư Camptothecine từ Hạnh phúc (Camptotheca acuminata ) [73], hai hoạt chất Vinblastine Vincristine từ Dừa cạn (Catharan thus roseus (L.) G.Don) [73] , Taxol từ Thông đỏ ( Taxus brevifolia) [67] v.v Nổi bật năm 2006, Đỗ thị Thảo- viên công nghệ sinh học- Viện công nghệ khoa học Việt Nam phát hiên hoạt chất Scutebarbalactone VN hoạt chất lân phân lập, tách chiết từ Bán chi liên (Scutellaria barbata D.Don) chứng minh cấu trúc hố học có khả diệt ức chế nhiều loại tế bào ung thư phát triển điều kiên in vitro, hoạt chất có hoạt tính mạnh diệt ức chế tế bào ung thư phát triển it gây độc với tế bào thường Dù hoạt chất để phát triển thành thuốc chữa bệnh, sau chứng minh điều kiện in vitro phải thử nghiêm mức độ in vivo để tạo sở cho nghiên cứu tiền lâm sàng( Preclincal) thử nghiêm lâm sàng(Clinical trial) Với hoạt tính phịng chống ung thư đầy tiềm chúng tơi muốn nghiên cứu sâu đặc tính, khả phòng chữa ung thư hoạt chất Scutebarbalactone VN mức in vivo tạo sở cho nghiên cứu khoa học thử nghiêm tiền lâm sàng lâm sàng sau này, nhầm đến đích cuối làm thuốc phòng ngừa chữa trị ung thư có hiệu kinh tế an tồn cho nhân dân góp phần vào việc chăm sóc bảo vệ sức khoẻ cho cộng đồng Xuất phát từ sở khoa học thưc tiển tiến hành đề tài ''Thăm dò khả phòng chữa trị ung thư hoạt chất Scutebarbalactone VN tách chiết từ bán chi liên chuột gây u thực nghiệm'' Mục tiêu nội dung nghiên cứu đề tài Mục tiêu : Gây u thực nghiệm chuột BALB/c tế bào tế bào LLC ( ) để tạo mơ hình cho nghiên cứu khả phịng chữa ung thư hoạt chất SBVN Tìm hiểu chứng minh khả phòng chữa ung thư hoạt chất SBVN mức in vivo Thiết lập tiền đề cho thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng hoạt chất tiềm SBVN Nội dung nghiên cứu: Gây ung thư thực nghiệm chuột nhắt trắng dịng BALB/c hố chất DMBA dịng tế bào ung thư ni cấy in vitro LLC Kiểm tra xác định liều độc cấp tính gây chết 50% động vật thí nghiệm LC50 (lethal dose) hoạt chất SBVN Dựa vào kết nghiên cứu độc tính in vitro có liều độc cấp LC50 , tiến hành xác định nồng độ SBVN sử dụng cho bước thử nghiệm in vivo chuột Thực việc sử dụng hoạt chất SBVN làm chất bảo vệ để ngăn chặn phát triển diệt khối u ung thư thực nghiệm Thu nhận kết quả, tiến hành xử lí số liệu thống kê hệ thống Student-t Test, Excel K-graph để phân tích liệu, thiết lập hình bảng minh hoạ, từ rút kết luận nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TÌNH HÌNH UNG THƯ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM Ung thư bệnh nan y, gây tỉ lệ tử vong cao Theo báo cáo Tổ chức y tế giới WHO bệnh ung thư dần vượt qua bệnh tim mạch để trở thành bệnh gây tử vong cao giới Trong năm từ 1998-2002 có 24,6 triệu người chết ung thư, riêng năm 2004 có triệu bệnh nhân ung thư tử vong thêm 11 triệu người mắc bệnh này[62], [63] Trong tổng số 58 triệu người chết toàn giới năm 2005, bệnh ung thư nguyên nhân gây tử vong cho 7,6 triệu (hay 13% tổng số) người Các ca tử vong ung thư khơng ngừng tăng, với mức ước tính khoảng triệu người chết ung thư vào năm 2015 11,4 triệu người chết vào năm 2030 ((http:// www.benhungthu.net.vn ) Các loại bệnh ung thư dẫn đến tỷ lên tử vong chung : Bệnh ung thư Phổi khiến 1,3 triệu người chết năm Bệnh ung thư Dạ Dày khiến triệu người chết năm Bệnh ung thư Gan khiến 662000 người chết năm Bệmh ung thư Đại Tràng khiến 655000 người chết năm Bệnh ung thư Vú khiến 502000 người chết năứnố người chết Số người chết bệnh ung thư thường rơi vào quốc gia có thu nhập bình quân trung bình thấp (http:// www.benhungthu.net.vn ) Ung thư gánh nặng bệnh tật tồn cầu Ở Việt Nam, chưa có thống kê đầy đủ theo thông tin từ bệnh viện K Trung ương, năm nước có thêm khoảng 150.000 ca mắc ung thư 75.000 ca tử vong vỡ bệnh ung thư (http:// www.ungthu.net.vn) Theo dự báo Y tế hội nghị sơ kết phòng chống ung thư tháng 7/2009, năm 2010 Việt Nam có khoảng 200.000 trường hợp mắc ung thư 100.000 người tử vong Tuy nhiên, điều đáng lo ngại số bệnh nhân mắc bệnh ngày trẻ hố, tế bào ung thư có xu hướng ác tính thường cao thời gian để khối u có kích thước nhân ngắn (http://www.ungthu.net.vn) Như vậy, ung thư nguyên nhân hàng đầu gây tử vong Việt Nam Ung thư xảy nam nữ, nam giới bệnh ung thư thường gặp như: phổi, gan, vòng họng nữ ung thư vú, ung thư cổ tư cung Đặc biệt, ung thư nữ thường xuất độ tuổi 40-50, ung thư mối đe doạ với người già Ung thư có khả điều trị khỏi phát giai đoạn sớm Để hạn chế gia tăng bệnh này, viềc tìm phương cách phịng chữa trị ung thư mối quan tâm thực cấp thiết Phương hướng tìm kiếm thảo dược lấy từ tự nhiên, để phòng chữa trị ung thư ưu sách 1.2 UNG THƯ HỌC, ĐẶC TÍNH CƠ BẢN, NGUYÊN NHÂN VÀ CÁC PHƯƠNHG PHÁP PHÒNG TRÁNH CHỮA TRỊ Ung thư tên chung dùng để gọi nhóm bệnh 200 loại khác nguồn gốc tế bào phát sinh, khả di căn, tiên lượng cách thức điều trị có chung đặc điểm bật tăng sinh vô hạn, vô tổ chức không tuân theo chế kiểm soát phát triển của thể, di căn, tồn tại, xâm lấn phát triển tế bào ưng thư [4], [5], [38], [22] Ung thư bênh tế bào, ung thư thường xuất phát từ tế bào ban đầu tổ chức thể vượt qua chế kiểm soát thể, phát triển, sinh sơi khơng ngừng, hình thành đám tế bào có chung đặc điểm phát sinh, phát triển vô tổ chức xâm lấn chèn ép vào mô, quan tổ chức xung quanh Như ung thư bệnh lý ''ác tính'' tế bào đa dạng nguyên, cách phịng bệnh, chẩn đốn điều trị Hippocrate, nhà y học Hy Lạp cổ đại xem người nhận dạng bệnh ung thư ông đặt tên cho bệnh ''karkino'' theo tiếng Hy lạp có nghĩa cua xâm lấn, phát triển khối u ác tính nhắc ơng nhớ tới hình ảnh ''con cua có tua tủa'' Ngày ung thư học giới biết đến với từ ''cancer'' theo tiếng anh có nghĩa cua tiếng la tinh [6], [24] 1.2.1 CÁC ĐẶC TÍNH CỦA BỆNH UNG THƯ 1.2.1.1 Ung thư bệnh tế bào Ung thư tế bào phải thời gian nhiều năm có khích thước đủ lớn xuất dấu hiệu nhận biết Thơng thường, tế bào có tuổi thọ định tuân thủ chặt chẽ theo qui luật chung '' phát triển - già - chết'' Các tế bào chết lại thay tế bào Cơ thể có chế kiểm sốt qui luật nghiêm gặt trì số lượng tế bào quan, tổ chức mức ổn định Bệnh ung thư bắt đầu có tế bào vượt qua chế kiểm sốt thể, phát triển, sinh sơi khơng ngừng, hình thành đám tế bào ( khối u ) có chung đặc điểm phát triển vơ tổ chức, xâm lấn chèn ép vào quan, tổ chức xung quanh gây tử vong cho người bệnh [ 17], [26] 1.2.1.2 Bệnh ung thư gồm nhiều giai đoạn Quá trình phát triển từ TBUT ban đầu thành khối u ung thư đe dọa tính mạng người bệnh trải qua nhiều giai đoạn [38] Giai đoạn đầu trình hình thành TBUT khởi phát ảnh hưởng tác nhân nội bào hay ngoại bào Tiếp theo q trình phân chia liên tục không ngừng TBUT để thành khối u gọi trình phát triển bệnh Các TBUT khối u tiếp tục tăng sinh, tự phụ cảm nhận biết giới hạn với tế bào lân cận sản xuất ạt Cytokine ( cell signals) enzym protease dẫn tới phá huỷ màng đệm lót mơi trường ngoại bào bao quanh khiến chúng liên kết lỏng lẻo, dễ dàng bứt khỏi khối u mẹ, theo mạch máu mạch bạch huyết di chuyển tới tổ chức quan mới, bám lại tiếp tục tăng sinh vơ tổ chức Q trình gọi di (metastatic process) Các TBUT chèn ép hay di vào quan giữ chức sống thể não, tim, phổi, gan, thận v.v khiến bệnh nhân tử vong [17], [27], [74] Như vậy, trình hình thành phát triển bệmh ung thư tóm tắt sau Tế bào bình thường Tác nhân nội ngoại bào Tế bào ung thư Quá trình tăng sinh phát triển U ác tính Chữa trị Sống sót Di xâm lấn 1.2.2 KHÁI QUÁT VỀ TẾ BÀO UNG THƯ Tử vong 1.2.2.1 Phân loại ung thư theo nguôn gốc tế bào Theo nguồn gốc phát sinh, ung thư nhà khoa học phân chia gồm [24], [38], [74] + Carcinoma: ( nguồn gốc biểu bì): dạng ung thư phổ biến nhất, phát sinh từ tế bào có nguồn gốc từ phơi phơi ngồi Như ung thư phổi, ung thư vú, ung thư trực tràng v.v + Sarcoma: Ung thư liên kêt: dạng ung thư it gặp, phát sinh từ tế bào có nguồn gốc phơi tế bào thuộc vào thống chống đỡ cho thể xương, sụn, mỡ, mô liên kết + Lymphoma: Ung thư hạch: dạng ung thư gặp phát sinh từ hạch bạch huyết mô thuộc hệ thống miễn dịch thể như: ung thư Lymphoma Burkitt + Leukemia: Ung thư máu (bệnh bạch cầu): dạng ung thư nguy hiểm biểu bệnh sớm, trẻ em người trẻ tuổi, phát sinh từ mô tạo máu, tế bào máu non thuộc tuỷ xương có xu hướng tích tụ thành số lượng lớn hệ máu trường hợp ung thư bạch cầu cấp tính (Human Acute Leukemia) 1.2.2.2 Các đặc tính tế bào ung thư Nhìn chung, TBUT kếm biệt hố so với tế bào bình thường phân chia nhanh tróng diễn liên tục [26] Trong trình phân chia, đặc tính tiềm ẩn chúng thay đổi bất thường nhanh theo thời gian Ví dụ TBUT gan khả sản xuất vài loại enzym đặc trưng so với tế bào gan bình thường khác qua nhiều lần phân chia bất thường, chúng chí hẳn chức đặc trưng tế bào gan Kiểu bất thường biến đổi nhanh chóng hệ gien TBUT Các TBUT thường có nhiều nhiễm sắc thể bất thường khơng ổn định Hình thái, TBUT có tỉ lệ nhân/ tế bào chất cao, nhân to, bờ nét không rỏ, xuất nhiều sợi phân bào so với tế bào bình thường khác Do đó, TBUT có đặc tính riêng như:[27], [38], [24] - Khả xâm lấn di TBUT Đây tính đặc trưng nguy hiểm TBUT riêng TBUT có Các TBUT khơng khu trú chổ mà chúng tăng cường xâm lấn vào quan, tổ chức sống lân cận, xâm nhập vào hệ thống tuần hoàn bạch huyết để di chuyển tới vị trí cách xa nơi TBUT phát sinh Tại vị trí mới, tế bào ung thư lại tiếp tục tăng sinh tạo khối u mới, chèn ép vào tổ chức mang chức sống thể gây tử vong cho bệnh nhân [8], [26] Hiện nay, đặc thù TBUT chua hoàn toàn sáng tỏ sở khoa học [24], [27], [74] Khả di TBUT phụ thuộc vào tiềm phát triển chúng vị trí bị bao quanh tế bào hoàn toàn khác biệt mặt chức hình thái Tiềm có nhờ xuất số protein TBUT Vi dụ số enzym TBUT tiết làm thoái hoá phân tử collagen hay số protêin màng đệm lót khác proteolycan, glycosaminoglycan để chúng xâm nhập, tồn phát triển tổ chức, quan mà chúng vừa di chuyển tới [27], [60] - Khả sinh sản khơng thể kiểm sốt TBUT Trong thể người, phút có tới 10 triệu tế bào sinh sơi q trình phân chia diễn theo trình tự khn mẫu kiểm sốt chặt chẽ Khi tế bào bình thường trở thành TBUT, phân chia bất thường Quá trình phân chia bất thường diễn nhanh bình thường tế bào cháu sinh không trưởng thành chết tế bào bình thường khác, ngược lại chúng tiếp tục q trình phân chia vơ tổ chức ngày trở nên khác biệt di truyền với tế bào mẹ ban đầu [16], [74], [60] -Khả vượt qua kiểm sốt hệ miễn dịch TBUT TBUT có khả vượt qua kiểm soát hệ miễn dịch để tồn phát triển Trong hệ máu thể có tế bào “giết tự nhiên” (Natural Killer Cell) nhận dạng tiêu diệt tế bào lạ xâm nhập hay xuất thể Tuy nhiên, điều đáng ngạc nhiên tế bào ung thư có thay đổi đáng kể khác lạ với tế bào bình thường lại thoát khỏi phát tiêu diệt hệ miễn dịch [66] 10 Có lẽ TBUT che dấu để vượt qua nhận biết tế bào Lympho Kết hệ miễn dịch thể phát TBUT tiêu diệt chúng TBUT tế bào thể bệnh nhân bị biến chất, thối hố nguy làm hệ miễn dịch khơng nhận biết được.[27] 1.2.3 NGUYÊN NHÂN GÂY BÊNH UNG THƯ Đến nay, chưa thể xác định rỏ loại nguyên nhân chung cho loại ung thư, loại ung thư có nguyên nhân riêng biệt, tác động theo nhiều chế khác chia làm nhóm tác nhân lớn: Tác nhân mơi trường tác nhân sinh học.[4], [5],[ 22] 2.1.3.1 Tác nhân mơi trường Gồm tác nhân hố học, vật lý * Tác nhân hố học gây ung thư như: khói thuốc lá, thành phần hoá học thuốc trừ sâu, sản phẩm phụ gia dùng cho bảo quản thực phẩm, tạo mầu không đạt tiêu chuẩn, chất A-mi-ăng Trong khói thuốc xem mối nguy hại tiềm ẩn lớn cho sức khoẻ cộng đồng với 20 chất hố học có khả gây bệnh ung thư như: ung thư phổi, quản, thực quản v.v Ngồi khí đốt xăng dầu, động cơ, khí thải nhà máy cơng nghiệp v.v xem độc hại gây ôi nhiễm môi trường nguyên nhân gây bệnh ung thư cao cho người.[5], [74], [43], [37], [27] Tác nhân hoá học gây ung thư theo cách: + Tác động trực tiếp đến hệ gien gọi nhóm carcinogen như: dẫn xuất nitrosamin có nhiều thành phần thuốc lá, alcohol rượu, polycyclic hydrocarbon (PAH), polyvinyl chlorid (PVC), thuốc trừ sâu chứa DDT, aflatoxin nấm mốc v.v.[5], [27] 53 Hình Đồ thị tăng trọng chuột uống SBVN bán trường diễn 3.4.2 Ảnh hưởng SBVN lên tiêu huyết học chức gan thận chuột uống SBVN Kết nghiên cứu ảnh hưởng SBVN lên tiêu huyết học chức gan thận chuột uống SBVN bảng Bảng ảnh hưởng SBVN lên tiêu huyết học chức gan thận chuột uống SBVN Uống SBVN bán trường diễn (30 ngày) 1000 mg/kgP/ngày ĐC (-): uống DDSL Trước uống Sau uống Trước uống Sau uống Trướ Sau c uống uống 7,99 8,03 8,25 8,8 500 mg/kgP/ngày Các tiêu Hng cu ( ì 106 t b/ L) 8,72 8,82 54 Bch ì cu ( 103 L) t bào) 4,1 6,7 4,8 6,6 4,8 4,9 Tiểu cầu ( × 103 t b/ µ L) 341 81 345 383 351 398 Hemoglobin (g/dL) 12,5 12,6 12,5 14,9 13,8 14,0 Creatin (minimol/L) 31 33 33 36 36 35 SGOT (U/L) 85 260 120 284 85 88 SGPT (U/L) 15 90 16 75 11 18 Về ảnh hưởng SBVN đến máu Qua kết thu được, nhận thấy thông số hồng cầu, tiểu cầu, hemoglobin máu chuột hai lơ thí nghiệm khơng có sai khác nhiều so với lô đối chứng Tuy nhiên qua số liệu số lượng bạch cầu, nhận thấy hai lơ thí nghiệm số lượng bạch cầu tằng so với lô đối chứng, bạch cầu tăng giúp tăng khả miễn dịch thể Thông số Creatin máu giúp đánh giá chức thận cho thấy khơng bị thay đổi nhiều (khơng có ý nghĩa thống kê) Tuy nhiên ,với số SGOT cho biết chức gan cho thấy có tăng cao đáng kể Chỉ số tăng cao cho biết chức gan bị ảnh hưởng Như vậy, chuột uống hoạt chất SBVN liều cao có gây ảnh hưởng đến chức gan 3.5 Kết xác định khả phòng ngăn chặn phát triển khối u chuột gây u thực nghiệm hoạt chất SBVN Các tế bào ung thư nhừng tế bào biệt hoá phân chia nhanh chóng diễn liên tuc Chúng có khả vượt qua kiểm soát hệ miễn dịch thể để tăng cường xâm lấn vào tố chức sống lân cân Chất có khả phịng chống điều trị ung thư chất có khả ngăn ngừa hoạt động bắt giữ tác nhân gây ung thư, ức chế trình 55 tiến triển bệnh thông qua ức chế hoạt động số enzym hay tác đơng gây biệt hố tế bào Hoạt chất nghiên cứu SBVN chứng minh có khả diệt ức chế nhiều loại tế bào ung thư phát triển điều kiện in vitro[ c.th] Trong nghiên cứu chung tôi, nhằm thăm dò khả phòng chữa trị, ức chế phát triển khối u hoạt chất SBVN điều kiện in vivo với mơ hình thí nghiệm bố trí mục 2.2.5 Để đánh giá khả ức chế khối u phát triển SBVN chuột gây u thực nghiệm, tiến hành theo phương pháp Abrham (1978), Eun-Ok Lee el all (2006) miêu tả phần phương pháp Theo đó, chuột kiểm tra trọng lượng đo kích thước khối u sơ cấp vị trớ tiờm vào thời điểm 10 ngày, 20 ngày, 30 ngày, 40 ngày, 50 ngày, 60 ngày tính từ thời điểm uống hoạt chất Kết trỡnh bày bảng Bảng Mức tăng trọng khối u lô nghiên cứu Lô thí nghiệm Lơ (500) Tăng (gram) 10 ngày trọng -1,01 ± 0,07 20 ngày 30 ngày 40 ngày 60 0,35 ± 0,04 0,75 ± 0,85 0,08 ± 0,12 0,93 ± 0,05 0,98 ± 0,08 Lô Tăng (1000) (gram) trọng 0,42 0,42 ± 0,08 ± 0,15 0,78 ± 0,14 0,89 ± 0,07 0,98 ± 0,06 1,12 ± 0,11 Lô (500) Tăng (gram) trọng -0,67 ± 0,12 0,81 ± 0,64 0,87 ± 0,29 0,92 ± 0,22 0,98 ± 0,18 Lô Tăng trọng - 0,23 ± 0,49 0,82 0,88 0,99 1,09 0,38 ± 0,23 56 (1000) (gram) 0,07 ± 0,14 ± 0,11 ± 0,13 ± 0,19 ± 0,108 Lô Tăng (1500) (gram) trọng 0,50 ± 0,08 1,17 ± 0,10 1,19 ± 0,02 1,26 ± 0,32 1,12 ± 0,45 1,23 ± 0,09 Lô Tăng (2000) (gram) trọng 0,51 ± 0,07 1,15 ± 0,10 1,23 ± 0,12 1,36 ± 0,22 1,41 ± 0,15 1,52 ± 0,18 Lô Tăng (2500) (gram) trọng 0,54 ±0,40 1,32 ±0,24 1,31 ±0,47 1,38 ±0,58 1,62 ±0,59 1,68 ±0,33 Lô Tăng (3000) (gram) trọng 1,28 ±0,13 1,29 ±0,16 1,37 ±0,66 1,76 ±0,40 1,83 ±0,45 1,94 ±0,44 Lô ĐCD trọng 0,23 0,29 ± 0,07 ±0,14 0,15 ± 0,11 0,16 ± 0,13 0,15 ±0,19 0,02 ±0,108 Tăng (gram) Bảng 10 Sự thay đổi thể tích khối u lơ nghiên cứu Lơ thí nghiệm 10 ngày 20 ngày 30 ngày 40 60 ngày Lô (500) Thể tí ch u (mm3) 1071,12 ± 1,21 2125,58 ±2,67 3407,62 ±1,28 5426,37 ±1,25 6439,61 ±2,13 7447,02 ±2,68 Lô (1000) Thể tí ch u (mm3) 1065,04 ±1,95 1560,03 ±2,64 1724,11 ±3,32 1812,08 ±1,05 1894,10 ±4,57 1944,06 ±4,36 Lô (500) Thể tí ch u (mm3) 1062,09 ±1,15 2218,58 ±1,37 3402,34 ±1,12 5427,12 ±1,25 6431,21 ±1,23 7452,41 ± 1,18 Lơ Thể tí 1069,98 1558,67 1719,22 1816,12 1893,56 1952,18 57 (1000) ch u (mm3) ±1,76 ±2,67 ±1,14 ±1,76 ±1,43 ±2,32 Lơ (1500) Thể tí ch u (mm3) 1069,18 ±1,16 990,77 ±0,52 916,72 ±1,35 907,71 ±1,12 866,36 ±1,73 778,72 ±1,13 Lơ (2000) Thể tí ch u (mm3) 1065,18 ±1,26 987,27 ±1,52 911,12 ±1,04 906,21 ±1,06 852,96 ±1,03 772,08 ±1,32 Lơ (2500) Thể tí ch u (mm3) 1048,19 ±1,84 905,85 ±1,61 596,14 ±1,08 314,09 ±1,67 125,31 ±1,38 Lơ (3000) Thể tí ch u (mm3) 1008,23 ±0,084 837,56 ±1,53 312,76 ±1,73 103,71 ±1,31 0 Thể tí ch u (mm3) 1068,14 ±1,16 3657,12 ±1,14 6215,13 ±1 ,18 8912,18 ±1,17 11521,08 16875,12 ±1,03 ±2,14 Lô ĐCD Các kết thử nghiệm cho thấy: Khả bảo vệ kéo dài tuổi thọ Chuột tất lơ thí nghiệm uống hoạt chất SBVN khơng bị chết bảo toàn số lượng đến thời điểm kết thúc thí nghiệm 60 ngày Lơ lơ 8, sau thời gian thí nhiệm 60 ngày, khối u khụng cũn, thể tớch khối u Trong đó, chuột lơ đối chứng dương (gây u không uống hoạt chất bảo vệ) chết tương đương 40% (2/5) tính thời điểm kết thúc thí nghiệm, đồng thời thể tích khối u lớn Như vậy, hoạt chất SBVN có khả bảo vệ kéo dài tuổi thọ cho động vật nghiên cứu Khả ức chế khối u phát triển  Để kiểm tra khả bảo vệ thể, SBVN cho chuột uống trước gây u thực nghiệm liều 500 1000 mg/kgP/ngày (lô 2) so sánh với lô (cùng liều tương ứng) lô chuột uống SBVN sau bị gõy u Tuy nhiờn, nhận thấy khơng có khác biệt thống 58 kê so sánh lô lô lô lô Như vậy, nhận thấy SBVN khơng có tác dụng phũng ung thư hiệu  Chuột uống SBVN liều 500 mg/kgP/ngày (cả trước sau gây u) có tác dụng ức chế khối u phát triển hiệu chưa cao Kích thước khối u tăng nhanh theo thời gian  Đối với lô sử dụng SBVN liều 1000 mg/kgP/ngày (cả trước sau cú u), thể tớch cỏc khối u tăng lên theo thời gian nghiờn cứu Tuy nhiờn, cú thể thấy rừ tỉ lệ phỏt triển khối u giảm đáng kể so với lơ lô (uống 500 mg/kgP/ngày) giảm tới 88,46% so với lô đối chứng âm Như vậy, liều 1000 mg/kgP/ngày, SBVN bắt đầu có tác dụng ức chế khối u ung thư phát triển cỏch rừ rệt cú ý nghĩa thống kờ (p < 0,05)  Ở liều cao 2000 mg/kgP/ngày, SBVN ức chế cỏc khối u phỏt triển hiệu cú ý nghĩa thống kờ(p < 0,05) Thể tớch khối u giảm 27,52% so với thời điểm ban đầu (10 ngày) giảm 95,42% so với lơ đối chứng dương Ngồi ra, chuột uống SBVN liều 2000 mg/kpP/ngày tăng trọng lượng theo thời gian nghiên cứu khác biệt mức ý nghĩa thống kờ so với lụ đối chứng âm Đây kết khả quan nhận định SBVN bắt đầu thể khả ức chế phát triển khối u ung thư hiệu liều 2000 mg/kgP/ngày  Khi sử dụng liều 2500mg/kgP/ngày 3000 mg/kgP/ngày, SBVN cú ức chế phỏt triển khối u khỏc nhau, làm thể tích khối u giảm so với thời điểm ngày thí nghiệm thứ 20 Lơ (uống liều 500 mg/kgP/ngày) thể tích khối u giảm 68,76% so với đối chứng dương Lơ (uống liều 1000 mg/kgP/ngày) thể tích khối u giảm 95,42% so với đối chứng dương Đặc biệt lơ lơ thể tích khối u thời điểm kết thúc thí nghiệm Như vậy, chuột BALB/c uống hoạt chất SBVN liều 2500 59 mg/kgP/ngày 3000 mg/kgP/ngày không ức chế phát triển khối u mà cũn tiờu diệt 100% khối u so với đối chứng dương Khả chống di TBUT có đặc tính riêng mà có khả xâm lấn di vào tổ chức sống lân cận đường mạch máu mạnh bách huyết Để đánh giá khả chống di hoạt chất SBVN tiến hành theo phương pháp Abrham (1978) mụ tả phần phương pháp Theo đó, sau 60 ngày thí nghiệm (hoặc q trỡnh thớ nghiệm chuột bị chết) chuột giết mổ để kiểm tra trực quan nội tạng Các lơ thí nghiệm uống hoạt chất SBVN cho thấy khơng có nội quan bị di từ khối u sơ cấp ban đầu, trừ 01 lô có tượng phổi bị nhục hố.Tuy nhiên, thí nghiệm chúng tơi gây u dịng tế bào LLC tế bào ung thư phổi nên việc xuất ung thư phổi lơ nói bình thường không xem di Các quan nội tạng khác gan, lách, thận, dày không thấy xuất u Trong lơ đối chứng dương (khơng uống hoạt chất SBVN) có tượng u di đến phổi số quan nội tạng khác dày, gan, thận v.v Như vậy, hoạt chất SBVN có tác dụng chống khối u di so với đối chứng dương Dưới số hỡnh ảnh chụp từ tiờu chứng minh di khối u đến số nội quan thể (A) (B) (C) (D) 60 Hình (A) U di xuất phổi – lô ; (B) U di xuất dày gan – lô 9; (C) U di xuất dày – lô 9; (D) U di xuất thận – lô (A) (B) (C) (D) Hình (A) Ảnh tiêu tế bào đùi chuột thí nghiệm bị ung thư; (B) Ảnh tiêu tế bào bình thường đùi chuột ; (C) Ảnh tiêu tế bào ung thư mô thận; (D) Ảnh tiêu tế bào bình thường mơ thận Như vậy,với kết thu từ thí nghiệm kiểm tra khả ức chế khối u hoạt chất SBVN chuột gây u thực nghiệm dòng tế bào LLC cho thấy hoạt chất SBVN tách chiết từ Bán chi liên không bảo vệ kéo dài tuổi thọ cho chuột bị gây u Mặt khác, sử dụng SBVN liều 2000 mg/kgP/ngày có tượng ức chế khối u phát triển tới 27,52% so với thời điểm ban đầu (10 ngày) thể tích khối u giảm 95,42% so với lụ đối chứng dương thời điểm kết thúc thí nghiệm Ở liều thí nghiệm cao 2500 3000 mg/kgP/ngày, cho thấy SBVN có khả tiêu diệt hồn tồn khối u ung thư chuột nghiên cứu Do đó, mức nghiên cứu in vivo chuột bị gây u thực nghiệm, hoạt chất SBVN chứng minh khả kéo dài tuổi thọ cho động vật bị u, khả chữa trị ung thư làm giảm thể tích khối u, chí tiêu diệt khối u chống di hiệu Đây kết khả quan chứng minh khả diệt ức chế TBUT phát triển điều kiện in vivo hoạt chất SBVN Tuy nhiên, không nhân thấy khả phòng ung thư SBVN 61 KẾT LUẬN Thực phân lập hoạt chất theo qui trình đề thu 8,2 gr chất tinh SBVN SBVN có điểm nóng chảy 218 - 2190C, khó tan nước, bảo quản nhiệt độ thường với độ bền hoạt tính 12 tháng Hiệu suất gây u chuột DMBA 70%, tế bào LLC 97,5% 62 Hoạt chất SBVN thể tính độc thấp cho động vật thí nghiệm nên khơng xác định liều độc cấp liều gây chết 50% động vật thí nghiệm (LD50) Hoạt chất SBVN khơng độc cho uống bán trường diễn tháng trường diễn tháng Uống SBVN liều 2500 mg/kgP/ngày 3000 mg/kgP/ngày khả diệt khối u 100% Uống liều 2000 mg/kgP/ngày (uống bắt đầu xuất u sơ cấp) khả ức chế phát triển khối u so với đối chứng dương 95,33 % Hoạt chất SBVN có khả kéo dài tuổi thọ chống khối u di cho động vật nghiên cứu tất liều thí nghiệm Với kết thu trên, nhận thấy hoạt chất SBVN tách chiết từ Bán chi liên Việt Nam hoạt chất có triển vọng ngăn ngừa ức chế phát triển TBUT Đây kết khả quan Chúng hy vọng tương lai SBVN phát triển thành thuốc chữa trị bệnh nhân ung thư an toàn, hiệu kinh tế KIẾN NGHỊ Có kết nghiên cứu trên, mong tiếp tục nghiên cứu sâu chế phân tử họat tính dược động học họat chất SBVN để sử dụng hiệu họat chất để chữa bệnh ung thư tương lai Nghiên cứu hoạt chất SBVN mà thấy cần thiếtlà: 63  Nghiên cứu sâu dược tính dược động học hoạt chất để sử dụng y học an toàn với hiệu cao  Nghiên cứu chế tác động mức phân tử hoạt chất SBVN kĩ thuật microarray nhằm xác định ảnh hưởng SBVN đến hoạt động/mức độ biểu gen tế bào ung thư Qua xác định tác dụng có, khả ứng dụng phát triển thương mại SBVN thuốc chữa ung thư sau Tài liệu tham khảo: Tài liệu tiếng Việt: Bành Văn Khìu, Phạm Xuân Phong, Phan Anh Tuấn, Châu Văn Minh, 2005 Nham chứng (cancer) Hội thảo quốc gia – Y học cổ truyền điều trị ung thư: 2-15 64 Đái Duy Ban, Lữ Thị Cẩm Vân (1995), Hỏi đáp bệnh ung thư NXB Y học, Hà nội Nguyễn Chấn Hùng (1994), Tìm hiểu bệnh ung thư NXB Thành phố Hồ Chí Minh http://www.laodong.com.vn/Home/Viet-Nam-co-ty-le-nguoi-mac- ung-thu-gan-dung-thu-2-the-gioi 5 http://ungthu.net.vn/? a=readmore&id=T49QZR92TPTH3AN15gioi/20084/85461.laodong V V Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà nội, 1996 Tài liệu tiếng Anh: A Monks, D Scudiero, P Skehan, R Shoemake, K Paull, D Vistica, C Hose, J Langley, P Cronise, H Campbell, J Mayo, M Boyd, Feasibility of a high-flux anticancer drug screen use a diverse panel of cultured human tumor cell lines J Natl Cancer Inst 83 (11) (1991) 757 A R Tuner, Screening methods in pharmacology Academic Press New York and London (1965), 60 D Hanahan, R A Weinberg, The hallmarks of cancer Cell 100(1) (2000), 57 10 D I Kim, T K Lee, Lim, Kim H., Y C Lee, C H Kim, Regulation of IGF-I production and proliferation of human leiomyomal smooth muscle cells by Scutellaria barbata D Don in vitro: isolation of flavonoids of apigenin and luteolin as acting compounds., Toxicol Appl Pharmacol 205(3), 213 11 D T Thao, D K Hieu, T T T Van, N T M Hang, N Q Chien, N V Hung, Chemical constituents of the Vietnamese medicinal plant 65 Scutellaria barbata D Don (Lamiaceae), Advances in Natural Sciences, 3(6), (2005) 313-317 12 D T Thao, L.Q Huan, D K Hieu, N Q Chien, N V Hung, Aromatase inhibitory and cytotoxic activities of chemical constituents from the Vietnamese medicinal plant Ban-Chi-Lien (Scutellarial barbata D Don), Asean Journal on Science and Technology for Development, 25(2) (2008), 481 13 Global Action against Cancer Updated Edition 2005 UICC/WHO Booklet 14 H Kizu, Y Imoto, T Tomimori, T Kikuchi, S Kadota, K Tsubono, Studies on the Constituents of Scutellaria Species XVIII Structures of neoclerodane-Type Diterpenoids from the Whole Herb of Scutellaria rivularis Wall., Chem Pharm Bull, , Vol 45(1) (1997) 152 15 H Rugo, E Shtivelman, A Perez, C Vogel, S Francop, E Tan Chiu, M Melisko, M Tagliaferri, M I Cohen, M Shoemaker, Z Tran, D Tripathy, Phase I trial and antitumor effects of BZL101 for patients with advanced breast cancer, Breast Cancer Res Treat 105(1) (2007) 17 16 J Darnell, H Losdish, D Baltimore, Molecular cell biology Scientific American Books, 2nd Edition, Chapter 245 (1990), 954 17 J H Kim, E O Lee, H J Lee, J S Ku, M H Lee, D C Yang, S H Kim, Caspase activation and extracellular signal-regulated kinase/Akt inhibition were involved in luteolin-induced apoptosis in Lewis lung carcinoma cells Ann N Y Acad Sci 1095 (2007) 598 18 J W Kosmeder, J M Pezzuto, Novel plant – derived anticarcinogens International Agency for Research on Cancer, Lyon, France, (2002) 343 66 19 H, T, Chan, P M Tang, P M Hon, S W Au, S K Tsui, M M Wayee, S K Kong, T C Mak, K P Fung, Pheophorbide, a major antitumor component purified from Scutellaria barbata, induced apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells Planta Med 72(1) (2006) 28 20 J Yu, H Liu, J Lei, W Tan, X Hu, G Zou, Antitumor activity of chloroform fraction of Scutellaria barbata and its active constituents, Phytother Res 21(9) (2007) 817 21 J Yu, J Lei, H Yu, X Cai, G Zou, Chemical composition and antimicrobial activity of the essencial oil of Scutellaria barbata Phytochemistry 65 (2004) 881 22 L Taylor (2000), Plant based drugs and medicines Raintree Nutrition Inc 23 M Iigo, A Hoshi, H Kadosawa, M Fujigaki, Antitumor Activity and Metabolism of a New Anthracycline-containing Fluorine (ME2303) in Lewis Lung Carcinoma-bearing Mice Jpn J Cancer Res, 82 (1991), 1317 24 National Cancer Institute (NCI), (2005), Understanding cancer series http://www.cancer.gov/cancertopics/understandingcancer 25 N Currier, S.E Solomon, E.G Demicco, D.L.F Chang, M Farago, H Ying, I Dominguez, Oncogenic signaling pathways activated in DMBA-induced mouse mammary tumors Toxicologic Pathology, 33 (2005) 726 26 P.O Crews , Novel cytotoxic natural products from marine sponges Computer retrieval of information on scientific projects – CRISP (2002), Grant No 5R01CA047135-13 27 S J Dai, J Y Sun, Y Ren, K Liu, L shen, Bioactive ent-clerodant from Scutellaria barbata, Planta Med 73(11) (2007) 1217 67 28 S J Dai, G F Wang, M Chen, K Liu, L Shen, Five new neoclerodane diterpenoid alkaloids from Scutellaria barbata with cytotoxic activities Chem Pharm Bull, 55(8) (2007) 1218 29 T K Lee, D I Kim, Y C Lee, H M Kim, Differential inhibition of Scutellaria barbata D Don (Lamiaceae) on HCG – promoted proliferation of cultured uterine leiomyomal and myometrial smooth muscle cells Immunopharmacol Immunotoxicol 26 (3) (2004) 329 30 X Yin, J Zhou, C Jie, D Xing, Y Zhang, Anticancer activity and mechanism of Scutellaria barbata extract on human lung cancer cell line A549, Life Sci., 75(18) (2004), 2233 31 W B Abrham, Techniques of animal and clinical toxicology Med Pud Chicago (1978) 55 32 http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/en/ ... đồng Xuất phát từ sở khoa học thưc tiển tiến hành đề tài ' 'Thăm dò khả phòng chữa trị ung thư hoạt chất Scutebarbalactone VN tách chi? ??t từ bán chi liên chuột gây u thực nghiệm' ' Mục ti? ?u nội dung... bệnh ung thư thường gặp như: phổi, gan, vòng họng nữ ung thư vú, ung thư cổ tư cung Đặc biệt, ung thư nữ thư? ??ng xuất độ tuổi 40-50, ngồi ung thư cịn mối đe doạ với người già Ung thư có khả đi? ?u trị. .. c? ?u đề tài Mục ti? ?u : Gây u thực nghiệm chuột BALB/c tế bào tế bào LLC ( ) để tạo mô hình cho nghiên c? ?u khả phịng chữa ung thư hoạt chất SBVN Tìm hi? ?u chứng minh khả phòng chữa ung thư hoạt chất